三聚氰胺试纸及其制备方法以及三聚氰胺的检测方法.pdf

摘要
申请专利号：	CN201010563601.5	申请日：	2010.11.29
公开号：	CN102023159A	公开日：	2011.04.20
当前法律状态：	终止	有效性：	无权
法律详情：	未缴年费专利权终止IPC(主分类):G01N 21/78申请日:20101129授权公告日:20120704终止日期:20121129\|\|\|授权\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):G01N 21/78申请日:20101129\|\|\|公开
IPC分类号：	G01N21/78	主分类号：	G01N21/78
申请人：	辽宁师范大学
发明人：	赫春香; 李翱楠; 刘洋
地址：	116028 辽宁省大连市沙河口区黄河路794号
优先权：
专利代理机构：	大连东方专利代理有限责任公司 21212	代理人：	胡景波
PDF下载：	PDF下载

内容摘要

三聚氰胺试纸及其制备方法以及三聚氰胺的检测方法，将茜素红、亚甲基蓝、十二烷基硫酸钠配制成水溶液，水溶液中各物质的浓度：茜素红0.0167mol/L，亚甲基蓝2.10×10-5mol/L，十二烷基硫酸钠0.015mol/L；再滤纸浸于上述水溶液中，取出，晾干；剪成条，制得三聚氰胺试纸。使用时，将EDTA固体粉末加入到待检测的牛奶或奶粉调制的奶液中；摇匀，加热微沸5min，静置沉降；将一条试纸浸入奶液上清液中，润湿后提出。本发明具备使用方法简便，检测速度快的优点。

权利要求书

1：三聚氰胺试纸的制备方法，具体步骤如下： (1) 将茜素红、亚甲基蓝、十二烷基硫酸钠配制成水溶液，水溶液中各物质的浓度：茜素红 0.0167mol/L，亚甲基蓝
2： 10×10-5mol/L，十二烷基硫酸钠 0.015mol/L ； (2) 将滤纸浸于步骤 (1) 所述的水溶液中，取出，晾干；剪成条，制得三聚氰胺试纸。 2. 三聚氰胺试纸，是按照下述步骤制备的： (1) 将茜素红、亚甲基蓝、十二烷基硫酸钠配制成水溶液，水溶液中各物质的浓度：茜素红 0.0167mol/L，亚甲基蓝 2.10×10-5mol/L，十二烷基硫酸钠 0.015mol/L ； (2) 将滤纸浸于步骤 (1) 所述的水溶液中，取出，晾干；剪成条，制得三聚氰胺试纸。
3：三聚氰胺的检测方法，具体步骤如下： (1) 将茜素红、亚甲基蓝、十二烷基硫酸钠配制成水溶液，溶液中各物质的浓度：茜素红 0.0167mol/L，亚甲基蓝 2.10×10-5mol/L，十二烷基硫酸钠 0.015mol/L ； (2) 将滤纸浸于该溶液中，取出，晾干；剪成条，制得三聚氰胺试纸； (3) 将 EDTA 固体粉末加入到待检测的牛奶或由奶粉调制的奶液中；摇匀，加热微沸 5min，静置沉降；将一条试纸浸入奶液上清液中，润湿后提出，若不含有三聚氰胺，试纸呈现淡绿色；若含有三聚氰胺，试纸就会出现粉色，并随着三聚氰胺浓度的增大，粉色逐渐加深。
4：如权利要求 3 所述的检测方法，其特征在于：所述的由奶粉调制的奶液中是将奶粉和水以 1 ∶ 8 的体积比调制而得；步骤 (3) 中 EDTA 的加入量是奶粉质量的 1/8。

