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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410841489.5 (22)申请日 2014.12.30 G01N 30/88(2006.01) (71)申请人 崔淑华 地址 266002 山东省青岛市市南区瞿塘峡路 70 号 (72)发明人 崔淑华 马惠 李瑞娟 (54) 发明名称 一种氰虫酰胺残留量的 GC-NCI-MS 测定方法 (57) 摘要 本 发 明 公 开 了 一 种 氰 虫 酰 胺 残 留 量 的 GC-NCI-MS 测定方法， 该方法主要用于测定粮谷、 动物源性食品等复杂基质食品农产品中残留的氰 虫酰胺含量的方法。 用乙腈或含1%乙酸的乙腈溶 液均质提取样品。
2、中残留的氰虫酰胺， C18/PSA 固相 萃取柱净化浓缩后， 气相色谱-负化学离子源-质 谱 （GC-NCI-MS）检测， 采用不含待测农药的空白 基质溶液建立校正的标准曲线， 外标法定量。 本方 法平均回收率为93.4%97.7%， 平均相对标准偏 差 （RSD） 为 4.0% 7.3%， 检出限低于 2.89 g/ kg， 具有操作简便、 快速、 去杂效果好、 灵敏度高、 特征性强、 重复性好、 定性定量准确的优点。能满 足美国、 加拿大、 欧盟、 日本等国家对相应食品安 全检测的 0.01 mg/kg 残留限量， 即 “一律标准” 的 技术要求， 将为保障我国人民食品安全及对外出 口贸易。
3、健康发展提供有力的技术支撑。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书8页 附图2页 (10)申请公布号 CN 104502508 A (43)申请公布日 2015.04.08 CN 104502508 A 1/1 页 2 1.一种氰虫酰胺残留量的 GC-NCI-MS 测定方法， 其特征在于， 所述方法包括以下步骤 ： (1) 提取 称取混匀样品于具塞离心管中， 加适量水后， 加入乙腈或含 1乙酸的乙腈溶液均质或 振荡超声提取后， 加入氯化钠或乙酸钠中的一种和无水硫酸镁， 剧烈涡旋 1min 后离心 ； (2) 净化 移取一定体。
4、积样品提取液， 浓缩至 1mL 左右， 经 C18/PSA 固相萃取柱净化， 乙腈洗脱， 收 集洗脱液， 浓缩至干后， 用体积比为1/1的丙酮/正己烷混合溶剂溶解定容， 过膜后， 待气相 色谱 - 电子轰击离子源 - 质谱 (GC-NCI-MS) 检测 ； (3) 标准工作溶液的配制 将不含氰虫酰胺的同种类基质空白样品按上述步骤 (1)、 (2) 处理， 得样品提取净化残 渣， 加入适量溶剂和混合标准溶液， 涡旋混匀， 配制成至少 3 个浓度的氰虫酰胺系列混合标 准工作液 ； (4) 测定和结果计算 将步骤 (3) 中的各浓度梯度的标准工作液进行 GC-NCI-MS 测定， 以标准工作液的色谱。
5、 峰面积对其相应浓度进行回归分析， 得到基质标准工作曲线 ； 在相同条件下将步骤 (2) 中 净化后的样品液注入 GC-NCI-MS 进行测定， 测得样品液中氰虫酰胺的色谱峰面积， 代入基 质标准曲线， 得到样品液中氰虫酰胺含量， 然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样 品中氰虫酰胺残留量。 2.根据权利要求1所述的一种氰虫酰胺残留量的GC-NCI-MS测定方法， 其特征在于， 步 骤 (1) 中样品若为粮谷及动物肝脏等含水量较少的样品， 提取前须加适量水充分浸润。 3.根据权利要求1所述的一种氰虫酰胺残留量的GC-NCI-MS测定方法， 其特征在于， 步 骤 (1) 中采用乙腈提取时需加入。
