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1、(10)申请公布号 CN 102879518 A (43)申请公布日 2013.01.16 CN 102879518 A *CN102879518A* (21)申请号 201210431217.9 (22)申请日 2012.11.02 G01N 30/90(2006.01) G01N 30/88(2006.01) (71)申请人 广西万寿堂药业有限公司 地址 530219 广西壮族自治区南宁市大沙田 经济开发区荣光南路 1 号 (72)发明人 李修善 蒋冰清 农常东 凌中华 (74)专利代理机构 广西南宁公平专利事务所有 限责任公司 45104 代理人 杨立华 (54) 发明名称 降血压、 降。
2、血脂药物的质量检测方法 (57) 摘要 本发明公开了一种降血压、 降血脂药物的质 量检测方法， 该法对现有决明山绿茶有关中药制 剂质量检测进行了改进， 主要是增加了三七叶、 决 明子药材及决明子中大黄酚的薄层色谱鉴别， 以 及决明子中大黄酚的含量测定方法。本发明的质 量检测方法稳定佳、 重现性好、 专属性强且操作简 单， 据此建立决明山绿茶新的质量控制标准， 可帮 助有效控制决明山绿茶生产中的成品质量和提高 其质量水平， 保证生产工艺可控， 确保临床使用疗 效， 为产品疗效稳定确切提供了可靠保障。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局。
3、 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 4 页 1/2 页 2 1. 一种降血压、 降血脂药物的质量检测方法， 其特征在于包括以下步骤 ： 三七叶的薄层色谱鉴别 决明子药材及大黄酚的薄层色谱鉴别 药物中大黄酚的含量测定 所述降血压、 降血脂药物为决明山绿茶。 2. 根据权利要求 1 所述的降血压、 降血脂药物的质量检测方法， 其特征在于各步骤按 以下操作 ： 三七叶的薄层色谱鉴别 取决明山绿茶 4.5g， 研细， 置研钵中， 用 7 g/ml 硫酸溶液研磨提取 3 次， 每次 25-30ml， 滤过， 合并硫酸提取液， 置沸水浴中加热回流 1-1.5 小时， 放冷， 用石油醚 30。
4、 60提取 3 次， 每次 30ml， 合并石油醚提取液， 水浴蒸干， 残渣用氯仿 0.5ml 溶解， 作为供试 品溶液 ； 另取三七叶药材 2.4g， 同法制成对照药材溶液 ； 再取人参二醇对照品， 加无水乙醇 制成每 1ml 含 0.5m g 的溶液， 作为对照品溶液 ； 照中国药典 2010 年版一部附录 VIB 薄层色 谱法试验， 吸取上述三种溶液各5-10l， 分别点于同一硅胶G薄层板上， 以体积比5-8 ： 2-6 的苯丙酮混合溶液为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 10 g/ml 硫酸乙醇溶液， 105加热 至斑点显色清晰 ； 决明子药材及大黄酚的薄层色谱鉴别 取决明子药材。
5、2.4g， 用7g/ml硫酸溶液研磨提取3次， 每次25-30ml， 滤过， 合并硫酸 提取液， 置沸水浴中加热回流 1-1.5 小时， 放冷 ； 用石油醚 30 60提取 3 次， 每次 30ml， 合并石油醚提取液， 水浴蒸干， 残渣用氯仿 0.5ml 溶解， 作为对照药材溶液 ； 另取大黄酚对 照品， 加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液， 作为对照品溶液 ； 照中国药典2010年版一部附录 VIB 薄层色谱法试验， 吸取鉴别步骤 中供试品溶液及上述二种溶液各 5-10l， 分别点 于同一硅胶 G 薄层板上， 以体积比 10-12 ： 0.5-1 ： 0.1-0.5 的苯醋酸乙酯甲酸混合。