说明书

三聚氰胺试纸及其制备方法以及三聚氰胺的检测方法
    【技术领域】
     本发明属于分析检测技术，用于食品安全的检测。背景技术三聚氰胺 (melamine) 简称三胺，又称蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，其含氮量高达 66 ％。三聚氰胺为纯白色单斜楞晶体，无味，由于食品工业传统的蛋白质含量测定方法不能测知氮的种类，因三聚氰胺含氮很高，常被不法商人作为食品添加剂，以冒充食品中的蛋白质，因此三聚氰胺也被称为 “蛋白精”。 2007 年 3 月美国发生的多起猫、狗等宠物中毒死亡事件，究其原因主要是宠物食品中添加了三聚氰胺，三聚氰胺在高温下可分解产生氰化物，动物食用后可发生肾衰竭并导致死亡。 2008 年 9 月份在我国出现的多例婴幼儿泌尿系统结石病例，调查发现是患儿食用的奶粉中含有三聚氰胺。目前，国家于 2008 年制定了 “原料乳与乳制品中三聚氰胺准检验方法” (GB/T22388-2008)。该标准规定了原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的三种测定方法，即高效液相色谱法 (HPLC)、液相色谱 - 质谱 / 质谱法 (LC-MS/MS) 和气相色谱 - 质谱联用法 [ 包括气相色谱 - 质谱法 (GC-MS)，气相色谱 - 质谱 / 质谱法 (GC-MS/MS)]。该方法适用于专业检测机构的标准分析。对于小型农贸市场、农村集市等还难以达到该检测水平。
     为了适应非专业机构或现场快速检测的需求，出现了试剂盒、速测卡等三聚氰胺的快速检测方法。
     ① 美国 abraxis 公司研制了三聚氰胺检测试剂盒。该试剂盒的原理为竞争 ELISA。利用萃取液通过均质及振荡的方式提取样品中的三聚氰胺进行免疫测定。将三聚氰胺 HRP 标记物、标样及样品提取液加入包被三聚氰胺抗体的试验孔中孵育。在 30 分钟的孵育过程中，样品中的三聚氰胺与 HRP 标记物竞争结合三聚氰胺抗体。孵育完后，倾去孔内液体，洗涤除去未结合的三聚氰胺和 HRP 标记物。每孔加入清澈的底物溶液，结合的酶标记物将无色的底物转化为蓝色的物质。孵育 20 分钟后终止反应，读取各孔 OD 值。比较未知样品的 OD 值与标样的 OD 值，就可计算出样品中的三聚氰胺浓度。
     ②中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所的专利技术 “一种检测三聚氰胺的直接竞争法酶联免疫试剂盒” ( 专利号：200710179475.1 大中小 )。该发明公开了一种检测三聚氰胺的直接竞争法酶联免疫检测试剂盒。本发明所提供的三聚氰胺的酶联免疫试剂盒包括三聚氰胺特异性抗体包被的酶标板、酶标记三聚氰胺。本发明的检测三聚氰胺的酶联免疫试剂盒灵敏、快速、准确，主要用于大批样品的筛查；盒中的主要试剂均以工作液的形式提供，使用方便，具有高特异性、高灵敏性、高精确性、高准确性等特点，可快速检测饲料及畜产品中残留的三聚氰胺。
     ③李吴；邹潮；饶平凡于 2009 年申请了专利技术 “一种三聚氰胺快速检测试剂盒” ( 申请号：200920138140.X)。该专利公开了一种食品、饲料等中三聚氰胺现场快速检测的试剂盒，由 8 微孔试剂条、样品吸取管、样品处理管、分别装有三聚氰胺标准
     溶液、稀释 / 清洗液、三聚氰胺浓缩酶标记物、底物溶液和反应终止液的塑料滴剂瓶、分别装有样品处理 A 液和样品处理 B 液的塑料平头盖瓶组成。其检测原理主要是利用酶标物与样品中的三聚氰胺进行竞争性的抗原与抗体的特异性免疫反应。在整个反应当中，样品三聚氰胺残留量越大便会消耗越多酶标记物，反应中酶标记物催化底物的呈色就会越淡，通过与标准孔对照即可判断三聚氰胺含量。本实用新型采用液滴计数的方式检测，检测方法快捷、准确、重现性好，可避免使用移液器，可广泛用于实验室及现场的三聚氰胺检测。
