《一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法及其应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法及其应用.pdf（12页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410519496.3 (22)申请日 2014.09.30 C07D 311/16(2006.01) C09K 11/06(2006.01) G01N 33/68(2006.01) G01N 21/64(2006.01) (71)申请人 天津理工大学 地址 300384 天津市西青区宾水西道 391 号 天津理工大学主校区 (72)发明人 王秋生 杨静 王云佳 (74)专利代理机构 天津佳盟知识产权代理有限 公司 12002 代理人 侯力 (54) 发明名称 一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备 方法及其应用 (57) 摘要 一。
2、 种 识 别 谷 胱 甘 肽 的 特 异 性 荧 光 探 针 的制备方法， 该荧光探针的分子结构式为 ： 制备步骤是 ： 首先以 4- 二乙胺基水杨醛、 丙二酸二乙酯为原料 合成 7-N,N- 二乙基氨基香豆素， 然后在 POCl3、 DMF 催化下合成 7-N,N- 二乙基氨基香豆素 -3- 甲 醛， 以对甲酰基苯甲酸甲酯、 二甘醇胺为原料形成 席夫碱在发生还原反应、 肼解反应形成化合物， 其与7-N,N-二乙基氨基香豆素-3-甲醛反应形成 目标化合物。本发明的优点是 ： 该制备方法工艺 简单、 易于实施， 制备的荧光探针对还原型谷胱甘 肽具有较高的选择性， 可作为荧光探针用于高灵 敏度快速。
3、检测还原性谷胱甘肽， 具有重要的应用 价值。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书6页 附图4页 (10)申请公布号 CN 104402853 A (43)申请公布日 2015.03.11 CN 104402853 A 1/1 页 2 1. 一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法， 其特征在于 ： 该荧光探针的分子 结构式为 ： 制备步骤如下 ： 1） 将 4- 二乙基氨基水杨醛和丙二酸二乙酯溶解在乙醇中， 加入哌啶， 90 回流 4-5 h， 冷却至室温， 蒸去乙醇， 加入 18wt% 的稀盐酸溶液回流 10-12 h。
4、， 冷却至室温加入饱和乙 酸钠溶液， 用饱和 NaOH 溶液调节 pH 至 4-5， 有固体析出， 抽滤后固体用蒸馏水洗涤三次， 滤 饼干燥后用无水乙醇重结晶， 得浅黄色的 7-N， N- 二乙基氨基香豆素 ； 2） 将 POCl3 逐滴加入 DMF 中， 在 0 下反应 30 min ， 然后逐滴加入 7-N,N- 二乙基 氨基香豆素 -DMF 混合液， 在 60 下反应 12-14 h ， 然后冷却至室温， 倒入冰水中搅拌 1-2 h， 有固体析出， 抽滤后用蒸馏水洗涤三次， 滤饼干燥后用无水乙醇重结晶， ， 得桔黄色 的 7-N,N- 二乙基氨基香豆素 -3- 甲醛 ； 3) 将对甲酰基。
5、苯甲酸甲酯和二甘醇胺加入无水乙醇中， 室温下搅拌 5 h 后， 将三乙酰 氧基硼氢化钠分三次加入到反应体系中 ,TLC 检测反应进程， 待反应完全后， 加入蒸馏水， 三乙酰氧基硼氢化钠与蒸馏水的质量比为 3:4.5-5.5， 用二氯甲烷萃取、 浓缩、 干燥后， 得到 油状化合物 （） 4- N （2- 乙氧基） 乙醇甲氨基 苯甲酸甲酯 ； 4) 将化合物 （） 和 80wt% 的水合肼加入无水乙醇中， 回流反应 24 h ， 旋出乙醇， 柱层 析提纯产物， 得化合物 ( )4 - N （2 - 乙氧基） 乙醇甲氨基 苯甲酰肼 ； 5） 将化合物 ( ) 和 7-N,N- 二乙基氨基香豆素 -3。
