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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410711798.0 (22)申请日 2014.11.28 G01N 30/02(2006.01) (71)申请人 谱尼测试科技 ( 天津 ) 有限公司 地址 300110 天津市南开区红旗路赢寰大厦 十层 (72)发明人 宋薇 (54) 发明名称 一种植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高 效液相色谱法 (57) 摘要 本发明提供了一种植物源性食品中喹螨醚残 留量测定的高效液相色谱法, 待测样品经乙腈震 荡提取, 提取液经弗罗里硅土固相萃取柱净化, 采 用以碳十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱分 离, 流动相为甲醇、 水的混合溶剂, 。
2、其组成的体积 比例为甲醇 80 -90、 水 20 -10, 检测波长 220nm, 柱温 35。本发明经过系统的比较研究, 首次建立了植物源性食品中喹螨醚残留量测定的 高效液相色谱法, 具有分离效果好, 测定准确、 灵 敏度高、 专属性强, 分析简便快速等技术特点。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 (10)申请公布号 CN 104374846 A (43)申请公布日 2015.02.25 CN 104374846 A 1/1 页 2 1. 一种植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱法, 其特征在于 : 所述。
3、测定 方法包括如下步骤 : (1) 样品经有机溶剂振荡提取, 提取液经旋转蒸发至近干, 用正己烷溶解残渣, 待净 化 ; (2) 采用固相萃取柱净化, 经有机溶剂淋洗后, 正己烷和乙酸乙酯混合溶剂洗脱, 洗脱 液旋转蒸发至近干, 用甲醇溶解并定容, 高效液相色谱仪测定。 2. 根据权利要求 1 所述的一种植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱法, 其特征在于, 步骤 (1) 中所述有机溶剂为乙腈。 3. 根据权利要求 1 所述的一种植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱法, 其特征在于, 步骤 (2) 中所述固相萃取柱为弗罗里硅土固相萃取柱, 淋洗液为正己烷, 采用 的正己烷和乙酸。
4、乙酯混合洗脱溶剂比例为 : 正己烷 + 乙酸乙酯 9+1(V/V)。 4. 根据权利要求 1 所述的一种植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱法, 其特征在于所述的植物源性食品为水果、 蔬菜或粮食。 权 利 要 求 书 CN 104374846 A 2 1/5 页 3 一种植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱法 技术领域 : 0001 本发明涉及一种农药残留分析方法, 具体涉及一种植物源性食品中喹螨醚残留量 测定的高效液相色谱法。 背景技术 : 0002 喹螨醚属喹唑啉类杀螨剂, 是以邻氨基苯甲酸为原料, 制得 4- 羟基喹唑啉, 再与 三氯氧磷反应, 得到的含 4- 氯喹唑啉盐。
5、酸盐的混合物, 然后 4- 特丁基苯乙醇回流反应, 得 到 4-(2-(4- 特丁基苯基 ) 乙氧基 ) 喹唑啉盐酸盐, 中和后即得本品。喹螨醚主要用于扁桃 ( 杏仁 )、 苹果、 柑橘、 棉花、 葡萄和观赏植物上, 可有效地防治真叶螨、 全爪螨和红叶螨以及 紫红短须螨。该化合物亦具有杀菌活性。中国、 欧盟、 日本和美国等暂未制定喹螨醚的最大 残留限量 (MRL), 印度规定喹螨醚在茶叶中的最大残留限量为 3mg/kg, 韩国规定其在苹果、 嫩枝、 茄子、 葡萄、 中国柑橘、 梨、 紫苏叶和西瓜中的最大残留限量分别为 0.1, 0.1, 0.2, 0.5, 0.7, 0.3, 3 和 0.05。
6、mg/kg。 0003 Food and Chemical Toxicology, 2004, 42, 423-428, 公开了用二氯甲烷萃取 茶叶和茶汤中的喹螨醚, 弗罗里硅土柱层析净化, 高效液相色谱仪测定, 采用乙腈 - 水 80 20 为流动相。 0004 ( 农药科学与管理, 2011, 32(8), 41-43 公开了用甲醇 0.05磷酸溶液 85 15 为流动相分离, 在 220nm 处检测紫外吸收进行喹螨醚定量分析。 0005 Journal of Chromatography A, 2008, 1208, 16-24, 公开了采用中空纤维-液相 微萃取技术分离含酒精饮料中的 。
