基于膜结构的血型检测方法.pdf

本发明公开了一种基于膜结构的血型检测方法，该方法选用能够允许单个红细胞通过的滤膜作为核心材料，将血型抗体结合到滤膜上，滤膜的周边包围有吸水材料，检测时将一定浓度的红细胞滴加在滤膜表面，再用冲洗液冲洗，未发生抗原抗体结合的红细胞将会随冲洗液液体渗出，而发生抗原抗体结合的红细胞则会留在膜表面形成肉眼可见的红色团块，操作人员可依据红细胞是否在滤膜形成肉眼可见的红色团块来判断结果，确定红细胞的血型。本发明的有益效果是，检测时间短，结果客观。

1.  一种基于膜结构的血型检测方法，该方法选用能够允许单个红细胞通过的滤膜作为核心材料，将血型抗体结合到滤膜上，滤膜的周边包围有吸水材料，检测时将一定浓度的红细胞滴加在滤膜表面，再用冲洗液冲洗，未发生抗原抗体结合的红细胞将会随冲洗液液体渗出，而发生抗原抗体结合的红细胞则会留在膜表面形成肉眼可见的红色团块，操作人员可依据红细胞是否在滤膜形成肉眼可见的红色团块来判断结果，确定红细胞的血型。

2.  根据权利要求1所述的基于膜结构的血型检测方法，其特征在于，所述该方法选用能够允许单个红细胞通过的滤膜作为核心材料，而滤膜材质可以是玻璃纤维膜或硝酸纤维膜或硅酸盐颗粒等能够形成特定连续液流通道的固体，且滤膜的内径在2—20微米之间。

3.  根据权利要求1所述的基于膜结构的血型检测方法，其特征在于，所述滤膜的周边包围有吸水材料，滤膜的形状为方形或者圆形，吸水材料包围滤膜的方式为全部包围或者部分包围。

4.  根据权利要求1所述的基于膜结构的血型检测方法，其特征在于，所述血型抗体结合到滤膜上，血型抗体结合到滤膜上的方法为物理吸附法或者化学交联法。

5.  根据权利要求1所述的基于膜结构的血型检测方法，其特征在于，所述检测时将一定浓度的红细胞滴加在滤膜表面，其中一定浓度的红细胞为全血或者不同浓度的红细胞悬液。

6.  根据权利要求1所述的基于膜结构的血型检测方法，其特征在于，该方法还包括检测试剂盒，检测试剂盒内设有能够允许单个红细胞通过的滤膜，将血型抗体结合到滤膜上，滤膜下面垫有吸水垫，吸水垫的面积要大于滤膜，且滤膜和吸水垫都通过检测试剂盒内的塑料固体结构来做固定和支撑；
检测时将一定浓度的红细胞滴加到检测试剂盒内结合了血型抗体的滤膜表面，随后将冲洗液滴加到同一滤膜表面上，冲洗液将未发生抗原抗体结合的红细胞从反应区冲洗掉。而发生抗原抗体结合的红细胞则截留在滤膜表面形成肉眼可见的红色团块。

基于膜结构的血型检测方法
技术领域
本发明涉及一种血型判定检测技术，特别是一种基于膜结构的血型检测方法。 
背景技术
血型检验已广泛应用于各级医疗机构，其中ABO血型系统和抗Rh(D)的检测已经作为常规检测。通常用IgM类型的抗A，抗B和抗D试剂分别和红细胞反应，根据是否形成凝聚反应来给红细胞分型。A型红细胞表面有A抗原，会和抗A抗体发生凝聚反应。B型红细胞表面有B抗原，会和抗B抗体发生凝聚反应。根据这两个反应的结果可以给红细胞的ABO血型系统分型。用抗D试剂确定Rh(D)阳性和阴性。其它血型系统的检测也在医疗机构中有应用。如Rh系统的DCcEe分型，MN系统，duffy和lewis系统的检测等。 
目前临床检测中用平板法和柱凝集技术最多。平板法缺乏客观判断的依旧，有时容易造成错误判断。柱凝集法结果客观，易于标准化，目前在逐渐替代前者。柱凝集法需要用到离心机，耗时长，限制了在紧急状况下的应用。 
