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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410714665.9 (22)申请日 2014.11.28 G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (71)申请人 中国农业科学院烟草研究所 地址 266000 山东省青岛市崂山区科苑经四 路 11 号 (72)发明人 曹建敏 郭承芳 于卫松 邱军 方松 鲁世军 王允白 (74)专利代理机构 北京科亿知识产权代理事务 所 ( 普通合伙 ) 11350 代理人 苏雪雪 (54) 发明名称 一种同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药 残留的方法 (57) 摘要 本发明公开了一种同时测定烟草或烟。
2、草制品 中 101 种农药残留的方法， 其特征在于， 该方法 是将烟草样品中加入无水硫酸钠、 内标和酸化乙 腈后， 涡旋提取， 离心分层， 取一定量萃取液过固 相萃取小柱净化， 用体积比 3 ： 1 的乙腈 / 甲苯混 合液洗脱， 将洗脱液浓缩， 并以正己烷进行溶剂交 换， 过有机相滤膜， 用气相色谱 - 质谱联用仪进行 检测。 本发明简化了烟草样品前处理方法， 缩短了 样品分析时间， 同时得到干净的上机溶液， 减少仪 器的维护频率和使用成本。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书3页 说明书28页 附图3页 (10)申请公布号 CN 。
3、104458947 A (43)申请公布日 2015.03.25 CN 104458947 A 1/3 页 2 1. 一种同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法， 其特征在于， 该方法是将 烟草样品中加入无水硫酸钠、 内标和酸化乙腈后， 涡旋提取， 离心分层， 取一定量萃取液过 固相萃取小柱净化， 用体积比 3 ： 1 的乙腈 / 甲苯混合液洗脱， 将洗脱液浓缩， 并以正己烷进 行溶剂交换， 过有机相滤膜， 用气相色谱 - 质谱联用仪进行检测。 2. 根据权利要求 1 所述同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法， 其特征在 于， 其具体的操作步骤如下 ： (1) 内标混。
4、合溶液的配制 ： 配制灭蚁灵和氯唑磷浓度均为 5g/mL 的正己烷内标混合 溶液 ； (2) 农药目标物提取 ： 称取 2.000g 烟末于 50mL 离心管中， 加入 5g 无水硫酸钠、 100L 步骤 (1) 配制的内标混合溶液， 以及 20mL 1甲酸的乙腈溶液， 涡旋震荡 3 分钟， 以 4000r/ min 离心 10 分钟， 吸取 5mL 上清液到 10mL 离心管中， 待净化 ； (3) 固相萃取小柱活化 ： TPT 固相萃取小柱中加入 2cm 高无水硫酸钠， 用 5mL 体积比 3 ： 1 的乙腈 / 甲苯混合液活化柱子， 弃去流出液 ； (4) 提取液的净化 ： 将步骤 (2。
5、) 得到的提取液转移到步骤 (3) 活化后的固相萃取小柱 中， 用2mL体积比3 ： 1的乙腈/甲苯混合液洗涤试管， 重复两次， 并将洗涤液转移至小柱中， 用 10mL 体积比 3 ： 1 的乙腈 / 甲苯混合液洗涤小柱， 收集流出液至平底烧瓶中 ； (5)洗脱液的浓缩、 溶剂置换 ： 将步骤(4)得到的流出液在40水浴的旋转蒸发仪中浓 缩近干 , 用 5mL 正己烷进行溶剂置换， 重复两次， 加入 1mL 正己烷， 转动烧瓶使壁上残留农 药充分溶解， 涡旋混匀， 过 0.45m 有机相滤膜， 待测 GC/MS ； (6) 标准储备液配制 ： 将待测的 101 种农药分成 9 组， 每组 10。
6、-13 种农药， 分别称取 0.0100g 农药标准品， 用体积比为 9:1 的正己烷 / 丙酮溶液定容于 10mL 容量瓶中， 配制成 9 组浓度为 1000g/mL 的 101 种农药的标准储备液 ； (7)混合标准溶液配制 ： 将步骤(6)中标准储备液各取0.1mL， 等比例稀释到10mL容量 瓶中， 用正己烷定容， 得到浓度为 10g/mL 的 101 种农药的混合标准溶液 ； (8) 空白烟草样品基质的制备 ： 称量 2.0g 不含目标农药的烟草样品， 共五份， 除不添加 内标溶液外， 其他均按照步骤 (2)、 (3)、 (4) 和 (5) 进行操作， 制备空白烟草样品基质提取 液 。