7、50 种农药 ( 含喹螨醚 ), 用超高效液相色谱 - 串联质谱仪 测定。 0006 Journal of Chromatography A, 2004, 1036, 161-169, 公开了用氢氧化钠调节 pH值, 用乙酸乙酯-环己烷提取苹果酱、 浓缩柠檬汁、 番茄酱中的24种新型农药残留(含喹 螨醚 ), 用液相色谱 - 串联质谱仪测定。 0007 但经过本发明人系统的研究, 结果表明上述专利或论文所确定的主要技术条件在 实际的生产应用中存在有缺陷 : 0008 (1) 上述方法所选用的流动相甲醇 -0.05磷酸溶液 85 15 在 220nm 波长处 不易平衡, 改用甲醇 - 水 85 。
8、15 时, 峰形、 分离度、 拖尾因子和对称性均能满足要求。 0009 (2) 上述方法采用二氯甲烷作为提取溶剂, 毒性较大, 且提取溶剂用量较大, 环境 污染严重, 采用乙腈作为提取溶剂, 提取效率较高, 毒性较二氯甲烷小。 0010 (3)上述方法采用正己烷-乙酸乙酯991(V/V)作为洗脱溶剂, 喹螨醚不能被 洗脱。 0011 为寻求对于植物源性食品中喹螨醚更科学合理, 更具有实用性的残留分析方法, 本发明人经过系统的对比研究, 提供了一种不同于上述论文或标准所公布的, 可用于测定 植物源性食品中喹螨醚残留的 HPLC 法。 说 明 书 CN 104374846 A 3 2/5 页 4 。
9、发明内容 : 0012 本发明所要解决的技术问题在于, 克服上述现有技术的不足, 提供一种简便快速, 且成本低的植物源性食品中喹螨醚残留量的液相色谱测定方法。 0013 本发明为实现上述目的, 所采用的技术方案是 : 0014 本发明的一种植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱法, 包括以下步 骤 : 0015 1. 样品提取 : 0016 称取已制备好的水果、 蔬菜或粮食样品 5.0-10.0g 于 50mL 具盖离心管中。粮食类 或含水量较少的样品加入 3-5mL 水, 然后加入 15-30mL 乙腈, 其他样品直接加入 15-30mL 乙 腈, 震荡提取20-60min, 加入3-。
10、5g氯化钠涡旋混匀后, 5000-10000rpm离心5-15min, 移取一 定体积的上清液至鸡心瓶中, 旋转蒸发至近干, 用正己烷溶解残渣, 待净化 ; 0017 2. 固相萃取柱净化 0018 将上步溶解液转移至弗罗里硅土固相萃取柱, 上样后先用 10-20mL 正己烷淋洗, 弃去流出液, 再用 10-30mL 正己烷 + 乙酸乙酯 (9+1) 洗脱, 收集洗脱液于鸡心瓶中, 旋转蒸 发至干, 残留物用甲醇溶解并定容, 供高效液相色谱测定 ; 0019 3. 色谱测定 0020 称取喹螨醚标准品, 用甲醇溶解并定容后作为储备液, 然后进一步用甲醇稀释为 具有浓度梯度的标准使用液 ; 00。
11、21 利用液相色谱仪对试样进行检测, 外标法定量 ; 0022 作为优选, 高效液相色谱分析条件为 : 0023 a) 色谱柱 : 以碳十八烷基键合硅胶为填充剂 ; 0024 b) 流动相 : 甲醇 + 水 80+20 至 90+10(V/V) ; 0025 c) 柱温 : 35 ; 0026 d) 流速 : 1mL/min ; 0027 e) 进样量 : 20L ; 0028 f) 波长 : 220nm ; 0029 由于采用上述技术方案, 本发明的有益效果在于 : 0030 1、 建立了植物源性食品(蔬菜、 水果、 粮食)中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱 法, 比利用 LC-MS/MS 检。
12、测方法成本低, 仪器较普遍, 利于推广应用。 0031 2、 对蔬菜、 水果、 粮食等样品采用乙腈震荡提取, 盐析、 离心分层, 提取效率高, 提 取液中杂质溶出少。 0032 3、 提取液采用弗罗里硅土固相萃取柱净化, 通过对弗罗里硅土固相萃取柱净化条 件的优化, 具有较好的净化效果, 并保证喹螨醚有较高的回收率。 0033 4、 本方法具有简单、 快速、 准确、 高效等优点, 喹螨醚的检测低限为 0.02g/mL, 平 均回收率为78.0-102.0, 变异系数(CV)为1.6-5.9。 本方法满足国内外相关法规的 要求, 回收率等技术指标符合相关标准的规定。 0034 5、 本发明可应用。