6、氯化钠盐析， 采用含 1乙酸的乙腈溶液提取时需加入乙 酸钠盐析。 4.根据权利要求1所述的一种氰虫酰胺残留量的GC-NCI-MS测定方法， 其特征在于， 步 骤 (2) 中进行 C18/PSA 固相萃取净化， 乙腈洗脱时， 洗脱体积为 6 8mL。 5.根据权利要求 1 所述的一种氰虫酰胺残留量的 GC-NCI-MS 测定方法， 其特征在于， 步骤 (4) 中 GC-NCI-MS 分析条件为 ： 色谱柱 ： HP-5MS 毛细管色谱柱， 柱长 30m， 内径 0.25mm， 膜厚0.25m ； 进样口温度250.0； 载气 ： He， 不分流模式进样， 进样量 ： 1L ； 恒流模式， 流 速。
7、 1.0mL/min ； 升温程序 ： 初温 60保持 2min， 以每分钟 20的速度升至 200， 然后以每 分钟 2的速度升至 220， 再以每分钟 20的速度升至 280， 保持 10min ； 传输线温度 ： 280 ； 电离模式 ： 负化学电离， 即 NCI 模式， 能量 70eV ； 离子源温度 150 ； 扫描方式 ： 选择 离子监测 (SIM) 模式， 监测的离子为 ： 269、 271、 270。 权 利 要 求 书 CN 104502508 A 2 1/8 页 3 一种氰虫酰胺残留量的 GC-NCI-MS 测定方法 技术领域 0001 本发明涉及一种氰虫酰胺残留量的 GC。
8、-NCI-MS 测定方法， 更具体地说是采用气相 色谱 - 负化学离子源 - 质谱 (GC-NCI-MS) 定性定量测定粮谷、 猪肉、 牛肉、 羊肉、 鸡肉等动物 肌肉及制品等复杂基质的动植物源性食品中残留的氰虫酰胺含量的方法， 属于农药残留量 的测定技术领域。 背景技术 0002 氰虫酰胺 (Cyantraniliprole)， 又名溴氰虫酰胺 (cyantraniliprole， 是杜邦 公司继氯虫苯甲酰胺之后成功开发的第二代鱼尼丁受体抑制剂类杀虫剂， 氰虫酰胺是 通过改变苯环上的各种极性基团而成， 与氯虫苯甲酰胺相比， 具有更广谱的杀虫活性， 对刺吸式害虫具有优异的防效， 并且具有较好的。
9、内吸性， 市场前景广阔。化学名称为 3- 溴 -1-(3- 氯 -2- 吡啶基 )-4- 氰基 -2- 甲基 -6-( 甲基氨基 ) 羰基 苯基 -1H- 吡 唑 -5- 甲酰胺， 英文名称为 ： 3-bromo-1-(3-chloro-2-pyridy)-4 -cyano-2 -methyl-6 -(methylcarbamoyl)pyrazole-5-carbox-anilide.CAS登录号为736994-63-1， 分子量为 473.7， 结构式为 ： 0003 氰虫酰胺除了对半翅目害虫(包括飞虱等)有优异的活性外， 对鳞翅目、 双翅目害 虫、 果蝇、 甲虫、 牧草虫、 蚜虫、 叶蝉及。
10、象鼻虫等具有很好的活性。 室内和田间试验表明， 其对 主要的飞虱有非常优异的活性， 包括 B 型和 Q 型烟粉虱等。该农药主要用于蔬菜、 水果、 玉 米、 棉花、 大豆、 水稻和咖啡等作物。 氰虫酸胺己在美国、 巴西、 日本、 加拿大和中国等多个国 家获得登记， 具有巨大的市场前景。 氰虫酰胺作用机理为 ： 通过激活靶标害虫的鱼尼丁受体 而防治害虫。鱼尼丁受体的激活可释放横纹肌和平滑肌细胞内贮存的钙离子， 结果导致损 害肌肉运动调节、 麻痹， 最终害虫死亡。 该药表现出对哺乳动物与害虫鱼尼丁受体极显著的 选择性差异， 大大提高了对哺乳动物、 其他脊椎动物以及其他天敌的安全性。 0004 随着氰。
