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1、(10)申请公布号 CN 104297381 A (43)申请公布日 2015.01.21 CN 104297381 A (21)申请号 201410618081.1 (22)申请日 2014.11.05 G01N 30/02(2006.01) (71)申请人 光明乳业股份有限公司 地址 201103 上海市闵行区吴中路 578 号 (72)发明人 刘景 任婧 郭本恒 刘振民 (74)专利代理机构 上海弼兴律师事务所 31283 代理人 朱水平 王卫彬 (54) 发明名称 一种游离的中链脂肪酸的测定方法 (57) 摘要 本发明公开了一种游离的中链脂肪酸的测定 方法， 包括以下步骤 ： 将待测样。
2、品和混合脂肪酸 标样分别经萃取， 气相色谱分离， 质谱检测， 即可 ； 所述的待测样品包括待测物和内标溶液 ； 所述的 待测物为原料乳、 液体乳制品或固体乳制品 ； 当 所述的待测物为原料乳或液体乳制品时， 所述的 待测样品还包括氯化钠 ； 当所述的待测物为固体 乳制品时， 所述的待测样品还包括水 ； 所述的混 合脂肪酸标样包括外标溶液和内标溶液 ； 所述的 外标溶液为己酸、 辛酸和癸酸中的一种或多种的 乙醇水溶液 ； 所述的内标溶液为庚酸的乙醇水溶 液 ； 所述的中链脂肪酸为己酸、 辛酸和癸酸中的 一种或多种。该方法操作简单、 准确度高、 精密度 高和萃取效率高。 (51)Int.Cl. 权。
3、利要求书 2 页 说明书 12 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书12页 附图2页 (10)申请公布号 CN 104297381 A CN 104297381 A 1/2 页 2 1. 一种游离的中链脂肪酸的测定方法， 包括以下步骤 ： 将待测样品和混合脂肪酸标样 分别经萃取， 气相色谱分离， 质谱检测， 即可 ； 所述的待测样品包括待测物和内标溶液 ； 所述的待测物为原料乳、 液体乳制品或固体 乳制品 ； 当所述的待测物为原料乳或液体乳制品时， 所述的待测样品还包括氯化钠 ； 当所 述的待测物为固体乳制品时， 所述的待测样品还。
4、包括水 ； 所述的混合脂肪酸标样包括外标 溶液和内标溶液 ； 所述的外标溶液为己酸、 辛酸和癸酸中的一种或多种的乙醇水溶液 ； 所 述的内标溶液为庚酸的乙醇水溶液 ； 所述的中链脂肪酸为己酸、 辛酸和癸酸中的一种或多 种。 2. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述的液体乳制品为灭菌乳和 / 或发酵乳 ； 和 / 或， 所述的固体乳制品为干酪和 / 或干酪制品。 3. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 当所述的待测物为原料乳或液体乳制品时， 所述的待测物与所述的内标溶液的体积比为 10:1 103:1， 所述的待测物与所述的氯化钠 的体积质量比为 1mL/g 10mL/g。
5、 ； 和 / 或， 当所述的待测物为固体乳制品时， 所述的待测物与所述的水的质量体积比为 0.01g/mL 1g/mL， 所述的水与所述的内标溶液的体积比为 10:1 103:1。 4. 如权利要求 3 所述的方法， 其特征在于， 当所述的待测物为原料乳或液体乳制品时， 所述的待测物与所述的内标溶液的体积比为 50:1 150:1， 所述的待测物与所述的氯化钠 的体积质量比为 3mL/g 8mL/g ； 和 / 或， 当所述的待测物为固体乳制品时， 所述的待测物与所述的水的质量体积比为 0.05g/mL 0.5g/mL， 所述的水与所述的内标溶液的体积比为 50:1 150:1。 5. 如权利。
6、要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述的混合脂肪酸标样中所述的外标溶液 和所述的内标溶液的体积比为 10:1 103:1 ； 和 / 或， 所述的外标溶液中所述的乙醇水溶液为 5乙醇水溶液 ； 和/或， 所述的外标溶液中所述的己酸与所述的乙醇水溶液的质量体积比为10mg/L 200mg/L ； 和/或， 所述的外标溶液中所述的辛酸与所述的乙醇水溶液的质量体积比为10mg/L 200mg/L ； 和/或， 所述的外标溶液中所述的癸酸与所述的乙醇水溶液的质量体积比为10mg/L 200mg/L ； 和 / 或， 所述的内标溶液中所述的庚酸与所述的乙醇水溶液的质量体积比为 0.1mg/ mL 2。
