一种丹参提取物及其制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 104013673 A (43)申请公布日 2014.09.03 CN 104013673 A (21)申请号 201410069832.9 (22)申请日 2014.02.28 201310062855.2 2013.02.28 CN A61K 36/537(2006.01) G01N 30/02(2006.01) (71)申请人 成都中医药大学 地址 611137 四川省成都市温江区柳台大道 1166 号 (72)发明人 韩丽 杨明 黄娟 张定堃 杨秀梅 陈晓东 (74)专利代理机构 成都高远知识产权代理事务 所 ( 普通合伙 ) 51222 代理人 李高峡 杜朗。

2、宇 (54) 发明名称 一种丹参提取物及其制备方法 (57) 摘要 本发明提供了丹参的提取方法， 它包括如下 操作步骤 ： 取丹参饮片， 加水， 减压条件下， 70 沸腾提取， 合并提取液， 即可。本发明还提供了丹 参提取物及其制备方法。本发明还提供了丹参提 取物的检测方法。 本发明的丹参提取方法， 所得提 取物中丹酚酸 B 含量远高于高温回流提取物， 其 他成分和杂质含量较高温回流提取低， 低温沸腾 动态法制得的丹参提取物丹酚酸 B 纯度大于高温 回流提取物。本发明检测方法， 能够有效将丹参 提取物中的多个成分有效分离， 峰形良好， 基线平 稳， 为丹参提取物的质量控制提供了可靠的基础。 (。

3、66)本国优先权数据 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 12 页 附图 7 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书12页 附图7页 (10)申请公布号 CN 104013673 A CN 104013673 A 1/1 页 2 1. 丹参的提取方法， 其特征在于 ： 它包括如下操作步骤 ： 取丹参饮片， 加水， 减压条件 下， 705沸腾提取， 合并提取液， 即可。 2. 根据权利要求 1 所述的提取方法， 其特征在于 ： 加水量为丹参干重的 5 15 倍， 优 选为 12 倍。 3. 根据权利要求 1 所述的提取方法， 其特征。

4、在于 ： 提取 1 3 次， 每次 0.5 3h ； 优选 提取 3 次， 每次 2h。 4. 一种丹参提取物的制备方法， 其特征在于 ： 它包括如下操作步骤 ： （1） 按权利要求 1-3 任意一项所述方法提取 ； （2） 取步骤 （1） 的提取液， 减压回收溶剂、 冷冻干燥后， 即得丹参提取物。 5. 根据权利要求 4 所述丹参提取物的制备方法， 其特征在于 ： 所述减压回收溶剂的条 件为 ： -0.05 -0.095MPa、 40 90 ； 优选 705。 6.权利要求4或5所述方法制备的丹参提取物， 其特征在于 ： 所述丹参提取物含有5 15% 的丹酚酸 B。 7. 丹参提取物的检测方。

5、法， 其特征在于 ： 它是以高效液相色谱法进行测定的， 具体操 作步骤如下 ： （1） 取待测丹参提取物， 制备供试品溶液 ； （2） 将供试品溶液注入高效液相色谱仪中， 检测即得， 其色谱条件如下 ： 色谱柱 ： 十八烷基键合硅胶为固定相 ； 流动相 ： 甲醇 A-1.0% 冰醋酸水溶液 B， 梯度洗脱， 洗脱程序 A ： 0min7%， 10min7%， 12min9%， 31min33%， 47min39%， 60min58%， 70min62% ； 检测波长 ： 2865nm。 8.根据权利要求7所述的检测方法， 其特征在于 ： 步骤 （1） 中， 以甲醇为溶剂或稀释剂， 制备供试品溶。

6、液。 9.根据权利要求7所述的检测方法， 其特征在于 ： 所述高效液相色谱法中， 以丹酚酸B、 原儿茶醛或丹参素钠中的一种或两种以上为对照品， 制备对照品溶液。 10. 根据权利要求 7 所述的检测方法， 其特征在于 ： 检测柱温为 305。 权 利 要 求 书 CN 104013673 A 2 1/12 页 3 一种丹参提取物及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种丹参提取物及其制备方法。本发明还涉及丹参提取物的检测方 法。 背景技术 0002 丹参为唇形科植物丹参 Salvia miltiorrhiza Bge. 的干燥根和根茎， 始载于 神 农本草经 ， 列为上品， 为临床常用中。