7、； (9) 基质混合标准溶液配制 ： 准确移取步骤 (7) 中浓度为 10g/mL 的混合标准溶液 2mL， 置于 10mL 容量瓶中， 用正己烷定容， 配制成各农药浓度为 2g/mL 的混合标准溶液 I ； 准确移取 0.0125、 0.025、 0.0625、 0.125、 0.2mL 的混合标准溶液 I， 准确移取 50L 步骤 (1) 中内标溶液， 加到 1.0mL 的空白烟草样品基质提取液中， 混匀， 配成具有浓度梯度的目 标农药的基质混合标准工作溶液， 配制的系列标准溶液的浓度分别为 ： 0.025、 0.05、 0.125、 0.25、 0.4g/mL ； (10)GC/MS测定。
8、 ： 将步骤(9)中的基质混合标准溶液， 过0.45m有机滤膜后， 进GC/MS 进行测定 ； (11) 农药残留结果计算 ： 采用内标法进行农药目标物的定量分析， 即以农药和内标物 的定量离子峰面积比对其相应浓度进行回归分析， 得到标准曲线， 对提取后的样品进行测 定， 测得检出农药和内标物定量离子峰面积比值， 代入标准曲线， 求的样品中农药的含量。 3. 根据权利要求 2 所述同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法， 其特征在 权 利 要 求 书 CN 104458947 A 2 2/3 页 3 于， 步骤 (10) 中 GC/MS 测定时采用的色谱条件为 ： 色谱柱 DB-5。
9、MS 弹性毛细管色谱柱， 规格 为 30m0.25mm0.25m ； 进样口 ： 250； 初始温度 50， 保持 5min， 以 25 /min 速率升 至 150， 保持 0min， 以 3速率升至 200， 保持 0min， 以 8速率升至 280， 保持 5min， 以 10 /min 速率升至 300， 保持 10min， 总运行时间为 52-53min。 4. 根据权利要求 2 所述同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法， 其特征 在于， 步骤 (10) 中 GC/MS 测定时采用的质谱条件为 ： 电子轰击离子源， 70ev， 离子源温度 300 ； 接口温度 ： 28。
10、0， 四级杆温度 ： 180 ； 溶剂延迟 6min ； 扫描模式 ： 选择离子监测。 5. 根据权利要求 1 或 2 所述同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法， 其特 征在于， 所述的 101 种农药包括 ： 叶蝉散、 庚烯磷、 仲丁威、 残杀威、 甲基内吸磷、 灭线磷、 二 溴磷、 氟乐灵、 氟草胺、 特丁硫磷、 敌虫硫磷、 乙拌磷、 敌稗、 -HCH、 林丹、 -HCH、 -HCH、 op“-DDE、 pp“-DDE、 op“-DDD、 pp“-DDD、 op“-DDT、 pp“-DDT、 五氯硝基苯、 七氯、 艾氏剂、 环氧 七氯、 顺式 - 氯丹、 - 硫丹、 反式 -。
11、 氯丹、 狄试剂、 异狄试剂、 - 硫丹、 硫丹硫酸酯、 乐果、 克百威、 磷胺 E、 磷胺 Z、 甲基毒死蜱、 乙烯菌核利、 甲基对硫磷、 皮蝇硫磷、 杀螟硫磷、 马拉硫 磷、 溴硫磷、 灭芽磷、 亚胺硫磷、 乙草胺、 甲草胺、 异丙甲草胺、 敌草索、 草乃敌、 异丙乐灵、 除 芽通、 丁草胺、 氟节胺、 敌草胺、 除草醚、 异稻瘟净、 三唑酮、 三唑醇、 稻瘟灵、 菌核净、 戊菌唑、 毒虫畏、 噻菌灵、 灭菌丹、 杀虫畏、 丰索磷、 噁霜灵、 七氟菊酯、 联苯菊酯、 甲氧 DDT、 甲氰菊酯、 高效氯氟氰菊酯、 顺式 - 氯菊酯、 反式 - 氯菊酯、 氟氯氰菊酯、 氯氰菊酯、 四溴菊酯、 。
12、顺式 - 氟 氰菊酯、 反式 - 氟氰菊酯、 氰戊菊酯、 顺式 - 氟胺氰菊酯、 反式 - 氟胺氰菊酯、 s- 氰戊菊酯、 溴氰菊酯、 异菌脲、 硫线磷、 氯硝铵、 水胺硫磷、 苯霜灵、 仲丁灵、 二嗪磷、 甲霜灵、 毒死蜱、 倍 硫磷、 乙基对硫磷、 付杀硫磷、 谷硫磷、 乙基谷硫磷。 6. 根据权利要求 5 所述同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法， 其特征在 于， 步骤 (6) 中将 101 种农药分成如下 9 组 ： 第1组13种 ： 叶蝉散、 庚烯磷、 仲丁威、 残杀威、 甲基内吸磷、 灭线磷、 二溴磷、 氟乐灵、 氟 草胺、 特丁硫磷、 敌虫硫磷、 乙拌磷、 敌稗 ；。