     ④ 马义才于 2008 年申请了专利 “三聚氰胺快速检测试剂盒” ( 申请号： 200820140824.9)。该剂盒包括塑料壳体、三聚氰胺检测试条和一个附在试剂盒体上的取样吸管。塑料壳体分为前、后两部分。前面部分其上表面下陷形成配放取样吸管凹槽，槽口附有塑料封皮以防试剂盒运输中取样吸管掉落。后面部分包括上、下盖，上盖上开有加样孔、检测显示窗和安装标识孔。后面部分其下盖内部设有试条凹槽，试条安装在该凹槽中。试条顺次设有样品垫、玻璃纤维膜结合垫、具有检测带和质控带的硝酸纤维素膜、强吸水垫和安装标志纸签。试条的玻璃纤维膜结合垫设有胶体金标记的抗三聚氰胺单抗和兔抗体，质控带设有羊抗兔多克隆抗体，检测带设有三聚氰胺抗原。 ⑤广东省疾病预防控制中心于 2008 年申请了专利 “食品或饲料中三聚氰胺掺杂的快速检测方法及其试剂盒” ( 申请号：200810218602.9)。该发明公开了食品或饲料中三聚氰胺掺杂的快速检测方法及其试剂盒。包括如下步骤：(1) 除去待测样品中的大部分蛋白质；(2) 除去上清液中残留的微量蛋白质制得供试液；(3) 结晶反应和结果判断：往供试液中加入三硝基苯酚的饱和水溶液，静置；当供试液中含有三聚氰胺，加入三硝基苯酚的饱和水溶液，静置后将可观察到试管中析出针束状晶体；不含三聚氰胺的供试液无析出物。试剂盒包括如下试剂：甲醇、质量百分数 10％的三氯乙酸溶液、三硝基苯酚的饱和水溶液。
     ⑥赵为武、唐国林于 2009 年申请了专利：“三聚氰胺检测卡” ( 专利号： 200920132392)。该检测卡包括检测卡座、检测卡盖和试纸条，本实用新型由于在检测卡座内的两端分别设计有与试纸条匹配的能紧密卡紧试纸条的卡槽，当试纸条放置在两卡槽之间时能固定住试纸条后，检测卡座与检测卡盖通过对称的检测卡座内的座扣接件和检测卡盖内的盖扣接件扣接在一起，试纸条比滴样孔和观察孔稍宽并能通过滴样孔和观察孔对外显示，当将溶解或混合了待测样品的试剂液滴入滴样孔内的试纸条上后，混合试液与试纸条内的一种生化物质反应后的反应复合物沿试纸条上的纤维膜向前扩散，当遇到另一种生化物时能在观察孔内观察到的试纸条上沉淀有色线，并与同样能在观察孔内观察到的试纸条上的对照色线比较，从而判断待测样品中的三聚氰胺是否超标。
     ⑦吴小平、江海洋、王战辉等于 2009 年申请了专利 “一种检测三聚氰胺的检测卡”( 申请号：CN200920108885.1)，该实用新型公开了一种检测三聚氰胺的检测卡。本实用新型包括底板、滤膜、反应膜、样品垫、结合物释放垫和吸水垫；底板 (1) 分为加样区、反应膜设置区和吸水垫设置区；反应膜 (2) 设于反应膜设置区上；加样区上，靠近反应膜设置区处设有结合物释放垫 (5)，远离反应膜设置区处设有滤膜 I(3) ；滤膜 I 上设有样品垫 (4) ；样品垫上设有滤膜 II(7) ；滤膜 II 上设有滤膜 III(8) ；吸水垫设置区上设有吸水垫 (6) ；反应区上设有 T 线 (9) 和 C 线 (10)，T 线包被三聚氰胺特异性抗体，C
     线包被载体蛋白抗体；结合物释放垫上包被胶体金标记的三聚氰胺 - 载体蛋白偶联物。
     ⑧冯才茂、冯才伟、何方洋、万宇平、汪善良、赵正苗等于 2009 年申请了专利技术 “三聚氰胺试纸”( 申请号：200810240316)。该发明公开了一种检测三聚氰胺的方法及其专用试纸。该试纸包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜和吸水垫，其依次连接；所述结合物释放垫上包被有胶体金标记的三聚氰胺特异性抗体；所述三聚氰胺特异性抗体为三聚氰胺多克隆抗体或三聚氰胺单克隆抗体；所述反应膜上包括检测区和质控区，检测区包被有半抗原和载体蛋白的偶联物，质控区包被有抗抗体。
     ⑨孙远明、雷红涛、杨金易、沈玉栋、宋利军、王弘、徐晓艳、张挺等申请了专利 “三聚氰胺快速检测试纸”( 申请号：200920052831.8)。该专利公开了一种三聚氰胺检测试纸，包括底板、样品垫、金垫、检测膜和吸水垫；所述样品垫、金垫、检测膜和吸水垫依次粘贴在底板上；所述检测膜上包被有三聚氰胺抗体，同时包被有抗三聚氰胺抗体的抗体作为参考。本实用新型可以快速检测样品溶液中三聚氰胺的含量，操作简单、快速，5 分钟即可观察结果。本实用新型适合于质监、工商等单位对乳品、饲料中的三聚氰胺进行快速检测。
     二种速测卡和二种试纸的检测反应原理均涉及酶反应或免疫反应，造价高、保质期有限。发明内容
     本发明旨在提供一种使用方法简便，检测速度快 (5 分钟即可观察结果 )、生产成本低的试纸。该试纸在检测反应的原理和试剂等方面与前述各类检测方法完全不同，尤其是它以定量试纸为载体制成，配合价格低廉的常规市售化学试剂使用。不需其它特殊试剂和仪器，不需专业人员和专业检测技术，可以在家庭、市场等场所完成检测。
     三聚氰胺试纸的制备方法，具体步骤如下：