7、0mg/mL。 6. 如权利要求 5 所述的方法， 其特征在于， 所述的混合脂肪酸标样中所述的外标溶液 和所述的内标溶液的体积比为 50:1 150:1 ； 和/或， 所述的外标溶液中所述的己酸与所述的乙醇水溶液的质量体积比为45mg/L 60mg/L ； 和/或， 所述的外标溶液中所述的辛酸与所述的乙醇水溶液的质量体积比为45mg/L 60mg/L ； 和/或， 所述的外标溶液中所述的癸酸与所述的乙醇水溶液的质量体积比为45mg/L 60mg/L ； 权 利 要 求 书 CN 104297381 A 2 2/2 页 3 和 / 或， 所述的内标溶液中所述的庚酸与所述的乙醇水溶液的质量体积比为。
8、 0.5mg/ mL 5mg/mL。 7. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述的萃取为固相微萃取 ； 所述的固相微萃 取的萃取头为聚二甲基硅氧烷-二乙烯基苯萃取头 ； 所述的固相微萃取的时间为15分钟 60 分钟。 8. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述的气相色谱的条件如下 ： 毛细管柱采 用 Varian 公司生产的 VF-5ms ； 载气为 He， 流速为 1mL/min ； 色谱柱起始柱温为 40， 保持 4min， 以 10 /min 升到 60， 再以 6 /min 升到 120， 最后以 10 /min 升到 230， 保 持 5min ； 进样口温度。
9、 230， 无分流进样， 检测器电压 800V。 9. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述的质谱条件如下 ： 电子轰击离子源， 电 子能量 70eV ； 灯丝发射电流 200A， 离子源温度 200， 传输线温度 250； 扫描模式 Scan ； 自动扫描时间 0.3s， 扫描间隔时间 0.2s ； 质量扫描范围 m/z 20 200。 10. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 定性方法如下 ： 将待测样品的己酸、 辛酸或癸酸的质谱与 Nist 谱库中的质谱对比 ； 或者， 将待测样品 的己酸、 辛酸或癸酸的保留时间和质谱， 与混合脂肪酸标样在相同的 GC-MS 条件下。
10、测得的 保留时间和质谱对比 ； 和 / 或， 定量方法如式 (1) 所示 ： 式中 ： mi： 待测样品中目标脂肪酸的含量， 单位为毫克每升或毫克每百克 ； As： 混合脂肪酸标样中内标物的峰面积 ； Ai： 待测样品中目标脂肪酸的峰面积 ； Asi： 待测样品中内标物的峰面积 ； Ar： 混合脂肪酸标样中目标脂肪酸的峰面积 ； mr： 混合脂肪酸标样中目标脂肪酸含量， 单位为毫克每升 ； 其中， 所述的目标脂肪酸为己酸、 辛酸或癸酸 ； 所述的内标物为庚酸。 权 利 要 求 书 CN 104297381 A 3 1/12 页 4 一种游离的中链脂肪酸的测定方法 技术领域 0001 本发明涉及。
11、一种游离的中链脂肪酸的测定方法。 背景技术 0002 原料乳和乳制品中的游离脂肪酸对其品质产生重要影响， 尤其对乳制品风味的作 用影响最大。游离脂肪酸作为乳及乳制品的风味物质及风味物质前体， 一部分来自于原料 固有成分， 比如原料乳中的乳脂肪即三甘油酯混合物， 就是由长链脂肪酸和中短链脂肪酸 构成。 还有一部分游离脂肪酸可能是在加工制造过程中产生， 比如干酪的成熟过程中， 乳脂 肪会在脂肪酶的作用下产生游离脂肪酸， 赋予干酪强烈的特征性风味 ； 在被嗜冷菌污染的 液态乳 ( 特别是货架保质期较长的超高温灭菌乳 ) 中， 脂肪水解产生的游离脂肪酸含量增 加， 最终造成产品出现脂肪氧化、 酸败等不。
12、良风味。 0003 原料乳和乳制品中游离的中链脂肪酸主要有己酸 (C6H12O2)、 辛酸 (C8H16O2) 和癸酸 (C10H20O2)。 这三种脂肪酸都具有明显而强烈的风味特征 ： 己酸的主体风味描述为汗臭味、 腐 臭味、 山羊味等， 风味阈值为 0.093-10mg/L ； 辛酸的主体风味描述为辛辣味、 山羊味， 风味 阈值为0.91-19mg/L ； 癸酸的主体风味描述为哈喇味、 山羊味， 风味阈值为2.2-102mg/L。 这 些中链脂肪酸对原料乳和乳制品的风味影响非常明显， 因此， 无论是从原料乳及液体乳制 品的质量安全控制、 还是干酪等发酵乳制品的风味形成角度， 中链游离脂肪酸。