13、 第 2 组 10 种 -HCH、 林丹、 -HCH、 -HCH、 op“-DDE、 pp“-DDE、 op“-DDD、 pp“-DDD、 op“-DDT、 pp“-DDT ； 第3组11种 ： 五氯硝基苯、 七氯、 艾氏剂、 环氧七氯、 顺式-氯丹、 -硫丹、 反式-氯丹、 狄试剂、 异狄试剂、 - 硫丹、 硫丹硫酸酯 ； 第4组13种 ： 乐果、 克百威、 磷胺E、 磷胺Z、 甲基毒死蜱、 乙烯菌核利、 甲基对硫磷、 皮蝇 硫磷、 杀螟硫磷、 马拉硫磷、 溴硫磷、 灭芽磷、 亚胺硫磷 ； 第5组11种 ： 乙草胺、 甲草胺、 异丙甲草胺、 敌草索、 草乃敌、 异丙乐灵、 除芽通、 丁草胺、。
14、 氟节胺、 敌草胺、 除草醚 ； 第6组12种 ： 异稻瘟净、 三唑酮、 三唑醇、 稻瘟灵、 菌核净、 戊菌唑、 毒虫畏、 噻菌灵、 灭菌 丹、 杀虫畏、 丰索磷、 噁霜灵 ； 第 7 组 10 种 ： 七氟菊酯、 联苯菊酯、 甲氧 DDT、 甲氰菊酯、 高效氯氟氰菊酯、 顺式 - 氯菊 酯、 反式 - 氯菊酯、 氟氯氰菊酯、 氯氰菊酯、 四溴菊酯 ； 第8组10种 ： 顺式-氟氰菊酯、 反式-氟氰菊酯、 氰戊菊酯、 顺式-氟胺氰菊酯、 反式-氟 胺氰菊酯、 s- 氰戊菊酯、 溴氰菊酯、 异菌脲、 硫线磷、 氯硝铵 ； 第9组11种 ： 水胺硫磷、 苯霜灵、 仲丁灵、 二嗪磷、 甲霜灵、 毒死。
15、蜱、 倍硫磷、 乙基对硫磷、 权 利 要 求 书 CN 104458947 A 3 3/3 页 4 付杀硫磷、 谷硫磷、 乙基谷硫磷。 7. 根据权利要求 6 所述同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法， 其特征在 于， 第 1 组农药以氯唑磷为内标进行校正， 第 2-9 组农药以灭蚁灵为内标进行校正。 权 利 要 求 书 CN 104458947 A 4 1/28 页 5 一种同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法 技术领域 0001 本发明属于农药残留分析检测技术领域， 涉及的农药残留分析检测方法， 尤其涉 及一种同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法。。
16、 背景技术 0002 农业产业化的发展， 农产品的生产越来越依赖于农药、 抗生素和激素等化学、 生物 制品。 而这些物质的不合理使用必将导致农产品中的残留超标， 影响消费者食用安全， 严重 时会造成消费者致病、 发育不正常， 甚至直接导致中毒死亡。控制农药残留对人体的危害， 最为有效的方法之一是加强对化学、 生物制品使用的监管， 为保障监管必须提高食品中农 药残留检测的能力水平和效率。当今世界农药残留检测向多残留、 快速分析发展， 多残留 检测是农残分析的一个重要趋势， 具有 “多” 、“快” 、“准” 三大优势。国内自 2006 年开始到 2008 年止， 水果和蔬菜、 粮谷、 茶叶、 果蔬。
17、汁和果酒、 牛奶和奶粉、 食用菌等农产品相继制订 了同时测定 100 种以上农药的多残留检测标准。 0003 烟草作为特殊的经济作物， 在生产过程中为了有效的控制病虫害常使用各种类型 的农药， 经常发生农药残留超标现象， 烟叶农药残留已经成为影响烟叶安全性的一个重要 因素， 烟草行业于 2011 年发布了 3 个烟草多农残检测行业标准， 该系列标准使用 4 种前处 理方法， 3 种分析方法， 可以检测 146 种农药。其中极性较大的 73 种农药采用 QuEChERS 净 化后， 使用 LC/MS/MS 进行分析， 非极性或中等极性的 38 种农药用 QuEChERS 方法处理后， 过 硅胶和。
18、弗洛里硅土小柱进行净化， 使用 GC/MS 和 GC/ECD 进行分析， 而有机氯及拟除虫菊酯 类 35 种农药单独作为一类， 过固相萃取小柱后， 使用 GC/ECD 进行分析。使用上述行业标准 分析烟草中使用范围较广的几种农药， 如甲霜灵、 仲丁灵、 二甲戊灵、 氟节胺、 高效氯氟氰菊 酯、 菌核净(以上3个标准不含菌核净)6种农药， 同样需要采用4种前处理方法， 耗时耗力， 效率低下。 0004 为了缩短分析时间， 提高检测效率， 中国烟草总公司在 2014 年又发布了一项烟草 及烟草制品多农残检测的企业标准， 使用气相色谱 - 串联质谱仪和液相色谱 - 串联质谱仪 检测， 其中气质串联方。