发明内容
本发明的目的是为了解决上述问题，设计了一种基于膜结构的血型检测方法。 
实现上述目的本发明的技术方案为，一种基于膜结构的血型检测方法，该方法选用能够允许单个红细胞通过的滤膜作为核心材料，将血型抗体结合到滤膜上，滤膜的周边包围有吸水材料，检测时将一定浓度的红细胞滴加在滤膜表面，再用冲洗液冲洗，未发生抗原抗体结合的红细胞将会随冲洗液液体渗出，而发生抗原抗体结合的红细胞则会留在膜表面形成肉眼可见的红色团块，操作人员可依据红细胞是否 在滤膜形成肉眼可见的红色团块来判断结果，确定红细胞的血型。 
所述该方法选用能够允许单个红细胞通过的滤膜作为核心材料，而滤膜材质可以是玻璃纤维膜或硝酸纤维膜或硅酸盐颗粒等能够形成特定连续液流通道的固体，且滤膜的内径在2-20微米之间。 
所述滤膜的周边包围有吸水材料，滤膜的形状为方形或者圆形，吸水材料包围滤膜的方式为全部包围或者部分包围。 
所述血型抗体结合到滤膜上，血型抗体结合到滤膜上的方法为物理吸附法或者化学交联法。 
所述检测时将一定浓度的红细胞滴加在滤膜表面，其中一定浓度的红细胞为全血或者不同浓度的红细胞悬液。而制备红细胞悬液的液体可以是生理盐水或其它等渗溶液，也可以是红细胞保存液。 
该方法还包括检测试剂盒，检测试剂盒内设有能够允许单个红细胞通过的滤膜，将血型抗体结合到滤膜上，滤膜下面垫有吸水垫，吸水垫的面积要大于滤膜，且滤膜和吸水垫都通过检测试剂盒内的塑料固体结构来做固定和支撑； 
检测时将一定浓度的红细胞滴加到检测试剂盒内结合了血型抗体的滤膜表面，随后将冲洗液滴加到同一滤膜表面上，冲洗液将未发生抗原抗体结合的红细胞从反应区冲洗掉。而发生抗原抗体结合的红细胞则截留在滤膜表面形成肉眼可见的红色团块。 
所述冲洗液为生理盐水。 
利用本发明的技术方案制作的基于膜结构的血型检测方法，具有无需特殊设备，检测时间短，结果客观等优势，具有较好的临床推广价值。 
附图说明
图1是本发明所述基于膜结构的血型检测方法的实施例1的结构示意图； 
图中，1、试剂盒底板；2、滤膜；3、吸水垫；4、带有抗原或抗体的 滤膜区域。 
图2是本发明所述基于膜结构的血型检测方法的实施例2的结构示意图； 
图中，1、滤膜；2、吸水垫。 
图3是本发明所述基于膜结构的血型检测方法的实施例3的结构示意图； 
图中，1、试剂盒底板；2、带有ABD抗体的滤膜；3、吸水垫。 
图4是本发明所述基于膜结构的血型检测方法的实施例4的两种结构示意图； 
图中，1、试剂盒底板；2、带有抗人球蛋白的滤膜；3、吸水垫。 
图5是本发明所述基于膜结构的血型检测方法的实施例5的结构示意图； 
图中，1、试剂盒底板；2、带有不同MN抗体的滤膜；3、吸水垫。 
图6是本发明所述基于膜结构的血型检测方法的实施例6的结构示意图； 
图中，1、试剂盒底板；2、带有挂A抗原和挂B抗原的滤膜；3、吸水垫；A为挂A抗原；B为挂B抗原。 
具体实施方式