7、药材。 具有活血祛瘀， 痛经止痛， 清心除烦， 凉血消痈等 功效， 临床广泛用于胸痹心痛、 脘腹胁痛、 癥瘕积聚、 热痹疼痛、 心烦不眠、 月经不调等证。 0003 丹参含有脂溶性的二萜醌类化合物和水溶性的酚酸类化合物。 水溶性酚酸是丹参 主要的活性成分， 包括丹参素、 丹酚酸B、 丹酚酸C及原儿茶醛等成分， 以丹酚酸B含量最高。 丹酚酸 B 对心血管系统、 大脑、 肝脏、 肾脏等都具有保护作用， 是丹参的有效水溶性成分。 0004 丹参提取多采用回流提取， 提取温度为溶剂在大气压下的沸点， 温度较高， 丹酚酸 B 对热不稳定， 长时间加热， 丹酚酸 B 易被分解破坏， 使其含量降低。因此， 。

8、亟待一种可有效 提取丹酚酸 B， 且对杂质提取较少的丹参提取方法。 发明内容 0005 本发明的技术方案是提供了一种丹酚酸 B 含量较高的丹参提取物， 本发明的另一 技术方案是提供了丹参提取物的制备方法。 0006 本发明提供了丹参的提取方法， 它包括如下操作步骤 ： 取丹参饮片， 加水， 减压条 件下， 705沸腾提取， 合并提取液， 即可。 0007 上述提取温度， 优选使用 70。 0008 本发明中所述的沸腾提取， 即在减压条件下， 使得水在相应的提取温度下达到沸 腾状态， 在此温度和压力条件下进行提取， 其中， 真空压力以满足在某一温度条件下保证水 沸腾为基准。 0009 其中， 加。

9、水量为丹参干重的 5 15 倍， 优选为 12 倍。 0010 其中， 提取 1 3 次， 每次 0.5 3h ； 优选提取 3 次， 每次 2h。 0011 本发明还提供了一种丹参提取物的制备方法， 它包括如下操作步骤 ： 0012 （1） 按上述方法提取 ； 0013 （2） 取步骤 （1） 的提取液， 减压回收溶剂、 冷冻干燥后， 即得丹参提取物。 0014 其中， 所述减压回收溶剂的条件为 ： -0.05-0.095MPa、 4090； 优选705。 0015 本发明还提供了一种丹参提取物， 所述丹参提取物含有 5 15% 的丹酚酸 B。 0016 进一步地， 所述丹参提取物的制备方法。

10、如上所述。 0017 本发明还提供了丹参提取物的检测方法， 它是以高效液相色谱法进行测定的， 具 体操作步骤如下 ： 0018 （1） 取待测丹参提取物， 以甲醇为溶剂或稀释剂， 制备供试品溶液 ； 0019 （2） 将供试品溶液注入高效液相色谱仪中， 检测即得， 其色谱条件如下 ： 说 明 书 CN 104013673 A 3 2/12 页 4 0020 色谱柱 ： 十八烷基键合硅胶为固定相 ； 0021 流动相 ： 甲醇 A-1.0% 冰醋酸水溶液 B， 梯度洗脱， 洗脱程序 A ： 0min7%， 10min7%， 12min9%， 31min33%， 47min39%， 60min58。

11、%， 70min62% ； 0022 检测波长 ： 2865nm。 0023 进一步地， 所述高效液相色谱法中， 以丹酚酸 B、 原儿茶醛或丹参素钠中的一种或 两种以上为对照品， 制备对照品溶液。 0024 进一步地， 检测柱温为 305。 0025 利用本发明提取方法， 制得的丹参提取物中丹酚酸 B 含量远高于高温回流提取 物， 其他成分和杂质含量较高温回流提取低， 低温沸腾动态法制得的丹参提取物丹酚酸 B 纯度大于高温回流提取物。 0026 较高温回流提取而言， 适宜低温提取既保证了酚酸类成分的最大溶出， 还防止其 在高温下被分解破坏， 最大限度的提取出了丹参中的酚酸类成分 ； 同时， 由。

12、于低温， 杂质及 其他成分溶出量减少， 使酚酸类成分被高效地从丹参中被分离出来的同时， 提取液中杂质 和其他成分的含量也降低， 有利于后续的分离纯化工艺， 提高了产品品质和附加值。 0027 本发明检测方法， 能够有效将丹参提取物中的多个成分有效分离， 峰形良好， 基线 平稳， 为丹参提取物的质量控制提供了可靠的基础。 附图说明 0028 图 1 ： 不同提取温度丹酚酸 B 含量图 0029 图 2 ： 丹参提取液表面张力 0030 图 3 ： 丹参提取液 Zeta 电位 0031 图 4 ： 丹参提取液粒径分布 0032 图 5 ： 丹参提取液指纹图谱色谱图 0033 图 6 ： 10 批丹。