19、法检测 169 种农药， 液质串联方法检测 141 种农药。两种方法均采用 QuEChERS 方法进行样品前处理， 串联质谱方法进行分析。与之前的行业标准相比可大大提 高工作效率， 减轻劳动负担。 0005 QuEChERS 方法是目前世界上公认的简单、 快速的样品前处理技术， 在水果蔬菜上 的应用较广。 QuEChERS方法中PSA具有一定的去除色素能力， 但是相对偏弱， 净化后的上机 溶液中仍存在大量色素和其他杂质， 尤其是对一些基质复杂的样品如茶叶、 烟草等， 其净化 效果还存在一定的局限性， 只能使用抗干扰能力强的 GC/MS/MS 和 LC/MS/MS 串联质谱进行 检测， 随着进样。
20、次数的增多， 色素会污染衬管、 色谱柱和检测器， 使得后期结果失真， 增加维 护仪器的频率， 尤其是对活性农药检测结果的准确性影响更大。因此在烟草的多农残检测 工作中， 尤其是大批量样品分析时， 干净的上机溶液对于保证检测结果的准确性尤为重要。 说 明 书 CN 104458947 A 5 2/28 页 6 发明内容 0006 鉴于现有技术的不足， 本发明的目的在于进一步简化烟草样品前处理方法， 缩短 样品分析时间， 同时得到干净的上机溶液， 减少仪器的维护频率和使用成本， 从而提供一种 准确度高、 重现性好、 适用范围更广的多农残同时检测方法。 0007 为了实现本发明的目的， 发明人通过大。
21、量试验研究并不懈探索， 最终获得了如下 技术方案 ： 0008 一种同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法， 其特征在于， 该方法是 将烟草样品中加入无水硫酸钠、 内标和酸化乙腈后， 涡旋提取， 离心分层， 取一定量萃取液 过固相萃取小柱净化， 用体积比 3 ： 1 的乙腈 / 甲苯混合液洗脱， 将洗脱液浓缩， 并以正己烷 进行溶剂交换， 过有机相滤膜， 用气相色谱 - 质谱联用仪进行检测。 0009 优选地， 如上所述同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法， 其具体的 操作步骤如下 ： 0010 (1) 内标混合溶液的配制 ： 配制灭蚁灵和氯唑磷浓度均为 5g/mL 。
22、的正己烷内标 混合溶液 ； 0011 (2) 农药目标物提取 ： 称取 2.000g 烟末于 50mL 离心管中， 加入 5g 无水硫酸钠、 100L 步骤 (1) 配制的内标混合溶液， 以及 20mL 1甲酸的乙腈溶液， 涡旋震荡 3 分钟， 以 4000r/min 离心 10 分钟， 吸取 5mL 上清液到 10mL 离心管中， 待净化 ； 0012 (3) 固相萃取小柱活化 ： TPT 固相萃取小柱中加入 2cm 高无水硫酸钠， 用 5mL 体积 比 3 ： 1 的乙腈 / 甲苯混合液活化柱子， 弃去流出液 ； 0013 (4) 提取液的净化 ： 将步骤 (2) 得到的提取液转移到步骤 。
23、(3) 活化后的固相萃取 小柱中， 用 2mL 体积比 3 ： 1 的乙腈 / 甲苯混合液洗涤试管， 重复两次， 并将洗涤液转移至小 柱中， 用 10mL 体积比 3 ： 1 的乙腈 / 甲苯混合液洗涤小柱， 收集流出液至平底烧瓶中 ； 0014 (5)洗脱液的浓缩、 溶剂置换 ： 将步骤(4)得到的流出液在40水浴的旋转蒸发仪 中浓缩近干 , 用 5mL 正己烷进行溶剂置换， 重复两次， 加入 1mL 正己烷， 转动烧瓶使壁上残 留农药充分溶解， 涡旋混匀， 过 0.45m 有机相滤膜， 待测 GC/MS ； 0015 (6) 标准储备液配制 ： 将待测的 101 种农药分成 9 组， 每组。
24、 10-13 种农药， 分别称 取 0.0100g 农药标准品， 用体积比为 9:1 的正己烷 / 丙酮溶液定容于 10mL 容量瓶中， 配制 成 9 组浓度为 1000g/mL 的 101 种农药的标准储备液 ； 0016 (7) 混合标准溶液配制 ： 将步骤 (6) 中标准储备液各取 0.1mL， 等比例稀释到 10mL 容量瓶中， 用正己烷定容， 得到浓度为 10g/mL 的 101 种农药的混合标准溶液 ； 0017 (8) 空白烟草样品基质的制备 ： 称量 2.0g 不含目标农药的烟草样品， 共五份， 除不 添加内标溶液外， 其他均按照步骤(2)、 (3)、 (4)和(5)进行操作，。