     (1) 将茜素红、亚甲基蓝、十二烷基硫酸钠配制成水溶液，水溶液中各物质的浓度：茜素红 0.0167mol/L，亚甲基蓝 2.10×10-5mol/L，十二烷基硫酸钠 0.015mol/L ；
     (2) 将滤纸浸于步骤 (1) 所述的水溶液中，取出，晾干；剪成条，制得三聚氰胺试纸。
     使用时，将 EDTA 固体粉末加入到待检测的牛奶或奶粉调制的奶液中，加热微沸 5min ；摇匀，静置沉降；将一条试纸浸入奶液上清液中，润湿后提出，若不含有三聚氰胺，试纸呈现淡绿色；若含有三聚氰胺，试纸就会出现粉色，并随着三聚氰胺的浓度的增大，粉色逐渐加深。
     在检测奶粉时，奶粉和 EDTA 的质量比为 8 ∶ 1，奶粉和水的体积比为 1 ∶ 8。
     以上用量比例仅仅是一种较佳的选择，但是 EDTA 用量应视奶粉或牛奶的种类而做适当的增减，适当多加不影响测定。
     可以配套设置比色卡，将试纸条和标准比色卡的进行颜色对比。
     本发明要求保护利用上述方法所制得的三聚氰胺试纸。
     本发明还要求保护三聚氰胺的检测方法：
     (1) 将茜素红、亚甲基蓝、十二烷基硫酸钠配制成水溶液，溶液中各物质的浓度：茜素红 0.0167mol/L，亚甲基蓝 2.10×10-5mol/L，十二烷基硫酸钠 0.015mol/L ；(2) 将滤纸浸于该溶液中，取出，晾干；剪成条，制得三聚氰胺试纸；
     (3) 将 EDTA 固体粉末加入到待检测的牛奶或奶粉调制的奶液中；用于检测奶粉时，奶粉和 EDTA 的质量比为 8 ∶ 1，奶粉和水的体积比为 1 ∶ 8 ；
     摇匀，静置沉降；将一条试纸浸入奶液上清液中，润湿后提出，若不含有三聚氰胺，试纸呈现淡绿色；若含有三聚氰胺，试纸就会出现粉色，并随着三聚氰胺的浓度的增大，粉色逐渐加深。
     可以配套设置比色卡，将三聚氰胺试纸条和标准比色卡的进行颜色对比。
     附图说明
     图 1 为采用分光光度法测定的奶液中三聚氰胺的标准工作曲线。测定波长为525nm。具体实施方式
     三聚氰胺加标对照实验检测与分析，所用仪器为上海精密仪器有限公司生产的 UV762 紫外 / 可见分光度计。 1. 含三聚氰胺标准牛奶上清液的配制方法：
     准确称取 3.2000g 市售奶粉 8 份 ( 完达山牌加锌奶粉，黑龙江省完达山乳业股份有限公司，产品标准号：Q/WDS 001，生产日期：2010 年 9 月 11 日 )，于小烧杯中，加入沸水使之溶解，分别加入 0、0.0100、0.0200、0.0300、0.0400、0.0500、0.0600、 0.0800g 三聚氰胺，并均加入 0.4000g EDTA，加热微沸 5min，静置，沉降，过滤，并用热蒸馏水洗涤难溶物，收集滤液于 100mL 容量瓶中，加水定容。得到 1 → 8 号含三聚氰胺的标准牛奶上清液，三聚氰胺的浓度分别为 0、0.1000、0.2000、0.3000、0.4000、0.5000、 0.6000、0.8000g/L。
     2. 奶液中三聚氰胺标准曲线的绘制：
     分别移取上述 1 → 8 号标准牛奶上清液 1.00mL 于 8 支 10mL 比色管中，加入 0.80mL 7×10-3mol/L 的茜素红，0.50mL 0.1000mol/L 的十二烷基硫酸钠，0.70mL 1.000×10-4mol/L 的亚甲基蓝，加水定容。转移至 1cm 比色皿中，以 1 号试液为空白，以 525nm 为测定波长，测定 2 → 8 号溶液的吸光度。
     以三聚氰胺的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准工作曲线 ( 附图 1)。对此实验数据进行线性回归处理，得到线性回归方程为 A ＝ 12.5c(g/L)-0.122，相关系数 R2 ＝ 0.994。按此线性回归方程计算牛奶样品中三聚氰胺含量时，应按下式进行换算：C 样＝ C 测 ×10。
     试纸法测定奶粉中三聚氰胺的实验：
     用自制三聚氰胺试纸检验 6 号牛奶上清液 ( 三聚氰胺标准加入量 0.5g/L)，与标准比色卡对比，其颜色与浓度为 0.6g/L 的比色卡相近；按同样的方法，用试纸检验 7 号牛奶上清液 ( 三聚氰胺标准加入量 0.6g/L)，其颜色与浓度为 0.8g/L 的比色卡相近。表明试纸检验法基本可靠。