11、虫酰胺的登记、 推广和使用， 作为我国蔬菜、 水果主要出口市场的美 国等国家对其制定了残留限量标准。2014 年 2 月 5 日， 美国环保署发布对氰虫酰胺 (Cyantraniliprole) 的残留限量要求， 具体如下 ： 说 明 书 CN 104502508 A 3 2/8 页 4 近 日，加 拿 大 卫 生 部 有 害 生 物 管 理 局 (PMRA) 拟 定 杀 虫 剂 氰 虫 酰 胺 (Cyantraniliprole)最大残留限量。 限量规定 ： 氰虫酰胺在多叶类甘蓝蔬菜(作物亚组5B) 说 明 书 CN 104502508 A 4 3/8 页 5 中的最大残留限量为30ppm，。
12、 在多叶类蔬菜， 甘蓝类除外(作物亚组4)中的最大残留限量为 20ppm， 在大葱 ( 作物亚组 3-07B) 中的最大残留限量为 8.0ppm， 在樱桃 ( 作物亚组 12-09A) 中的最大残留限量为 6.0ppm， 在蓝莓 ( 作物亚组 13-07B) 中的最大残留限量为 4.0ppm， 在 甘蓝类蔬菜头和茎 ( 作物亚组 5A) 中的最大残留限量为 3.0ppm， 在柑橘油中的最大残留限 量为2.4ppm， 在果类蔬菜(作物亚组8-09)中的最大残留限量为2.0ppm， 在仁果类水果(作 物亚组 11-09)、 桃子 ( 作物亚组 12-09B)、 油子 ( 作物亚组 20)、 葡萄、。
13、 橄榄中的最大残留限 量为 1.5ppm， 在柑橘果 ( 修订作物亚组 10) 中的最大残留限量为 0.7ppm， 在李子 ( 作物亚 组12-09C)中的最大残留限量为0.5ppm， 在葫芦类蔬菜(作物亚组9)中的最大残留限量为 0.4ppm， 在块茎和球茎蔬菜 ( 作物亚组 1C) 中的最大残留限量为 0.15ppm， 在根茎和块茎植 物叶 ( 作物亚组 2)、 洋葱头 ( 作物亚组 3-07A)、 树坚果 ( 作物亚组 14-11) 中的最大残留限 量为 0.04ppm， 在根茎植物 ( 作物亚组 1A) 中的最大残留限量为 0.02ppm， 在牛、 绵山羊、 猪、 马、 家禽肥瘦肉及肉。
14、制品、 蛋、 乳中的最大残留限量为 0.01ppm， 与美国规定大多一致。欧盟 和日本规定， 没有制定最大允许残留限量的食品农产品， 均实行 0.01mg/L 的 “一律标准” 。 0005 现阶段， 对氰虫酰胺残留量测定方法的研究较少， 报道的检测方法主要为蔬菜和 水果中氰虫酰胺残留检测方法， 这些检测方法均采用液相色谱 (LC) 或液相色谱串联质谱 (LC-MS/MS) 测定蔬菜和水果中氰虫酰胺残留量的检测方法， 使用 LC-MS/MS 测定食品农产 品中农药残留具有快速、 简便、 灵敏度高等优点， 但由于其价格较昂贵， 很多检测机构、 企业 或科研院所未配置该仪器或配置台数较少， 由于不。
15、同的化合物采用 LC-MS/MS 检测时， 需 使用不同的流动相或色谱柱， 这样需要不断更换色谱柱、 流动相并耗费比较长的时间对系 统进行平衡， 这一定程度上制约了 LC-MS/MS 的应用。配备负化学电离源的气相色谱质谱 (GC-NCI-MS) 分析食品农产品中农药残留具有很大优势， 负化学离子源 (NCI 源 ) 被称为质 谱 “软电离源” ， 对含电负性集团的分析物具有高选择性和高灵敏度， 由于其特征性强， 利用 其进行残留分析时， 基质干扰很少， 可很准确地对目标物进行定性和定量分析。 现各种检测 机构和企业均购置了气相色谱 - 质谱仪 (GC-MS)， 一般也都配备了负化学离子源 (。
16、NCI)， 现 很多类农药均含有电负性基团， 有机氯和拟除虫菊酯类农药分子大都含有 F、 Cl、 Br 或 COO 等强电负性基团 ； 有机磷农药分子大都含有 S、 OR、 P、 O 、 Cl、 或 PO等电负性基团 ； 而近年来开发的新型农药中大多含有F基团， 因此， 使用GC-NCI-MS 可方便实现多种农药的多残留分析， 与 GC-NCI-MS 相比， 能获得更好的抗干扰能力、 更低的 灵敏度和更好的选择性， 氰虫酰胺属电负性化合物， 但迄今为止未见蔬菜和水果中氰虫酰 胺残留量的 GC-NCI-MS 检测方法的报道， 由于粮谷、 动物源性食品等食品农产品基质比较 复杂， 须建立净化效果良。
