《一种熟地黄中5羟甲基糠醛的含量检测方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种熟地黄中5羟甲基糠醛的含量检测方法.pdf（5页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)申请公布号 CN 104237400 A (43)申请公布日 2014.12.24 CN 104237400 A (21)申请号 201410438257.5 (22)申请日 2014.09.01 G01N 30/02(2006.01) (71)申请人 李晓枫 地址 545000 广西壮族自治区柳州市上游路 四区 15 栋 1 单元 9 号 (72)发明人 李晓枫 (74)专利代理机构 北京众合诚成知识产权代理 有限公司 11246 代理人 龚燮英 (54) 发明名称 一种熟地黄中 5- 羟甲基糠醛的含量检测方 法 (57) 摘要 本发明公开了一种熟地黄中 5- 羟甲基糠醛 的含量检测。
2、方法， 采用高效液相法测定熟地黄中 5- 羟甲基糠醛， 色谱条件， 采用 C18 柱或 C8， 流动 相为 5-15 95-85 的醋酸乙酯 -0.5醋酸水溶 液或体积比为10-15:90-85乙腈-水溶液， 等度洗 脱， 检测波长为 280-284nm。该方法操作简便、 灵 敏度高， 重现性好。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 104237400 A CN 104237400 A 1/1 页 2 1. 一种熟地黄中 5- 羟甲基糠醛含量的检测方法， 包。
3、括以下步骤 (A) 供试品溶液的制备 ： 取过 60 目筛的熟地黄药材粉末约 1.00g， 精密称定， 置离心管 中， 加入醋酸乙酯12mL， 冰浴超声提取， 每次25min， 共提取4次， 合并提取液， 离心， 过滤， 至 50mL 容量瓶中， 用醋酸乙酯加至刻度， 摇匀， 过 0.45m 滤膜， 取续滤液作为供试品溶液。 ； (B) 对照品溶液的制备 ： 精密称取 5-HMF 对照品 6.00mg 置 10ml 量瓶中， 加醋酸乙酯溶 解并定容至 10mL， 摇匀。从中精密吸取 3mL 置 50mL 量瓶中， 加醋酸乙酯至刻度， 摇匀即得， 4储藏备用。 ； (C) 高效液相色谱法测定， 。
4、分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l， 注入 液相色谱仪， 以 C18色谱柱、 醋酸乙酯 -0.5醋酸水 (15 85) 的流动相等度洗脱、 流速 1mLmin-1、 检测波长 284nm、 柱温 30的色谱条件测定， 外标法定量， 计算， 即得。 权 利 要 求 书 CN 104237400 A 2 1/3 页 3 一种熟地黄中 5- 羟甲基糠醛的含量检测方法 技术领域 0001 本发明涉及中药材化学成分的检测， 特别涉及熟地黄中的检测方法。 背景技术 0002 熟地黄为玄参科植物地黄的块根， 经加工蒸晒而成。 具有补血滋润 ； 益精填髓的功 能。用血虚萎黄 ； 眩晕心悸 ； 月经不。
5、调 ； 崩不止 ； 肝肾阴亏 ； 潮热盗汗 ； 遗精阳痿 ； 不育不孕 ； 腰膝酸软 ； 耳鸣耳聋 ； 头目昏花 ； 须发早白 ； 消渴 ； 便秘 ； 肾虚喘促等症。 0003 5- 羟甲基糠醛 (5-HMF)， 又称 5- 羟甲基 -2- 糠醛， 是由葡萄糖等单糖化合物在高 温或弱酸等条件下产生的一个醛类化合物， 是 Maillard 反应的典型产物之一。文献中表述 该化合物对人体横纹肌和内脏有损害， 具有神经毒性， 能与人体蛋白质结合产生积蓄中毒， 2010 年版中国药典二部中明确规定了它在含葡萄糖注射液中的限量。此外， 近年来也有 研究表明， 它具有抗氧化、 抗心肌缺血、 改变血液流变学。