13、参提取液指纹图谱叠加图 0034 图 7 ： 丹参提取物粒径分布图 0035 图 8 ： 丹参提取物吸湿百分率曲线 0036 图 9 ： 10 批丹参提取物指纹图谱叠加图 具体实施方式 0037 实施例 1 丹参提取方法 0038 取丹参饮片， 加丹参干重的12倍量水， 减压条件下， 70沸腾提取3次， 每次2h， 合 并提取液， 即可。 0039 实施例 2 丹参提取方法的研究 0040 1 仪器与试药 0041 岛津LC-10A高效液相色谱仪， SCL-6A系统控制器， N2000色谱数据工作站， TC-100 恒温箱 （日本岛津公司） ； Agilent1200 高效液相色谱仪系列 （美。

14、国 Agilent 公司） ； Mettler AE240 十万分之一电子天平 （德国 Mettler 公司） ； FA1104 万分之一电子天平 （上海天平仪器 厂） ； KQ3200 型超声清洗器 （昆山市超声仪器有限公司） ； SHZ-D（） 循环水式真空泵 （巩义 市予华仪器有限责任公司） ； 恒温水浴锅 （北京中兴伟业仪器有限公司） ； RE-2000 型旋转蒸 说 明 书 CN 104013673 A 4 3/12 页 5 发仪 （上海亚荣生化仪器厂） ， ALPHA1-4LSC 冷冻干燥器 （CHRIST 公司） ， PHS-3E 型 PH 计 （上 海精密科学仪器有限公司） ；。

15、 OCAT21 表面 / 界面张力仪 （德国 Dataphysics 公司） ； 电导率仪 （雷磁 DDS307A， 上海精科） Malvern 纳米粒度仪 （型号 Nano-ZS） 。 0042 丹参药材 （四川科伦天然药业有限公司） ； 丹酚酸 B 对照品 （批号 ： MUST-12020104， 成都曼斯特生物科技有限公司） ， 丹参素钠对照品 （批号 ： MUST-12020803， 成都曼斯特生物 科技有限公司） ， 原儿茶醛对照品 （批号 ： 110810-200205， 中国药品生物制品检定所） ， 甲醇 为色谱纯， 水为重蒸水 （自制） ， 其他试剂均为分析纯。 0043 2 。

16、丹酚酸 B 含量测定方法学的建立 0044 色谱条件色谱柱 ： 十八烷基硅烷键合硅胶柱 ； Agilent TC-C18（250mm4.6mm） 色 谱柱， 5m ； 乙腈 -0.5% 磷酸水 （28:72） 为流动相， 检测波长 286nm， 流速 1.0mL/min ； 柱温 ： 30。 0045 对照品溶液的制备对照品溶液的制备精密称取丹酚酸 B 对照品 14.08mg 于 10mL 量瓶中， 75% 甲醇溶液定容， 摇匀， 作为贮备液 ； 精密量取 1mL 于 10mL 量瓶中， 75% 甲醇溶液 定容， 摇匀， 即得 0.1408mg/mL 丹酚酸 B 对照品溶液。 0046 供试品。

17、溶液的制备精密吸取提取液适量于 25mL 量瓶中， 75% 甲醇溶液定容， 摇匀， 0.45m 微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液。 0047 线性范围试验取对照品溶液， 分别精密进样 2、 4、 8、 16、 20L， 照上述色谱条件测 定峰面积积分值， 以峰面积对进样量进行回归， 得回归方程 ： Y=131290X+46157， R=0.9991。 结果表明， 在丹酚酸 B 含量为 0.2816mg 2.8160mg 范围内， 线性关系良好。 0048 精密度试验精密吸取对照品溶液 10uL 注入液相色谱仪， 连续进样 6 次， 记录峰面 积， 计算 RSD 为 1.16%， 表明仪器。