13、的含量都应 在乳品生产制造过程中予以监测。 0004 现行国家标准 GB5413.27-2010婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定 中对乳品中 的脂肪酸测定方法进行了描述 ： 使用盐酸 - 甲醇 ( 由乙酰氯与甲醇反应得到 ) 使样品中 的游离脂肪酸甲酯化， 用甲苯提取后， 经气相色谱仪分离检测， 外标法定量。游离脂肪酸 在三氟化硼催化下进行甲酯化反应， 经气相色谱柱分离， 以氢火焰离子化检测器检测， 外标 法定量。 这两种方法都是使用衍生化试剂将脂肪酸甲酯化， 然后通过气相色谱分离， 使用外 标法定量。常用测定脂肪酸的衍生化方法虽然可以一次性检出多种脂肪酸 ( 包括短链、 中 链和长链 N 端脂。
14、肪酸 )， 但步骤繁琐、 重复性和回收率相对不高， 在实验室和工业检测中具 有一定局限性。 0005 顶空固相微萃取-气相色谱质谱法联用(HS-SPME-GC/MS)技术以其快速、 方便、 高 效的优点， 成为原料乳和乳制品中游离的中链脂肪酸的常见定量检测方法。顶空固相微萃 取 (Headspace solid phase micro-extraction,HS-SPME) 技术集采样、 萃取、 浓缩、 进样 为一体， 结合气相色谱 - 质谱联用仪 (GC-MS) 可以实现对原料乳和乳制品等复杂混合物中 风味化合物的定量分析。游离的中链脂肪酸在固相微萃取装置的涂层 ( 萃取头 ) 中经过 萃取。
15、、 浓缩、 解吸后， 在气相色谱 - 质谱联用仪中分离并鉴定。但是由于游离的中链脂肪酸 沸点低， 在原料乳和乳制品中含量少， 在极性萃取头上吸附能力相对较弱， 需要对萃取头类 型、 萃取平衡条件、 吸附时间、 萃取温度、 盐 ( 氯化钠 ) 浓度等萃取条件， 以及色谱 - 质谱等 分离条件进行优化， 以增加中链脂肪酸在萃取头上的单位时间吸附量以及仪器对目标脂肪 酸的分离度 ； 而且 SPME-GC/MS 一般使用峰面积归一法进行半定量， 得到的数据只是目的中 说 明 书 CN 104297381 A 4 2/12 页 5 链脂肪酸占所有风味物质的百分比， 是一个比例数据。这些检测与定量方法都限。
16、制了现有 方法的准确性与精密度。 0006 综上所述， 实验室和工业检测中急需一种操作简单、 准确度高、 精密度高和萃取效 率高的游离的中链脂肪酸的测定方法。 发明内容 0007 本发明所要解决的技术问题是为了克服现有的甲酯化等衍生化方法和 HS-SPME-GC/MS 方法中操作繁琐、 准确度低、 精密度低和萃取效率低等缺陷而提供了一种原 料乳和乳制品中游离的中链脂肪酸的测定方法， 该方法操作简单、 准确度高、 精密度高和萃 取效率高， 适用于实验室检测和样品监控。 0008 本发明提供了一种游离的中链脂肪酸的测定方法， 包括以下步骤 ： 将待测样品和 混合脂肪酸标样分别经萃取， 气相色谱分离。
17、， 质谱检测， 即可 ； 0009 所述的待测样品包括待测物和内标溶液 ； 所述的待测物为原料乳、 液体乳制品或 固体乳制品 ； 当所述的待测物为原料乳或液体乳制品时， 所述的待测样品还包括氯化钠 ； 当所述的待测物为固体乳制品时， 所述的待测样品还包括水 ； 所述的混合脂肪酸标样包括 内标溶液和外标溶液 ； 所述的外标溶液为己酸、 辛酸和癸酸中的一种或多种的乙醇水溶液 ； 所述的内标溶液为庚酸的乙醇水溶液 ； 所述的中链脂肪酸为己酸、 辛酸和癸酸中的一种或 多种。 0010 本发明中， 所述的液体乳制品为本领域常规的各种液体乳制品， 所述的液体乳制 品优选为灭菌乳和 / 或发酵乳 ； 所述的。
18、固体乳制品为本领域常规的各种固体乳制品， 所述 的固体乳制品优选为干酪和 / 或干酪制品。 0011 本发明中， 所述的水优选蒸馏水。 0012 本发明中， 如果所述的待测物为原料乳或液体乳制品， 所述的待测物与所述的内 标溶液的体积比优选 10:1 103:1， 进一步优选 50:1 150:1， 更进一步优选 100:1 ； 所述 的待测物与所述的氯化钠的体积质量比优选 1mL/g 10mL/g， 进一步优选 3mL/g 8mL/g， 更进一步优选 5mL/g ； 所述的待测样品的制备优选恒温振荡平衡， 进一步优选 60振荡平 衡 30 分钟 ； 所述的振荡优选在顶空瓶中进行。 0013 。
