动物源食品中2氨基1甲基6苯基咪唑4，5B吡啶的测定方法.pdf

摘要
申请专利号：	CN201010111646.9	申请日：	2010.02.22
公开号：	CN101893609A	公开日：	2010.11.24
当前法律状态：	驳回	有效性：	无权
法律详情：	发明专利申请公布后的驳回IPC(主分类):G01N 30/02申请公布日:20101124\|\|\|著录事项变更IPC(主分类):G01N 30/02变更事项:发明人变更前:王培华李青山冯颖俞安敏刘平年李广滨陈志强变更后:王培花李青山冯颖俞安敏刘平年李广滨陈志强\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/02申请日:20100222\|\|\|公开
IPC分类号：	G01N30/02; G01N30/14	主分类号：	G01N30/02
申请人：	通标标准技术服务(上海)有限公司
发明人：	王培华; 李青山; 冯颖; 俞安敏; 刘平年; 李广滨; 陈志强
地址：	200030 上海市徐汇区宜山路900号B-15楼
优先权：
专利代理机构：	上海三方专利事务所 31127	代理人：	吴干权
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内容摘要

本发明属于分析化学领域，具体地说是一种动物源食品中PhIP的测定方法，用有机溶剂萃取动物源食品中的PhIP，并由固相萃取柱净化，高效液相色谱质谱进行检测其含量，本发明的有益效果：利用固相萃取柱净化，样品处理方便快捷，用高效液相色谱-质谱检测器检测动物源性食品中的PhIP，和紫外、荧光检测器相比，能更好地去除基质干扰，使定性更准确，选择性更强，灵敏度更高。

权利要求书

1.一种测定动物源食品中PhIP的方法，其特征在于：用有机溶剂萃取动物源食品中的PhIP，并由固相萃取柱净化提取液，高效液相色谱质谱进行检测其含量，其中，所述的用有机溶剂萃取动物源食品中的PhIP，并由固相萃取柱净化包括以下步骤：(1)有机溶剂提取：样品2～10g于玻璃烧杯中，加入30～50mL有机溶剂，高速匀浆，静置备用；(2)固相萃取柱的净化提取液：A.固相萃取柱的活化：分别以1～3mL甲醇，1～3mL去离子水，1～3mL0.1～0.5mM乙酸铵水溶液活化待用的固相萃取柱，B.提取液的净化：取匀浆提取后的样品提取溶液1～5mL加入至已活化的固相萃取柱上，再以1～5mL 4+6的0.1～0.5mM乙酸铵水溶液和甲醇混合溶液洗脱，收集全部流出液，过0.45um滤膜，高效液相色谱质谱分析；所述的高效液相色谱质谱测定分析样液：A.以甲醇和0.1％乙酸胺体系为流动相，等度洗脱，用反相色谱柱分离。B.质谱采集采用选择离子扫描方式。2.如权利要求1所述的所述的测定动物源食品中PhIP的方法，其特征在于：所述动物源性食品是炸鸡翅、猪肉。3.如权利要求1所述的测定动物源食品中PhIP的方法，其特征在于：所述固相萃取柱采用C18、C8或PSA键合硅胶柱。4.如权利要求1所述的测定动物源食品中PhIP的方法，其特征在于：所述提取用有机溶剂为丙酮、甲醇或乙腈。5.如权利要求1所述的测定动物源食品中PhIP的方法，其特征在于：所述提取过程采用高速匀浆机或振荡器。6.如权利要求1所述的测定动物源食品中PhIP的方法，其特征在于：所述被测物为：2-氨基-1-甲基-6-苯基咪唑[4，5-b]吡啶。

说明书

动物源食品中2-氨基-1-甲基-6-苯基咪唑[4，5-b]吡啶的测定方法

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体地说是一种动物源食品中PhIP的测定方法。

背景技术

PhIP(2-氨基-1-甲基-6-苯基咪唑[4，5-b]吡啶)是一种“危险的”杂环胺化合物，美国政府2005年已将它列为致癌物。美国科学家09年4月发表的研究报告称，烤肉食品的烹制过程中会产生这种物质，在小白鼠身上进行的实验表明，PhIP能够诱发前列腺癌。

