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1、(10)申请公布号 CN 104237445 A (43)申请公布日 2014.12.24 CN 104237445 A (21)申请号 201410351751.8 (22)申请日 2014.07.23 G01N 30/90(2006.01) (71)申请人 江苏七七天然制药有限公司 地址 212005 江苏省镇江市朱方路 102 号 (72)发明人 耿秋霞 陈清华 贺敬竹 (74)专利代理机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 代理人 李纪昌 (54) 发明名称 一种五仙膏的质量检测方法 (57) 摘要 本发明公开了一种五仙膏的质量检测方法， 五仙膏的质量检测方法包括 ： 陈皮的。
2、薄层色谱鉴 别和麦冬的薄层色谱鉴别。本发明提供的一种五 仙膏的质量检测方法， 增加了陈皮、 麦冬的薄层鉴 别方法， 该方法可以客观、 全面、 准确的评价五仙 膏的质量， 对控制生产过程的质量、 保证产品的疗 效有重要意义。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 (10)申请公布号 CN 104237445 A CN 104237445 A 1/1 页 2 1. 一种五仙膏的质量检测方法， 其特征在于五仙膏的质量检测方法如下 ： 1） 陈皮的薄层色谱鉴别方法 ： 。
3、供试品溶液的制备 ： 取五仙膏 10g， 加水 30mL 使溶解， 加 5mL 饱和氯化钠溶液， 再加乙 酸乙酯 20mL， 超声处理 2 次， 每次 20 分钟， 合并乙酸乙酯液， 蒸干， 残渣加甲醇 1mL 使溶解， 作为供试品溶液 ； 对照药材溶液的制备 ： 取陈皮对照药材 2g， 加水 30mL 使溶解， 加 5mL 饱和氯化钠溶液， 再加乙酸乙酯20mL， 超声处理2次， 每次20分钟， 合并乙酸乙酯液， 蒸干， 残渣加甲醇1mL使 溶解， 作对照药材溶液 ； 对照品溶液的制备 ： 取橙皮苷对照品， 加甲醇制成每 1mL 含 0.5mg 橙皮苷的溶液， 作为 对照品溶液 ； 薄层层析。
4、 ： 吸取供试品溶液和对照药材溶液各 5L， 对照品溶液 2L， 分别点于同一用 0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上， 以体积比为28101的三氯甲烷-甲醇-水 为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以显色剂， 置紫外光灯下检视 ； 供试品色谱中， 分别在与对照 品色谱和对照药材色谱相应位置上， 显相同颜色的荧光斑点 ； 2） 麦冬的薄层色谱鉴别方法 ： 供试品溶液的制备 ： 取五仙膏 20g， 加水 20mL 使溶解， 加 0.5% 的 HCl 溶液 20mL， 加热回 流， 放冷， 加三氯甲烷20mL振摇提取， 三氯甲烷液蒸干， 残渣加甲醇1mL使溶解， 作为供试品 溶液 ； 对照药。
5、材溶液的制备 ： 另取麦冬对照药材 2g 同供试品溶液的制备法制成对照药材溶 液 ； 薄层层析 ： 吸取上述两种溶液各 10L， 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅 胶 G 薄层板上， 以体积比为 4 1 三氯甲烷 - 丙酮为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以显色剂， 105加热至斑点显色清晰， 供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应位置上， 显相同颜色的 斑点。 2. 根据权利要求 1 所述的一种五仙膏的质量检测方法， 其特征在于 ： 所述陈皮的薄层 色谱鉴别方法中薄层层析中使用的显色剂为 1% 三氯化铝乙醇溶液。 3. 根据权利要求 1 所述的一种五仙膏的质量检测方法， 其特征在于。
6、 ： 所述麦冬的薄层 色谱鉴别方法中薄层层析中使用的显色剂为 10% 硫酸乙醇溶液。 4. 根据权利要求 1 所述的一种五仙膏的质量检测方法， 其特征在于 ： 所述加热回流的 时间为 30min。 5. 根据权利要求 1 所述的一种五仙膏的质量检测方法， 其特征在于 ： 所述紫外光灯为 波长 365nm 紫外光灯。 权 利 要 求 书 CN 104237445 A 2 1/5 页 3 一种五仙膏的质量检测方法 技术领域 0001 本发明涉及一种五仙膏的质量检测方法， 属于中药质量检测领域。 背景技术 0002 江苏七 0 七天然制药有限公司生产的五仙膏， 中医药方， 健脾开胃， 滋肾清肝， 益。