19、本发明中， 如果所述的待测物为固体乳制品， 所述的待测物与所述的水的质量体 积比优选 0.01g/mL 1g/mL， 进一步优选 0.05g/mL 0.5g/mL， 更进一步优选 0.1g/mL ； 所 述的水与所述的内标溶液的体积比优选 10:1 103:1， 进一步优选 50:1 150:1， 更进一 步优选 100:1 ； 所述的固体乳制品优选预先处理成小块 ； 所述的待测样品的制备优选恒温 振荡平衡， 进一步优选 60振荡平衡 45 分钟 ； 所述的振荡优选在顶空瓶中进行。 0014 本发明中， 所述的混合脂肪酸标样中所述的外标溶液和所述的内标溶液的体积比 优选 10:1 103:1，。
20、 进一步优选 50:1 150:1， 更进一步优选 100:1 ； 所述的混合脂肪酸标 样的制备优选在顶空瓶中进行。 0015 本发明中， 所述的外标溶液中所述的乙醇水溶液优选 5 (v/v) 乙醇水溶液。 0016 本发明中， 所述的外标溶液中所述的己酸与所述的乙醇水溶液的质量体积比优选 10mg/L 200mg/L， 进一步优选 45mg/L 60mg/L， 更进一步优选 51.6mg/L ； 所述的己酸的 纯度优选为色谱级。 说 明 书 CN 104297381 A 5 3/12 页 6 0017 本发明中， 所述的外标溶液中所述的辛酸与所述的乙醇水溶液的质量体积比优选 10mg/L 2。
21、00mg/L， 进一步优选 45mg/L 60mg/L， 更进一步优选 51.2mg/L ； 所述的辛酸的 纯度优选为色谱级。 0018 本发明中， 所述的外标溶液中所述的癸酸与所述的乙醇水溶液的质量体积比优选 10mg/L 200mg/L， 进一步优选 45mg/L 60mg/L， 更进一步优选 51.9mg/L ； 所述的癸酸的 纯度优选为色谱级。 0019 本发明中， 所述的内标溶液中所述的庚酸与所述的乙醇水溶液的质量体积比优选 0.1mg/mL 20mg/mL， 进一步优选 0.5mg/mL 5mg/mL， 更进一步优选 1mg/mL ； 所述的庚酸 的纯度优选为色谱级。 0020 本。
22、发明一较佳实施例中， 当所述的待测物为原料乳或液体乳制品时， 所述的待测 样品由待测物、 内标溶液和氯化钠组成。 0021 本发明一较佳实施例中， 当所述的待测物为固体乳制品时， 所述的待测样品由待 测物、 内标溶液和水组成。 0022 本发明一较佳实施例中， 所述的混合脂肪酸标样由内标溶液和外标溶液组成。 0023 本发明中， 所述的萃取优选固相微萃取 ； 所述的固相微萃取优选顶空固相微萃 取 ； 所述的固相微萃取的萃取头优选聚二甲基硅氧烷 - 二乙烯基苯萃取头， 进一步优选 Supelco 公司生产的 65m 的聚二甲基硅氧烷 - 二乙烯基苯萃取头 ； 所述的固相微萃取的 萃取头优选在 2。
23、50下老化 0.5h ； 所述的固相微萃取的恒温振荡平衡时间优选 15 分钟 60 分钟， 进一步优选 30 分钟。 0024 本发明中， 所述的气相色谱的条件优选如下 ： 毛细管柱采用 Varian 公司生产的 VF-5ms(30m0.25mm， 液膜厚度 0.25m) ； 载气为 He， 流速为 1mL/min ； 色谱柱起始柱温为 40 ( 保持 4min)， 以 10 /min 升到 60， 再以 6 /min 升到 120， 最后以 10 /min 升 到 230， 保持 5min ； 进样口温度 230， 无分流进样， 检测器电压 800V。 0025 本发明中， 所述的质谱条件优。
24、选如下 ： 电子轰击离子源(EI电离)， 电子能量70eV ； 灯丝发射电流200A， 离子源温度200， 传输线温度250； 扫描模式Scan ； 自动扫描时间 0.3s， 扫描间隔时间 0.2s ； 质量扫描范围 m/z20 200。 0026 本发明中， 较佳的定性方法如下 ： 将待测样品的己酸、 辛酸或癸酸的质谱与 Nist 谱库中的质谱对比 ； 或者， 将待测样品的己酸、 辛酸或癸酸的保留时间和质谱， 与混合脂肪 酸标样在相同的 GC-MS 条件下测得的保留时间和质谱对比。 0027 本发明中， 较佳的定量方法如式 (1) 所示 ： 0028 0029 式中 ： 0030 mi： 待。