下面结合附图对本发明的进行具体描述，一种基于膜结构的血型检测方法，该方法选用能够允许单个红细胞通过的滤膜作为核心材料，将血型抗体结合到滤膜上，滤膜的周边包围有吸水材料，检测时将一定浓度的红细胞滴加在滤膜表面，再用冲洗液冲洗，未发生抗原抗体结合的红细胞将会随冲洗液液体渗出，而发生抗原抗体结合的红细胞则会留在膜表面形成肉眼可见的红色团块，操作人员可依据红细胞是否在滤膜形成肉眼可见的红色团块来判断结果，确定红细胞的血型。其中，所述该方法选用能够允许单个红细胞通过的滤膜作为核心材料， 而滤膜材质可以是玻璃纤维膜或硝酸纤维膜或硅酸盐颗粒等能够形成特定连续液流通道的固体，且滤膜的内径在2-20微米之间；所述滤膜的周边包围有吸水材料，滤膜的形状为方形或者圆形，吸水材料包围滤膜的方式为全部包围或者部分包围；所述血型抗体结合到滤膜上，血型抗体结合到滤膜上的方法为物理吸附法或者化学交联法；所述检测时将一定浓度的红细胞滴加在滤膜表面，其中一定浓度的红细胞为全血或者不同浓度的红细胞悬液。而制备红细胞悬液的液体可以是生理盐水或其它等渗溶液，也可以是红细胞保存液；该方法还包括检测试剂盒，检测试剂盒内设有能够允许单个红细胞通过的滤膜，将血型抗体结合到滤膜上，滤膜下面垫有吸水垫，吸水垫的面积要大于滤膜，且滤膜和吸水垫都通过检测试剂盒内的塑料固体结构来做固定和支撑；检测时将一定浓度的红细胞滴加到检测试剂盒内结合了血型抗体的滤膜表面，随后将冲洗液滴加到同一滤膜表面上，冲洗液将未发生抗原抗体结合的红细胞从反应区冲洗掉。而发生抗原抗体结合的红细胞则截留在滤膜表面形成肉眼可见的红色团块；所述冲洗液为生理盐水。 
实施例1 
一种基于膜结构的血型检测方法，该方法选用能够允许单个红细胞通过的滤膜作为核心材料，将血型抗体结合到滤膜上，滤膜的周边包围有吸水材料，检测时将一定浓度的红细胞滴加在滤膜表面，再用冲洗液冲洗，未发生抗原抗体结合的红细胞将会随冲洗液液体渗出，而发生抗原抗体结合的红细胞则会留在膜表面形成肉眼可见的红色团块，操作人员可依据红细胞是否在滤膜形成肉眼可见的红色团块来判断结果，确定红细胞的血型。其中，所述该方法选用能够允许单个红细胞通过的滤膜作为核心材料，而滤膜材质可以是玻璃纤维膜或硝酸纤维膜或硅酸盐颗粒等能够形成特定连续液流通道的固体，且滤膜的内径在2-20微米之间；所述滤膜的周边包围有吸水材料，滤膜的形状可以为方形或者圆形，吸水材料包围滤膜的方式为全部包围或者部分 包围；所述血型抗体结合到滤膜上，血型抗体结合到滤膜上的方法为物理吸附法或者化学交联法；所述检测时将一定浓度的红细胞滴加在滤膜表面，其中一定浓度的红细胞为全血或者不同浓度的红细胞悬液。而制备红细胞悬液的液体可以是生理盐水或其它等渗溶液，也可以是红细胞保存液；该方法还包括检测试剂盒，检测试剂盒内设有能够允许单个红细胞通过的滤膜，将血型抗体结合到滤膜上，滤膜下面垫有吸水垫，吸水垫的面积要大于滤膜，吸水垫的宽度与滤膜相同，但是长度要大于滤膜，如图1所示，且滤膜和吸水垫都通过检测试剂盒内的塑料固体结构来做固定和支撑；检测时将一定浓度的红细胞滴加到检测试剂盒内结合了血型抗体的滤膜表面，随后将冲洗液滴加到同一滤膜表面上，冲洗液将未发生抗原抗体结合的红细胞从反应区冲洗掉。而发生抗原抗体结合的红细胞则截留在滤膜表面形成肉眼可见的红色团块；所述冲洗液为生理盐水。 
实施例2 
该方法还包括检测试剂盒，检测试剂盒内设有能够允许单个红细胞通过的滤膜，将血型抗体结合到滤膜上，滤膜下面垫有吸水垫，吸水垫的面积要大于滤膜，吸水垫的长度和宽度都大于滤膜，即滤膜位于吸水垫的中心区域，如图2所示，其他与实施例1相同。 
实施例3 
ABO及Rh(D)血型检测试剂盒，选取玻璃纤维膜为滤膜； 
1在玻璃纤维膜上固定血型抗体(抗A、抗B、抗D) 
