CN200310113797.8
2003.11.26
CN1621523A
2005.06.01
撤回
无权
发明专利申请公布后的视为撤回|||实质审查的生效|||公开
C12N15/11; C12N15/29; C07K14/415; C07H21/04; C12P19/34
中国农业科学院生物技术研究所;
郭三堆; 任茂智; 张锐
100081北京市海淀区中关村南大街12号
本发明提供了一种棉花基因组中的ARF1基因及其启动子序列。该基因及其启动子可在棉花的花蕾、花、纤维及其棉铃铃壳中优势表达。该基因及其启动子可用于棉花生殖器官的发育、品质改良以及外源基因在棉花生殖器官中的特异表达研究。
棉花腺苷酸核糖基化作用因子1基因及其启动子 技术领域 本发明涉及一种棉花基因组中的ADP-ribosylation factor 1(arf1)基因及其启动子序列。该基因及其启动子可在棉花的花蕾、花、纤维及其棉铃铃壳中优势表达。该基因及其启动子可用于棉花生殖器官的发育、品质改良以及外源基因在棉花生殖器官中的特异表达研究。 背景技术 棉纤维是已知纤维素纯度最高的天然资源之一。它成本低廉，产出量大，且具有吸湿、通气、保暖性好，不带静电，手感柔软等人造纤维难以比拟的优点。由于世界纺织工业加工速度的加快和人民生活水平的提高，对棉纤维品质的要求愈来愈高。因此，弄清纤维细胞的表达模式以及可能的生物学功能，系统阐明棉纤维细胞发育调控的分子机理，对充分利用棉花自身基因资源、提高棉花产量、改良纤维品质乃至发展人工棉纤维都具有重要意义(贾士荣，郭三堆，2002，转基因棉花，p265-270)。 虽然棉纤维形成和发育的过程已经基本清楚，但对纤维发育的分子机理还知之甚少。分离鉴定与棉纤维细胞分化、伸长和次生壁沉淀等过程相关的基因，了解它们在纤维发育不同阶段的功能及其与纤维品质的关系，可以为利用基因工程方法定向改良纤维品质提供依据。 涉及到棉纤维的分化、发育过程中的基因有几千种(贾士荣，郭三堆，2002，转基因棉花，p265-270)。虽然目前已经克隆到几十个棉纤维发育相关基因，且多数是在纤维伸长阶段的纤维细胞中特异表达(JhonM E，1992，Proc Natl Acad Sci USA，89：5769-5773；Jhon M E，1995，Plant Physiol 107：1478-1486；Jhon M E，1996，Plant Molecular Biology 30：297-306；1999，New York：Food Products Press，271-292)。但绝大部分基因在棉纤维发育中的确切功能还不清楚或有待确定，因此，还不能有效地应用于纤维品质的遗传改良，棉纤维的转基因改良已有一些成功实例，但由于目标基因缺乏，利用分子生物学方法改良棉纤维的潜力还远没有发挥(贾士荣，郭三堆，2002，转基因棉花，p265-270)。 小G蛋白是一类重要的信号转导蛋白，在真核生物基因的表达调控中起到重要作用(Terryn N.，MontaguM.V.，1993，The plant Cell，.5：1761-1769.)。至于在棉纤维发育过程中的作用，Delmer等人从棉花cDNA文库中筛选出2个与哺乳动物rac基因高度同源的克隆Rac13和Rac9，其中Rac13在棉纤维发育过程中优势表达，且于纤维伸长向次生壁增厚的转换期表达量达到最大。Rac13编码的蛋白可参与调控细胞骨架形成的信号转导(Delmer D P，Pear J R，1995，Mol Gen Genet，48：43-51)。 ADP-ribosylation factor 1(arf1)是属于Ras小G蛋白超级家族中的ARF亚族，在真核生物中普遍存在并高度保守。人类和植物的arf1基因均可互补于酵母arf1突变株。ARF1是高尔基体/内质网运输小泡的重要组成部分和调控因子，在物质运输系统中起到重要的调控作用(Lee M H，Min M K，2002，Plant Physiology，129(4)：1507-1520)。ARF1在胞内细胞膜运输中起重要作用，尤其是芽生小泡的关键调控因子。在酵母中对arf1基因进行突变研究，结果出现了对低温敏感、生长缓慢、对氟敏感、多种分泌突变等表型(Yahara N，Ueda T，2001，Molecular Biology of the Cell，12，221-238)。在拟南芥细胞中的研究表明：arf1在内织网和高尔基之间的小泡运输起重要作用，并且对维持高尔基体的正常形态结构至关重要(Takeuchi M，Ueda T，2002，The Plant Journal 31(4)：499-515)。另外，Arf1在质膜和细胞质之间生长素的极性运输中起到重要作用。