18、精密度良好。 0049 稳定性试验精密吸取供试品溶液， 分别于 0h、 2h、 4h、 6h、 8h 进样 5uL， 记录峰面积， RSD 为 1.08%， 表明样品在 8h 内稳定性良好。 0050 重复性试验按 “供试品溶液的制备” 制备 6 份供试品溶液， 分别精密吸取 5uL 注入 液相色谱仪， 记录峰面积， RSD 为 2.14%， 表明该法重复性良好 0051 回收率试验精密称取已知含量的丹参粉末 0.1g， 精密加入丹酚酸 B 对照品 3.8016mg， 75甲醇定容至 50mL， 称定重量， 超声 1h， 取出， 放冷， 再称定重量， 用 75甲醇 补足减失的重量， 摇匀， 滤。

19、过， 取续滤液， 进样 5L 测定含量， 计算回收率， 平均回收率为 101.77%， RSD 为 2.89%(n=6)。 0052 丹参药材中丹酚酸B含量测定取丹参粉末(过三号筛)约0.2g， 精密称定， 置具塞 锥形瓶中， 精密加入 75甲醇 50mL， 称定重量， 超声 1h， 取出， 放冷， 再称定重量， 用 75甲 醇补足减失的重量， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 进样5L测定含量， 测得丹参药材中丹酚酸B含 量为 3.81%。 0053 3 正交试验设计 0054 称取丹参饮片 30g， 以水为溶剂， 于抽真空 70下沸腾提取温度下对提取次数、 溶 剂用量、 提取时间三个因素进行L9。

20、(34)正交实验， 制备样品溶液， 测定丹酚酸B含量， 结果如 下 ： 0055 表 1 正交试验设计及结果 说 明 书 CN 104013673 A 5 4/12 页 6 0056 0057 表 2 方差分析 0058 0059 注 ： P 0.05 表示有显著性， P 0.01 表示有极显著性 0060 结果表明， 各因素作用主次为ACB， A对丹参酚酸提取影响最大， 其次为C因素， B 因素影响最小。方差分析结果为 ： A、 B、 C 因素对提取效果都有显著影响。综合直观分析和 方差分析的结果， 确定优化工艺为 A3B3C3， 即加 12 倍量水， 于低温 70沸腾回流提取 3 次， 每。

21、次 2h。 0061 正交试验的验证根据以上正交试验的结果， 对优选出来的最佳工艺条件 A3B3C3进 行验证试验， 重复三次， 丹酚酸 B 和干膏收率分别为 3.11%、 40.36%。 0062 不同提取温度的差异称取丹参饮片 30g， 采用正交试验优化的工艺条件， 于 50、 60、 70、 80、 90、 100下制备丹参提取液， 测定丹酚酸 B 含量和干膏收率。结果如表 3、 图 1 ： 0063 表 3 不同提取温度的影响 （n=3） 0064 0065 以上数据表明， 随着提取温度的升高， 丹酚酸 B 含量先增大后减小， 70含量最 高为 3.14%， 100含量最低为 2.46。

22、% ； 干膏收率随温度升高逐渐增大， 50最低为 38.95%， 100最高为 48.50%。提取温度低于 70时， 丹酚酸 B 不能有效溶出 ； 高于 70时， 随着加 热时间延长， 丹酚酸 B 被分解破坏 ； 故 70为丹酚酸 B 适宜提取温度。由于物质溶剂中溶 说 明 书 CN 104013673 A 6 5/12 页 7 解度一般随着温度升高而增大， 因而， 低温时物质溶出少， 干膏收率低， 随着温度升高， 物质 溶出量增大， 干膏收率增加。70时， 丹酚酸 B 既能有效溶出， 不被破坏， 溶液中其他成分和 杂质溶解量也较高温低， 有利于后续分离纯化。 0066 4 提取液物理参数测定。

23、 0067 （1） 丹参提取液表面张力的测定 0068 采用 OCAT21 表面 / 界面张力仪测定丹参高温与低温提取液的表面张力， 运用 SPSS17.0 统计软件对试验数据进行独立样本 t 检验对比分析， 测定结果如表 4、 图 2。 0069 表 4 丹参高温提取液与低温提取液的表面张力测定 （单位 ： mN） 0070 0071 与高温提取液比较， *P 0.05 0072 统计分析结果显示， 两组数据方差不齐， 双侧检验 P=0.027 0.05， 高温提取液 与低温提取液的表面张力有显著性差异， 低温提取液表面张力显著大于高温提取液表面张 力， 这可能与提取工艺有关。 0073 （。