6、溶液 为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 置紫外光灯 365nm 下检视 ； 药物中大黄酚的含量测定 照 中国药典 2010 年版一部附录 VIB 的高效液相色谱测定方法试验 ： 3.1 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷化键合硅胶为填充剂 ； 体积比 75 ： 25 的甲醇 0.1% 磷酸水溶液为流动相 ； 检测波长为 254nm， 理论板数按大黄酚峰计算不低于 2500 ； 3.2 对照品溶液的制备取大黄酚对照品适量， 精密称定， 加甲醇制成每 1ml 含 33g 的 溶液， 即得 ； 3.3 供试品溶液的制备取决明山绿茶装量差异项下的内容物， 研细， 混匀， 取粉末约 1.5g， 精。
7、密称定， 置锥形瓶中， 精密加入甲醇 20-40ml， 密塞， 称定重量， 水浴加热回流 1-1.5 小时， 放冷， 称定重量， 用甲醇补足减失的重量， 摇匀， 过滤， 精密量取续滤液 10ml， 水浴蒸 干， 残渣加水 20-30ml、 盐酸 2-3ml、 氯仿 20-40ml， 水浴加热回流 0.5-1 小时， 放冷， 分取氯 仿层， 水层用氯仿振摇提取 3 次， 每次 15-20ml， 合并氯仿液， 蒸干， 残渣用甲醇适量使溶解， 转移至 10ml 量瓶中， 加甲醇至刻度， 摇匀， 滤过， 取滤液作为供试品溶液， 即得， 测定前用 0.45m 的有机微孔滤膜过滤 ； 3.4 测定法分别精。
8、密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 测定， 权 利 要 求 书 CN 102879518 A 2 2/2 页 3 即得 ； 其中， %g/ml 表示每 100ml 溶液中含有溶质若干克。 3. 根据权利要求 2 所述的降血压、 降血脂药物的质量检测方法， 其特征在于 ： 步骤 供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上， 显相同颜色主斑点 ； 在与对 照品色谱相应的位置上， 显相同颜色斑点 ； 步骤 供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上， 显相同的橙黄色荧光斑点， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同的一个橙黄色荧光斑点 ； 置氨蒸气中熏后， 日光下检 视， 。
9、斑点变为红色 ； 步骤 高效液相色谱中， 测得每袋决明山绿茶含决明子以大黄酚计， 不得少于 0.3mg。 4. 根据权利要求 3 所述的降血压、 降血脂药物的质量检测方法， 其特征在于所述决明 山绿茶按以下步骤制备 ： 山绿茶 1600 克、 三七叶 1600 克、 决明子 1600 克、 白芍 1600 克、 陈 皮 160 克， 将山绿茶粉碎成粗粉， 其余四味加水煎煮三次 ； 第一次加水 10 倍重量， 煎煮 1 小 时， 第二次加水 8 倍重量， 煎煮 1 小时， 第三次加水 8 倍重量， 煎煮 1 小时 ； 合并煎液， 滤过， 滤液浓缩至 60相对密度为 1.20 1.30 的清膏， 。
10、加入山绿茶粗粉， 混匀， 制成颗粒， 干燥， 制成 1000 袋， 即得。 权 利 要 求 书 CN 102879518 A 3 1/4 页 4 降血压、 降血脂药物的质量检测方法 技术领域 0001 本发明属于药物质量检测领域， 尤其是一种降血压、 降血脂药物的质量检测方法。 背景技术 0002 决明山绿茶系一种降血压、 降血脂药物， 是由山绿茶、 三七叶、 决明子、 白芍、 陈皮 等药味制成的袋泡茶剂， 具有清热平肝、 化瘀活血功效， 用于高血压、 高血脂症和肝阳上亢 引起的眩晕等症的辅助治疗。国家药品监督管理局标准 （试行） WS-5809(B-0809)-2002 中 只有山绿茶和白芍。