6、- 甲醛加入无水乙醇中， 95 下回 流 6 h， 冷却至室温， 旋出乙醇， 柱层析提纯粗产物， 得橘红色目标化合物 ( )7 - 二乙基 氨基 - 3 - 4- N - （ （2 - 乙氧基） 乙醇） 甲基氨基苯甲酰基 甲基香豆素 ( )。 2. 根据权利要求 1 所述识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法， 其特征在于 ： 所 述 4- 二乙基氨基水杨醛、 丙二酸二乙酯和乙醇的质量比为 1:1.7:10， 哌啶、 稀盐酸溶液、 饱 和乙酸钠溶液的体积比为 1:60:100， 哌啶与 4- 二乙基氨基水杨醛的质量比为 1:2.2。 3. 根据权利要求 1 所述识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制。
7、备方法， 其特征在于 ： 所 述 7-N,N- 二乙基氨基香豆素 -DMF 混合液的浓度为 0.5 mmol/L， POCl3 、 DMF、 7-N,N- 二乙 基氨基香豆素 -DMF 混合液的体积比为 1:1:5。 4. 根据权利要求 1 所述识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法， 其特征在于 ： 所 述对甲酰基苯甲酸甲酯、 二甘醇胺、 三乙酰氧基硼氢化钠、 无水乙醇的质量比为 1:2:4:12。 5. 根据权利要求 1 所述识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法， 其特征在于 ： 所 述化合物 （） 、 80wt% 的水合肼、 无水乙醇的质量比为 1:1.9:15。 6. 根据权利要求 。
8、1 所述识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法， 其特征在于 ： 所 述化合物 ( )、 7-N,N- 二乙基氨基香豆素 -3- 甲醛与无水乙醇的质量比为 1:1.3:46。 7. 一种权利要求 1 所制备的识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的应用， 其特征在于 ： 用 于作为特异性荧光探针快速检测还原性谷胱甘肽。 权 利 要 求 书 CN 104402853 A 2 1/6 页 3 一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法及其应用 技术领域 0001 本发明属于生物检测技术领域， 具体涉及一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的 制备方法及其应用。 背景技术 0002 谷胱甘肽广泛存在于动植物和微生物。
9、中， 是生物体内最重要的非蛋白巯基化合物 之一， 具有还原型 （GSH） 和氧化型 （GSSG） ， 生物体内大量存在并起主要作用的是GSH。 GSH分 子含有-谷氨酰基和活性巯基， 是GSH许多重要生理功能的结构基础。 GSH在红细胞中作 为巯基缓冲剂存在， 维持血红蛋白和其它红细胞蛋白质的半胱氨酸残基处于还原状态。 GSH 还广泛存在于其它正常细胞中， 有很强的亲和力， 能与多种化学物质及其代谢物结合， 清除 体内氧自由基及其它自由基， 具有保护肝细胞膜、 促进肝酶活性、 抗氧化、 解毒等作用， 是人 体细胞内的主要代谢调节物质。 GSH还在蛋白质和DNA合成、 物质运输、 酶活性、 新陈。
10、代谢及 细胞保护等生物学功能中起着直接或间接的作用。它还是许多酶反应的辅基， 可作为抗氧 化剂保护生物分子蛋白的巯基， 清除体内过多的自由基， 参与体内三羧酸循环及糖代谢， 具 有解毒、 预防糖尿病、 癌症及消除疲劳等作用。通过对谷胱甘肽的分析检测 , 从中获得重要 的生理、 病理信息 , 促进医疗事业的发展。 0003 GSH 也广泛应用于食品领域， 如加入酸奶和婴儿食品起类似维生素 C 的稳定作用 ； 防止水果罐头水果褐变 ； 在面制品中起还原和强化氨基酸作用 ； 缩短面包混揉时间 ； GSH 在 与谷氨酸钠、 核酸系呈味物质或其混合物共存时具有肉类风味 ； GSH 可抑制肉食类、 鱼类和。
11、 海鲜类食品的核酸分解， 延长保鲜期以及提高奶酪质量， 防止酪蛋白褐变。 0004 由于谷胱甘肽具有重要的生理功能和广泛应用的市场前景,因此,谷胱甘肽的工 业化生产和检测越来越受到关注。 0005 香豆素及其衍生物广泛存在于植物中， 具有明显的生物活性 , 在医药方面已有很 多报道， 如， 对人体具有抗氧化、 降血糖、 抗菌和抗癌等多种药理作用 ； 同时， 其还是一种具 有强烈荧光性能的化合物， 在荧光探针方面的报道在国内还不多见。香豆素类化合物是典 型的内酯结构 , 其发色团是内酯环 , 通过其内酯结构使二苯乙烯化合物中双键被同定为 反式， 使得双键的旋转被阻抑起来， 提高其光稳定性， 从而。