6、等对人体有益的作用。目前 5-HMF 测定主要为 UV 法和 HPLC 法， 熟地黄应用广泛， 在加工干制的过程中会产生 5-HMF， 但是熟 地黄药材中 5-HMF 的含量测定未见文献报道， 因此本实验采用 HPLC-UV 建立熟地黄药材中 5-HMF 的含量测定方法， 对于研究炮制作用机理， 规范炮制工艺， 控制饮片炮制质量具有一 定意义。 发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种简便、 快速、 准确、 重复性好的熟地黄中 5- 羟甲基糠 醛的含量检测方法。 0005 本发明提供的熟地黄中 5- 羟甲基糠醛含量的检测方法， 包括以下步骤 0006 (A) 供试品溶液的制备 ； 0007。
7、 (B) 对照品溶液的制备 ； 0008 (C) 高效液相色谱法测定 ： 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液， 注入液相色 谱仪， 按照一定的色谱条件测定， 外标法定量， 计算， 即得。 0009 上述步骤 (A) 为取过 60 目筛的熟地黄药材粉末， 冰浴超声或冰浴振摇提取， 将得 到提取离心， 过滤， 定容， 过 0.45m 滤膜， 取续滤液作为供试品溶液。 0010 进一步的， 上述步骤(A)为取过60目筛的熟地黄药材粉末0.5-1.5g， 精密称定， 置 离心管中， 加入醋酸乙酯12mL， 冰浴超声或冰浴振摇提取， 每次20-30min， 共提取3-4次， 合 并提取液， 离心， 过滤。
8、， 至50mL容量瓶中， 用醋酸乙酯加至刻度， 摇匀， 过0.45m滤膜， 取续 滤液作为供试品溶液。 0011 更进一步的， 上述步骤 (A) 为取过 60 目筛的熟地黄药材粉末约 1.00g， 精密称定， 置离心管中， 加入醋酸乙酯 12mL， 冰浴超声提取， 每次 25min， 共提取 3 次， 合并提取液， 离 心， 过滤， 至 50mL 容量瓶中， 用醋酸乙酯加至刻度， 摇匀， 过 0.45m 滤膜， 取续滤液作为供 试品溶液。 0012 上述步骤 (B) 为精密称取 5-HMF 对照品， 加醋酸乙酯溶解， 定容， 摇匀即得。 说 明 书 CN 104237400 A 3 2/3 页。
9、 4 0013 进一步的， 取 5-HMF 对照品 5.00-8.00mg， 精密称定， 置 10ml 量瓶中， 加醋酸乙酯 溶解并定容至 10mL， 摇匀。从中精密吸取 3mL 置 50mL 量瓶中 , 加醋酸乙酯至刻度， 摇匀即 得， 4储藏备用。 0014 更进一步的， 精密称取 5-HMF 对照品 6.00mg 置 10ml 量瓶中， 加醋酸乙酯溶解并定 容至 10mL， 摇匀。从中精密吸取 3mL 置 50mL 量瓶中 , 加醋酸乙酯至刻度， 摇匀即得， 4储 藏备用。 0015 上述的步骤 (C) 中的色谱条件可以采用下述的色谱条件 ： 0016 色谱柱 ： 选自 C18或 C8柱。
10、 ； 0017 流动相 ： 选自体积比为 5-15 95-85 的醋酸乙酯 -0.5醋酸水溶液或体积比为 10-15:90-85 乙腈 - 水溶液， 等度洗脱 ； 0018 流速 ： 0.8-1.2mLmin-1； 0019 检测波长 ： 280-284nm ； 0020 柱温 ： 25-35 ； 0021 进样量 ： 10-20L ； 0022 更进一步的， 上述的步骤 (C) 中的色谱条件为 0023 色谱柱 ： C18； 0024 流速 ： 1mLmin-1； 0025 检测波长 ： 284nm ； 0026 柱温 ： 30 ； 0027 进样量 ： 10L ； 0028 本发明采用的方。
11、法和实验条件是经过筛选获得的， 能够达到精确测定的目的 0029 本发明所提供的熟地黄中 5- 羟甲基糠醛的含量检测方法， 是通过大量具体创造 性试验筛选后得到的， 通过对样品、 供试品处理方法的筛选， 流动相的选择， 建立了熟地黄 中 5- 羟甲基糠醛的含量检测方法 HPLC 分析方法， 尤其是该方法供试品处理方法简单不需 要过色谱柱、 也不需要用毒有机溶剂反复萃取。该方法操作简便， 重复性和稳定性好， 结果 准确可靠。 0030 为了进一步说明本发明方法的有益效果， 将方法学验证举例如下 ： 0031 1.1 仪器与试剂 Agilent1100 型高效液相色谱仪 ( 美国 Agilent 。