11、两味药材的薄层鉴别， 没有涉及含量控制方法， 难以有效控制生产中的 成品质量， 不同批次产品的质量没有规范的指标来进行衡量， 无法确保产品疗效， 对临床治 疗影响巨大。 发明内容 0003 本发明要解决的技术问题是提供一种稳定佳、 重现性好、 专属性强且操作简单的 降血压、 降血脂药物的质量检测方法， 帮助有效控制决明山绿茶生产中的成品质量和提高 其质量水平， 确保临床使用疗效。 0004 为解决上述技术问题， 本发明采用如下技术方案 ： 降血压、 降血脂药物的质量检测 方法， 包括以下步骤 ： 0005 三七叶的薄层色谱鉴别 0006 决明子药材及大黄酚的薄层色谱鉴别 0007 药物中大黄酚。
12、的含量测定 0008 上述降血压、 降血脂药物为决明山绿茶。 0009 上述的降血压、 降血脂药物的质量检测方法， 各步骤按以下操作 ： 0010 三七叶的薄层色谱鉴别 0011 取决明山绿茶 4.5g， 研细， 置研钵中， 用 7（g/ml） 硫酸溶液研磨提取 3 次， 每次 25-30ml， 滤过， 合并硫酸提取液， 置沸水浴中加热回流 1-1.5 小时， 放冷， 用石油醚 （30 60） 提取 3 次， 每次 30ml， 合并石油醚提取液， 水浴蒸干， 残渣用氯仿 0.5ml 溶解， 作为供 试品溶液 ； 另取三七叶药材 2.4g， 同法制成对照药材溶液 ； 再取人参二醇对照品， 加无水。
13、乙 醇制成每 1ml 含 0.5m g 的溶液， 作为对照品溶液 ； 照薄层色谱法 （中国药典 2010 年版一部 附录 VIB） 试验， 吸取上述三种溶液各 5-10l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以苯丙酮 混合溶液 （体积比 5-8 ： 2-6） 为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 10（g/ml） 硫酸乙醇溶液， 105加热至斑点显色清晰 ； 0012 决明子药材及大黄酚的薄层色谱鉴别 0013 取决明子药材 2.4g， 用 7（g/ml） 硫酸溶液研磨提取 3 次， 每次 25-30ml， 滤过， 合并硫酸提取液， 置沸水浴中加热回流 1-1.5 小时， 放冷 ； 用石油。
14、醚 （30 60） 提取 3 次， 每次 30ml， 合并石油醚提取液， 水浴蒸干， 残渣用氯仿 0.5ml 溶解， 作为对照药材溶液 ； 另 取大黄酚对照品， 加甲醇制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液， 作为对照品溶液 ； 照薄层色谱法 （中 说 明 书 CN 102879518 A 4 2/4 页 5 国药典 2010 年版一部附录 VIB） 试验， 吸取鉴别步骤 中供试品溶液及上述二种溶液各 5-10l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以苯醋酸乙酯甲酸混合溶液 （体积比 10-12 ： 0.5-1 ： 0.1-0.5） 为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 置紫外光灯 （365nm。
15、） 下检视 ； 0014 药物中大黄酚的含量测定 0015 照 中国药典 2010 年版一部附录 VIB 的高效液相色谱测定方法试验 ： 0016 3.1 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷化键合硅胶为填充剂 ； 甲醇 0.1%磷酸水溶液 （体积比75 ： 25） 为流动相 ； 检测波长为254nm， 理论板数按大黄酚峰计算不 低于 2500 ； 0017 3.2 对照品溶液的制备取大黄酚对照品适量， 精密称定， 加甲醇制成每 1ml 含 33g 的溶液， 即得 ； 0018 3.3 供试品溶液的制备 取决明山绿茶装量差异项下的内容物， 研细， 混匀， 取粉 末约 1.5g， 精密称定， 。