12、使得原来荧光量子效率较低的二 苯乙烯化合物转变为量子效率较高的香豆素化合物， 避免了二苯乙烯化合物在紫外光照射 下顺 - 反式的相互转化， 致使这类化合物具有很高的光量子稳定性及光致发光量子效率， 因而可广泛应用于荧光染料和荧光探针的检测。 0006 荧光分子探针由于其灵敏度高 , 选择性好 , 检测成本低 , 可实现细胞内定位等优 势而倍受关注 , 已广泛应用于生物医学、 环境检测等领域。本发明设计和合成的小分子荧 光探针 , 可将其应用于还原型谷胱甘肽的分析检测。 发明内容 0007 本发明的目的是针对还原型谷胱甘肽的分析检测， 提供一种具有高选择性和高灵 说 明 书 CN 1044028。
13、53 A 3 2/6 页 4 敏性的识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法及其应用。 0008 本发明的技术方案 ： 一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法， 该荧光探针的分子结构式为 ： 制备步骤如下 ： 1） 将 4- 二乙基氨基水杨醛和丙二酸二乙酯溶解在乙醇中， 加入哌啶， 90 回流 4-5 h， 冷却至室温， 蒸去乙醇， 加入 18wt% 的稀盐酸溶液回流 10-12 h， 冷却至室温加入饱和乙 酸钠溶液， 用饱和 NaOH 溶液调节 pH 至 4-5， 有固体析出， 抽滤后固体用蒸馏水洗涤三次， 滤 饼干燥后用无水乙醇重结晶， 得浅黄色的 7-N， N- 二乙基氨基香豆素 ； 。
14、反应式为 ： 2） 将 POCl3 逐滴加入 DMF 中， 在 0 下反应 30 min ， 然后逐滴加入 7-N,N- 二乙基 氨基香豆素 -DMF 混合液， 在 60 下反应 12-14 h ， 然后冷却至室温， 倒入冰水中搅拌 1-2 h， 有固体析出， 抽滤后用蒸馏水洗涤三次， 滤饼干燥后用无水乙醇重结晶， ， 得桔黄色 的 7-N,N- 二乙基氨基香豆素 -3- 甲醛 ； 反应式为 ： 3) 将对甲酰基苯甲酸甲酯和二甘醇胺加入无水乙醇中， 室温下搅拌 5 h 后， 将三乙酰 氧基硼氢化钠分三次加入到反应体系中 ,TLC 检测反应进程， 待反应完全后， 加入蒸馏水， 三乙酰氧基硼氢化钠。
15、与蒸馏水的质量比为 3:4.5-5.5， 用二氯甲烷萃取、 浓缩、 干燥后， 得到 油状化合物 （） 4- N （2- 乙氧基） 乙醇甲氨基 苯甲酸甲酯 ； 反应式为 ： 说 明 书 CN 104402853 A 4 3/6 页 5 4) 将化合物 （） 和 80wt% 的水合肼加入无水乙醇中， 回流反应 24 h ， 旋出乙醇， 柱层 析提纯产物， 得化合物 ( )4 - N （2 - 乙氧基） 乙醇甲氨基 苯甲酰肼 ； 反应式为 ： 5） 将化合物 ( ) 和 7-N,N- 二乙基氨基香豆素 -3- 甲醛加入无水乙醇中， 95 下回 流 6 h， 冷却至室温， 旋出乙醇， 柱层析提纯粗产物。
16、， 得橘红色目标化合物 ( )7 - 二乙基 氨基 - 3 - 4- N - （ （2 - 乙氧基） 乙醇） 甲基氨基苯甲酰基 甲基香豆素 ( )， 反应式为 ： 所述 4- 二乙基氨基水杨醛、 丙二酸二乙酯和乙醇的质量比为 1:1.7:10， 哌啶、 稀盐 酸溶液、 饱和乙酸钠溶液的体积比为 1:60:100， 哌啶与 4- 二乙基氨基水杨醛的质量比为 1:2.2。 0009 所述 7-N,N- 二乙基氨基香豆素 -DMF 混合液的浓度为 0.5 mmol/L， POCl3 、 DMF、 说 明 书 CN 104402853 A 5 4/6 页 6 7-N,N- 二乙基氨基香豆素 -DMF 。
17、混合液的体积比为 1:1:5。 0010 所述对甲酰基苯甲酸甲酯、 二甘醇胺、 三乙酰氧基硼氢化钠、 无水乙醇的质量比为 1:2:4:12。 0011 所述化合物 （） 、 80wt% 的水合肼、 无水乙醇的质量比为 1:1.9:15。 0012 所述化合物 ( )、 7-N,N- 二乙基氨基香豆素 -3- 甲醛与无水乙醇的质量比为 1:1.3:46。 0013 一种所制备的识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的应用， 用于作为特异性荧光探针 快速检测还原性谷胱甘肽。 0014 该方法制备的荧光探针对还原型谷胱甘肽具有良好的荧光性能， 可以在水溶液中 选择性的结合金属铜离子， 紫外吸收发生红移， 荧光。