17、好的样品前处理方法和仪器分析条件才能满足检测要求， 因此， 建 立气相色谱 - 负化学离子源 - 质谱 (GC-NCI-MS) 定性和定量分析粮谷和动物源性食品中氰 虫酰胺残留量的检测方法具有重要意义。 发明内容 0006 本发明的目的是提供一种氰虫酰胺残留量的 GC-NCI-MS 测定方法， 主要用于测定 粮谷、 动物源性食品等复杂基质食品农产品中氰虫酰胺残留量。 0007 为实现以上目的， 本发明所采用的技术方案是 ： 一种氰虫酰胺残留量的 GC-NCI-MS 测定方法， 包括如下步骤 ： 说 明 书 CN 104502508 A 5 4/8 页 6 0008 (1) 提取 称取混匀样品于。
18、具塞离心管中， 加入适量水复苏后， 定量加入乙腈或含 1乙酸的乙 腈溶液均质或振荡超声提取， 然后加入氯化钠或乙酸钠中的一种和无水硫酸镁， 剧烈涡旋 1min 后离心。 0009 (2) 净化 移取一定体积样品提取液， 浓缩至 1mL 左右， 经 C18/PSA 固相萃取柱净化， 乙腈洗脱， 收 集洗脱液， 浓缩至干后， 用体积比为1/1的丙酮/正己烷混合溶剂溶解定容， 过膜后， 待气相 色谱 - 负化学离子源 - 质谱 (GC-NCI-MS) 检测。 0010 (3) 标准工作溶液的配制 将不含氰虫酰胺的同种类基质空白样品按上述步骤 (1)、 (2) 处理时， 得样品提取净化 残渣， 加入适。
19、量溶剂和混合标准溶液， 涡旋混匀， 配制成至少 3 个浓度的氰虫酰胺系列混合 标准工作液。 0011 (4) 气相色谱 - 负化学离子源 - 质谱法 (GC-NCI-MS) 测定 将步骤 (3) 中的各浓度梯度的标准工作液进行 GC-NCI-MS 测定， 以标准工作液的色谱 峰面积对其相应浓度进行回归分析， 得到标准工作曲线 ； 在相同条件下将步骤 (2) 中净化 后的样品液注入 GC-NCI-MS 进行测定， 测得样品液中氰虫酰胺的色谱峰面积， 代入标准曲 线， 得到样品液中氰虫酰胺含量， 然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中氰虫 酰胺残留量。 0012 步骤 (1) 中样品若为粮谷。
20、及动物肝脏等含水量较少的样品， 提取前须加适量水充 分浸润。 0013 步骤 (1) 中采用乙腈提取时加入氯化钠盐析， 采用含 1乙酸的乙腈溶液提取时 加入乙酸钠盐析。 0014 步骤 (2) 中进行 C18/PSA 固相萃取净化， 乙腈洗脱时， 洗脱体积为 6 8mL。 0015 步骤 (4) 中气相色谱条件为 ： 色谱柱 ： HP-5MS 毛细管色谱柱， 柱长 30m， 内径 0.25mm， 膜厚0.25m ； 进样口温度250； 载气 ： He， 不分流模式进样， 进样量 ： 1L ； 恒流模 式， 流速1.0mL/min ； 升温程序 ： 初温60保持2min， 以每分钟20的速度升至。
21、200， 然后 以每分钟 2的速度升至 220， 再以每分钟 20的速度升至 280， 保持 10min ； 传输线温 度 ： 280。 0016 步骤 (4) 中质谱条件为 ： 离子源温度 150； 四极杆温度 150； 电离模式 ： 负化学 电离， 即NCI模式， 能量70eV ； 扫描方式 ： 选择离子监测(SIM)模式监测的离子为 ： 269、 271、 270。 0017 步骤 (4) 中测定样液和基质标准工作溶液时， 若样液中农药色谱峰保留时间与标 准溶液中相应农药保留时间相一致， 并且在扣除背景后的样品质谱图中， 所选择的离子均 出现， 而且离子丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致。