7、 气生津， 清利头目。用于胁胀脘痞， 消化不良， 耳鸣目眩， 记忆衰退， 口干津少， 四肢无力等。 0003 五仙膏的处方为人参 50g、 白术 100g、 茯苓 150g、 菊花 100g、 枸杞子 100g、 地黄 200g、 麦冬 150g、 陈皮 100g、 葛根 100g、 蔓荆子 50g、 六神曲 150g。 五仙膏的 制法以上十一味， 加水煎煮三次， 第一次4小时， 第二、 三次各3小时， 合并煎液， 滤过， 静置， 取上清液浓缩至相对密度为 1.20 （80） 的清膏。另取清膏 4 倍量的蔗糖， 加热溶化， 滤过， 与清膏合并， 混匀， 浓缩至规定的相对密度， 即得。五仙膏性状。
8、为本品为黑褐色稠厚的半流 体 ； 味甜。 而现有的质量标准中只有性状和检查项， 无鉴别方法， 不能很好的控制产品质量。 0004 为了有效控制生产过程的质量、 保证产品的疗效， 需要研究设计出一种能准确检 测五仙膏制剂中有效成分的检测方法。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供一种五仙膏的质量检测方法， 以提高五仙膏的质量控制标 准， 该方法简单、 易操作， 能够快速准确的鉴别中药五仙膏。 0006 本发明的技术方案是这样的 ： 一种五仙膏的质量检测方法， 该方法的步骤如下 ： 1） 陈皮的薄层色谱鉴别方法 ： 供试品溶液的制备 ： 取五仙膏 10g， 加水 30ml 使溶解， 加 5mL。
9、 饱和氯化钠溶液， 再加乙 酸乙酯 20ml， 超声处理 2 次， 每次 20 分钟， 合并乙酸乙酯液， 蒸干， 残渣加甲醇 1ml 使溶解， 作为供试品溶液 ； 对照药材溶液的制备 ： 取陈皮对照药材 2g， 加水 30ml 使溶解， 加 5mL 饱和氯化钠溶液， 再加乙酸乙酯20ml， 超声处理2次， 每次20分钟， 合并乙酸乙酯液， 蒸干， 残渣加甲醇1ml使 溶解， 作对照药材溶液 ； 对照品溶液的制备 ： 取橙皮苷对照品， 加甲醇制成每 1ml 含 0.5mg 橙皮苷的溶液， 作为 对照品溶液 ； 薄层层析 ： 吸取供试品溶液和对照药材溶液各 5l， 对照品溶液 2l， 分别点于同一。
10、用 0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上， 以体积比为28101的三氯甲烷-甲醇-水 为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以显色剂， 置波长 365nm 紫外光灯下检视 ； 供试品色谱中， 分 别在与对照品色谱和对照药材色谱相应位置上， 显相同颜色的荧光斑点 ； 2） 麦冬的薄层色谱鉴别方法 ： 供试品溶液的制备 ： 取五仙膏 20g， 加水 20ml 使溶解， 加 0.5% 的 HCl 溶液 20ml， 加热回 流， 放冷， 加三氯甲烷20ml振摇提取， 三氯甲烷液蒸干， 残渣加甲醇1ml使溶解， 作为供试品 溶液。 说 明 书 CN 104237445 A 3 2/5 页 4 000。
11、7 对照药材溶液的制备 ： 另取麦冬对照药材 2g 同供试品溶液的制备法制成对照药 材溶液。 0008 薄层层析 ： 吸取上述两种溶液各 10l， 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合 剂的硅胶 G 薄层板上， 以体积比为 4 1 三氯甲烷 - 丙酮为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 显色剂， 105加热至斑点显色清晰， 供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应位置上， 显相同 颜色的斑点。 0009 所述陈皮的薄层色谱鉴别方法中薄层层析中使用的显色剂为 1% 三氯化铝乙醇溶 液。 0010 所述麦冬的薄层色谱鉴别方法中薄层层析中使用的显色剂为 10% 硫酸乙醇溶液。 0011 所述加热回流的。
12、时间为 30min。 0012 有益效果 本发明的五仙膏的质量检测方法在于方法简单、 准确， 提高了五仙膏的质量控制标准， 增加了陈皮和麦冬的薄层色谱鉴别方法， 保证了本复方制剂较高的质量标准水平。 附图说明 0013 图 1 是本发明中实施例 2 的五仙膏的陈皮的薄层色谱鉴别比较图。 0014 图 2 是本发明中实施例 3 的五仙膏的麦冬的薄层色谱鉴别比较图。 具体实施方式 0015 实施例 1、 五仙膏的制备 五仙膏的处方 ： 人参 50g、 白术 100g、 茯苓 150g、 菊花 100g、 枸杞子 100g、 地黄 200g、 麦冬 150g、 陈皮 100g、 葛根 100g、 蔓。