18、发射波长发生明显的淬灭， 荧光强度大 大减弱， 可肉眼观察溶液的颜色变化 ； 将溶液结合还原型谷胱甘肽后， 荧光强度又大大增 强， 同时肉眼可观察到溶液颜色变化。 0015 本发明的优点是 ： 该制备方法工艺简单、 原料易得、 易于实施， 制备的荧光探针对 还原型谷胱甘肽具有较高的选择性， 肉眼可观察到溶液颜色变化， 能够区分谷胱甘肽、 半胱 氨酸、 巯基乙酸、 巯基乙胺， 实现了对谷胱甘肽的高灵敏度检测， 具有重要的应用价值。 0016 附图说明 0017 图 1 为该探针水溶液 ( 浓度为 110-5 mol/L) 与 Cu2+反应后紫外吸收变化图。 0018 图 2 为该探针水溶液 ( 。
19、浓度为 110-5 mol/L) 与相同浓度的不同金属离子 (Sn2+、 Cd2+、 Al3+ 、 Mn2+、 K+、 Na+ 、 Mg2+ 、 Cu2+ 、 Ca2+、 Zn2+ 、 Fe3+ 、 Hg2+、 Pd2+、 Co2+) 反应后紫外吸 收变化图。 0019 图 3 为该探针水溶液 ( 浓度为 110-5 mol/L) 与 GSH 反应后紫外吸收变化图。 0020 图 4 为该探针水溶液 ( 浓度为 110-5 mol/L) 与 Cu2+反应后荧光光谱变化图。 0021 图 5 为该探针水溶液 ( 浓度为 110-5 mol/L) 与不同金属离子 (Sn2+、 Cd2+、 Al3+。
20、 、 Mn2+、 K+、 Na+ 、 Mg2+ 、 Cu2+ 、 Ca2+、 Zn2+ 、 Fe3+ 、 Hg2+、 Pd2+、 Co2+) 反应后荧光强度变化图 （离 子浓度为 110-5 mol/L） 。 0022 图 6 为该探针水溶液 ( 浓度为 110-5 mol/L) 与铜离子发生淬灭后再与 GSH 反应 的荧光光谱变化图。 0023 图7为该探针水溶液(浓度为110-5 mol/L)与铜离子发生淬灭后再与相同浓度 的 GSH、 Cys、 TGA、 MEA 反应的荧光强度变化图。 0024 具体实施方式 0025 下面通过实施例具体的说明本发明， 但本发明不受下述实施例的限定。 0。
21、026 实施例 ： 一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法， 该荧光探针的分子结构式为 ： 说 明 书 CN 104402853 A 6 5/6 页 7 制备步骤如下 ： 1） 将 1.9 g 4- 二乙基氨基水杨醛和 3.2 g 丙二酸二乙酯溶解在 25 mL 乙醇中， 加入 1 mL 哌啶， 90 回流 4-5 h， 冷却至室温， 蒸去乙醇， 加入 60 mL 18wt% 的稀盐酸溶液回流 10 h， 冷却至室温加入 100 mL 饱和乙酸钠溶液， 用饱和 NaOH 溶液调节 pH 至 4， 有固体析 出， 抽滤后固体用蒸馏水洗涤三次， 滤饼干燥后用无水乙醇重结晶， 得到 1.68 g。
22、 浅黄色的 7-N， N-二乙基氨基香豆素， 产率77.3%。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): (ppm) = 7.55 (d, J = 9.6 Hz, 1H, -CH=C-), 7.26 (d, J = 8.8 Hz, 1H, Ar-H), 6.56 (d, J = 8.8 Hz, 1H, Ar-H), 6.49 (s, 1H, Ar-H), 6.02 (d, J = 9.2 Hz, 1H, =CH-CO-), 3.42 (q, J = 7.2 Hz, 4H, -CH2-), 1.21 (t, J = 7.2 Hz, 6H, -CH3). Analytically cal。
23、culated for C13H15NO2: C, 71.87; H, 6.96; N, 6.45%. Found: C, 71.77; H, 6.99; N, 6.49%。 0027 2） 将 2 mL POCl3 逐滴加入 2 mL DMF 中， 在 0 下反应 30 min ， 然后逐滴加 入 7-N,N- 二乙基氨基香豆素 -DMF 混合液， 该混合液由 1.1 g 7-N， N- 二乙基氨基香豆素 和 10 mL DMF 混合得到， 在 60 下反应 12 h ， 然后冷却至室温， 倒入冰水中搅拌 1 h， 有 固体析出， 抽滤后用蒸馏水洗涤三次， 滤饼干燥后用无水乙醇重结晶， 得 。