22、， 则可判断样液中存在这种农药 ； 若 上述两个条件不能同时满足， 则判断不含该种农药。 0018 本发明的有益效果在于 ： 0019 本发明利用分散固相萃取技术， 建立了简便、 快速并能有效避免样品中基质干扰 的样品前处理方法， 将此前处理方法结合 GC-NCI-MS 应用于粮谷、 动物源性食品中氰虫 酰胺定性确证和定量检测， 平均回收率为 93.4 97.7， 平均相对标准偏差 (RSD) 为 说 明 书 CN 104502508 A 6 5/8 页 7 4.0 7.3， 检出限低于 2.89g/kg， 具有操作简便、 快速、 准确、 灵敏度高及重复性好 的优点。能满足美国、 加拿大、 欧。
23、盟、 日本等国家对相应食品安全检测的 0.01mg/kg 残留限 量， 即 “一律标准” 的技术要求， 将为保障我国人民食品安全及对外出口贸易健康发展提供 有力的技术支撑。 附图说明 0020 图 1 为浓度为 100ng/mL 的氰虫酰胺标液的 GC-NCI-MS 选择离子色谱图。 0021 图 2 为不含氰虫酰胺的牛肉空白样品的 GC-NCI-MS 选择离子色谱图。 0022 图 3 为添加在空白牛肉基质中的氰虫酰胺的 GC-NCI-MS 选择离子色谱图。 0023 图 4 为以不含氰虫酰胺的牛肉空白样品为基质配制的氰虫酰胺标准工作曲线。 具体实施方式 0024 现以以下实施实例来说明本发。
24、明， 但并不是限制本发明的范围。 0025 实施例中使用的仪器与试剂 0026 T18 Basic 均质器 (IKA， Germany) ； CR21G 离心机 ( 日立， Japan) ； MS3 基本型旋 涡混合器 (IKA， Germany) ； TurboVap LV 型样品自动浓缩仪 (Caliper， USA) ； 7890N 气相色 谱 -5975C 质谱仪 (Agilent， USA) ； C18/PSA 固相萃取柱 (6mL， 500mg/500mg) 购于天津博纳 艾杰尔科技有限公司。 0027 试 剂 ： 乙 腈、 丙 酮、 正 己 烷 (HPLC 级， Merke， G。
25、ermany) ； 乙 酸 (HPLC 级， CNW， Germany) ； 无水硫酸镁、 氯化钠和乙酸钠为分析纯， 均购自国药集团化学试剂有限公司。 0028 标准物质 ： 纯度 98.0， 购自德国 Dr.Ehrenstorfer 公司。 0029 实施例 1 ： 牛肉中氰虫酰胺残留量的检测 0030 (1) 样品前处理 0031 提取 称取经充分混匀的 5g 牛肉样品于 50mL 离心管中， 加入 5mL 水混匀， 放置 30min， 准确 加入 20mL 乙腈， 均质提取 2min， 加入 3g 无水硫酸镁和 2g 氯化钠， 涡旋 1min 后， 7000r/min 离心 5min。离。
26、心后， 取 8mL 乙腈提取液于 40旋蒸或氮气吹至约 1mL， 待净化。 0032 净化 用 5mL 乙腈预洗 C18/PSA 固相萃取柱， 当液面到达吸附剂的顶部时， 将上述提取溶液转 入柱中， 用 2mL 乙腈洗涤试管， 并将洗涤液移入 SPE 柱中， 待溶液达到吸附剂顶部时， 加入 4mL 乙腈至柱子上进行洗脱， 洗脱液全部接收到定量试管中， 氮气吹干后用体积比为 1/1 的 丙酮 / 正己烷混合溶剂定容至 1mL， 过 0.22m 滤膜后， 待 GC-NCI-MS 测定。 0033 (2) 标准工作溶液的配制 将100ng/mL标准溶液用体积比为1/1的丙酮/正己烷混合溶剂稀释成10。
27、ng/mL标准中 间液， 将 10g/mL 标准溶液稀释配成 5、 2、 1、 0.5、 0.2、 0.1g/mL 标准溶液。将不含氰虫酰 胺的牛肉空白样品按上述前处理步骤处理， 得样品提取净化残渣， 在此残渣中加入 900L 体积比为 1/1 的丙酮 / 正己烷混合溶剂和 100L 上述混合标准溶液， 涡旋混匀， 配成 10、 20、 50、 100、 200、 500g/L 基质标准工作溶液。 0034 (3) 气相色谱 - 负化学离子源 - 质谱法 (GC-NCI-MS) 测定 说 明 书 CN 104502508 A 7 6/8 页 8 将不同浓度梯度的标准工作液分别注入 GC-NCI。