13、荆子 50g、 六神曲 150g。 0016 制法 ： 以上十一味， 加水煎煮三次， 第一次 4 小时， 第二、 三次各 3 小时， 合并煎液， 滤过， 静置， 取上清液浓缩至相对密度为 1.20（80） 的清膏。另取清膏 4 倍量的蔗糖， 加 热溶化， 滤过， 与清膏合并， 混匀， 浓缩至规定的相对密度， 即得。 0017 实施例 2、 陈皮的薄层色谱鉴别 供试品溶液制备 ： 取五仙膏 5g， 加水 30ml 使溶解， 加 5mL 饱和氯化钠溶液， 再加乙酸乙 酯 20ml， 超声处理 2 次， 每次 20 分钟， 合并乙酸乙酯液， 蒸干， 残渣加甲醇 1ml 使溶解， 作为 供试品溶液 ；。
14、 取江苏七 O 七天然制药有限公司生产的 3 个不同批号的五仙膏， 按照上述供试品溶液 制备方法， 分别制得 3 份供试品溶液。 0018 对照药材溶液的制备 ： 取陈皮对照药材 2g， 加水 30ml 使溶解， 加 5mL 饱和氯化钠 溶液， 再加乙酸乙酯 20ml， 超声处理 2 次， 每次 20 分钟， 合并乙酸乙酯液， 蒸干， 残渣加甲醇 1ml 使溶解， 作对照药材溶液 ； 对照品溶液的制备 ： 取橙皮苷对照品， 加甲醇制成每 1ml 含 0.5mg 橙皮苷的溶液， 作为 对照品溶液 ； 阴性对照液 ： 取缺陈皮的阴性样品 5g， 用与供试品溶液相同的制备方法， 分别制得陈 皮阴性对。
15、照液。 0019 薄层层析 ： 照薄层色谱法 （ 中国药典 2010年版一部附录 B） 试验吸取供试品溶 说 明 书 CN 104237445 A 4 3/5 页 5 液和对照药材溶液各5l， 对照品溶液2l， 分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶 G 薄层板上， 以三氯甲烷 - 甲醇 - 水 （28 10 1） 为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 1% 三 氯化铝乙醇溶液， 置紫外光灯(365nm)下检视 ； 附图1为本实施例中各个溶液的薄层色谱鉴 别比较图。图中从左至右依次为 ： 阴性对照液条带， 陈皮对照药材溶液条带 （中检所） ， 橙皮 苷对照品溶液条带， 供试品溶液 1。
16、 条带， 供试品溶液 2 条带， 供试品溶液 3 条带 ； 硅胶 G 薄层 板 ( 青岛海洋化工厂生产 )（供薄层层析用） ， 其它试剂均为 AR 级。温度 ： 23， 湿度 ： 56%。 0020 从图 1 中可以清楚看出， 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜 色的荧光斑点， 阴性无干扰。试验说明， 本实施例中展开剂的分离效果好， 系统 Rf 值适中， 特征斑点清晰、 圆整， 同时提取过程无污染。 0021 实施例 3、 麦冬的薄层色谱鉴别 ： 供试品溶液的制备 ： 取五仙膏 20g， 加水 20ml 使溶解， 加 0.5% 的 HCl 溶液 20ml， 加热回 流 30。
17、min， 放冷， 加三氯甲烷 20ml 振摇提取， 三氯甲烷液蒸干， 残渣加甲醇 1ml 使溶解， 作为 供试品溶液。取江苏七 O 七天然制药有限公司生产的 3 个不同批号的五仙膏， 按照上述供 试品溶液制备方法， 分别制得 3 份供试品溶液。 0022 对照药材溶液的制备 ： 另取麦冬对照药材 2g ， 加水 20ml 使溶解， 加 0.5% 的 HCl 溶液20ml， 加热回流30min， 放冷， 加三氯甲烷20ml振摇提取， 三氯甲烷液蒸干， 残渣加甲醇 1ml 使溶解， 作为对照药材溶液。 0023 阴性对照液 ： 取缺麦冬的阴性样品 5g， 用与供试品溶液相同的制备方法， 分别制 得。
18、麦冬阴性对照液。 0024 薄层层析 ： 照薄层色谱法 （ 中国药典 2010 年版一部附录 B） 试验， 吸取上述 两种溶液各 10l， 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上， 以三氯甲 烷 - 丙酮 （4 1） 为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 10% 硫酸乙醇溶液， 105加热至斑点显 色清晰， 附图2为本实施例中各个溶液的薄层色谱鉴别比较图。 图中从左至右依次为 ： 麦冬 麦冬对照药材溶液条带 （中检所） ， 麦冬阴性对照液条带， 供试品溶液 1 条带， 供试品溶液 2 条带， 供试品溶液 3 条带 ； 硅胶 G 薄层板 ( 青岛海洋化工厂生产 )（供薄层层。
