一种应用于污染物小分子定性定量分析检测和高通量筛选增强试剂盒及其制备.pdf

摘要
申请专利号：	CN201410455796.X	申请日：	2014.09.09
公开号：	CN104215685A	公开日：	2014.12.17
当前法律状态：	授权	有效性：	有权
法律详情：	授权\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):G01N 27/64申请日:20140909\|\|\|公开
IPC分类号：	G01N27/64	主分类号：	G01N27/64
申请人：	武汉品生科技有限公司
发明人：	成晓亮; 郑可嘉
地址：	430040 湖北省武汉市东西湖区七雄路海峡创业城二期1栋303
优先权：
专利代理机构：	南京知识律师事务所 32207	代理人：	胡玲
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内容摘要

一种应用于污染物小分子定性定量分析检测和高通量筛选剂盒的制备，具体步骤如下：应用在饮用水及污水处理中极性污染物的检测。操作简单，高效。将样本(单个离心管，96孔多孔板，384孔多孔板)放置室温10分钟，充分解冻。加入-20度同等体积的试剂QLW(50-100％甲醇,1-5％三氟乙酸)，作用15分钟，并在50度水浴中作用5分钟。3000rmp离心10分钟后，收集上清液。取上清后，加入同等体积的制备试剂QLB1；充分混合后，取溶液点在靶板上，静置10分钟后进样检测；QLW物质组成及体积比为：50-100％甲醇，1-5％三氟乙酸；QLB1物质组成及体积比为：50-70％甲醇，30-50％离子水，1-7％三氟乙酸；此试剂盒制备方法简单、成本较低。

权利要求书

权利要求书
1.  一种应用于污染物小分子定性定量分析检测和高通量筛选试剂盒，其特征在于，由已用QLW已裂解样本和同等体积的制备试剂QLB1组成，QLW物质组成及体积比为：50-100％甲醇，1-5％三氟乙酸；QLB1物质组成及体积比为：50-70％甲醇，30-50％离子水，1-7％三氟乙酸。

2.  权利要求1所述的一种应用于污染物小分子定性定量分析检测和高通量筛选试剂盒的制备，其特征在于，具体步骤如下：将样本放置室温，充分解冻,加入-20度同等体积的试剂QLW，在50度水浴中反应5分钟；离心后，收集上清液；取上清后，加入同等体积的制备试剂QLB1；充分混合后，取溶液点在靶板上，静置后进样检测；QLW物质组成及体积比为：50-100％甲醇，1-5％三氟乙酸；QLB1物质组成及体积比为：50-70％甲醇，30-50％离子水，1-7％三氟乙酸。

3.  根据权利要求1所述的应用于一种应用于污染物小分子定性定量分析检测和高通量筛选试剂盒的制备，其特征在于，QLW物质组成及体积比为：100％甲醇，1％三氟乙酸；QLB1物质组成及体积比为：50％甲醇，50％离子水，3％三氟乙酸。