24、1.28 g 桔黄色的 7-N,N- 二乙基氨基香豆素 -3- 甲醛， 产率 ： 52.2% 。 1H NMR (400MHz, CDCl 3): (ppm) = 10.16 (s, 1H, -CHO), 8.28 (s, 1H, -CH=C-), 7.46 (d, J = 8.8Hz, 1H, Ar-H), 6.65 (dd, J = 2.4, J = 8.8 Hz, 1H, Ar-H), 6.52 (d, J = 2.4 Hz, 1H, Ar-H), 3.49 (q, J = 7.2 Hz, 4H, -CH2-), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 6H, -CH3). Analy。
25、tically calculated for C14H15NO3: C, 68.56; H, 6.16; N, 5.71%. Found: C, 68.85; H, 6.13; N, 5.73%。 0028 3) 将 1.64 g 对甲酰基苯甲酸甲酯和 3.28 g 二甘醇胺加入 25 mL 无水乙醇中， 室 温下搅拌 5 h 后， 将 6.55 g 三乙酰氧基硼氢化钠分三次加入到反应体系中 ,TLC 检测反应 进程， 待反应完全后， 加入10 g蒸馏水， 用二氯甲烷萃取、 浓缩、 干燥后， 得到1.21 g油状化 合物 （） 4- N （2- 乙氧基） 乙醇甲氨基 苯甲酸甲酯， 产率 47.。
26、8%。1H NMR (400MHz, CDCl3): (ppm) = 8.02 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ar-H), 7.42 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ar-H), 3.93 (s, 3H, -CH3), 3.90 (s, 2H, -CH2-), 3.75 (t, J = 4Hz, 2H, -CH2-), 3.66 (t, J = 5.2 Hz, -CH2-), 3.61 (t, J = 4.8 Hz, -CH2-), 2.85 (t, J = 5.2 Hz, -CH2-), 2.22 (s, 2H, -NH-, -OH),Analytically calcul。
27、ated for C13H19NO4： C, 61.64; H, 7.56; N, 5.53%. Found: C, 61.54 ; H, 7.67; N, 5.56%。 0029 4) 将 0.76 g 化合物 （） 和 1.47 g 80wt% 的水合肼加入 15 mL 无水乙醇中， 回流 反应 24 h ， 旋出乙醇， 柱层析提纯产物， 得 0.68 g 化合物 ( )4 - N （2 - 乙氧基） 乙醇甲氨基 苯甲酰肼 , 产率 87.2%。 1H NMR (400MHz, CDCl 3): (ppm) = 7.70 (d, J = 8.4 Hz , 2H, Ar-H), 7.41 (。
28、d, J = 8.4 Hz, 2H, Ar-H), 7.34 (s, 1H, -NH-), 3.87 (s, 2H, -CH2-), 3.73 (t, J = 4 Hz, 2H, -CH2-), 3.64 (t, J = 5.2 Hz, -CH2-), 3.59 (t, J = 4.8 Hz, -CH2-), 2.82 (t, J = 5.2 Hz, -CH2-), Analytically calculated for 说 明 书 CN 104402853 A 7 6/6 页 8 C12H19N3O3: C, 56.90; H, 7.56; N, 16.59%. Found: C, 56.8。
29、5 ; H, 7.64 ; N, 16.46%。 0030 5） 将 0.17 g 化合物 ( ) 和 0.23 g 7-N,N- 二乙基氨基香豆素 -3- 甲醛加入 10 mL 无水乙醇中， 95 下回流 6 h， 冷却至室温， 旋出乙醇， 柱层析提纯粗产物， 得 0.11 g 橘红色目标化合物 ( )7 - 二乙基氨基 - 3 - 4- N - （ （2 - 乙氧基） 乙醇） 甲 基氨基苯甲酰基 甲基香豆素， 产率 32.7%。1H NMR (400MHz, DMSO-d6): (ppm) = 11.86 (s, 1H, -NH-), 8.51 (s, 1H, -CH=N-), 8.38 。