25、测样品中目标脂肪酸的含量， 单位为毫克每升 (mg/L) 或毫克每百克 (mg/100g) ； 0031 As： 混合脂肪酸标样中内标物的峰面积 ； 0032 Ai： 待测样品中目标脂肪酸的峰面积 ； 0033 Asi： 待测样品中内标物的峰面积 ； 说 明 书 CN 104297381 A 6 4/12 页 7 0034 Ar： 混合脂肪酸标样中目标脂肪酸的峰面积 ； 0035 mr： 混合脂肪酸标样中目标脂肪酸含量， 单位为毫克每升 (mg/L)。 0036 其中， 所述的目标脂肪酸为己酸、 辛酸或癸酸 ； 所述的内标物为庚酸。毫克每升 (mg/L) 与毫克每百克 (mg/100g) 可根。
26、据溶液的密度近似于水的密度 1g/ml 进行换算。 0037 在不违背本领域常识的基础上， 上述各优选条件， 可任意组合， 即得本发明各较佳 实例。 0038 本发明所用试剂和原料均市售可得。 0039 本发明的积极进步效果在于 ： 操作简单、 准确度高、 精密度高和萃取效率高， 适用 于实验室检测和样品监控。 附图说明 0040 图 1 为己酸标准曲线 ( 外标法 )。 0041 图 2 为辛酸标准曲线 ( 外标法 )。 0042 图 3 为癸酸标准曲线 ( 外标法 )。 具体实施方式 0043 下面通过实施例的方式进一步说明本发明， 但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中。 下列实。
27、施例中未注明具体条件的实验方法， 按照常规方法和条件， 或按照商 品说明书选择。 0044 实施例 1 0045 (1) 标准溶液的配制 0046 目标脂肪酸标准溶液 ： 准确称取 1g 的三种目标脂肪酸 ( 纯度为色谱级 )， 分别配 制成 1L 的母液贮存于 4冰箱备用。混合标准溶液即以该母液稀释适当梯度混合而成， 使 用前新鲜配制。 0047 内标溶液 ： 准确称取 1g 庚酸 ( 纯度为色谱级 )， 配制成 1L 的溶液贮存于 4冰箱 备用。 0048 (2) 样品处理 0049 取 5mL 巴氏灭菌乳样品 A 置于 15mL 顶空瓶中， 加入 1g 氯化钠和 50L 内标溶液， 立即。
28、旋紧瓶盖。 0050 混合脂肪酸标样 ： 分别取己酸、 辛酸、 癸酸标准溶液配制成混合标准溶液， 混标中 己酸、 辛酸、 癸酸浓度分别为 51.6mg/L、 51.2mg/L、 51.9mg/L。取该混合标准溶液 5ml 置于 15mL 顶空瓶中， 加入 50L 内标溶液， 立即旋紧瓶盖。 0051 (3) 固相微萃取 0052 待已装入样品的顶空瓶在 60振荡平衡 30 分钟后， 将已经老化好的聚二甲基硅 氧烷-二乙烯基苯(PDMS-DVB， 65m， Supelco,Pennsylvania,USA)萃取头装入固相微萃取 装置， 然后插入顶空瓶顶空处萃取， 萃取时间 30 分钟。 0053。
29、 (4) 气相色谱质谱法 0054 气相色谱条件 ： 毛细管柱采用 VF-5ms(30m0.25mm， 液膜厚度 0.25m) ； 载气为 He， 流速为 1ml/min。色谱柱起始柱温为 40 ( 保持 4min)， 以 10 /min 升到 60， 再以 说 明 书 CN 104297381 A 7 5/12 页 8 6 /min 升到 120， 最后以 10 /min 升到 230， 保持 5min。进样口温度 230， 无分流 进样， 检测器电压 800V。 0055 质谱条件 ： 电子轰击离子源 (EI 电离 )， 电子能量 70eV ； 灯丝发射电流 200A， 离子源温度 200。
30、， 传输线温度 250 ； 扫描模式 Scan ； 自动扫描时间 0.3s， 扫描间隔时间 0.2s ； 质量扫描范围 m/z20 200。 0056 (5) 定性及定量方法 0057 定性 ： 将目标化合物的质谱与 Nist 谱库中的质谱对比， 同时目标脂肪酸在与待测 样品相同的 GC-MS 条件下分析标准样品得到的保留时间和质谱对比定性。 0058 定量 ： 以庚酸为内标物， 定量方法为内标法。 0059 样品中目标脂肪酸的含量按式 (1) 计算 ： 本实施例中， 通过计算得到巴氏灭菌乳 样品 A 中己酸含量为 13.35mg/L， 辛酸含量为 2.60mg/L， 癸酸含量为 2.13mg。