说明书

说明书一种应用于污染物小分子定性定量分析检测和高通量筛选增强试剂盒及其制备
技术领域
本技术属于分析化学应用领域，具体涉及表面激光解析质谱领域。
背景技术
表面激光解析质谱是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱，其中以基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)为最重要的实例，此项发明获得过诺贝尔化学奖。主要由两部分组成：基质辅助激光解吸电离离子源(MALDI)和飞行时间质量分析器(TOF)。MALDI的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，在电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离的过程。因此它是一种软电离技术，适用于混合物及生物大分子的测定。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比(M/Z)与离子的飞行时间成正比，检测离子。MALDI-TOF-MS具有灵敏度高、准确度高及分辨率高等特点，为生命科学等领域提供了一种强有力的分析测试手段。
然而，以基质辅助激光解析电离飞行时间质谱为首的所有基于表面激光解析的质谱都需要将样品制备在特制靶板上面，其操作是将样品分散在基质分子中并形成晶体。当用激光照射晶体时，基质从激光中吸收能量，样品解吸附，基质-样品之间发生电荷转移使得样品分子电离，电离的样品在电场作用下飞过真空的飞行管，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即通过离子的质量电荷之比(M/Z)与离子的飞行时间成正比来分析离子，并测得样品分子的分子量。焦点问题就在于通用的基质分子的分子量在1000-3000da,造成了过量的背景质谱峰。这就决定了所有此类基于表面激光解析的质谱分析只能适用于大分子检测，比如蛋白质，长链多肽，核酸，高分子材料等等，而不能应用于小分子检测(分子量小于1000da)，或者说基于表面激光解析的质谱分析的高灵敏度/高通量等独特的优势无法施展在小分子分析检测上面.而分子量小于1000da的小分子却是对人类最重要的最具应用价值的一类化学产品，例如95％以上的药物小分子，所有的氨基酸，维生素等等和人类生活健康相关的化学物质。
目前现有技术针对小分子检测和筛选还停留在光谱法检测，例如荧光发光检测或者衍生出可以荧光检测的底物，但此类检测要求目标小分子分子结构具有光活性集团，另一弊端就是往往光度法灵敏度较低，检测不到微量的小分子浓度。液相质谱(LC-MS)及气相质谱(GC-MS)的已经开始应用在小分子的检测和高通量筛选。但需要消耗大量的人力和溶剂耗材，而且一个样品从制备到质谱分析再到出结果需要相当长一个过程，根据要求不同，分析一个样品从样品制备到拿到结果需要30-60分钟，远远不能满足现代生物医药发展的高通量筛选要求。
发明内容
发明目的：找到一种制备方法简单、成本较低的增强电离缓冲液制备方法，节省开支与时间。
技术方案：一种应用于污染物小分子定性定量分析检测和高通量筛选试剂盒，由已用QLW已裂解样本和同等体积的制备试剂QLB1组成，QLW物质组成及体积比为：50-100％甲醇，1-5％三氟乙酸；QLB1物质组成及体积比为：50-70％甲醇，30-50％离子水，1-7％三氟乙酸。
一种应用于污染物小分子定性定量分析检测和高通量筛选试剂盒的制备，具体步骤如下：将样本放置室温，充分解冻,加入-20度同等体积的试剂QLW，在50度水浴中反应5分钟；离心后，收集上清液；取上清后，加入同等体积的制备试剂QLB1；充分混合后，取溶液点在靶板上，静置后进样检测；QLW物质组成及体积比为：50-100％甲醇，1-5％三氟乙酸；QLB1物质组成及体积比为：50-70％甲醇，30-50％离子水，1-7％三氟乙酸。
优选方案为：QLW物质组成及体积比为：100％甲醇，1％三氟乙酸；QLB1物质组成及体积比为：50％甲醇，50％离子水，3％三氟乙酸。
有益效果：1、制备方法简单；2、成本较低。
具体实施方式
应用在饮用水及污水处理中极性污染物的检测。操作简单，高效。将样本(单个离心管，96孔多孔板，384孔多孔板)放置室温10分钟，充分解冻。加入-20度同等体积的试剂QLW(50-100％甲醇,1-5％三氟乙酸)，作用15分钟，并在50度水浴中作用5分钟。3000rmp离心10分钟后，收集上清液。取上清后，加入同等体积的制备试剂QLB1；充分混合后，取溶液点在靶板上，静置10分钟后进样检测；QLW物质组成及体积比为：50-100％甲醇，1-5％三氟乙酸；QLB1物质组成及体积比为：50-70％甲醇，30-50％离子水，1-7％三氟乙酸。

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1、(10)申请公布号 CN 104215685 A (43)申请公布日 2014.12.17 CN 104215685 A (21)申请号 201410455796.X (22)申请日 2014.09.09 G01N 27/64(2006.01) (71)申请人武汉品生科技有限公司地址 430040 湖北省武汉市东西湖区七雄路海峡创业城二期 1 栋 303 (72)发明人成晓亮郑可嘉 (74)专利代理机构南京知识律师事务所 32207 代理人胡玲 (54) 发明名称一种应用于污染物小分子定性定量分析检测和高通量筛选增强试剂盒及其制备 (57) 摘要一种应用于污染物小分子定性定。