24、2） 丹参提取液电导率的测定 0074 采用电导率仪测定丹参高温与低温提取液的电导率， 运用 SPSS17.0 统计软件对 试验数据进行独立样本 t 检验对比分析， 测定结果见表 5。 0075 表 5 丹参高温提取液与低温提取液的电导率测定 （单位 ： s/cm） 0076 0077 经统计分析， 两组数据方差齐， 双侧检验 P=0.190 0.05， 表明高温提取液与低温 提取液电导率没有显著差异。 0078 （3） 丹参提取液 pH 值测定 0079 采用pHS-3C精密pH计测定丹参高温与低温提取液的pH， 运用SPSS17.0统计软件 对试验数据进行独立样本 t 检验对比分析， 测定。

25、结果见表 6。 0080 表 6 丹参高温提取液与低温提取液的 pH 测定 0081 0082 与高温提取液比较， *P 0.05 0083 统计结果显示， 两组数据方差齐， 双侧检验 P=0.000 0.05， 两者有显著统计学差 异， 低温提取液 pH 值显著低于高温提取液 ； 由于两者提取温度不同， 物质在两者中的溶出 不同， 提取液所含化合物种类与数量有差异， 故提取液的 pH 值不同。 0084 （4） 丹参提取液 Zeta 电位的测定 0085 采用 Zeta 电位仪测定丹参高温与低温提取液 Zeta 电位， 运用 SPSS17.0 统计软件 说 明 书 CN 104013673 。

26、A 7 6/12 页 8 对试验数据进行独立样本 t 检验对比分析， 测定结果见表 7、 图 3。 0086 表 7 丹参高温提取液与低温提取液的电导率测定 （单位 ： vm） 0087 0088 与高温提取液比较， *P 0.05 0089 统计分析显示， 两组数据方差齐， 双侧检验 P=0.008 0.05， 两者具有显著的统计 学差异， 低温提取液Zeta电位显著低于高温提取液Zeta电位， 表明高温提取液稳定性比低 温提取液好。 0090 （5） 丹参提取液纳米粒径的测定 0091 采用Malvern纳米粒度仪测定丹参高温与低温提取液纳米粒径， 运用SPSS17.0统 计软件对试验数据。

27、进行独立样本 t 检验对比分析， 测定结果见表 8、 图 4。 0092 表 8 丹参高温提取液与低温提取液的电导率测定 （单位 ： d.nm） 0093 0094 与高温提取液比较， *P 0.05 0095 统计结果显示， 两组数据方差齐， 双侧检验 P=0.000 0.05， 两者有显著统计学差 异， 低温提取液纳米粒径平均值显著大于高温提取液纳米粒径平均值。 由光强分布图可知， 高温提取液粒径分布在 400 800nm， 低温提取液粒径分布在 2000 6000nm， 均为粗分散 体系， 低温提取液纳米粒径远大于高温提取液。 0096 实施例 3 提取液的指纹图谱研究 0097 供试品。

28、溶液的制备称取丹参药材 30g， 加 12 倍水， 于 70回流提取 3 次， 每次 2h， 滤过， 合并滤液， 定容至 1000mL， 精密吸取 5mL 于量瓶中， 甲醇定容至 25ml， 摇匀， 即得丹参 低温提取液供试品溶液。 0098 称取丹参药材 30g， 加 12 倍水， 回流提取 3 次， 每次 2h， 滤过， 合并滤液， 定容至 1000mL， 精密吸取 5mL 于量瓶中， 甲醇定容至 25ml， 摇匀， 即得丹参高温提取液供试品溶液。 0099 对照品溶液的制备精密称定丹酚酸 B、 原儿茶醛、 丹参素钠对照品适量于 10mL 量瓶中， 甲醇定容， 即得含丹酚酸 B0.1466。

29、mgmL-1、 原儿茶醛 8.533gmL-1、 丹参素钠 33.4gmL-1的混合对照品溶液。 0100 （1） 色谱条件的选择 0101 检测波长的选择为了保证指纹图谱的最大信息量化， 尽可能多地反映样品全貌， 采用甲醇 -1.0% 冰醋酸水溶液二元梯度洗脱， 30柱温下， 记录 254、 270、 280、 286、 310nm 波长下丹参提取液色谱图， 并结合 3D-plot 图确定出检测波长。结果表明， 286nm 波长下色 谱峰分离效果较好， 所有色谱峰都能够体现， 可充分反映丹参样品的情况， 因此， 选择 286nm 为检测波长。 0102 流动相种类的选择在 30柱温下， 以甲。