19、析用） ， 其它试 剂均为 AR 级。温度 ： 23， 湿度 ： 56%。 0025 从图 2 中可以清楚看出， 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜 色的荧光斑点， 试验说明， 本实施例中展开剂的分离效果好， 展开系统 Rf 值为 0.5， 特征斑 点清晰、 圆整。 0026 对照例 1 本对照例供试品溶液的制备如下 ： 取五仙膏 5g， 加甲醇 10ml， 加热回流 20 分钟， 滤过， 取续滤液 5ml， 浓缩至干， 用甲醇 2ml 溶解残渣， 作为供试品溶液。其它步骤 （对照品溶液的 制备、 阴性对照液制备、 薄层层析试验等） 与实施例 2 中都相同。对五仙膏中的陈皮。
20、的薄层 鉴别结果显示 ： 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 斑点显色不清楚， 而阴性对 照液无此斑点。 0027 对照例 2 本对照例供试品溶液的制备如下 ： 取五仙膏 5g， 加甲醇 20ml 超声处理 15 分钟， 滤过， 滤液水浴蒸干， 残渣 加甲酵2ml， 溶解作为供试品溶液。 其它步骤 （对照品溶液的制备、 阴性 对照液制备、 薄层层析试验等） 与实施例 2 中都相同。对五仙膏中的陈皮的薄层鉴别结果显 说 明 书 CN 104237445 A 5 4/5 页 6 示 ： 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 斑点显色不明显， 而阴性对照液无此斑 点。 0028 对。
21、照例 3 本对照例供试品溶液的制备如下 ： 取五仙膏 5g， 加乙酸乙酯 20ml， 30 分钟， 滤过， 蒸 干， 残渣加甲醇 1ml 使溶解， 作为供试品溶液。其它步骤 （对照品溶液的制备、 阴性对照液制 备、 薄层层析试验等） 与实施例 2 中都相同。对五仙膏中的陈皮的薄层鉴别结果显示 ： 供试 品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 斑点显色不明显， 而阴性对照液无此斑点。 0029 对照例 4 本对照例中展开剂为乙酸乙酯 - 甲醇 - 水 （100 17 13） 和二次展开剂为三氯甲 烷 - 乙酸乙酯 - 冰醋酸 - 水 （20 10 10 1） ， 其它步骤 （供试品溶液、 对照。
22、品溶液的制 备、 阴性对照液制备、 薄层层析试验等） 与实施例 2 中都相同。对五仙膏中的陈皮的薄层鉴 别结果显示 ： 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 展开系统 Rf 值为 0.89， 偏高， 斑点显色不明显， 而阴性对照液无此斑点。 0030 对照例 5 本对照例中展开剂乙酸乙酯 - 甲醇 - 水 （100 17 13） 和二次展开剂甲苯 - 乙酸乙 酯 - 冰醋酸 - 水 （20 10 10 1） ， 其它步骤 （供试品溶液、 对照品溶液的制备、 阴性对照 液制备、 薄层层析试验等） 与实施例 2 中都相同。对五仙膏中的陈皮的薄层鉴别结果显示 ： 供试品色谱中， 在与对照品色。
23、谱相应的位置上， 展开系统 Rf 值为 0.76， 偏高， 斑点显色不明 显， 而阴性对照液无此斑点。 0031 对照例 6 本对照例中除了展开剂选用三氯甲烷与甲醇的体积比为 9:1， 其它步骤 （供试品溶液、 对照品溶液的制备、 阴性对照液制备、 薄层层析试验等） 与实施例 2 中都相同。对五仙膏中 的陈皮的薄层鉴别结果显示 ： 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 展开系统 Rf 值为 0.64， 但是斑点显色不完整， 而阴性对照液无此斑点。 0032 对照例 7 本对照例中除了展开剂选用正己烷-丙酮-乙酸乙酯按体积配比313， 其它步骤 （供试品溶液、 对照品溶液的制备、 阴性对。
24、照液制备、 薄层层析试验等） 与实施例 2 中都相同。 对五仙膏中的陈皮的薄层鉴别结果显示 ： 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 展 开系统 Rf 值为 0.68， 但是斑点显色不完整， 而阴性对照液无此斑点。 0033 对照例 8 本对照例供试品溶液的制备如下 ： 取五仙膏 5g， 加乙醇 20ml， 加热回流 20 分钟， 滤过， 滤液作为供试品溶液。其它步骤 （对照品溶液的制备、 阴性对照液制备、 薄层层析试验等） 与 实施例3中都相同。 对五仙膏中的麦冬的薄层鉴别结果显示 ： 供试品色谱中， 在与对照品色 谱相应的位置上， 背景颜色较深， 斑点显色不清楚， 而阴性对照液无此。