资源描述

《三聚氰胺试纸及其制备方法以及三聚氰胺的检测方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《三聚氰胺试纸及其制备方法以及三聚氰胺的检测方法.pdf（7页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。

1、(10)申请公布号 CN 102023159 A (43)申请公布日 2011.04.20 CN 102023159 A *CN102023159A* (21)申请号 201010563601.5 (22)申请日 2010.11.29 G01N 21/78(2006.01) (71)申请人辽宁师范大学地址 116028 辽宁省大连市沙河口区黄河路 794 号 (72)发明人赫春香李翱楠刘洋 (74)专利代理机构大连东方专利代理有限责任公司 21212 代理人胡景波 (54) 发明名称三聚氰胺试纸及其制备方法以及三聚氰胺的检测方法 (57) 摘要三聚氰胺试纸及其制备方法以及。

2、三聚氰胺的检测方法，将茜素红、亚甲基蓝、十二烷基硫酸钠配制成水溶液，水溶液中各物质的浓度：茜素红 0.0167mol/L，亚甲基蓝 2.1010-5mol/L，十二烷基硫酸钠 0.015mol/L ；再滤纸浸于上述水溶液中，取出，晾干；剪成条，制得三聚氰胺试纸。使用时，将 EDTA 固体粉末加入到待检测的牛奶或奶粉调制的奶液中；摇匀，加热微沸 5min，静置沉降；将一条试纸浸入奶液上清液中，润湿后提出。本发明具备使用方法简便，检测速度快的优点。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权。

3、利要求书 1 页说明书 4 页附图 1 页 CN 102023173 A1/1 页 2 1. 三聚氰胺试纸的制备方法，具体步骤如下： (1) 将茜素红、亚甲基蓝、十二烷基硫酸钠配制成水溶液，水溶液中各物质的浓度：茜素红 0.0167mol/L，亚甲基蓝 2.1010-5mol/L，十二烷基硫酸钠 0.015mol/L ； (2) 将滤纸浸于步骤 (1) 所述的水溶液中，取出，晾干；剪成条，制得三聚氰胺试纸。 2. 三聚氰胺试纸，是按照下述步骤制备的： (1) 将茜素红、亚甲基蓝、十二烷基硫酸钠配制成水溶液，水溶液中各物质的浓度：茜素红 0.0167mol/L，亚甲基蓝 2.。

4、1010-5mol/L，十二烷基硫酸钠 0.015mol/L ； (2) 将滤纸浸于步骤 (1) 所述的水溶液中，取出，晾干；剪成条，制得三聚氰胺试纸。 3. 三聚氰胺的检测方法，具体步骤如下： (1) 将茜素红、亚甲基蓝、十二烷基硫酸钠配制成水溶液，溶液中各物质的浓度：茜素红 0.0167mol/L，亚甲基蓝 2.1010-5mol/L，十二烷基硫酸钠 0.015mol/L ； (2) 将滤纸浸于该溶液中，取出，晾干；剪成条，制得三聚氰胺试纸； (3)将EDTA固体粉末加入到待检测的牛奶或由奶粉调制的奶液中；摇匀，加热微沸 5min，静置沉降；将一条试纸浸入奶液上清液中，润。

5、湿后提出，若不含有三聚氰胺，试纸呈现淡绿色；若含有三聚氰胺，试纸就会出现粉色，并随着三聚氰胺浓度的增大，粉色逐渐加深。 4. 如权利要求 3 所述的检测方法，其特征在于：所述的由奶粉调制的奶液中是将奶粉和水以 1 8 的体积比调制而得；步骤 (3) 中 EDTA 的加入量是奶粉质量的 1/8。权利要求书 CN 102023159 A CN 102023173 A1/4 页 3 三聚氰胺试纸及其制备方法以及三聚氰胺的检测方法技术领域 0001 本发明属于分析检测技术，用于食品安全的检测。背景技术 0002 三聚氰胺 (melamine) 简称三胺，又称蜜胺、三聚氰酰胺、。

6、氰脲三酰胺，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，其含氮量高达 66。三聚氰胺为纯白色单斜楞晶体，无味，由于食品工业传统的蛋白质含量测定方法不能测知氮的种类，因三聚氰胺含氮很高，常被不法商人作为食品添加剂，以冒充食品中的蛋白质，因此三聚氰胺也被称为 “蛋白精”。 2007 年 3 月美国发生的多起猫、狗等宠物中毒死亡事件，究其原因主要是宠物食品中添加了三聚氰胺，三聚氰胺在高温下可分解产生氰化物，动物食用后可发生肾衰竭并导致死亡。 2008 年 9 月份在我国出现的多例婴幼儿泌尿系统结石病例，调查发现是患儿食用的奶粉中含有三聚氰胺。目前，国家于 2008 年制定了 “原料乳与乳制品中。