2、量分析检测和高通量筛选剂盒的制备，具体步骤如下：应用在饮用水及污水处理中极性污染物的检测。操作简单，高效。将样本 ( 单个离心管， 96 孔多孔板， 384 孔多孔板 ) 放置室温 10 分钟，充分解冻。加入 -20 度同等体积的试剂 QLW(50-100甲醇 ,1-5三氟乙酸 )，作用 15 分钟，并在 50 度水浴中作用5分钟。 3000rmp离心10分钟后，收集上清液。取上清后，加入同等体积的制备试剂 QLB1 ；充分混合后，取溶液点在靶板上，静置 10 分钟后进样检测； QLW 物质组成及体积比为： 50-100甲醇， 1-5三氟乙酸；。

3、 QLB1 物质组成及体积比为： 50-70甲醇， 30-50离子水， 1-7三氟乙酸；此试剂盒制备方法简单、成本较低。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页说明书 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书1页说明书2页 (10)申请公布号 CN 104215685 A CN 104215685 A 1/1 页 2 1. 一种应用于污染物小分子定性定量分析检测和高通量筛选试剂盒，其特征在于，由已用 QLW 已裂解样本和同等体积的制备试剂 QLB1 组成， QLW 物质组成及体积比为： 50-100甲醇， 1-5三氟乙酸； QLB1。

4、物质组成及体积比为： 50-70甲醇， 30-50离子水， 1-7三氟乙酸。 2. 权利要求 1 所述的一种应用于污染物小分子定性定量分析检测和高通量筛选试剂盒的制备，其特征在于，具体步骤如下：将样本放置室温，充分解冻 , 加入 -20 度同等体积的试剂QLW，在50度水浴中反应5分钟；离心后，收集上清液；取上清后，加入同等体积的制备试剂 QLB1 ；充分混合后，取溶液点在靶板上，静置后进样检测； QLW 物质组成及体积比为： 50-100甲醇， 1-5三氟乙酸； QLB1 物质组成及体积比为： 50-70甲醇， 30-50离子水， 1-7三氟乙。

5、酸。 3. 根据权利要求 1 所述的应用于一种应用于污染物小分子定性定量分析检测和高通量筛选试剂盒的制备，其特征在于， QLW 物质组成及体积比为： 100甲醇， 1三氟乙酸； QLB1 物质组成及体积比为： 50甲醇， 50离子水， 3三氟乙酸。权利要求书 CN 104215685 A 2 1/2 页 3 一种应用于污染物小分子定性定量分析检测和高通量筛选增强试剂盒及其制备技术领域 0001 本技术属于分析化学应用领域，具体涉及表面激光解析质谱领域。背景技术 0002 表面激光解析质谱是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱，其中以基质辅助激光解析电离飞行时。

6、间质谱 (MALDI-TOF-MS) 为最重要的实例，此项发明获得过诺贝尔化学奖。主要由两部分组成：基质辅助激光解吸电离离子源 (MALDI) 和飞行时间质量分析器 (TOF)。MALDI 的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，在电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离的过程。因此它是一种软电离技术，适用于混合物及生物大分子的测定。TOF 的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比 (M/Z) 与离子的飞行时间成正比，检测离子。MALDI-T。

7、OF-MS 具有灵敏度高、准确度高及分辨率高等特点，为生命科学等领域提供了一种强有力的分析测试手段。 0003 然而，以基质辅助激光解析电离飞行时间质谱为首的所有基于表面激光解析的质谱都需要将样品制备在特制靶板上面，其操作是将样品分散在基质分子中并形成晶体。当用激光照射晶体时，基质从激光中吸收能量，样品解吸附，基质 - 样品之间发生电荷转移使得样品分子电离，电离的样品在电场作用下飞过真空的飞行管，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即通过离子的质量电荷之比 (M/Z) 与离子的飞行时间成正比来分析离子，并测得样品分子的分子量。焦点问题就在于通用的基质分子的分。