25、斑点。 0034 对照例 9 本对照例供试品溶液的制备如下 ： 取五仙膏5g， 加乙醇10ml， 密塞， 超声30分钟， 滤过， 滤液作为供试品溶液。其它步骤 （对照品溶液的制备、 阴性对照液制备、 薄层层析试验等） 与 实施例3中都相同。 对五仙膏中的麦冬的薄层鉴别结果显示 ： 供试品色谱中， 在与对照品色 谱相应的位置上， 背景颜色较深， 斑点显色不清楚而阴性对照液无此斑点。 说 明 书 CN 104237445 A 6 5/5 页 7 0035 对照例 10 本对照例供试品溶液的制备如下 ： 取五仙膏 5g， 加水 30ml 使溶解， 再加入甲醇 20ml 提 取， 甲醇液蒸干， 加入水。
26、饱和的正丁醇 30ml 超声 30min， 正丁醇液蒸干， 残渣加甲醇 1ml 溶 解， 作为供试品溶液。阴性与对照药材溶液同上述方法制得。参考 2010 版药典计有关资 料， 分别吸取上述三种溶液各 10l， 点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板 上， 展开剂为三氯甲烷 - 乙酸乙酯 - 甲醇 - 水 （15 40 22 10） 的下层溶液。展开后 在 105加热至斑点显色清晰。对五仙膏中的麦冬的薄层鉴别结果显示 ： 供试品色谱中， 在 与对照品色谱相应的位置上， 斑点显色不清楚， 而阴性对照液无此斑点。与实施例 2 相比， 可以看出实施例 2 中采用了水解方法， 水解后药材、。
27、 供试品斑点清晰， 阴性无干扰。但是本 对照例中不水解的话， 由于复方中成分复杂， 含皂苷类物质较多， 干扰较大， 鉴别结果差。 0036 对照例 11 本对照例中除了展开剂选用三氯甲烷 - 正已烷 （15 3） ， 其它步骤 （供试品溶液、 对照 品溶液的制备、 阴性对照液制备、 薄层层析试验等） 与实施例 3 中都相同。对五仙膏中的麦 冬的薄层鉴别结果显示 ： 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 展开系统 Rf 值为 0.3， 但是斑点显色不完整， 而阴性对照液无此斑点。 0037 对照例 12 本对照例中除了展开剂选用苯 - 丙酮 （20 1） ， 其它步骤 （供试品溶液、 对。
28、照品溶液的 制备、 阴性对照液制备、 薄层层析试验等） 与实施例3中都相同。 对五仙膏中的麦冬的薄层鉴 别结果显示 ： 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 展开系统 Rf 值为 0.18， 偏低， 斑点显色不完整， 而阴性对照液无此斑点。 0038 对照例 13 本对照例中除了展开剂选用丙酮 - 甲醇 （15 4） ， 其它步骤 （供试品溶液、 对照品溶液 的制备、 阴性对照液制备、 薄层层析试验等） 与实施例 3 中都相同。对五仙膏中的麦冬的薄 层鉴别结果显示 ： 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 展开系统 Rf 值为 0.28， 偏 低， 斑点显色不明显， 而阴性对照。
29、液无此斑点。 0039 对照例 14 本对照例中除了显示剂选用 10% 硫酸乙醇溶液， 其它步骤 （供试品溶液、 对照品溶液的 制备、 阴性对照液制备、 薄层层析试验等） 与实施例 2 中都相同。对五仙膏中的陈皮的薄层 鉴别结果显示 ： 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 斑点显色不太明显， 而阴性 对照液无此斑点。 0040 对照例 15 本对照例中除了显示剂选用 10% 氢氧化钾硫酸溶液， 其它步骤 （供试品溶液、 对照品溶 液的制备、 阴性对照液制备、 薄层层析试验等） 与实施例 3 中都相同。对五仙膏中的麦冬的 薄层鉴别结果显示 ： 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 斑点显色不明显， 同时 显色时间长， 而阴性对照液无此斑点。 说 明 书 CN 104237445 A 7 1/2 页 8 图 1 说 明 书 附 图 CN 104237445 A 8 2/2 页 9 图 2 说 明 书 附 图 CN 104237445 A 9 。