25、 制备空白烟草样品基质提 取液 ； 0018 (9) 基质混合标准溶液配制 ： 准确移取步骤 (7) 中浓度为 10g/mL 的混合标准溶 液 2mL， 置于 10mL 容量瓶中， 用正己烷定容， 配制成各农药浓度为 2g/mL 的混合标准溶液 I ； 准确移取 0.0125、 0.025、 0.0625、 0.125、 0.2mL 的混合标准溶液 I， 准确移取 50L 步骤 (1) 中内标溶液， 加到 1.0mL 的空白烟草样品基质提取液中， 混匀， 配成具有浓度梯度的目 标农药的基质混合标准工作溶液， 配制的系列标准溶液的浓度分别为 ： 0.025、 0.05、 0.125、 0.25、。
26、 0.4g/mL ； 说 明 书 CN 104458947 A 6 3/28 页 7 0019 (10)GC/MS 测定 ： 将步骤 (9) 中的基质混合标准溶液， 过 0.45m 有机滤膜后， 进 GC/MS 进行测定 ； 0020 (11) 农药残留结果计算 ： 采用内标法进行农药目标物的定量分析， 即以农药和内 标物的定量离子峰面积比对其相应浓度进行回归分析， 得到标准曲线， 对提取后的样品进 行测定， 测得检出农药和内标物定量离子峰面积比值， 代入标准曲线， 求的样品中农药的含 量。 0021 进一步优选地， 如上所述同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法， 其 中步骤(1。
27、0)中GC/MS测定时采用的色谱条件为 ： 色谱柱DB-5MS弹性毛细管色谱柱， 规格为 30m0.25mm0.25m ； 进样口 ： 250 ； 初始温度 50， 保持 5min， 以 25 /min 速率升至 150， 保持 0min， 以 3速率升至 200， 保持 0min， 以 8速率升至 280， 保持 5min， 以 10 /min 速率升至 300， 保持 10min， 总运行时间为 52-53min。 0022 进一步优选地， 如上所述同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法， 其 中步骤(10)中GC/MS测定时采用的质谱条件为 ： 电子轰击离子源， 70ev， 。
28、离子源温度300； 接口温度 ： 280， 四级杆温度 ： 180 ； 溶剂延迟 6min ； 扫描模式 ： 选择离子监测。 0023 再进一步优选地， 如上所述同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法， 其中所述的 101 种农药包括 ： 叶蝉散、 庚烯磷、 仲丁威、 残杀威、 甲基内吸磷、 灭线磷、 二溴 磷、 氟乐灵、 氟草胺、 特丁硫磷、 敌虫硫磷、 乙拌磷、 敌稗、 -HCH、 林丹、 -HCH、 -HCH、 op“-DDE、 pp“-DDE、 op“-DDD、 pp“-DDD、 op“-DDT、 pp“-DDT、 五氯硝基苯、 七氯、 艾氏剂、 环氧 七氯、 顺式 - 氯。
29、丹、 - 硫丹、 反式 - 氯丹、 狄试剂、 异狄试剂、 - 硫丹、 硫丹硫酸酯、 乐果、 克百威、 磷胺 E、 磷胺 Z、 甲基毒死蜱、 乙烯菌核利、 甲基对硫磷、 皮蝇硫磷、 杀螟硫磷、 马拉硫 磷、 溴硫磷、 灭芽磷、 亚胺硫磷、 乙草胺、 甲草胺、 异丙甲草胺、 敌草索、 草乃敌、 异丙乐灵、 除 芽通、 丁草胺、 氟节胺、 敌草胺、 除草醚、 异稻瘟净、 三唑酮、 三唑醇、 稻瘟灵、 菌核净、 戊菌唑、 毒虫畏、 噻菌灵、 灭菌丹、 杀虫畏、 丰索磷、 噁霜灵、 七氟菊酯、 联苯菊酯、 甲氧 DDT、 甲氰菊酯、 高效氯氟氰菊酯、 顺式 - 氯菊酯、 反式 - 氯菊酯、 氟氯氰菊酯、。
30、 氯氰菊酯、 四溴菊酯、 顺式 - 氟 氰菊酯、 反式 - 氟氰菊酯、 氰戊菊酯、 顺式 - 氟胺氰菊酯、 反式 - 氟胺氰菊酯、 s- 氰戊菊酯、 溴氰菊酯、 异菌脲、 硫线磷、 氯硝铵、 水胺硫磷、 苯霜灵、 仲丁灵、 二嗪磷、 甲霜灵、 毒死蜱、 倍 硫磷、 乙基对硫磷、 付杀硫磷、 谷硫磷、 乙基谷硫磷。 0024 再进一步优选地， 如上所述同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法， 其中步骤 (6) 中将 101 种农药分成如下 9 组 ： 0025 第 1 组 13 种 ： 叶蝉散、 庚烯磷、 仲丁威、 残杀威、 甲基内吸磷、 灭线磷、 二溴磷、 氟乐 灵、 氟草胺、 特。