7、三聚氰胺准检验方法” (GB/T22388-2008)。该标准规定了原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的三种测定方法，即高效液相色谱法 (HPLC)、液相色谱 - 质谱 / 质谱法 (LC-MS/MS)和气相色谱-质谱联用法包括气相色谱-质谱法(GC-MS)，气相色谱-质谱 / 质谱法 (GC-MS/MS)。该方法适用于专业检测机构的标准分析。对于小型农贸市场、农村集市等还难以达到该检测水平。 0003 为了适应非专业机构或现场快速检测的需求，出现了试剂盒、速测卡等三聚氰胺的快速检测方法。 0004 美国 abraxis 公司研制了三聚氰胺检测试剂盒。该试剂盒的原理为竞争 E。

8、LISA。利用萃取液通过均质及振荡的方式提取样品中的三聚氰胺进行免疫测定。将三聚氰胺HRP标记物、标样及样品提取液加入包被三聚氰胺抗体的试验孔中孵育。在30分钟的孵育过程中，样品中的三聚氰胺与 HRP 标记物竞争结合三聚氰胺抗体。孵育完后，倾去孔内液体，洗涤除去未结合的三聚氰胺和 HRP 标记物。每孔加入清澈的底物溶液，结合的酶标记物将无色的底物转化为蓝色的物质。孵育 20 分钟后终止反应，读取各孔 OD 值。比较未知样品的 OD 值与标样的 OD 值，就可计算出样品中的三聚氰胺浓度。 0005 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所的专利技术 “一种检测三聚氰胺的。

9、直接竞争法酶联免疫试剂盒” ( 专利号：200710179475.1 大中小 )。该发明公开了一种检测三聚氰胺的直接竞争法酶联免疫检测试剂盒。本发明所提供的三聚氰胺的酶联免疫试剂盒包括三聚氰胺特异性抗体包被的酶标板、酶标记三聚氰胺。本发明的检测三聚氰胺的酶联免疫试剂盒灵敏、快速、准确，主要用于大批样品的筛查；盒中的主要试剂均以工作液的形式提供，使用方便，具有高特异性、高灵敏性、高精确性、高准确性等特点，可快速检测饲料及畜产品中残留的三聚氰胺。 0006 李吴；邹潮；饶平凡于 2009 年申请了专利技术“一种三聚氰胺快速检测试剂盒” ( 申请号：20092013814。

10、0.X)。该专利公开了一种食品、饲料等中三聚氰胺现场快速检测的试剂盒，由 8 微孔试剂条、样品吸取管、样品处理管、分别装有三聚氰胺标准说明书 CN 102023159 A CN 102023173 A2/4 页 4 溶液、稀释 / 清洗液、三聚氰胺浓缩酶标记物、底物溶液和反应终止液的塑料滴剂瓶、分别装有样品处理 A 液和样品处理 B 液的塑料平头盖瓶组成。其检测原理主要是利用酶标物与样品中的三聚氰胺进行竞争性的抗原与抗体的特异性免疫反应。在整个反应当中，样品三聚氰胺残留量越大便会消耗越多酶标记物，反应中酶标记物催化底物的呈色就会越淡，通过与标准孔对照即可判断三聚氰胺含量。。

11、本实用新型采用液滴计数的方式检测，检测方法快捷、准确、重现性好，可避免使用移液器，可广泛用于实验室及现场的三聚氰胺检测。 0007 马义才于 2008 年申请了专利 “三聚氰胺快速检测试剂盒” ( 申请号： 200820140824.9)。该剂盒包括塑料壳体、三聚氰胺检测试条和一个附在试剂盒体上的取样吸管。塑料壳体分为前、后两部分。前面部分其上表面下陷形成配放取样吸管凹槽，槽口附有塑料封皮以防试剂盒运输中取样吸管掉落。后面部分包括上、下盖，上盖上开有加样孔、检测显示窗和安装标识孔。后面部分其下盖内部设有试条凹槽，试条安装在该凹槽中。试条顺次设有样品垫、玻璃纤维膜结合。

12、垫、具有检测带和质控带的硝酸纤维素膜、强吸水垫和安装标志纸签。试条的玻璃纤维膜结合垫设有胶体金标记的抗三聚氰胺单抗和兔抗体，质控带设有羊抗兔多克隆抗体，检测带设有三聚氰胺抗原。 0008 广东省疾病预防控制中心于 2008 年申请了专利“食品或饲料中三聚氰胺掺杂的快速检测方法及其试剂盒”( 申请号：200810218602.9)。该发明公开了食品或饲料中三聚氰胺掺杂的快速检测方法及其试剂盒。包括如下步骤：(1) 除去待测样品中的大部分蛋白质；(2) 除去上清液中残留的微量蛋白质制得供试液；(3) 结晶反应和结果判断：往供试液中加入三硝基苯酚的饱和水溶液，静置；当。