目前尚未见到arf1基因参与棉纤维发育、形成的报道。 有人通过RNA斑点杂交证明：在棉花中，ARF1主要在花器官的各种组织中高效表达，而在根、茎、叶等生殖器官中不表达。(候磊等，2002，遗传学报，29(4)：359-363)。这说明在棉花中ARF1的顺式调控元件具有生殖器官组织特异性。 但到目前为止，国内外尚未见到对arf1基因及其启动子在棉纤维及棉花生殖器官中的研究报道。 发明内容 本发明的一个目的是提供一种与棉纤维发育有关的基因：arf1基因。它全长为3609bp(如序列表SEQ ID：2所示)，具有7个外显子和6个内含子(如图3所示)。其含有一个1125bp的ORF结构(如序列表SEQ ID：3所示)。Northern blot结果证明，它在棉纤维及棉花生殖器官中呈优势表达，在国内外尚未见到有类似报道。 本发明的另一个目的是提供一种新的棉纤维发育有关的启动子(如序列表SEQ ID：1所示)，该启动子DNA序列上具有Initiator、TATA box、CCAA box和GC box等明显启动子特征序列(如图3所示)。Northernblot结果证明，该启动子驱动的arf1基因在棉纤维及棉花生殖器官中优势表达(如图4所示)。在国内外尚未见到有类似报道。 本发明的再一个目的是提供一种新的棉纤维及棉花生殖器官优势表达的蛋白质(如序列表SEQ ID：4所示)。Arf1蛋白，它具有181个氨基酸(如序列表SEQ ID：4所示)。 本发明再一个目的是提供一种我们自己独创的同尾酶反向PCR(isocaudarner inverse PCR，II-PCR)技术，在棉花基因组上连续步移，获得了棉花arf1上游1865bp的DNA序列(如图2所示)。再用我们自己独创的快速分离目的基因cDNA-5”未知序列和启动子(rapid isolation of cDNA 5’unknown sequence and promoter，RICUP)的技术，获得了arf1的全长cDNA序列和启动子(如图3所示)。 下面结合附图对本发明做进一步说明 图1为从棉花基因组中用PCR扩增的arf1基因的4924bp DNA序列的琼脂糖凝胶电泳图。 图2为用反向PCR和同尾酶反向PCR进行染色体步移扩增到棉花arf1基因上游1865bp DNA序列的琼脂糖凝胶电泳图及II-PCR流程示意图。 图3为棉花arf1基因全长cDNA的步移和启动子定位过程琼脂糖凝胶电泳图及RICUP流程示意图。 图4为用Northern blot确定启动子在棉花生殖器官中高效表达。1、2、3、4、5、6、7分别代表棉花根、茎、叶、蕾、花、铃壳和纤维中提取的总RNA电泳泳道 实施例1 棉花arf1基因上游1865bp DNA序列的分离克隆 1 DNA和RNA模板的制备：用改良的CTAB法提取陆地棉品种Y18基因组DNA，要求DNA片段大于50Kb，OD260/OD280大于1.8。采用改良的热硼酸法提取陆地棉品种Y18 7-10dpa纤维总RNA，用于cDNA序列扩增和未知cDNA序列步移。 2用RT-PCR获取棉花ARF1基因EST序列的3’端全长和相应的DNA序列：RT-PCR按照TaKaRa RNA PCR引物表染色体步移正向引物DFP1：AGGGTCCTATGGTTTTTGTTCCTTDFP2：GTTTGCCTTTCATTTCTTTCTCTATT反向引物DIP1：CTATACTATAACAACGACTACATDIP2：GACACTTTTTCTGCTTCCACTAACarf1 cDNA步移正向引物ACF1：GTTTGCCTTTCATTTCTTTCTCTATTACF2：TCTGAAATCACTCACCCCCGCCTCCACF3：AGTGTTTGCCCCAACATATGTTAACF4：AAGTCACTAAAGCTGGTGACAGAACF5：CGTACTTACTTTGACCATAA反向引物ACR1：ATACTAGTGGACTTGAGATTAAGGOligo(dT18)：TTTTTTTTTTTTTTTTTT启动子片段缺失用PCR引物正向引物APF1：GGAAGCTTGCAGAGTGTTTTAGTGGGTTTTATAPF2：GGAAGCTTAGTTGGGCCCTGCTTCGTGAAPF3：GGGAAGCTTGATTTGCAGTTTTAGTTTTTGTG反向引物APR1：CCCCCGGGTTTTTATCTTCGCTGACACCAAPR2：CCCTCTAGACGTTGCGATGCCCTTTGATTAGNorthern blot探针用PCR引物正向引物NPF1：ACTCACCCCCGCCTCCAG反向引物NPR1：AAAGCCAGTCCAGTCCCTCATACASouthern blot探针用PCR引物正向引物SPF1：TTCCTTGCTTTGATTTGTGTATGG反向引物SPR1：GTGGCATTAGGAAATGTAACPCR Kit(AMV)Ver.2.1说明书操做。