30、醇 -0.5% 磷酸水溶液、 甲醇 -1.0% 冰醋酸 水溶液、 甲醇-1.0%甲酸水溶液、 乙腈-0.5%磷酸水溶液为流动相， 进行梯度洗脱， 记录色谱 说 明 书 CN 104013673 A 8 7/12 页 9 图。结果表明， 以甲醇 -1.0% 冰醋酸水溶液梯度洗脱基线平稳， 分离较好， 故以甲醇 -1.0% 冰醋酸水溶液为流动相。 0103 梯度洗脱程序的选择以甲醇 -1.0% 冰醋酸水溶液为流动相， 在 30柱温下， 采 用不同梯度洗脱程序， 测定指纹图谱， 结果表明在梯度洗脱程序 （A ： 0min7%， 10min7%， 12min9%， 31min33%， 47min39%。

31、， 60min58%， 70min62%） 下分离度较好， 特征峰明显， 故以该梯 度洗脱程序进行洗脱。 0104 色谱柱的选择以甲醇 (A)-1.0% 冰醋酸水溶液 (B) 为流动相， 在 286nm 下， 分别采 用 Agilent TC-C18、 Dikma Kromasil100A C18、 Scienhome Kromasil C18 色谱柱测定指纹 图谱， 结果以Agilent TC-C18色谱柱分离效果较好， 故选择Agilent TC-C18色谱柱进行测 定。 0105 结果表明， 丹参指纹图谱色谱条件为 ： 色谱柱为 Agilent TC-C18 色谱柱 ； 流动相 为甲醇(。

32、A)-1.0%冰醋酸水溶液(B)， 二元梯度洗脱， 洗脱程序A ： 0min7%， 10min7%， 12min9%， 31min33%， 47min39%， 60min58%， 70min62% ； 柱温为 30 , ； 体积流量为 1.0mL min-1， 检测波 长为 286nm， 分析时间 70min， 供试品、 对照品溶液进样量均为 15L。 0106 （2） 方法学考察 0107 精密度试验取1号丹参常压提取液供试品溶液连续进样5次， 记录指纹图谱， 计算 共有峰相对保留时间、 相对峰面积及 RSD 值， 均小于 3%， 表明仪器精密度良好。 0108 稳定性试验取精密度试验供试品。

33、溶液， 分别于 0h、 2h、 4h、 8h、 16h、 36h 测定指纹图 谱， 计算共有峰相对保留时间、 相对峰面积及RSD值， 均小于3%， 表明样品36h内稳定性良 好。 0109 重复性试验取同一批次 6 份丹参药材， 精密称定， 按 “供试品溶液的制备” 方法制 备供试品溶液， 测定指纹图谱， 计算共有峰相对保留时间、 相对峰面积及 RSD 值。结果表明， 共有指纹峰相对保留时间、 相对峰面积 RSD 3%， 该测定方法重复性良好。 0110 （3） 丹参指纹图谱的建立 0111 丹参指纹图谱的检测分别取 10 个批次丹参药材， 精密称定， 按 “供试品溶液的制 备” 方法制备供试。

34、品溶液， 按试验色谱条件制备检测， 记录70min内色谱图， 通过比较各峰的 保留时间选择每一个图谱都产生的共有峰， 记录共有峰峰面积， 见表 9、 表 10、 图 5、 图 6。 0112 表 9 丹参低温提取液峰面积 0113 0114 表 10 丹参高温提取液峰面积 0115 说 明 书 CN 104013673 A 9 8/12 页 10 0116 指纹图谱相似度计算采用中国药典委员会出版的中药色谱指纹图谱相似度评价 软件 (2004A 版 ) 进行相似度计算， 见表 11。 0117 表 11 丹参提取液相似度计算结果 0118 0119 从提取液指纹图谱来看， 两者差异较大 ； 丹。

35、参高温提取液指纹图谱色谱峰数量较 多， 丹参低温提取液指纹图谱色谱峰数量较少， 表明丹参高温提取液所含化合物种类较低 温提取液多， 一些成分在低温提取时溶出减少。高温提取液与低温提取液有 6 个共有峰， 13min 左右色谱峰为丹参素钠， 21min 左右色谱峰为原儿茶醛， 56min 左右色谱峰为丹酚酸 B。 从共有峰峰面积来看， 两者也有差异 ； 低温提取液丹参素钠、 原儿茶醛峰面积远小于高温 提取液， 丹酚酸 B 色谱峰峰面积远大于高温提取液。以上试验， 丹参低温提取液丹酚酸 B 含 量高， 杂质和其他成分少， 提取液中丹酚酸 B 纯度较高。 0120 实施例 4 丹参提取物的参数测定 。