8、子量在 1000-3000da, 造成了过量的背景质谱峰。这就决定了所有此类基于表面激光解析的质谱分析只能适用于大分子检测，比如蛋白质，长链多肽，核酸，高分子材料等等，而不能应用于小分子检测 ( 分子量小于 1000da)，或者说基于表面激光解析的质谱分析的高灵敏度 / 高通量等独特的优势无法施展在小分子分析检测上面 . 而分子量小于 1000da 的小分子却是对人类最重要的最具应用价值的一类化学产品，例如 95以上的药物小分子，所有的氨基酸，维生素等等和人类生活健康相关的化学物质。 0004 目前现有技术针对小分子检测和筛选还停留在光谱法检测，例如荧光发光检测。

9、或者衍生出可以荧光检测的底物，但此类检测要求目标小分子分子结构具有光活性集团，另一弊端就是往往光度法灵敏度较低，检测不到微量的小分子浓度。液相质谱 (LC-MS) 及气相质谱 (GC-MS) 的已经开始应用在小分子的检测和高通量筛选。但需要消耗大量的人力和溶剂耗材，而且一个样品从制备到质谱分析再到出结果需要相当长一个过程，根据要求不同，分析一个样品从样品制备到拿到结果需要 30-60 分钟，远远不能满足现代生物医药发展的高通量筛选要求。发明内容 0005 发明目的：找到一种制备方法简单、成本较低的增强电离缓冲液制备方法，节省开说明书 CN 104215。

10、685 A 3 2/2 页 4 支与时间。 0006 技术方案：一种应用于污染物小分子定性定量分析检测和高通量筛选试剂盒，由已用 QLW 已裂解样本和同等体积的制备试剂 QLB1 组成， QLW 物质组成及体积比为： 50-100甲醇， 1-5三氟乙酸； QLB1 物质组成及体积比为： 50-70甲醇， 30-50离子水， 1-7三氟乙酸。 0007 一种应用于污染物小分子定性定量分析检测和高通量筛选试剂盒的制备，具体步骤如下：将样本放置室温，充分解冻 , 加入 -20 度同等体积的试剂 QLW，在 50 度水浴中反应 5 分钟；离心后，收集上清液；取上清后。

11、，加入同等体积的制备试剂 QLB1 ；充分混合后，取溶液点在靶板上，静置后进样检测； QLW 物质组成及体积比为： 50-100甲醇， 1-5三氟乙酸； QLB1 物质组成及体积比为： 50-70甲醇， 30-50离子水， 1-7三氟乙酸。 0008 优选方案为： QLW 物质组成及体积比为： 100甲醇， 1三氟乙酸； QLB1 物质组成及体积比为： 50甲醇， 50离子水， 3三氟乙酸。 0009 有益效果： 1、制备方法简单； 2、成本较低。具体实施方式 0010 应用在饮用水及污水处理中极性污染物的检测。操作简单，高效。将样本 ( 单个离心管。

12、， 96 孔多孔板， 384 孔多孔板 ) 放置室温 10 分钟，充分解冻。加入 -20 度同等体积的试剂 QLW(50-100甲醇 ,1-5三氟乙酸 )，作用 15 分钟，并在 50 度水浴中作用 5 分钟。 3000rmp 离心 10 分钟后，收集上清液。取上清后，加入同等体积的制备试剂 QLB1 ；充分混合后，取溶液点在靶板上，静置 10 分钟后进样检测； QLW 物质组成及体积比为： 50-100甲醇， 1-5三氟乙酸； QLB1 物质组成及体积比为： 50-70甲醇， 30-50离子水， 1-7三氟乙酸。说明书 CN 104215685 A 4 。

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