根据棉花ARF1基因EST序列(GenBank Accession Number BF272643)设计引物ACF1与Oligo(dT18)组成引物对(见PCR引物表)，从棉花7-10dpa纤维总RNA扩出859bp和1295bp两条特异条带，经测序分析发现，859bp条带地5’端730bp序列与EST序列完全相同，故此条带看作是ARF1基因cDNA3’端全长序列(图2A)；并可以将polyA前的核甘酸序列看作arf1基因的转录终止位点。以polyA前23个核甘酸的反义链(ACR1)为下游引物(见PCR引物表)，仍以ACF1为上游引物，从棉花基因组中扩增出4124bp特异条带(图1A)。序列分析表明：该序列为ARF1基因842bp cDNA序列所对应的基因组DNA序列。 3用反向PCR和同尾酶反向PCR获取arf1基因上游1865bp的DNA序列：第一次反向PCR步移选用BsrGI、Csp6I、MfeI、SalI、EcoRI等酶消化棉花基因组DNA，环化后以DIP1和DFP1(见PCR引物表)为引物进行反向PCR步移，结果仅从Csp6I和MfeI处理的DNA环化产物中分别扩增716bp和385bp的带(图2A)，选取前者克隆测序，减去474bp的重叠部分，使序列向5’端步移242bp。第二次反向PCR采用BglII、XbaI、HpaI充分消化基因组DNA，酶解产物环化后进行反向PCR，结果均未有特异带扩增。于是采用II-PCR，首先选用Bgl II充分消化基因组DNA，再利用Bgl II六碱基同尾酶BamH I和Bcl I分别消化Bgl II处理过的基因组DNA，产物环化后进行反向PCR，分别扩增出497bp和1879bp的条带(图2B)。选取较大者克隆测序，减去交叠的256bp序列，再次将序列向前推进1623bp。加上第一次反向PCR步移的242bp，共向前推进了1865bp的DNA序列(图2C)。 实施例2 棉花ARF1基因启动子的分离 1 arf1基因上游1865bp的DNA序列中外显子的捕获和cDNA步移引物的设计在NCBI/GenBank的nr、EST和蛋白数据库中对该序列进行Blast搜索，结果未发现有与该序列同源的序列。于是利用DNAStar软件将DNA全序列译成三种可能氨基酸序列，对比分析后，将所有大于40个氨基酸的序列作为外显子可能的位置。在各可能外显子处设计用于ARF1基因5’端cDNA步移引物：ACF2、ACF3、ACF4、ACF5和ACR2(见PCR引物表)。 2棉花ARF1全长cDNA序列的获取和替换剪接现象的发现在用ACF1与Oligo(dT18)组成引物对进行arf1 3’RACE时，从棉花7-10dpa纤维总RNA中扩增到859bp和1295bp两条特异条带。经进一步分析发现，859bp条带与部分1295bp条带完全重叠，后者在5’端比前者多436bp的插入序列。与4124bp基因组DNA对比后发现，436bp恰为第一个内含子。当其被剪掉时形成859bp的cDNA，若保留则形成1295bp的cDNA(图2A)。arf1cDNA5’端第一次步移是将ACF2、ACF3和ACF4分别与ACR1组成引物对，从棉花7-10dpa纤维总RNA进行RT-PCR扩增，仅从ACF2和ACR1引物对扩出873bp、949bp和1385bp三条cDNA条带(图2B)。测序表明，第一个内含子又向5’端延伸76bp，形成512bp的内含子。若其被完全剪掉，则形成873bp的cDNA；若仅保留其5’端76bp，则形成949bp的cDNA；若完全保留，则形成1385bp的cDNA。由于ACF3和ACF4两条引物组合均未有扩增，估计它们可能被设计在内含子中或转录起始位点之前。对ACF2上游序列分析发现，1629bp处有一个典型的启动子特征结构：Initiator(图4所示)。故进行第二次步移，以确定其是否为Initiator，即cDNA5’末端。于此处设计一条上游引物ACF5，以ACR1为下游引物，从棉纤维总RNA中扩增出1008bp、1084bp和1520bp三条cDNA条带(图2C)。测序发现，这三条cDNA条带均是在前次步移所获片断的基础上分别向5’端推进135bp。从而证明1629bp处确为Initiator，同时说明已获该基因cDNA5’端全长序列。将全长cDNA序列和DNA进行同源比较发现，ARF1含有6个内含子和7个外显子(图5)，其中第一个内含子位于5’端非翻译区。