31、/L。 0060 实施例 2 0061 (1) 标准溶液的配制 0062 目标脂肪酸标准溶液 ： 准确称取 1g 的三种目标脂肪酸 ( 纯度为色谱级 )， 分别配 制成 1L 的母液贮存于 4冰箱备用。混合标准溶液即以该母液稀释适当梯度混合而成， 使 用前新鲜配制。 0063 内标溶液 ： 准确称取 1g 庚酸 ( 纯度为色谱级 )， 配制成 1L 的溶液贮存于 4冰箱 备用。 0064 (2) 样品处理 0065 取 5mLUHT 灭菌乳样品 B 置于 15mL 顶空瓶中， 加入 1g 氯化钠和 50L 内标溶液， 立即旋紧瓶盖。 0066 混合脂肪酸标样 ： 分别取己酸、 辛酸、 癸酸标准。
32、溶液配制成混合标准溶液， 混标中 己酸、 辛酸、 癸酸浓度分别为 51.6mg/L、 51.2mg/L、 51.9mg/L。取该混合标准溶液 5ml 置于 15mL 顶空瓶中， 加入 50L 内标溶液， 立即旋紧瓶盖。 0067 (3) 固相微萃取 0068 待已装入样品的顶空瓶在 60振荡平衡 30 分钟后， 将已经老化好的聚二甲基硅 氧烷-二乙烯基苯(PDMS-DVB， 65m， Supelco,Pennsylvania,USA)萃取头装入固相微萃取 装置， 然后插入顶空瓶顶空处萃取， 萃取时间 30 分钟。 0069 (4) 气相色谱质谱法 0070 气相色谱条件 ： 毛细管柱采用 VF。
33、-5ms(30m0.25mm， 液膜厚度 0.25m) ； 载气为 He， 流速为 1ml/min。色谱柱起始柱温为 40 ( 保持 4min)， 以 10 /min 升到 60， 再以 6 /min 升到 120， 最后以 10 /min 升到 230， 保持 5min。进样口温度 230， 无分流 进样， 检测器电压 800V。 0071 质谱条件 ： 电子轰击离子源 (EI 电离 )， 电子能量 70eV ； 灯丝发射电流 200A， 离子源温度 200， 传输线温度 250 ； 扫描模式 Scan ； 自动扫描时间 0.3s， 扫描间隔时间 0.2s ； 质量扫描范围 m/z20 20。
34、0。 0072 (5) 定性及定量方法 0073 定性 ： 将目标化合物的质谱与 Nist 谱库中的质谱对比， 同时目标脂肪酸在与待测 样品相同的 GC-MS 条件下分析标准样品得到的保留时间和质谱对比定性。 说 明 书 CN 104297381 A 8 6/12 页 9 0074 定量 ： 以庚酸为内标物， 定量方法为内标法。 0075 样品中目标脂肪酸的含量按式(1)计算 ： 本实施例中， 通过计算得到UHT灭菌乳样 品 B 中己酸含量为 10.41mg/L， 辛酸含量为 2.33mg/L， 癸酸含量为 1.78mg/L。 0076 实施例 3 0077 (1) 标准溶液的配制 0078 。
35、目标脂肪酸标准溶液 ： 准确称取 1g 的三种目标脂肪酸 ( 纯度为色谱级 )， 分别配 制成 1L 的母液贮存于 4冰箱备用。混合标准溶液即以该母液稀释适当梯度混合而成， 使 用前新鲜配制。 0079 内标溶液 ： 准确称取 1g 庚酸 ( 纯度为色谱级 )， 配制成 1L 的溶液贮存于 4冰箱 备用。 0080 (2) 样品处理 0081 取 5mL 原料乳样品 C 置于 15mL 顶空瓶中， 加入 1g 氯化钠和 50L 内标溶液， 立即 旋紧瓶盖。 0082 混合脂肪酸标样 ： 分别取己酸、 辛酸、 癸酸标准溶液配制成混合标准溶液， 混标中 己酸、 辛酸、 癸酸浓度分别为 51.6mg。
36、/L、 51.2mg/L、 51.9mg/L。取该混合标准溶液 5ml 置于 15mL 顶空瓶中， 加入 50L 内标溶液， 立即旋紧瓶盖。 0083 (3) 固相微萃取 0084 待已装入样品的顶空瓶在 60振荡平衡 30 分钟后， 将已经老化好的聚二甲基硅 氧烷-二乙烯基苯(PDMS-DVB， 65m， Supelco,Pennsylvania,USA)萃取头装入固相微萃取 装置， 然后插入顶空瓶顶空处萃取， 萃取时间 30 分钟。 0085 (4) 气相色谱质谱法 0086 气相色谱条件 ： 毛细管柱采用 VF-5ms(30m0.25mm， 液膜厚度 0.25m) ； 载气为 He， 流。