16、置锥形瓶中， 精密加入甲醇 20-40ml， 密塞， 称定重量， 水浴加热回流 1-1.5 小时， 放冷， 称定重量， 用甲醇补足减失的重量， 摇匀， 过滤， 精密量取续滤液 10ml， 水 浴蒸干， 残渣加水20-30ml、 盐酸2-3ml、 氯仿20-40ml， 水浴加热回流0.5-1小时， 放冷， 分取 氯仿层， 水层用氯仿振摇提取 3 次， 每次 15-20ml， 合并氯仿液， 蒸干， 残渣用甲醇适量使溶 解， 转移至 10ml 量瓶中， 加甲醇至刻度， 摇匀， 滤过， 取滤液作为供试品溶液， 即得， 测定前 用 0.45m 的有机微孔滤膜过滤 ； 0019 3.4 测定法 分别精密吸。
17、取对照品溶液与供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 测定， 即得 ； 0020 其中， %（g/ml） 表示每 100ml 溶液中含有溶质若干克。 0021 上述的降血压、 降血脂药物的质量检测方法， 步骤 供试品色谱中， 在与对照药 材色谱相应的位置上， 显相同颜色主斑点 ； 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色斑 点 ； 步骤 供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上， 显相同的橙黄色荧光斑点， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同的一个橙黄色荧光斑点 ； 置氨蒸气中熏后， 日光下 检视， 斑点变为红色 ； 步骤 高效液相色谱中， 测得每袋决明山绿茶含决明子以大黄酚 （C15H。
18、10O4） 计， 不得少于 0.3mg。 0022 上述决明山绿茶按以下步骤制备 ： 山绿茶 1600 克、 三七叶 1600 克、 决明子 1600 克、 白芍 1600 克、 陈皮 160 克， 将山绿茶粉碎成粗粉， 其余四味加水煎煮三次 ； 第一次加水 10 倍重量， 煎煮 1 小时， 第二次加水 8 倍重量， 煎煮 1 小时， 第三次加水 8 倍重量， 煎煮 1 小 时 ； 合并煎液， 滤过， 滤液浓缩至相对密度为 1.20 1.30（60） 的清膏， 加入山绿茶粗粉， 混匀， 制成颗粒， 干燥， 制成 1000 袋， 即得。 0023 针对现有决明山绿茶有关中药制剂质量检测方法存在的。
19、问题， 发明人进行了改 进， 主要是增加了三七叶、 决明子药材及决明子中大黄酚的薄层色谱鉴别， 以及决明子中大 黄酚的含量测定方法。本发明的质量检测方法稳定佳、 重现性好、 专属性强且操作简单， 据 此建立决明山绿茶新的质量控制标准， 可帮助有效控制决明山绿茶生产中的成品质量和提 高其质量水平， 保证生产工艺可控， 确保临床使用疗效， 为产品疗效稳定确切提供了可靠保 障。 具体实施方式 说 明 书 CN 102879518 A 5 3/4 页 6 0024 以下结合实施例进一步说明本发明。 0025 实施例 1 决明山绿茶的制备 0026 山绿茶 1600 克、 三七叶 1600 克、 决明子。
20、 1600 克、 白芍 1600 克、 陈皮 160 克， 将山 绿茶粉碎成粗粉， 其余四味加水煎煮三次 ； 第一次加水 10 倍重量， 煎煮 1 小时， 第二次加水 8 倍重量， 煎煮 1 小时， 第三次加水 8 倍重量， 煎煮 1 小时 ； 合并煎液， 滤过， 滤液浓缩至相对 密度为 1.25（60） 的清膏， 加入山绿茶粗粉， 混匀， 制成颗粒， 干燥， 制成 1000 袋， 即得。 0027 性状 ： 本品为棕褐色的颗粒状袋装茶剂 ； 气微香 , 味微苦、 微甘。 0028 实施例 2 应用本发明检测决明山绿茶质量 0029 按以下操作 ： 0030 三七叶的薄层色谱鉴别 0031 取。
21、决明山绿茶 4.5g， 研细， 置研钵中， 用 7（g/ml） 硫酸溶液研磨提取 3 次， 每次 25ml， 滤过， 合并硫酸提取液， 置沸水浴中加热回流1小时， 放冷， 用石油醚 （3060） 提取 3次， 每次30ml， 合并石油醚提取液， 水浴蒸干， 残渣用氯仿0.5ml溶解， 作为供试品溶液 ； 另 取三七叶药材 2.4g， 同法制成对照药材溶液 ； 再取人参二醇对照品， 加无水乙醇制成每 1ml 含 0.5m g 的溶液， 作为对照品溶液 ； 照薄层色谱法 （中国药典 2010 年版一部附录 VIB） 试 验， 吸取上述三种溶液各 10l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以苯丙酮。