由于第一个内含子存在替换剪接现象，从而形成三种不同的cDNA。进一步分析发现，三种cDNA都有一个546bp含有Kozak序列的完整ORF结构(图4)，编码182个氨基酸，。利用GenBank的blastp软件进行蛋白序列查询，发现其与多种生物ARF1蛋白具有98％以上同源性。 3 ARF1基因转录起始位点的确定和启动子位置的定位通过对Initiator上游序列的分析发现：在-61bp处具有典型的TATA box结构，在-98bp和-102bp处具有两个典型CCAAT box，在-374bp处具有典型的GCbox。对Initiator下游序列的分析发现：起始密码子ATG位于+752bp处，在起始密码子ATG和Initiator之间具有大量富含AT序列和回文结构。根据以上信息可将arf1的转录起始位点定位在Initiator结构中的保守的A处。并可将ARF1基因的启动子定位在-1628bp-+751bp之间的位置。由于在启动子的下游区域存在替换剪接现象，这表明该启动子具有复杂的表达调控机制。至于决定启动子表达强度和表达特异性的元件，还需要进一步做区段缺失的功能鉴定。 实施例3 棉花ARF1基因启动子表达特性分析 Northern blot：分别从棉花根、茎、叶、蕾、花、纤维和铃壳中提取总RNA，各取总RNA 15μg，用1.5％的甲酰胺-甲醛琼脂糖凝胶对RNA进行电泳分级分离，然后按照试剂盒说明书进行转膜、Northern杂交，杂交探针为地高辛标记的arf1 cDNA特异片段。结果表明arf1在棉花的根、茎、叶中表达量很弱，而在蕾、花、纤维和铃壳中呈显著优势表达，其中蕾和花中表达量最高(图4)。 实施例4 棉花ARF1基因启动子功能结构域的分析确定 将棉花ARF1基因的启动子序列构建了350bp、896bp、1913bp和2370bp四种启动子缺失片段，各自的引物对分别是APF1/APR1、APF2/APR1、APF3/APR1和APF3/APR2(见PCR引物表)。其中2370bp片段是位于起始密码子上游的启动子全长序列，350bp、896bp、1913bp三种启动子缺失片段是位于第一个内含子之前的序列。将这四种启动子片段与pBI121植物表达载体上的gus基因融合，然后用花粉管通道技术将其导入到棉花品种Y18中。用gus染色法对阳性植株的根、茎、叶、蕾、花、纤维和玲壳进行染色，结果表明2370bp的启动子区段在棉花的蕾、花、纤维和玲壳中的表达效果最好。 棉花arf1基因及其启动子.ST25 SEQUENCE LISTING <110>中国农业科学院生物技术研究所 <120>棉花arf1基因及其启动子 <130>棉花arf1基因及其启动子 <160>4 <170>PatentIn version 3.1 <210>1 <211>2380 <212>DNA <213>陆地棉Y18 <400>1 tgatcacggt tccttttctt ccttctcagc aaaagcctat ggctaacatc aaaatgacca 60 ttgatgaatg cagggcaaca gcgaaccagg ttttttattt tgtagggctg caaaatacta 120 ctgcaacgat tgcatgtgca ttgaacaatg tactgccagc agccacattt ctcctcgcag 180 ccatttgcag gtcccaatgt catattttgg tacttaaatt ctacaaaaaa aaatttgggt 240 ttcatctgat aaattgtcga atttgatgtt caatatatag acaagaagct gtggggataa 300 agaaagcatc agggcaggct aaggtaatag gtactttggt atgtgttggt ggagctatgt 360 tgctgtcatt ttaccatgga cacatcatcg gcataggtga atccagcatt cactggaact 420 atgccaataa aatggcaaat tcaagtccca gccctagtgg ttcaaacttc ttcctgggtc 480 ctttccttgt aatggccagt gctgttgctt gggcactatg gttcataatc cagggacaaa 540 caagcaagag cttcccagct ccttacacaa gcactactct aatgtgcttc atggcgagca 600 ttgagtgtac aataatcggc atattttcag accccaagcc atctgcttgg tcattgagct 660 