13、供试液中含有三聚氰胺，加入三硝基苯酚的饱和水溶液，静置后将可观察到试管中析出针束状晶体；不含三聚氰胺的供试液无析出物。试剂盒包括如下试剂：甲醇、质量百分数 10的三氯乙酸溶液、三硝基苯酚的饱和水溶液。 0009 赵为武、唐国林于 2009 年申请了专利：“三聚氰胺检测卡” ( 专利号： 200920132392)。该检测卡包括检测卡座、检测卡盖和试纸条，本实用新型由于在检测卡座内的两端分别设计有与试纸条匹配的能紧密卡紧试纸条的卡槽，当试纸条放置在两卡槽之间时能固定住试纸条后，检测卡座与检测卡盖通过对称的检测卡座内的座扣接件和检测卡盖内的盖扣接件扣接在一起，试纸条比滴样孔。

14、和观察孔稍宽并能通过滴样孔和观察孔对外显示，当将溶解或混合了待测样品的试剂液滴入滴样孔内的试纸条上后，混合试液与试纸条内的一种生化物质反应后的反应复合物沿试纸条上的纤维膜向前扩散，当遇到另一种生化物时能在观察孔内观察到的试纸条上沉淀有色线，并与同样能在观察孔内观察到的试纸条上的对照色线比较，从而判断待测样品中的三聚氰胺是否超标。 0010 吴小平、江海洋、王战辉等于 2009 年申请了专利 “一种检测三聚氰胺的检测卡”( 申请号：CN200920108885.1)，该实用新型公开了一种检测三聚氰胺的检测卡。本实用新型包括底板、滤膜、反应膜、样品垫、结合物释放垫和吸水垫；底板。

15、(1) 分为加样区、反应膜设置区和吸水垫设置区；反应膜 (2) 设于反应膜设置区上；加样区上，靠近反应膜设置区处设有结合物释放垫 (5)，远离反应膜设置区处设有滤膜 I(3) ；滤膜 I 上设有样品垫 (4) ；样品垫上设有滤膜 II(7) ；滤膜 II 上设有滤膜 III(8) ；吸水垫设置区上设有吸水垫 (6) ；反应区上设有 T 线 (9) 和 C 线 (10)，T 线包被三聚氰胺特异性抗体，C 说明书 CN 102023159 A CN 102023173 A3/4 页 5 线包被载体蛋白抗体；结合物释放垫上包被胶体金标记的三聚氰胺 - 载体蛋白偶联物。 0011 冯。

16、才茂、冯才伟、何方洋、万宇平、汪善良、赵正苗等于 2009 年申请了专利技术“三聚氰胺试纸”( 申请号：200810240316)。该发明公开了一种检测三聚氰胺的方法及其专用试纸。该试纸包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜和吸水垫，其依次连接；所述结合物释放垫上包被有胶体金标记的三聚氰胺特异性抗体；所述三聚氰胺特异性抗体为三聚氰胺多克隆抗体或三聚氰胺单克隆抗体；所述反应膜上包括检测区和质控区，检测区包被有半抗原和载体蛋白的偶联物，质控区包被有抗抗体。 0012 孙远明、雷红涛、杨金易、沈玉栋、宋利军、王弘、徐晓艳、张挺等申请了专利“三聚氰胺快速检测试纸”( 申请号：。

17、200920052831.8)。该专利公开了一种三聚氰胺检测试纸，包括底板、样品垫、金垫、检测膜和吸水垫；所述样品垫、金垫、检测膜和吸水垫依次粘贴在底板上；所述检测膜上包被有三聚氰胺抗体，同时包被有抗三聚氰胺抗体的抗体作为参考。本实用新型可以快速检测样品溶液中三聚氰胺的含量，操作简单、快速，5分钟即可观察结果。本实用新型适合于质监、工商等单位对乳品、饲料中的三聚氰胺进行快速检测。 0013 二种速测卡和二种试纸的检测反应原理均涉及酶反应或免疫反应，造价高、保质期有限。发明内容 0014 本发明旨在提供一种使用方法简便，检测速度快 (5 分钟即可观察结果 )、生产成本低的。

18、试纸。该试纸在检测反应的原理和试剂等方面与前述各类检测方法完全不同，尤其是它以定量试纸为载体制成，配合价格低廉的常规市售化学试剂使用。不需其它特殊试剂和仪器，不需专业人员和专业检测技术，可以在家庭、市场等场所完成检测。 0015 三聚氰胺试纸的制备方法，具体步骤如下： 0016 (1) 将茜素红、亚甲基蓝、十二烷基硫酸钠配制成水溶液，水溶液中各物质的浓度：茜素红 0.0167mol/L，亚甲基蓝 2.1010-5mol/L，十二烷基硫酸钠 0.015mol/L ； 0017 (2) 将滤纸浸于步骤 (1) 所述的水溶液中，取出，晾干；剪成条，制得三聚氰胺试纸。 0018 使用。