28、-MS， 以外标法进行氰虫酰胺含量的定 量分析， 即以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析， 得到标准曲线 ； 在相同 条件下将样品提取液注入 GC-NCI-MS 进行测定， 测得样品液中氰虫酰胺的色谱峰面积， 代 入标准曲线， 得到样品液中氰虫酰胺含量， 然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样 品中氰虫酰胺残留量。 0035 其中色谱条件为 ： 0036 色谱柱 ： HP-5MS 毛细管色谱柱， 柱长 30m， 内径 0.25mm， 膜厚 0.25m。 0037 进样口温度 ： 250.0， 进样模式 ： 不分流进样， 进样量 ： 1L。 0038 载气 ： He， 恒流模式， 。
29、流速 1.0mL/min。 0039 炉箱升温程序 ： 初温60保持2min， 以每分钟20的速度升至200， 然后以每分 钟 2的速度升至 220， 再以每分钟 20的速度升至 280， 保持 10min。 0040 传输线温度 ： 280。 0041 其中， 质谱参数为 ： 0042 电离模式 ： 负化学电离， 即 NCI 模式， 能量 70eV。 0043 离子源温度 ： 150 ； 四极杆温度 150。 0044 扫描方式 ： 选择离子监测 (SIM) 模式 ； SIM 监测的离子为 ： 269、 271、 270， 定量离子 为 269。 0045 定性鉴定 ： 在相同的条件下， 如。
30、果样液中农药色谱峰保留时间与标准溶液中相应 农药保留时间相一致， 并且在扣除背景后的样品质谱图中， 所选择的离子均出现， 而且离子 丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致， 则可判断样液中存在这种农药 ； 若上述两个条件 不能同时满足， 则判断不含该种农药。 0046 以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析， 得到标准工作曲线如表 1。 表 1 牛肉空白基质中氰虫酰胺的标准曲线 名称保留时间 (min)回归方程相关系数 氰虫酰胺 Cyantraniliprole26.29Y 33.615X-37.9780.9997 0047 加标回收率和重复性 ： 0048 在不含氰虫酰胺的牛肉中加入 。
31、10、 20 和 200g/kg3 个浓度水平的氰虫酰胺标准 溶液， 待农药添加 30min 后按上述处理步骤进行残留量测定。将测定浓度与农药理论添加 浓度进行比较， 得到农药添加回收率， 每个添加水平平行测定 6 次， 得其相对标准偏差， 测 定结果见表 2。由表 2 可以看出， 在 3 个加标水平上， 氰虫酰胺的平均回收率为 93.4 96.0， 平均相对标准偏差(RSD)为4.07.3， 说明本发明方法的回收率较高， 重复性 好。 0049 表 2 氰虫酰胺的回收率和重复性 (n 6) 说 明 书 CN 104502508 A 8 7/8 页 9 0050 检出限 ： 0051 将不同浓。