36、0121 取低温 （实施例1） 、 高温提取液于旋转蒸发仪70下浓缩至200mL， 浓缩液于-5 下冷藏 12 小时， 结成冰块， 于冷冻干燥器干燥 24h， 取出， 称重， 于干燥器内避光保存， 测定 丹酚酸 B 的含量， 低温提取物为 7.38%， 高温提取物为 5.62%， 低温提取物丹酚酸 B 含量显著 高于高温提取物。 0122 1 提取物物理参数的测定 0123 （1） 丹参提取物比表面积的测定 0124 取提取物粉末适量， 采用比表面积测定仪测定丹参高温与低温提取物的比表面 积， 运用 SPSS17.0 统计软件对试验数据进行独立样本 t 检验对比分析， 测定结果见表 12 01。

37、25 表 12 丹参高温提取物与低温提取物的比表面积测定 （单位 ： m2/g） 说 明 书 CN 104013673 A 10 9/12 页 11 0126 0127 与高温提取物比较， *P 0.05 0128 经统计分析， 两组数据方差齐， 双侧检验的 P 0.05， 不能认为两种丹参提取物的 比表面积相同， 因低温提取物的比表面积均值大于高温提取物， 故低温提取物的比表面积 显著大于高温提取物比表面积， 提示低温提取物的表面吸附能力可能比高温提取物强。 0129 （2） 丹参提取物孔隙率测定 0130 取提取物粉末适量， 采用比表面积测定仪测定丹参高温与低温提取物的比表面 积， 运用 。

38、SPSS17.0 统计软件对试验数据进行独立样本 t 检验对比分析， 测定结果见表 13。 0131 表 13 丹参高温提取物与低温提取物的孔隙率测定 （单位 ： cm2/g） 0132 0133 与高温提取物比较， *P 0.05 0134 经统计分析， 两组数据方差齐， 双侧检验的 P 0.05， 两者有显著统计学差异， 低 温提取物的孔隙率显著大于高温提取物孔隙率。 0135 （3） 丹参提取物的粒径测定 0136 采用粉体干法测定丹参提取物粒径， 测定结果见表 14、 图 7。 0137 表 14 丹参高温提取物与低温提取物的粒径测定 （单位 ： m） 0138 0139 结果显示， 。

39、低温提取物 d(0.1)、 d(0.9) 粒径小于高温提取物， 低温提取物 d(0.5) 粒径大于高温提取物， 丹参高温提取物粒径分布在 0.8 2000nm， 丹参低温提取物粒径分 布在 0.8 700nm， 低温提取物较高温提取物粒径分布更集中。 0140 （4） 丹参提取物休止角的测定 0141 采用固定漏斗法测定丹参提取物休止角， 将漏斗固定于水平放置的绘图纸的上方 一定距离， 小心地将制备好的提取物粉体倒入漏斗中， 在坐标纸上堆积成圆锥体， 测量圆锥 体的直径 2R 和高度 H， 根据 tan=H/R， 计算出休止角 ， 见表 15。 0142 表 15 丹参高温提取物与低温提取物的。

40、休止角测定 （单位 ： 度） 说 明 书 CN 104013673 A 11 10/12 页 12 0143 0144 运用 SPSS17.0 统计软件对以上数据进行独立样本 t 检验对比分析， 两主数据方 差齐， 双侧检验 P=0.067 0.05， 两者无显著统计学差异， 高温与低温提取物休止角小于 40， 流动性较好， 可满足生产需要， 低温提取物流动性好于高温提取物。 0145 （5） 丹参提取物堆密度和振实密度测定 0146 称取丹参提取物粉体 10g， 置于 25mL 量筒中， 轻轻刮平后读取体积 V0， 振动量筒至 粉体体积不在变化， 读取体积 Vf， 计算出堆密度， 振实密度，。

41、 结果见表 16。 0147 表 16 丹参高温提取物与低温提取物的堆密度和振实密度测定 （单位 ： g/mL） 0148 0149 与高温提取物比较， *P 0.05 0150 运用 SPSS17.0 统计软件对以上数据进行独立样本 t 检验对比分析， 方差齐， 双侧 检验堆密度与振实密度P值均为0.0000.05， 有显著统计学差异， 低温提取物堆密度与振 实密度显著小于高温提取物。 0151 （6） 丹参提取物吸湿百分率测定 0152 取洗净的称量瓶恒重称重， 取丹参提取物平铺 （厚度12mm） 于称量瓶中， 于60 干燥 6h， 取出， 放于盛有变色硅胶的干燥器中脱水 12h， 称重，。