19、时，将 EDTA 固体粉末加入到待检测的牛奶或奶粉调制的奶液中，加热微沸 5min ；摇匀，静置沉降；将一条试纸浸入奶液上清液中，润湿后提出，若不含有三聚氰胺，试纸呈现淡绿色；若含有三聚氰胺，试纸就会出现粉色，并随着三聚氰胺的浓度的增大，粉色逐渐加深。 0019 在检测奶粉时，奶粉和 EDTA 的质量比为 8 1，奶粉和水的体积比为 1 8。 0020 以上用量比例仅仅是一种较佳的选择，但是 EDTA 用量应视奶粉或牛奶的种类而做适当的增减，适当多加不影响测定。 0021 可以配套设置比色卡，将试纸条和标准比色卡的进行颜色对比。 0022 本发明要求保护利用上述方法所制得的三聚氰胺。

20、试纸。 0023 本发明还要求保护三聚氰胺的检测方法： 0024 (1) 将茜素红、亚甲基蓝、十二烷基硫酸钠配制成水溶液，溶液中各物质的浓度：茜素红 0.0167mol/L，亚甲基蓝 2.1010-5mol/L，十二烷基硫酸钠 0.015mol/L ；说明书 CN 102023159 A CN 102023173 A4/4 页 6 0025 (2) 将滤纸浸于该溶液中，取出，晾干；剪成条，制得三聚氰胺试纸； 0026 (3)将EDTA固体粉末加入到待检测的牛奶或奶粉调制的奶液中；用于检测奶粉时，奶粉和 EDTA 的质量比为 8 1，奶粉和水的体积比为 1 8 ； 0027 。

21、摇匀，静置沉降；将一条试纸浸入奶液上清液中，润湿后提出，若不含有三聚氰胺，试纸呈现淡绿色；若含有三聚氰胺，试纸就会出现粉色，并随着三聚氰胺的浓度的增大，粉色逐渐加深。 0028 可以配套设置比色卡，将三聚氰胺试纸条和标准比色卡的进行颜色对比。 0029 附图说明 0030 图 1 为采用分光光度法测定的奶液中三聚氰胺的标准工作曲线。测定波长为 525nm。具体实施方式 0031 三聚氰胺加标对照实验检测与分析，所用仪器为上海精密仪器有限公司生产的 UV762 紫外 / 可见分光度计。 0032 1. 含三聚氰胺标准牛奶上清液的配制方法： 0033 准确称取 3.2000g 市售奶。

22、粉 8 份 ( 完达山牌加锌奶粉，黑龙江省完达山乳业股份有限公司，产品标准号：Q/WDS 001，生产日期：2010 年 9 月 11 日 )，于小烧杯中，加入沸水使之溶解，分别加入 0、0.0100、0.0200、0.0300、0.0400、0.0500、0.0600、 0.0800g三聚氰胺，并均加入0.4000g EDTA，加热微沸5min，静置，沉降，过滤，并用热蒸馏水洗涤难溶物，收集滤液于100mL容量瓶中，加水定容。得到18号含三聚氰胺的标准牛奶上清液，三聚氰胺的浓度分别为 0、0.1000、0.2000、0.3000、0.4000、0.5000、 0.6000、0.8。

23、000g/L。 0034 2. 奶液中三聚氰胺标准曲线的绘制： 0035 分别移取上述 1 8 号标准牛奶上清液 1.00mL 于 8 支 10mL 比色管中，加入 0.80mL 710-3mol/L 的茜素红，0.50mL 0.1000mol/L 的十二烷基硫酸钠，0.70mL 1.00010-4mol/L 的亚甲基蓝，加水定容。转移至 1cm 比色皿中，以 1 号试液为空白，以 525nm 为测定波长，测定 2 8 号溶液的吸光度。 0036 以三聚氰胺的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准工作曲线 ( 附图 1)。对此实验数据进行线性回归处理，得到线性回归方程为 A 。

24、12.5c(g/L)-0.122，相关系数 R2 0.994。按此线性回归方程计算牛奶样品中三聚氰胺含量时，应按下式进行换算：C样 C测10。 0037 试纸法测定奶粉中三聚氰胺的实验： 0038 用自制三聚氰胺试纸检验 6 号牛奶上清液 ( 三聚氰胺标准加入量 0.5g/L)，与标准比色卡对比，其颜色与浓度为 0.6g/L 的比色卡相近；按同样的方法，用试纸检验 7 号牛奶上清液 ( 三聚氰胺标准加入量 0.6g/L)，其颜色与浓度为 0.8g/L 的比色卡相近。表明试纸检验法基本可靠。说明书 CN 102023159 A CN 102023173 A1/1 页 7 图 1 说明书附图 CN 102023159 A 。

展开阅读全文