动物源性食品，除了有大量的蛋白质，氨基酸等之外，制作过程中还可能加入多种调味剂，包括香精香料，食用油等，因此食品基质相当复杂。国外有用高效液相色谱和紫外或荧光检测器检测油炸食品中杂环胺类的报道，而国内尚无此类检测的报道。

发明内容

本发明提供了一种用有机溶剂萃取动物源食品中的PhIP，并由固相萃取柱净化，高效液相色谱质谱进行检测其含量。

本发明的具体内容为：

一种测定动物源食品中PhIP的方法，其特征在于：用有机溶剂萃取动物源食品中的PhIP，并由固相萃取柱净化提取液，高效液相色谱质谱进行检测其含量，其中，所述的用有机溶剂萃取动物源食品中的PhIP，并由固相萃取柱净化包括以下步骤：

(1)有机溶剂提取：

样品2～10g于玻璃烧杯中，加入30～50mL有机溶剂，高速匀浆，静置备用；

(2)固相萃取柱的净化提取液：

A.固相萃取柱的活化：

分别以1～3mL甲醇，1～3mL去离子水，1～3mL0.1～0.5mM乙酸铵水溶液活化待用的固相萃取柱，

B.提取液的净化：

取匀浆提取后的样品提取溶液1～5mL加入至已活化的固相萃取柱上，再以1～5mL 4+6的0.1～0.5mM乙酸铵水溶液和甲醇混合溶液洗脱，收集全部流出液，过0.45um滤膜，高效液相色谱质谱分析；

所述的高效液相色谱质谱测定分析样液：

A.以甲醇和0.1％乙酸胺体系为流动相，等度洗脱，用C8，C18等反相色谱柱分离。

B.质谱采集采用选择离子扫描方式。

所述动物源性食品是炸鸡翅、猪肉等。

所述固相萃取柱采用C18、C8或PSA键合硅胶柱。

所述提取用有机溶剂为丙酮、甲醇或乙腈。

所述提取过程采用高速匀浆机或振荡器。

所述被测物为：2-氨基-1-甲基-6-苯基咪唑[4，5-b]吡啶。

本发明的有益效果：利用固相萃取柱净化，样品处理方便快捷，用高效液相色谱-质谱检测器检测动物源性食品中的PhIP，和紫外、荧光检测器相比，能更好地去除基质干扰，使定性更准确，选择性更强，灵敏度更高。

具体实施方式：

实施例一

1.样品的提取

烤熟的鸡翅弃去骨头，鸡肉经食品粉碎机粉碎，准确称取5.0于150mL烧杯中，准确加入50mL甲醇，用高速匀浆机匀浆，静置20分钟，使分层，待净化。

2.C18固相萃取柱活化：

分别以3mL甲醇，3mL去离子水，3mL0.1mM乙酸铵水溶液淋洗C18固相萃取柱。弃去流出液。

3.样品的净化：

取提取好的样品上清液1ml于活化好的SPE柱中，以较慢的速度过柱，并用1mL 4∶6的0.1mM乙酸铵水溶液+甲醇溶液洗脱，收集全部流出液。取适量过0.45μm滤膜，上机分析。

4.仪器测定：

液相色谱条件测试条件：

色谱柱Agilent Eclipse反相柱，2.1×100mm，3.5μm

流动相MeOH(％)+0.1％乙酸铵缓冲盐＝60+40

流速0.3mL/min

进样体积40μL

柱温30℃

质谱条件：

离子源Ion source ESI(Positive)

干燥气流速Drying gas flow(L/min)10

喷雾针压力Nebulizer pressure(psig)35

干燥气温度Drying gas temperature(℃)300

毛细管电压Capillary voltage(V)4000

击碎电压Fragmentor(V)210

选择特征离子225

5.定性和定量

定性：根据化合物在色谱柱上的保留时间和特征离子进行定性。特征离子225。

定量：根据化合物的特征离子225，外标法进行定量。