ccagcatgag gcttattgca gctctttatg cggtaagcat aacatatatc tatatcgata 720 tcgatatcga tatcgatatc gatatcgata tctatatata ttatattatc agtttcgtaa 780 tggtttatgt atgatgtatc tttcagggaa ttatatgtaa tgcagtagca ttctgcgtaa 840 tgtcatggtg catccagaaa agaggtcctc tctatgtctc agtgttcagc cctttgctgc 900 ttgtcattgt ggctattcta agttgggccc tgcttcgtga gaagctatat gtgggaacgt 960 acgttcgtac acacattatg ctaaccccta tcaccaaaag ttaaaactcc ttattattaa 1020 ttaattattt attgggtatt gattaaattg caatgatggg acagtgttgt agggtcactg 1080 ctgatagttg gtggactgta tgctgtcctg tggggaaaag ataaagagat gaaacagatg 1140 aaaggcaatg aaaaaggagg aggaggagga gagcaagtag tagtagaaga aggggcagtg 1200 棉花arf1基因及其启动子.ST25 gaagtcacta aagctggtga cagagatcat gacttggaga tgcagtcgca gcaaggcggc 1260 ggcgcccgtg gttaactagg gcgtacggaa tccaaaaaaa ggaatgttaa catatatgta 1320 tgaatgtaga acgctgctgt gacaccccag cagagtgttt tagtgggttt tattttgttc 1380 ttggatccag ctgttaaaga gtttttagta tgtttagcta ttattaataa taatctttct 1440 ttcctcatta caaaacaagg caaagctacc tccaaatttg atgttcctta aaccatattt 1500 taaatgattg tactttcaat ttggtcatat ccaatgtgat tatatattaa accatcttaa 1560 aataacttat ataaataccc aaagtgtttg ccccaacata tgttaaaaaa atattagcat 1620 ccgtacttac tttgaccata attgattaat ttaaagaata aaaaaatctg tgaaaaagac 1680 gaaggtgatt gggatttcca 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gagattgtca ctaccattcc caccattggt atgccccatt ctttattaga tttttccttt 180 tttttataca tcttaatgat ttgatcctta atagtgatgc ttatgacaac ctaatgcagg 240 ctttaatgtg gagaccgtag aatataagaa cattagcttc actgtttggg atgttggtgg 300 tcaggacaag gtaatacaac atttacttta agatttgtgg aacaaaacct taagtattca 360 gacttttagc gttatactgt ttttctgggc ctactgtttc atgttaacgt catcttttgc 420 catattattt tcctctgcaa ttgaagttac tgtagaactg atagatgtgc ttatggacta 480 tcttatgctg attcaatttc atcgtcagca taggatgtaa tcataagcta catctactaa 540 tgccactttg tctttcgagg ttttcctttg attgtatgag gaaaggctat ccttgctgtg 600 gctgacacat aaaaactgtc ctcttcatct tgcatattcc ttgctattgg aactgttgga 660 tgggtttatg gactatctta cgccagttca atttcattgt caacatagga cataatcata 