31、丁硫磷、 敌虫硫磷、 乙拌磷、 敌稗 ； 0026 第 2 组 10 种 -HCH、 林丹、 -HCH、 -HCH、 op“-DDE、 pp“-DDE、 op“-DDD、 pp“-DDD、 op“-DDT、 pp“-DDT ； 0027 第 3 组 11 种 ： 五氯硝基苯、 七氯、 艾氏剂、 环氧七氯、 顺式 - 氯丹、 - 硫丹、 反 式 - 氯丹、 狄试剂、 异狄试剂、 - 硫丹、 硫丹硫酸酯 ； 0028 第4组13种 ： 乐果、 克百威、 磷胺E、 磷胺Z、 甲基毒死蜱、 乙烯菌核利、 甲基对硫磷、 皮蝇硫磷、 杀螟硫磷、 马拉硫磷、 溴硫磷、 灭芽磷、 亚胺硫磷 ； 0029 第 。
32、5 组 11 种 ： 乙草胺、 甲草胺、 异丙甲草胺、 敌草索、 草乃敌、 异丙乐灵、 除芽通、 丁 草胺、 氟节胺、 敌草胺、 除草醚 ； 说 明 书 CN 104458947 A 7 4/28 页 8 0030 第6组12种 ： 异稻瘟净、 三唑酮、 三唑醇、 稻瘟灵、 菌核净、 戊菌唑、 毒虫畏、 噻菌灵、 灭菌丹、 杀虫畏、 丰索磷、 噁霜灵 ； 0031 第7组10种 ： 七氟菊酯、 联苯菊酯、 甲氧DDT、 甲氰菊酯、 高效氯氟氰菊酯、 顺式-氯 菊酯、 反式 - 氯菊酯、 氟氯氰菊酯、 氯氰菊酯、 四溴菊酯 ； 0032 第 8 组 10 种 ： 顺式 - 氟氰菊酯、 反式 - 。
33、氟氰菊酯、 氰戊菊酯、 顺式 - 氟胺氰菊酯、 反 式 - 氟胺氰菊酯、 s- 氰戊菊酯、 溴氰菊酯、 异菌脲、 硫线磷、 氯硝铵 ； 0033 第 9 组 11 种 ： 水胺硫磷、 苯霜灵、 仲丁灵、 二嗪磷、 甲霜灵、 毒死蜱、 倍硫磷、 乙基对 硫磷、 付杀硫磷、 谷硫磷、 乙基谷硫磷。 0034 再进一步优选地， 如上所述同时测定烟草或烟草制品中 101 种农药残留的方法， 其中第 1 组农药以氯唑磷为内标进行校正， 第 2-9 组农药以灭蚁灵为内标进行校正。 0035 本发明方法的检测限 ： 将不同浓度目标农药的基质混合标准溶液进GC/MS,以3倍 信噪比 (S/N) 计算检测限 (。
34、LOD)， 检测限在 0.001-0.060g/mL 之间。 0036 与现有技术相比， 本发明方法具有如下优点和进步性 ： 0037 (1) 前处理中使用两种不同极性的内标进行校正， 可以满足极性差异大的目标物 如有机氯、 菊酯类农药和有机磷农药的同时分析需求， 保证了非极性和极性目标物的回收 率。 0038 (2) 选用 1甲酸的乙腈作为提取溶剂， 可以降低一些农药的降解 ( 如 N- 三卤代 乙基硫农药灭菌丹 )， 增加目标农药在乙腈中的稳定性， 提高回收率。 0039 (3) 采用本发明方法净化后的上机溶液清澈透明， 与现有技术得到的上机溶液相 比， 共萃取基质中色素等干扰组分大大减少。
35、 ( 见图 4、 5， 两种处理方法上机溶液的紫外 - 可 见吸收光谱图， QuECHERS 方法上机溶液在 400-500nm 和 650nm 处的可见区均有较强的吸收 峰， 而本发明上机溶液无明显吸收峰 )， 减少了仪器的维护频率， 更适用于大批量样品分析。 0040 (4) 本发明方法使用气相色谱 - 质谱联用仪进行检测， 可以降低烟草多农残检测 业务门槛。 附图说明 0041 图 1 ： 101 种农药标准品 SIM 谱图 ； 0042 图 2 ： 烟叶空白样本添加 101 种农药标准品 SIM 谱图 ； 0043 图 3 ： 烟叶空白样本 SIM 谱图 ； 0044 图 4 ： 本发。
36、明上机溶液紫外 - 可见吸收光谱图 ； 0045 图 5 ： QuECHERS 方法上机溶液紫外 - 可见吸收光谱图。 具体实施方式 0046 实施例 1 ： 样品 A 烟末中 101 种农药残留量检测 0047 1、 仪器与试剂 ： 0048 农药标准品 ： 叶蝉散、 庚烯磷、 仲丁威、 残杀威、 甲基内吸磷、 灭线磷、 二溴磷、 氟乐 灵、 氟草胺、 特丁硫磷、 敌虫硫磷、 乙拌磷、 敌稗、 -HCH、 林丹、 -HCH、 -HCH、 op“-DDE、 pp“-DDE、 op“-DDD、 pp“-DDD、 op“-DDT、 pp“-DDT、 五氯硝基苯、 七氯、 艾氏剂、 环氧七氯、 顺 。