37、速为 1ml/min。色谱柱起始柱温为 40 ( 保持 4min)， 以 10 /min 升到 60， 再以 6 /min 升到 120， 最后以 10 /min 升到 230， 保持 5min。进样口温度 230， 无分流 进样， 检测器电压 800V。 0087 质谱条件 ： 电子轰击离子源 (EI 电离 )， 电子能量 70eV ； 灯丝发射电流 200A， 离子源温度 200， 传输线温度 250 ； 扫描模式 Scan ； 自动扫描时间 0.3s， 扫描间隔时间 0.2s ； 质量扫描范围 m/z20 200。 0088 (5) 定性及定量方法 0089 定性 ： 将目标化合物的质谱。
38、与 Nist 谱库中的质谱对比， 同时目标脂肪酸在与待测 样品相同的 GC-MS 条件下分析标准样品得到的保留时间和质谱对比定性。 0090 定量 ： 以庚酸为内标物， 定量方法为内标法。 0091 样品中目标脂肪酸的含量按式 (1) 计算 ： 本实施例中， 通过计算得到原料乳样品 C 中己酸含量为 16.16mg/L， 辛酸含量为 4.07mg/L， 癸酸含量为 1.54mg/L。 0092 实施例 4 0093 (1) 标准溶液的配制 0094 目标脂肪酸标准溶液 ： 准确称取 1g 的三种目标脂肪酸 ( 纯度为色谱级 )， 分别配 制成 1L 的母液贮存于 4冰箱备用。混合标准溶液即以该。
39、母液稀释适当梯度混合而成， 使 用前新鲜配制。 说 明 书 CN 104297381 A 9 7/12 页 10 0095 内标溶液 ： 准确称取 1g 庚酸 ( 纯度为色谱级 )， 配制成 1L 的溶液贮存于 4冰箱 备用。 0096 (2) 样品处理 0097 取 5mL 发酵乳样品 D 置于 15mL 顶空瓶中， 加入 1g 氯化钠和 50L 内标溶液， 立即 旋紧瓶盖。 0098 混合脂肪酸标样 ： 分别取己酸、 辛酸、 癸酸标准溶液配制成混合标准溶液， 混标中 己酸、 辛酸、 癸酸浓度分别为 51.6mg/L、 51.2mg/L、 51.9mg/L。取该混合标准溶液 5ml 置于 1。
40、5mL 顶空瓶中， 加入 50L 内标溶液， 立即旋紧瓶盖。 0099 (3) 固相微萃取 0100 待已装入样品的顶空瓶在 60振荡平衡 30 分钟后， 将已经老化好的聚二甲基硅 氧烷-二乙烯基苯(PDMS-DVB， 65m， Supelco,Pennsylvania,USA)萃取头装入固相微萃取 装置， 然后插入顶空瓶顶空处萃取， 萃取时间 30 分钟。 0101 (4) 气相色谱质谱法 0102 气相色谱条件 ： 毛细管柱采用 VF-5ms(30m0.25mm， 液膜厚度 0.25m) ； 载气为 He， 流速为 1ml/min。色谱柱起始柱温为 40 ( 保持 4min)， 以 10 。
41、/min 升到 60， 再以 6 /min 升到 120， 最后以 10 /min 升到 230， 保持 5min。进样口温度 230， 无分流 进样， 检测器电压 800V。 0103 质谱条件 ： 电子轰击离子源 (EI 电离 )， 电子能量 70eV ； 灯丝发射电流 200A， 离子源温度 200， 传输线温度 250 ； 扫描模式 Scan ； 自动扫描时间 0.3s， 扫描间隔时间 0.2s ； 质量扫描范围 m/z20 200。 0104 (5) 定性及定量方法 0105 定性 ： 将目标化合物的质谱与 Nist 谱库中的质谱对比， 同时目标脂肪酸在与待测 样品相同的 GC-MS。
42、 条件下分析标准样品得到的保留时间和质谱对比定性。 0106 定量 ： 以庚酸为内标物， 定量方法为内标法。 0107 样品中目标脂肪酸的含量按式 (1) 计算 ： 本实施例中， 通过计算得到发酵乳样品 D 中己酸含量为 7.55mg/L， 辛酸含量为 3.46mg/L， 癸酸含量为 0.50mg/L。 0108 实施例 5 0109 (1) 标准溶液的配制 0110 目标脂肪酸标准溶液 ： 准确称取 1g 的三种目标脂肪酸 ( 纯度为色谱级 )， 分别配 制成 1L 的母液贮存于 4冰箱备用。混合标准溶液即以该母液稀释适当梯度混合而成， 使 用前新鲜配制。 0111 内标溶液 ： 准确称取 。