13、于植物源性产品中喹螨醚残留量的检测中, 对促进我国植物源性 食品的进出口贸易, 确保食品安全, 保障人类身体健康都具有十分重要的意义。 说 明 书 CN 104374846 A 4 3/5 页 5 具体实施方式 : 0035 下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明, 但本发明并不局限于具体实施 例。 0036 实施例 1 黄瓜中喹螨醚残留量的测定 0037 1、 样品提取 : 称取制备好的黄瓜样品 10.0g 于 50mL 具盖离心管中, 加入 20mL 乙 腈, 震荡提取 30min 后, 加入 5g 氯化钠涡旋混匀, 8000rpm 离心 10min, 用移液管移取 10mL 上清液至。
14、鸡心瓶中, 40水浴中旋转蒸发至近干, 用 2mL 正己烷溶解残渣, 待净化 ; 0038 2、 固相萃取柱净化 : 将上步溶解液转移至已活化好的弗罗里硅土固相萃取柱 (6mL正己烷活化), 上样后先用20mL正己烷淋洗, 弃去流出液(控制流速不超过2mL/min), 再用 15mL 正己烷 + 乙酸乙酯 (9+1) 洗脱, 收集洗脱液于鸡心瓶中, 洗脱液在 40水浴中旋 转蒸发至干, 残留物用甲醇溶解并定容至 1.0mL, 混匀, 过 0.45m 有机系滤膜, 供高效液相 色谱测定。 0039 3、 高效液相色谱仪测定 0040 按照液相色谱条件测定样品和标准工作溶液, 用标准曲线对样品溶液。
15、浓度进行校 正, 外标法定量。 0041 4、 线性关系 : 将标准溶液逐级稀释, 制备五个不同浓度的系列混合标准溶液, 按浓 度从低到高顺序, 依照上述色谱条件测定。每一浓度测定 3 次, 按其标准溶液浓度 Y(g/ mL) 与对应峰面积平均值 X 作标准曲线图, 计算回归方程和相关系数, 结果见表 1。 0042 表 1 喹螨醚系列标准工作液浓度、 峰面积及标准曲线 0043 0044 5、 回收率 : 0045 黄瓜样品中喹螨醚未检出, 采用该黄瓜样品, 添加两个不同含量水平的喹螨醚标 准物质, 每个浓度进行 3 个平行样品, 按上述色谱条件进行分析。添加水平、 回收率和变异 系数计算结。
16、果见表 2。 0046 表 2 黄瓜中添加喹螨醚药物准确度试验结果 (n 3) 0047 说 明 书 CN 104374846 A 5 4/5 页 6 0048 0049 由表 2 结果可见 : 黄瓜中喹螨醚添加水平的平均回收率为 84.7-95.7, 变异系数 (CV ) 为 4.4-5.9。 0050 6、 检测低限 : 以黄瓜空白样品进行添加试验, 以 3 倍信噪比求得方法对喹螨醚的 检出限 (LOD)。喹螨醚在黄瓜样品中的检测低限为 0.02mg/kg。 0051 7、 方法优化过程 : 0052 提取溶剂的选择 : 植物源性食品中喹螨醚的检测, 去除色素和脂肪是十分重要 的步骤。 乙。
17、腈提取出来的色素和其他类型的杂质较少, 且喹螨醚在乙腈中的溶解度较大, 乙 腈的提取效率较高, 所以采用乙腈作为提取溶剂。 0053 提取方式的选择 : 为了增加提取效率, 本实验采用涡旋混匀后, 震荡提取 30min 进行提取, 样品中的喹螨醚能够提取充分, 提高提取效率。 0054 样品净化条件的选择 : 采用固相萃取 (SPE) 柱净化技术。弗罗里硅土固相萃取 柱是一种硅镁型吸附剂, 能够吸附色素和脂肪粒等。 试验表明选择正己烷作为上样液, 用正 己烷 - 乙酸乙酯 (9 1, V V) 作为洗脱液, 当洗脱液体积大于 15.0mL 时, 洗脱液体积的 变化对回收率的影响不明显。 005。
18、5 实施例 2 小麦中喹螨醚残留量的测定 0056 1、 样品提取 : 称取已制备好的小麦样品 5.0g 于 50mL 具盖离心管中, 加入 5mL 水, 30mL乙腈, 震荡提取30min后, 加入5g氯化钠涡旋混匀, 8000rpm离心10min, 用移液管移取 15mL 上清液至鸡心瓶中, 40水浴中旋转蒸发至近干, 用 2mL 正己烷溶解残渣, 待净化 ; 0057 2、 固相萃取柱净化 : 同实例 1。 0058 3、 高效液相色谱仪测定 : 同实例 1。 0059 4、 回收率 : 0060 小麦样品中喹螨醚未检出, 采用该小麦样品, 添加两个不同含量水平的喹螨醚标 准溶液, 每个浓度进行 3 个平行样品, 按上述色谱条件进行分析。添加水平、 回收率和变异 系数计算结果见表 3。 说 明 书 CN 104374846 A 6 5/5 页 7 0061 表 3 小麦中添加喹螨醚药物准确度试验结果 (n 3) 0062 0063 由表 2 结果可见 : 小麦中喹螨醚添加水平的平均回收率为 91.0-92.8, 变异系数 (CV ) 为 1.6-2.9。 说 明 书 CN 104374846 A 7 。