37、式 - 氯丹、 - 硫丹、 反式 - 氯丹、 狄试剂、 异狄试剂、 - 硫丹、 硫丹硫酸酯、 乐果、 克百威、 说 明 书 CN 104458947 A 8 5/28 页 9 磷胺 E、 磷胺 Z、 甲基毒死蜱、 乙烯菌核利、 甲基对硫磷、 皮蝇硫磷、 杀螟硫磷、 马拉硫磷、 溴硫 磷、 灭芽磷、 亚胺硫磷、 乙草胺、 甲草胺、 异丙甲草胺、 敌草索、 草乃敌、 异丙乐灵、 除芽通、 丁 草胺、 氟节胺、 敌草胺、 除草醚、 异稻瘟净、 三唑酮、 三唑醇、 稻瘟灵、 菌核净、 戊菌唑、 毒虫畏、 噻菌灵、 灭菌丹、 杀虫畏、 丰索磷、 噁霜灵、 七氟菊酯、 联苯菊酯、 甲氧 DDT、 甲氰菊酯。
38、、 高效氯 氟氰菊酯、 顺式 - 氯菊酯、 反式 - 氯菊酯、 氟氯氰菊酯、 氯氰菊酯、 四溴菊酯、 顺式 - 氟氰菊 酯、 反式 - 氟氰菊酯、 氰戊菊酯、 顺式 - 氟胺氰菊酯、 反式 - 氟胺氰菊酯、 s- 氰戊菊酯、 溴氰 菊酯、 异菌脲、 硫线磷、 氯硝铵、 水胺硫磷、 苯霜灵、 仲丁灵、 二嗪磷、 甲霜灵、 毒死蜱、 倍硫磷、 乙基对硫磷、 付杀硫磷、 谷硫磷、 乙基谷硫磷， 0049 内标 ： 灭蚁灵、 氯唑磷， 均为标准品 ； 乙腈、 甲酸、 丙酮、 正己烷、 甲苯、 均为色谱纯， 无水硫酸钠为分析纯 ； 蒸馏水， 符合 GB/T6682 中一级水的要求。 0050 美国安捷伦。
39、 7890A-5975C 气相色谱 - 质谱仪 ； 旋转蒸发仪 ( 瑞士步琦公司 ) ； BS214S 分析天平 ( 德国 Sartorius 公司 ) ； 上海安亭高速离心机。 0051 2、 样品处理 ： 0052 (1) 称取 2.0g 烟末 ( 样品 A ： 精确至 0.001g) 于 50mL 离心管中， 加入 5g 无水硫 酸钠、 100L 内标 ( 灭蚁灵、 氯唑磷混标 )， 20mL 1甲酸乙腈溶液， 涡旋震荡 3 分钟， 以 4000r/min 离心 10 分钟， 吸取 5mL 上清液到 10mL 离心管中， 待净化。 0053 (2) 固相萃取小柱活化 ： TPT 固相萃取。
40、小柱中加入 2cm 高无水硫酸钠， 用 5mL 乙腈 / 甲苯 ( 体积比 3 ： 1) 活化柱子， 弃去流出液。 0054 (3) 提取液的净化 ： 将步骤 2 中提取液转移到活化后的固相萃取小柱中， 用 2mL 乙 腈 / 甲苯 ( 体积比 3 ： 1) 洗涤试管， 重复两次， 并将洗涤液转移至小柱中， 用 10mL 乙腈 / 甲 苯 ( 体积比 3 ： 1) 洗涤小柱， 收集流出液至平底烧瓶中。 0055 (4)洗脱液的浓缩、 溶剂置换 ： 将步骤3中流出液在40水浴的旋转蒸发仪中浓缩 近干 , 用 5mL 正己烷进行溶剂置换， 重复两次， 加入 1mL 正己烷， 转动烧瓶使壁上残留农药。
41、 充分溶解， 涡旋混匀， 过 0.45m 有机相滤膜， 待测 (GC/MS)。 0056 采用上述样品处理方法净化后的上机溶液清澈透明， 与现有技术得到的上机溶液 相比， 共萃取基质中色素等干扰组分大大减少 ( 见图 4、 图 5， 两种处理方法上机溶液的紫 外 - 可见吸收光谱图， QuECHERS 方法上机溶液在 400-500nm 和 650nm 处的可见区均有较强 的吸收峰， 而本发明上机溶液无明显吸收峰 )， 减少了仪器的维护频率， 更适用于大批量样 品分析。 0057 3、 准备混合标准溶液 ： 0058 将本发明涉及 101 种农药分成如下 9 组 ： 0059 第 1 组 13。
42、 种 ： 叶蝉散、 庚烯磷、 仲丁威、 残杀威、 甲基内吸磷、 灭线磷、 二溴磷、 氟乐 灵、 氟草胺、 特丁硫磷、 敌虫硫磷、 乙拌磷、 敌稗 ； 0060 第 2 组 10 种 -HCH、 林丹、 -HCH、 -HCH、 op“-DDE、 pp“-DDE、 op“-DDD、 pp“-DDD、 op“-DDT、 pp“-DDT ； 0061 第 3 组 11 种 ： 五氯硝基苯、 七氯、 艾氏剂、 环氧七氯、 顺式 - 氯丹、 - 硫丹、 反 式 - 氯丹、 狄试剂、 异狄试剂、 - 硫丹、 硫丹硫酸酯 ； 0062 第4组13种 ： 乐果、 克百威、 磷胺E、 磷胺Z、 甲基毒死蜱、 乙烯。
43、菌核利、 甲基对硫磷、 皮蝇硫磷、 杀螟硫磷、 马拉硫磷、 溴硫磷、 灭芽磷、 亚胺硫磷 ； 说 明 书 CN 104458947 A 9 6/28 页 10 0063 第 5 组 11 种 ： 乙草胺、 甲草胺、 异丙甲草胺、 敌草索、 草乃敌、 异丙乐灵、 除芽通、 丁 草胺、 氟节胺、 敌草胺、 除草醚 ； 0064 第6组12种 ： 异稻瘟净、 三唑酮、 三唑醇、 稻瘟灵、 菌核净、 戊菌唑、 毒虫畏、 噻菌灵、 灭菌丹、 杀虫畏、 丰索磷、 噁霜灵 ； 0065 第7组10种 ： 七氟菊酯、 联苯菊酯、 甲氧DDT、 甲氰菊酯、 高效氯氟氰菊酯、 顺式-氯 菊酯、 反式 - 氯菊酯、。