43、1g 庚酸 ( 纯度为色谱级 )， 配制成 1L 的溶液贮存于 4冰箱 备用。 0112 (2) 样品处理 0113 取 0.5g 预先处理成小块的干酪样品 E 置于 15mL 顶空瓶中， 加入 5ml 蒸馏水和 50L 内标溶液浸没样品， 立即旋紧瓶盖。 0114 混合脂肪酸标样 ： 分别取己酸、 辛酸、 癸酸标准溶液配制成混合标准溶液， 混标中 己酸、 辛酸、 癸酸浓度分别为 51.6mg/L、 51.2mg/L、 51.9mg/L。取该混合标准溶液 5ml 置于 15mL 顶空瓶中， 加入 50L 内标溶液， 立即旋紧瓶盖。 说 明 书 CN 104297381 A 10 8/12 页 。
44、11 0115 (3) 固相微萃取 0116 待已装入样品的顶空瓶在 60振荡平衡 45 分钟后， 将已经老化好的聚二甲基硅 氧烷-二乙烯基苯(PDMS-DVB， 65m， Supelco,Pennsylvania,USA)萃取头装入固相微萃取 装置， 然后插入顶空瓶顶空处萃取， 萃取时间 30 分钟。 0117 (4) 气相色谱质谱法 0118 气相色谱条件 ： 毛细管柱采用 VF-5ms(30m0.25mm， 液膜厚度 0.25m) ； 载气为 He， 流速为 1ml/min。色谱柱起始柱温为 40 ( 保持 4min)， 以 10 /min 升到 60， 再以 6 /min 升到 120。
45、， 最后以 10 /min 升到 230， 保持 5min。进样口温度 230， 无分流 进样， 检测器电压 800V。 0119 质谱条件 ： 电子轰击离子源 (EI 电离 )， 电子能量 70eV ； 灯丝发射电流 200A， 离子源温度 200， 传输线温度 250 ； 扫描模式 Scan ； 自动扫描时间 0.3s， 扫描间隔时间 0.2s ； 质量扫描范围 m/z20 200。 0120 (5) 定性及定量方法 0121 定性 ： 将目标化合物的质谱与 Nist 谱库中的质谱对比， 同时目标脂肪酸在与待测 样品相同的 GC-MS 条件下分析标准样品得到的保留时间和质谱对比定性。 01。
46、22 定量 ： 以庚酸为内标物， 定量方法为内标法。 0123 样品中目标脂肪酸的含量按式(1)计算 ： 本实施例中， 通过计算得到干酪样品E中 己酸含量为 17.47mg/100g， 辛酸含量为 4.22mg/100g， 癸酸含量为 6.79mg/100g。 0124 效果实施例 1 0125 分别称取 0.526g 己酸、 0.529g 辛酸、 0.518g 癸酸， 分别于 1L 容量瓶中用 5 (v/ v) 乙醇水溶液定容后配制成 526mg/L 己酸溶液、 529mg/L 辛酸溶液和 518mg/L 癸酸溶液。 0126 表 1 脂肪酸溶液稀释倍数 0127 样品 1 样品 2 样品 。
47、3 样品 4 样品 5 己酸 23.3351050 辛酸 23.3351050 癸酸 23.3351050 0128 如表 1 所示， 将上述溶液按一定稀释倍数配制成一系列梯度浓度样品， 经固相微 萃取， 气相色谱分离， 质谱检测， 绘制外标法标准曲线。 0129 外标法如式 (2) 所示的方法定量 ： 0130 0131 式中 ： 0132 mi： 待测样品中目标脂肪酸的含量， 单位为毫克每升 (mg/L) 或毫克每百克 (mg/100g) ； 说 明 书 CN 104297381 A 11 9/12 页 12 0133 Ai： 待测样品中目标脂肪酸的峰面积 ； 0134 Ar： 混合脂肪酸。
48、标样中目标脂肪酸的峰面积 ； 0135 mr： 混合脂肪酸标样中目标脂肪酸含量， 单位为毫克每升 (mg/L)。 0136 其中， 所述的目标脂肪酸为己酸、 辛酸或癸酸。所述的内标物为庚酸。毫克每升 (mg/L) 与毫克每百克 (mg/100g) 可根据溶液的密度近似于水的密度 1g/ml 进行换算。 0137 表 2 外标法的浓度梯度及峰面积数据 ( 峰面积单位 ： 108Mcountsmin ； 浓度单 位 ： mg/L) 0138 物质 峰面积 浓度物质 峰面积 浓度 物质 峰面积 浓度 己酸 00己酸 0.8110.52己酸 2.5352.6 辛酸 00辛酸 1.0810.58辛酸 3.6752.9 癸酸 00癸酸 0.9310.38癸酸 1.8451.9 物质 峰面积 浓度 物质 峰面积 浓度 物质 峰面积 浓度 己酸 5.93105.2己酸 8.22157.8己酸 10.90263 辛酸 。