血型抗体固定：取高效价的血型单克隆抗体(抗A、抗B、抗D)，以加入抗体保护剂。抗体保护剂可以是含5％牛血清白蛋白、5％蔗糖、5％PVP、5％的小牛血清的5mM磷酸盐缓冲液(pH7.4)。抗体保护液能够辅助抗体固定在玻璃纤维膜上，并且增强抗体的有效期。用抗体保护液的作为稀释液，稀释抗体，使其终效价为128。将150μL的稀释后的抗体滴加到1.5cm×1.5cm玻璃纤维膜的中心，让抗体呈圆形在玻璃纤维膜上铺展，然后37℃烘干处理并密封保存。 
2快速检测试剂条的组装： 
在一带有4个个孔(孔径为0.5cm)的方形的塑料板背部贴上带有4片抗体的1.5cm×1.5cm玻璃纤维膜，使塑料版上的孔与玻璃纤维膜上的抗体中心对映。然后将2.5cm宽的吸水纸贴在玻璃纤维膜的周边(如图3A)所示。玻璃纤维膜和吸水纸都是使用防水胶黏贴在聚酯版上，防止加样和冲洗过程玻璃纤维膜和吸水纸脱落或串位置，最后扣上后盖。 
组装后ABO及Rh(D)血型检测试剂盒如图1所示，其中加样孔I为抗A抗体，加样孔II为抗B抗体，加样孔III为抗D抗体，加样孔IV为阳性对照孔，如图3所示。 
3样品检测 
在检测试剂盒的加样孔处滴加150μL的全血(或50μl的3％的红细胞悬液)样品。滴加待检测样品后，等待30s至1min，然后向每个样品孔缓慢加入500μL的冲洗液。待冲洗液被吸水纸吸收后，观察加样孔的颜色。 
在加样孔上有显著的红色物质残留为阳性反应，加样垫上没有红色物质残留为阴性反应。结合ABO及Rh(D)血型抗体和红细胞反应的关系，可以很容易得知待检测样品的血型。或者，也可以利用光信号或者电信号采集系统采集加样垫上残留的红色残留物质，然后可以对结果自动化判断，从而实现对批量血液样品的ABO及Rh(D)血型正定检测。 
实施例4 
抗人球蛋白检测试剂盒，选取玻璃纤维膜为滤膜； 
1在玻璃纤维膜上固定抗人球蛋白抗体 
血型抗体固定：取高效价的抗人球蛋白抗体，加入抗体保护剂稀释。抗体保护剂可以是含5％牛血清白蛋白、5％蔗糖、5％PVP、5％的小牛血清的5mM磷酸盐缓冲液(pH7.4)。抗体保护液能够辅助抗体固定在 玻璃纤维膜上，并且增强抗体的有效期。用抗体保护液的作为稀释液，稀释抗体。将150μL的稀释后的抗体滴加到1.5cm×1.5cm玻璃纤维膜的中心，让抗体呈圆形的在玻璃纤维膜上铺展，然后37℃烘干处理并密封保存。 
2快速检测试剂条的组装： 
在一带有一个孔(孔径为0.5cm)的长方形的塑料板背部贴上带有抗人球蛋白抗体的1.5cm×1.5cm玻璃纤维膜，使塑料版上的孔与玻璃纤维膜上的抗体中心对映。然后将2.5cm宽的吸水纸贴在玻璃纤维膜的两侧，如图4所示。玻璃纤维膜和吸水纸都是使用防水胶黏贴在聚酯版上，防止加样和冲洗过程玻璃纤维膜和吸水纸脱落或串位置，最后扣上后盖。组装后抗人球蛋白检测试剂盒如图4所示。 
3样品检测 
在检测试剂盒的加样孔处滴加15μL的全血(或50的3％的红细胞)样品或者经过体外和血清孵育的红细胞。滴加待检测样品后，等待30s至1min，然后向每个样品孔缓慢加入500μL的冲洗液。待冲洗液被吸水纸吸收后，观察加样孔的颜色。 
在加样孔处有显著的红色物质残留为阳性反应，加样垫上没有红色物质残留为阴性反应。结合抗人球蛋白实验原理，可以很容易得知待检测样品的血细胞是否被致敏。或者，也可以利用光信号或者电信号采集系统采集加样垫上残留的红色残留物质，然后可以对结果自动化判断，从而实现对批量血液样品的直接抗人球蛋白检测。 
实施例5 
MN系统血型检测试剂盒，选取玻璃纤维膜为滤膜； 