42、 将称量瓶放于盛有过饱和氯 化钠溶液 （相对湿度为 75%） 的干燥器中， 密闭干燥器， 置于室温下， 分别于 0.5、 1、 2、 4、 8、 12、 24、 48、 72、 96、 120、 144、 168h 取出称重， 按吸湿率 （%） =（吸湿后提取物重量 - 吸湿前提 取物重量） / 吸湿前提取物重量 100% 公式， 计算吸湿百分率， 以吸湿百分率对时间作图， 得吸湿平衡曲线， 见图 8 ： 0153 数据显示， 0 120h 时， 随着时间延长， 丹参提取物吸湿百分率显著增大， 当时间 超过120h后， 随着时间延长， 吸湿百分率缓慢增大， 表明丹参提取物在120h达到吸湿平衡。

43、。 丹参提取物吸湿后颜色变深， 并液化。提取物平衡吸湿百分率均大于 15%， 说明丹参提取物 极具引湿性。低温提取物平衡吸湿百分率大于高温提取物平衡吸湿百分率， 低温提取物较 高温提取物更易吸湿， 可能是两种提取物所含成分的不同， 导致其吸湿性发生变化。 0154 实施例 5 丹参提取物指纹图谱研究 说 明 书 CN 104013673 A 12 11/12 页 13 0155 供试品溶液的制备精密称取相当于生药量0.15g的丹参提取物于25mL量瓶中， 甲 醇定容， 超声 30min 溶解， 滤过， 去续滤液， 即得丹参提取物供试品溶液。 0156 对照品溶液按 “提取液指纹图谱研究” 下对。

44、照品溶液的制备方法制备。 0157 （1） 指纹图谱的建立 0158 取供试品溶液与对照品溶液， 按提取液指纹图谱试验色谱条件制备检测， 记录 70min 内色谱图， 通过比较各峰的保留时间选择每一个图谱都产生的共有峰， 计算共有峰的 峰面积， 见表 17、 表 18、 图 9。 0159 表 17 丹参低温提取物峰面积 0160 0161 表 18 丹参高温提取物峰面积 0162 0163 （2） 指纹图谱相似度计算 0164 采用中国药典委员会出版的中药色谱指纹图谱相似度评价软件 (2004A 版 ) 进行 相似度计算， 见表 19。 0165 表 19 丹参提取物相似度计算结果 0166。

45、 说 明 书 CN 104013673 A 13 12/12 页 14 0167 由上可知， 丹参提取物指纹图谱差异较大。 高温提取物指纹图谱色谱峰较多， 低温 提取物色谱峰较少， 高温提取物所含成分种类较低温提取物多 ； 高温提取物丹参素与原儿 茶醛色谱峰峰面积大于低温提取物， 丹酚酸 B 峰面积小于低温提取物。表明， 丹参低温提取 物中丹酚酸 B 含量大于高温提取物， 杂质和其他成分含量较高温提取物少， 低温提取物丹 酚酸 B 纯度高于高温提取物。 0168 9 结论 0169 通过以上试验， 丹参低温沸腾动态提取， 丹酚酸 B 可最大限度溶出， 防止被高温分 解破坏， 杂质和其他成分溶出。

46、减少 ； 较高温提取， 低温提取丹酚酸B含量高， 纯度大。 由于提 取温度不同， 化合物种类与数量不同， 提取液物理参数和提取物粉体性质也有差异。 0170 本发明检测方法， 能够有效将丹参提取物中的多个成分有效分离， 峰形良好， 基线 平稳， 为丹参提取物的质量控制提供了可靠的基础。 说 明 书 CN 104013673 A 14 1/7 页 15 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 104013673 A 15 2/7 页 16 图 3 说 明 书 附 图 CN 104013673 A 16 3/7 页 17 图 4 说 明 书 附 图 CN 104013673 A 17 4/7 页 18 图 5 说 明 书 附 图 CN 104013673 A 18 5/7 页 19 图 6 说 明 书 附 图 CN 104013673 A 19 6/7 页 20 图 7 图 8 说 明 书 附 图 CN 104013673 A 20 7/7 页 21 图 9 说 明 书 附 图 CN 104013673 A 21 。