44、 氟氯氰菊酯、 氯氰菊酯、 四溴菊酯 ； 0066 第 8 组 10 种 ： 顺式 - 氟氰菊酯、 反式 - 氟氰菊酯、 氰戊菊酯、 顺式 - 氟胺氰菊酯、 反 式 - 氟胺氰菊酯、 s- 氰戊菊酯、 溴氰菊酯、 异菌脲、 硫线磷、 氯硝铵 ； 0067 第 9 组 11 种 ： 水胺硫磷、 苯霜灵、 仲丁灵、 二嗪磷、 甲霜灵、 毒死蜱、 倍硫磷、 乙基对 硫磷、 付杀硫磷、 谷硫磷、 乙基谷硫磷。 0068 分别称取0.010g农药标准品(结果精确至0.1mg)， 用体积比为9:1的正己烷/丙 酮溶液定容于 10mL 容量瓶中， 配制成 9 组浓度为 1000g/mL 的农药的标准储备液。。
45、标准 储备液避光 0 -4保存， 可使用 1 年。 0069 将上述 9 组标准储备液各取 0.1mL， 等比例稀释到 10mL 容量瓶中， 用正己烷定容， 得到浓度为 10g/mL 的 101 种农药的混合标准溶液。混合标准溶液避光 0 -4保存， 可 使用 1 个月。 0070 第 1 组农药以氯唑磷为内标进行校正， 第 2-9 组农药以灭蚁灵为内标进行校正。 101 种目标农药和内标的保留时间和质谱参数见附表 1。101 种农药标准品 SIM 色谱图见 图 1， 烟叶空白样本 SIM 色谱图见图 2， 烟叶空白样本添加 101 种农药标准品 SIM 色谱图见 图 3。 0071 表 1 。
46、： 101 种农药及内标的保留时间及质谱参数 0072 说 明 书 CN 104458947 A 10 7/28 页 11 0073 说 明 书 CN 104458947 A 11 8/28 页 12 0074 说 明 书 CN 104458947 A 12 9/28 页 13 0075 说 明 书 CN 104458947 A 13 10/28 页 14 0076 说 明 书 CN 104458947 A 14 11/28 页 15 0077 4、 准备基质混合标准工作溶液 ： 0078 对空白烟草样品按相同的前处理方式进行处理 ( 除不添加内标溶液外， 其他操作 与步骤 2 相同 )， 共。
47、五份， 制备空白烟草样品基质提取液。准确移取步骤 3 中浓度为 10g/ mL 的混合标准溶液 2mL， 置于 10mL 容量瓶中， 用正己烷定容， 配制成各农药浓度为 2g/mL 的混合标准溶液 I。准确移取 0.0125、 0.025、 0.0625、 0.125、 0.20mL 的混合标准溶液 I， 准 确移取 50L 内标溶液， 加到 1.0mL 的空白烟草样品基质提取液中， 混匀， 配成具有浓度梯 度的目标农药的基质混合标准工作溶液。 配制的系列标准溶液的浓度分别为 ： 0.025、 0.05、 0.125、 0.25、 0.4g/mL。 0079 5、 测定方法 ： 0080 将配。
48、制好的不同浓度的农药基质混合标准工作溶液注入 GC/MS， 以内标法进行定 量分析， 即以农药和内标物的定量离子峰面积比对其相应浓度进行回归分析， 得到标准曲 线， 对提取后的样品进行测定， 测得检出农药和内标物定量离子峰面积比值， 代入标准曲 说 明 书 CN 104458947 A 15 12/28 页 16 线， 求的样品中农药的含量见表 2。 0081 表 2 ： 样品 A 农药目标物检测结果 0082 0083 说 明 书 CN 104458947 A 16 13/28 页 17 0084 说 明 书 CN 104458947 A 17 14/28 页 18 0085 说 明 书 C。
49、N 104458947 A 18 15/28 页 19 0086 GC/MS 测定时， 采用的色谱条件为 ： 色谱柱 DB-5MS 弹性毛细管色谱柱， 规格为 (30m0.25mm0.25m) ； 进样口 ： 250 ； 初始温度 50， 保持 5min， 以 25 /min 速率升 至 150， 保持 0min， 以 3速率升至 200， 保持 0min， 以 8速率升至 280， 保持 5min， 以 10 /min 速率升至 300， 保持 10min， 总运行时间为 52.667min。载气 ： 氦气， 纯度为 99.999； 恒压模式， 17Psi ； 进样量 ： 1L， 不分流进样。当色谱。