12、公司 )， 万分之一 天平(AL204梅特勒-托利多仪器有限公司)， 十万分之一天平(XS105梅特勒-托利多仪器 有限公司 )， Milli-Q 超纯水机， 电热鼓风干燥箱 ( 天津市天宇实验仪器有限公司制造 )， 超 声波清洗器 (KQ5200 型， 昆山市超声波仪器有限公司 )， L-550 低速自动平衡离心机 ( 长沙 湘仪离心仪器有限公司 )， WK-200B 高速药物粉碎机 ( 青州市精诚机械有限公司 )。 0032 5-HMF对照品(批号111626-201308， 中国食品药品检定研究院)， 醋酸乙酯(色谱 纯 )， 醋酸 ( 色谱纯 )， 水为实验室自制超纯水， 其他试剂均为。
13、分析纯。 具体实施方式 0033 以下通过实施例进一步说明本发明。 0034 实施例 1 0035 供试品溶液的制备过 60 目筛的取熟地黄药材粉末约 1.00g， 精密称定， 置离心管 说 明 书 CN 104237400 A 4 3/3 页 5 中， 加入醋酸乙酯12mL， 冰浴超声提取， 每次25min， 共提取4次， 合并提取液， 离心， 过滤， 至 50mL 容量瓶中， 用醋酸乙酯加至刻度， 摇匀， 过 0.45m 滤膜， 取续滤液作为供试品溶液。 0036 对照品溶液的制备精密称取 5-HMF 对照品 6.07mg 置 10ml 量瓶中， 加醋酸乙酯溶 解并定容至 10mL， 摇匀。
14、。从中精密吸取 3mL 置 50mL 量瓶中 , 加醋酸乙酯至刻度， 摇匀即得， 4储藏备用。 0037 高效液相色谱法测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10L， 注入液相 色谱仪， 以 C18色谱柱、 醋酸乙酯 -0.5醋酸水 (15 85) 溶液的流动相等度洗脱、 流速 1mLmin-1、 检测波长 284nm、 柱温 30的色谱条件测定， 外标法定量， 计算， 即得。 0038 实施例 2 0039 供试品溶液的制备过 60 目筛的取熟地黄药材粉末约 0.50g， 精密称定， 置离心管 中， 加入醋酸乙酯12mL， 冰浴超声提取， 每次20min， 共提取3次， 合并提取液， 离。
15、心， 过滤， 至 50mL 容量瓶中， 用醋酸乙酯加至刻度， 摇匀， 过 0.45m 滤膜， 取续滤液作为供试品溶液。 0040 对照品溶液的制备取5-HMF对照品5.00mg， 精密称定， 置10ml量瓶中， 加醋酸乙酯 溶解并定容至 10mL， 摇匀。从中精密吸取 3mL 置 50mL 量瓶中 , 加醋酸乙酯至刻度， 摇匀即 得， 4储藏备用。 0041 高效液相色谱法测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10L， 注入液相 色谱仪， 以 C18色谱柱 ； 流动相 ： 醋酸乙酯 -0.5醋酸水 (15 85) 溶液的流动相等度洗脱 ； 流速 0.8mLmin-1； 检测波长 280nm。
16、 ； 柱温 25的色谱条件测定， 外标法定量， 计算， 即得。 0042 实施例 3 0043 供试品溶液的制备过 60 目筛的取熟地黄药材粉末约 1.50g， 精密称定， 置离心管 中， 加入醋酸乙酯12mL， 冰浴超声提取， 每次35min， 共提取4次， 合并提取液， 离心， 过滤， 至 50mL 容量瓶中， 用醋酸乙酯加至刻度， 摇匀， 过 0.45m 滤膜， 取续滤液作为供试品溶液。 0044 对照品溶液的制备取5-HMF对照品8.00mg， 精密称定， 置10ml量瓶中， 加醋酸乙酯 溶解并定容至 10mL， 摇匀。从中精密吸取 3mL 置 50mL 量瓶中 , 加醋酸乙酯至刻度， 摇匀即 得， 4储藏备用。 0045 高效液相色谱法测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 20L， 注入液相 色谱仪， 以 C8色谱柱 ； 流动相 ： 醋酸乙酯 -0.5醋酸水 (10 85) 溶液的流动相等度洗脱 ； 流速 1.2mLmin-1； 检测波长 282nm ； 柱温 35的色谱条件测定， 外标法定量， 计算， 即得。 说 明 书 CN 104237400 A 5 。