30、(s, 1H, Ar-H), 7.89 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.66 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8 Hz, 2H), 6.77 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.59 (s, 1H, Ar-H), 3.85 (s, 2H, -CH2-), 3.50 (m, 8H, -CH2-),3.42 (m, 4H, -CH2-), 1.15 (t, J = 6.8 Hz, 6H, -CH3). 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6): (ppm) = 163.14, 161.29, 156.99, 151.79, 145。
31、.54, 142.65, 139.04, 132.05, 131.29, 128.25, 127.99, 113.18, 110.21, 108.57, 96.91, 72.65, 70.44, 60.75, 53.00, 48.62, 44.72, 12.83. Analytically calculated for C26H32N4O5 : C, 64.98; H, 6.71; N, 11.66%. Found: C, 64.87 ; H, 6.59 ; N, 11.78%. ESI-MS: m/z: calcd: 481.2451, found: 481.2458 M+1。 0031 所。
32、制备的识别谷胱甘肽的特异性荧光探针， 用于作为识别谷胱甘肽的特异性荧光 探针。 0032 荧光探针的光谱测试 ： 将制备的荧光探针溶于水中， 配制成浓度为110-5 mol/L的水溶液， 检测其光谱性能。 图 1 为该探针水溶液加入不同浓度的铜离子检测紫外光谱变化图， 图 1 中可以看出最大吸 收波长为 457 nm， 加入不同浓度的铜离子后紫外吸收光谱发生红移。图 2 是相同浓度的金 属离子 Sn2+、 Cd2+、 Al3+ 、 Mn2+、 K+、 Na+ 、 Mg2+ 、 Cu2+ 、 Ca2+、 Zn2+ 、 Fe3+ 、 Hg2+、 Pd2+、 Co2+与 荧光探针反应后的吸收图谱， 。
33、从图中可以看出只有铜离子发生红移， 其他金属离子加到溶 液中紫外吸收光谱几乎没有任何变化。图 3 是探针 - 铜离子与 GSH 作用的紫外吸收变化图 谱， 可见加入 GSH 后， 紫外吸收发生蓝移。图 4 是探针加入不同浓度发铜离子的荧光变化光 谱， 图中表明 ： 最大吸收波长为 457 nm， 发射波长为 522 nm， 加入铜离子后， 荧光淬灭， 荧光 强度大大减弱。图 5 是相同浓度是金属离子 Sn2+、 Cd2+、 Al3+ 、 Mn2+、 K+、 Na+ 、 Mg2+ 、 Cu2+ 、 Ca2+、 Zn2+ 、 Fe3+ 、 Hg2+、 Pd2+、 Co2+与荧光探针反应后的荧光强度。
34、变化图谱， 从图中可以看 出只有金属 Cu2+使荧光淬灭。图 6 是探针 -Cu2+加入不同 GSH 后荧光变化图谱， 可见加入 GSH 后， 荧光强度增强。图 7 为探针 -Cu2+中加入相同浓度的 GSH、 TGA、 Cys、 MEA 的荧光强度 变化图， 图中可以看出只有 GSH 荧光强度变化大， 效果明显， 探针对 GSH 有很高的灵敏度。 说 明 书 CN 104402853 A 8 1/4 页 9 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 104402853 A 9 2/4 页 10 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 104402853 A 10 3/4 页 11 图 5 图 6 说 明 书 附 图 CN 104402853 A 11 4/4 页 12 图 7 说 明 书 附 图 CN 104402853 A 12 。