32、度的氰虫酰胺基质标准工作溶液注入 GC-NCI-MS， 以最低浓度基质标准 溶液色谱峰的 3 倍信噪比和样品处理过程的浓缩倍数 ( 牛肉的浓缩倍数为 2.0 倍 ) 计算检 出限， 氰虫酰胺的检出限为 2.89g/kg。 0052 实施例 2 ： 小麦中氰虫酰胺残留量的检测 0053 (1) 样品前处理 0054 提取 称取经充分混匀的 5g 小麦样品 ( 研磨成面粉 ) 于 50mL 离心管中， 加入 20mL 水复苏 30min 后， 准确加入 20mL 含 1乙酸的乙腈溶液， 振荡提取 20min， 超声提取 5min， 加入 3g 无水硫酸镁和 2g 乙酸钠， 涡旋 1min 后， 7。
33、000r/min 离心 5min。离心后， 取 8mL 乙腈提取液 于 40旋蒸或氮气吹至近干， 加入 1mL 乙腈涡旋后， 待净化。 0055 净化 用 5mL 乙腈预洗 C18/PSA 固相萃取柱， 当液面到达吸附剂的顶部时， 将上述提取溶液转 入柱中， 用 2mL 乙腈洗涤试管， 并将洗涤液移入 SPE 柱中， 待溶液达到吸附剂顶部时， 加入 4mL 乙腈至柱子上进行洗脱， 洗脱液全部接收到定量试管中， 氮气吹干后用体积比为 1/1 的 丙酮 / 正己烷混合溶剂定容至 1mL， 过 0.22m 滤膜后， 待 GC-NCI-MS 测定。 0056 (2) 标准工作溶液的配制 将100ng/。
34、mL标准溶液用体积比为1/1的丙酮/正己烷混合溶剂稀释成10ng/mL标准中 间液， 将 10g/mL 标准溶液稀释配成 5、 2、 1、 0.5、 0.2、 0.1g/mL 标准溶液。将不含氰虫酰 胺的小麦空白样品按上述前处理步骤处理， 得样品提取净化残渣， 在此残渣中加入 900L 体积比为 1/1 的丙酮 / 正己烷混合溶剂和 100L 上述混合标准溶液， 涡旋混匀， 配成 10、 20、 50、 100、 200、 500g/L 基质标准工作溶液。 0057 (3) 气相色谱 - 负化学离子源 - 质谱法 (GC-NCI-MS) 测定 操作步骤、 色谱和质谱条件与上述牛肉样品中氰虫酰胺。
35、的测定一致。 0058 定性鉴定 ： 同上述牛肉样品中氰虫酰胺的测定一致。 0059 线性关系 ： 0060 以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析， 得到标准工作曲线为 Y 65.272X-601.55， 相关系数为 0.9993。 0061 加标回收率和重复性 ： 0062 在不含氰虫酰胺的小麦中加入 10、 20 和 200g/kg 3 个浓度水平的氰虫酰胺标 准溶液， 待农药添加 30min 后按上述处理步骤进行残留量测定， 将测定浓度与农药理论添 加浓度进行比较， 得到农药添加回收率， 每个添加水平平行测定 6 次， 得其相对标准偏差， 测定结果见表 3。由表 3 可以看出。
36、， 在 3 个加标水平上， 氰虫酰胺的平均回收率为 95.1 说 明 书 CN 104502508 A 9 8/8 页 10 97.7， 平均相对标准偏差 (RSD) 为 4.9 6.3， 说明本发明方法的回收率高， 重复性 好。 0063 表 3 氰虫酰胺的回收率和重复性 (n 6) 0064 检出限 ： 0065 将不同浓度的氰虫酰胺基质标准工作溶液注入 GC-NCI-MS， 以最低浓度基质标准 溶液色谱峰的 3 倍信噪比和样品处理过程的浓缩倍数 ( 小麦的浓缩倍数为 2.0 倍 ) 计算检 出限， 氰虫酰胺的检出限为 1.83g/kg。 0066 以上的实施例仅是对本发明的优选实施方式进行描述， 并非对本发明的范围进行 限定， 在不脱离本发明设计精神的前提下， 本领域普通工程技术对本发明的技术方案作出 的各种变型和改进， 均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。 说 明 书 CN 104502508 A 10 1/2 页 11 图 1 图 2 图 3 说 明 书 附 图 CN 104502508 A 11 2/2 页 12 图 4 说 明 书 附 图 CN 104502508 A 12 。