720 棉花arf1基因及其启动子.ST25 agtcacatct actaatgcca cttggatgtg cttatggact atcttatgct gattccattt 780 catcattagc atagactact cataagttac atttcctaat gccaccttgt cttttgaggt 840 tttcctttga ttgtatgagg gaaggctatc ggctttgtgg ttgttgcata aaaactgccc 900 tcttcacctt gtattttcct tgctattaat gtgcttatgg acggtcctgt gctgattaga 960 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gatttaaaca tgtggagttt ggtagcatgt aatgttctga aagcttttat ggacactttc 2700 agattcgacc tttgtggagg cactacttcc aaaacactca gggtctaatc tttgttgttg 2760 atagcaatga ccgtgaccgt gtggttgagg ccagggatga gcttcatcgt atgctaaatg 2820 aggtactaat ttgctttagg catgttgccg agtggtcttt gggacttgga agtacattgt 2880 ttgaaactgt gatatacttg tcatatgtgt agaaattacg aggctgtgta aattagttga 2940 棉花arf1基因及其启动子.ST25 ttattatcat acacatgtaa taaccttttc caatcattat gttacttgtg atatgtgtag 3000 gacgagctga gggatgctgt gcttcttgtg tttgcaaaca agcaagatct gccgaatgct 3060 atgaatgctg ctgagattac tgataagctt ggccttcact cccttcgtca gcgccactgg 3120 tattatgtta ttaactgttt ccctgtttgc ttactactta ttagggtatt tgtttgtttg 3180 catttgcaaa atgtaatcgc ttgtattcat attcttgtgc gtctctcaca ggtatatcca 3240 gagtacttgt gccacctctg gcgaagggct gtatgaggga ctggactggc tttccaacaa 3300 cattgctaac aaggtaggat gagactcaca actcacgtgc atccattttg tggatattgt 3360 tcagttgtaa cttattgcgt tgcttgtttt gtttccatag ggttgagggt tggttgaatt 3420 ccagtcatat cttcaggcag ctatccttat tattttctgg ttcctttttt aagttttaca 3480 ggaaatgtat cagattgtgt tatataatta atatatattc accgtactac tgaaattagg 3540 catttgcctg ctttgtagat tgatttctca aataattttt ttctatatga tcacctgaac 3600 tctaattcc 3609 <210>3 <211>1085 <212>DNA <213>陆地棉Y18 <400>3 catccgtact tactttgacc ataattgatt aatttaaaga ataaaaaaat ctgtgaaaaa 60 gacgaaggtg attgggattt ccaaaacggc agcgtttgga tctaatcaaa gggcatcgca 120 acgttttaag aaaacctaat ctgaaatcac tcacccccgc ctccagctcc tccaattgcg 180 taataaatag ccccaaagcc caaccccttc ccccatcgaa tttgatattt gtaagtgtta 240 aacattgttt gcctttcatt tctttctcta ttccttgttg cttcttcggc agcctctcgg 300 tttctgagta atataaaaaa ggatggggct gtcttttgct aagctgttta gtcgactgtt 