1在玻璃纤维膜上固定MN系统的血型抗体 
血型抗体固定：取高效价的血型单克隆抗体(抗M、抗N、抗S、抗s等)，以加入抗体保护剂。抗体保护剂可以是含5％牛血清白蛋白、5％蔗糖、5％PVP、5％的小牛血清的5mM磷酸盐缓冲液(pH7.4)。抗体保护液能够辅助抗体固定在玻璃纤维膜上，并且增强抗体的有效期。用抗体保护液的作为稀释液，稀释抗体。将150μL的稀释后的抗体滴加到1.5cm×1.5cm玻璃纤维膜的中心，让抗体呈圆形在玻璃纤维膜上铺展，然后37℃烘干处理并密封保存。 
2快速检测试剂条的组装： 
在一带有多孔个个孔(孔径为0.5cm)的长方形的塑料板背部贴上带有4片抗体的1.5cm×1.5cm玻璃纤维膜，使塑料版上的孔与玻璃纤维膜上的抗体中心对映。然后将2.5cm宽的吸水纸贴在玻璃纤维膜的周边，如图5所示。玻璃纤维膜和吸水纸都是使用防水胶黏贴在聚酯版上，防止加样和冲洗过程玻璃纤维膜和吸水纸脱落或串位置，最后扣上后盖。组装后抗人球蛋白检测试剂盒如图5所示。 
3样品检测 
在检测试剂盒的加样孔处滴加15μL的全血(或50μl的3％的红细胞悬液)样品。滴加待检测样品后，等待30s至1min，然后向每个样品孔缓慢加入500μL的冲洗液。待冲洗液被吸水纸吸收后，观察加样孔的颜色。 
在加样孔上有显著的红色物质残留为阳性反应，加样垫上没有红色物质残留为阴性反应。结合MN血型抗体和红细胞反应的关系，可以很容易得知待检测样品的MN血型。或者，也可以利用光信号或者电信号采集系统采集加样垫上残留的红色残留物质，然后可以对结果自动 化判断，从而实现对批量血液样品的MN血型检测。 
实施例6 
ABO血型的反定检测试剂盒，选取玻璃纤维膜为滤膜； 
1在玻璃纤维膜上固定抗原(A抗原、B抗原) 
血型抗原固定：使用低渗压溶液破碎A型(或B型)红细胞，离心去上清，再使用相同的低渗压溶液洗涤沉淀，直至上清无色透明，收集沉淀即为红细胞膜，作为血型A(或B)抗原提取物。使用加入抗体保护剂稀释抗原提取物。将稀释后的抗原提取物滴加到1.5cm×1.5cm玻璃纤维膜的中心，然后37℃烘干处理并密封保存。 
2快速检测试剂条的组装： 
在一带有两个孔(孔径为0.5cm)的长方形的塑料板背部贴上带有抗原的1.5cm×1.5cm玻璃纤维膜，使聚酯版上的孔与玻璃纤维膜上的抗原中心对映。然后将2.5cm宽的吸水纸贴在玻璃纤维膜的两侧。玻璃纤维膜和吸水纸都是使用防水胶黏贴在聚酯版上，防止加样和冲洗过程玻璃纤维膜和吸水纸脱落或串位置，最后扣上后盖。组装后抗人球蛋白检测试剂盒，如图6所示。 
3样品检测 
在两个反定检测加样孔处滴分别加50μL血清或血浆样品，再在两个加样孔处分别滴加50μL3％的A型细胞悬液和B型细胞悬液，等待30s至1min后，缓慢加入500μL的反应冲洗液。待冲洗液被吸水纸吸收后，观察加样孔的颜色。 
在加样孔上有显著的红色物质残留为阳性反应，加样垫上没有红色物质残留为阴性反应。ABO血型抗原与血清或血浆中的AB抗体结合， 进而与通过的细胞悬液反应，从而可以确定血清中含有的抗体类型，间接测定样品的血型。或者，也可以利用光信号或者电信号采集系统采集加样垫上残留的红色残留物质，然后可以对结果自动化判断，从而实现对批量血液样品的ABO血型反定检测。 
上述技术方案仅体现了本发明技术方案的优选技术方案，本技术领域的技术人员对其中某些部分所可能做出的一些变动均体现了本发明的原理，属于本发明的保护范围之内。