22、混合溶液 （体积 比 5 ： 2） 为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 10（g/ml） 硫酸乙醇溶液， 105加热至斑点显 色清晰。 0032 结果 ： 供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上， 显相同颜色主斑点 ； 在与 对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色斑点。 0033 决明子药材及大黄酚的薄层色谱鉴别 0034 取决明子药材 2.4g， 用 7（g/ml） 硫酸溶液研磨提取 3 次， 每次 25ml， 滤过， 合并 硫酸提取液， 置沸水浴中加热回流1小时， 放冷 ； 用石油醚 （3060） 提取3次， 每次30ml， 合并石油醚提取液， 水浴蒸干， 残渣用氯仿 0.5ml。
23、 溶解， 作为对照药材溶液 ； 另取大黄酚对 照品， 加甲醇制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液， 作为对照品溶液 ； 照薄层色谱法 （中国药典 2010 年版一部附录 VIB） 试验， 吸取鉴别步骤 中供试品溶液及上述二种溶液各 5l， 分别点 于同一硅胶 G 薄层板上， 以苯醋酸乙酯甲酸混合溶液 （体积比 10 ： 0.5 ： 0.1） 为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 置紫外光灯 （365nm） 下检视。 0035 结果 ： 供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上， 显相同的橙黄色荧光斑 点， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同的一个橙黄色荧光斑点 ； 置氨蒸气中熏后， 日光。
24、 下检视， 斑点变为红色。 0036 药物中大黄酚的含量测定 0037 照 中国药典 2010 年版一部附录 VIB 的高效液相色谱测定方法试验 ： 0038 3.1 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷化键合硅胶为填充剂 ； 甲醇 0.1%磷酸水溶液 （体积比75 ： 25） 为流动相 ； 检测波长为254nm， 理论板数按大黄酚峰计算不 低于 2500 ； 0039 3.2 对照品溶液的制备 取大黄酚对照品适量， 精密称定， 加甲醇制成每 1ml 含 33g 的溶液， 即得 ； 0040 3.3 供试品溶液的制备 取决明山绿茶装量差异项下的内容物， 研细， 混匀， 取粉末 说 明 书 。
25、CN 102879518 A 6 4/4 页 7 约1.5g， 精密称定， 置锥形瓶中， 精密加入甲醇20ml， 密塞， 称定重量， 水浴加热回流1小时， 放冷， 称定重量， 用甲醇补足减失的重量， 摇匀， 过滤， 精密量取续滤液 10ml， 水浴蒸干， 残渣 加水 20ml、 盐酸 2ml、 氯仿 20ml， 水浴加热回流 1 小时， 放冷， 分取氯仿层， 水层用氯仿振摇 提取 3 次， 每次 20ml， 合并氯仿液， 蒸干， 残渣用甲醇适量使溶解， 转移至 10ml 量瓶中， 加甲 醇至刻度， 摇匀， 滤过， 取滤液作为供试品溶液， 即得， 测定前用 0.45m 的有机微孔滤膜过 滤 ； 0041 3.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 测定， 即得。 0042 结果 ： 测得每袋决明山绿茶含决明子以大黄酚 （C15H10O4） 计为 0.42mg。 说 明 书 CN 102879518 A 7 。