360 tgccaagaaa gagatgcgaa ttcttatggt gggtcttgat gctgctggta agactaccat 420 tttgtacaag ctcaagctcg gtgagattgt cactaccatt cccaccattg gctttaatgt 480 ggagaccgta gaatataaga acattagctt cactgtttgg gatgttggtg gtcaggacag 540 gattcgacct ttgtggaggc actatttcca aaacactcag gggctaatct ttgttgttga 600 tagcaatgac cgtgaccgtg tggttgaggc cagggatgag cttcatcgta tgctaaataa 660 ggacgagctg agggatgctg tgcttcttgt gtttgcaaac aagcaagatc tgccgaatgc 720 tatgaatgct gctgagatta ctgataagct tggccttcac tcccttcgtc agcgccactg 780 gtatatccag agtacttgtg ccacctctgg cgaagggctg tatgagggac tggactggct 840 ttccaacaac attgctaaca agggttgagg gttggttgaa ttccagtcat atcttcaggc 900 agctatcctt attattttct ggttcctttt ttaagtttta caggaaatgt atcagattgt 960 gttatataat taatatatat tcaccgtact actgaaatta ggcatttgcc tgctttgtag 1020 attgatttct caaataattt ttttctatat gatcacctga actctaattc caaaaaaaaa 1080 aaaaa 1085 棉花arf1基因及其启动子.ST25 <210>4 <211>181 <212>PRT <213>陆地棉Y18 <400>4 Met Gly Leu Ser Phe Ala Lys Leu Phe Ser Arg Leu Phe Ala Lys Lys 1 5 10 15 Glu Met Arg Ile Leu Met Val Gly Leu Asp Ala Ala Gly Lys Thr Thr 20 25 30 Ile Leu Tyr Lys Leu Lys Leu Gly Glu Ile Val Thr Thr Ile Pro Thr 35 40 45 Ile Gly Phe Asn Val Glu Thr Val Glu Tyr Lys Asn Ile Ser Phe Thr 50 55 60 Val Trp Asp Val Gly Gly Gln Asp Arg Ile Arg Pro Leu Trp Arg His 65 70 75 80 Tyr Phe Gln Asn Thr Gln Gly Leu Ile Phe Val Val Asp Ser Asn Asp 85 90 95 Arg Asp Arg Val Val Glu Ala Arg Asp Glu Leu His Arg Met Leu Asn 100 105 110 Lys Asp Glu Leu Arg Asp Ala Val Leu Leu Val Phe Ala Asn Lys Gln 115 120 125 Asp Leu Pro Asn Ala Met Asn Ala Ala Glu Ile Thr Asp Lys Leu Gly 130 135 140 Leu His Ser Leu Arg Gln Arg His Trp Tyr Ile Gln Ser Thr Cys Ala 145 150 155 160 Thr Ser Gly Glu Gly Leu Tyr Glu Gly Leu Asp Trp Leu Ser Asn Asn 165 170 175 Ile Ala Asn Lys Gly 180
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本发明提供了一种棉花基因组中的ARF1基因及其启动子序列。该基因及其启动子可在棉花的花蕾、花、纤维及其棉铃铃壳中优势表达。该基因及其启动子可用于棉花生殖器官的发育、品质改良以及外源基因在棉花生殖器官中的特异表达研究。。
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