一种水中痕量a-萘乙酸的测定方法 【技术领域】
本发明属于分析技术领域，具体涉及一种水中痕量a-萘乙酸的测定方法。
背景技术
萘乙酸是一类新型的植物生长调节剂，英文通用名为naphthalene aceticacid(NAA)，化学名称为2-(1-萘基)乙酸(IUPAC)、1-萘乙酸、萘乙酸等。萘乙酸的分子式为C12H10O2，分子量为186.21。萘乙酸有α型β型两种，其中以α型的活力较强作用较广。它的纯品为白色无臭无味针状晶体，熔点为130度，易溶于甲醇、乙腈、三氯甲烷、乙醚、丙酮等有机溶剂，几乎不溶于冷水(24度时水中溶解度为0.24g/L)，易溶于热水。当萘乙酸遇碱时能够生成盐；其钾盐、钠盐均可溶于水，且活力保持不变。
萘乙酸亦属对人、畜具有低毒的植物生长调节剂。它对皮肤或黏膜有刺激作用；也能经过食道等引起中毒，急性中毒可见肝、肾损害。萘乙酸的毒性为大鼠急性经口LD50约1.0～5.9g/kg，兔急性经暮LD50大于5.0g/kg，长时间接触对兔皮肤有中等刺激，对兔眼睛有强烈刺激。另外，H.Alson Moye(1979)等人对萘乙酸在菠萝、柑橘中残留量做动态观察，发现萘乙酸在开花期喷洒需要14-30天后无法检出，而在采前喷洒则需要125-156天后无法检出。而且，外皮中残留量的消减时间远远短于果实内部。
目前对α-萘乙酸的分析方法有化学法、气相色谱法和高效液相色谱法、伏安分析法等。化学法不易排除杂质的干扰，而使测定结果出现较大误差；气相色谱法和液相色谱法灵敏度和准确度虽高，但仪器价格昂贵，且需多次萃取，过柱净化等手续，操作繁琐，不便快速分析。
【发明内容】
本发明要解决的技术问题是现有对α-萘乙酸的分析方法存在误差较大或操作繁琐、不便分析等技术问题，提供一种灵敏度高，再现性好，准确度高，取样量少，操作简便，方便快速的分析方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
本发明的水中痕量a-萘乙酸的测定方法，该方法是在羧甲基纤维素钠胶体存在的条件下，用荧光分光光度法测定水中痕量a-萘乙酸的浓度。
本发明的水中痕量a-萘乙酸的测定方法包括以下步骤：
(1)标准溶液的制作：
准确称取a-萘乙酸，70～90℃水浴溶解后定容中，配成1.0×10-5mol/L的a-萘乙酸标准溶液，准确称取羧甲基纤维素钠，80℃水浴溶解后定容配制成摩尔浓度为1.0×10-3mol/L的羧甲基纤维素钠标准溶液；
取至少5个容量瓶，分别加入0～2.0mL a-萘乙酸标准溶液，5个容量瓶中a-萘乙酸标准溶液的添加量呈梯度变化，分别向上述容量瓶中加入3.0mL摩尔浓度为1.0×10-3mol/L的羧甲基纤维素钠标准溶液和3.5mL乙醇，调节pH为7.5，以水稀释至刻度，摇匀，反应15min；
(2)标准溶液吸光度的测定及标准曲线的制作：
在固定激发波长223nm和发射波长335nm下，分别测定步骤(1)得到的反应液的相对荧光强度，以a-萘乙酸溶液的浓度为横坐标，以荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线；
(3)水样中a-萘乙酸的测定方法
将水样用0.40～0.50μm孔径的滤膜过滤以除去水样中的悬浮的微粒，取10mL容量瓶三个，加入1～5mL处理过的水样，分别加入1.0×10-5mol/L的a-萘乙酸标准溶液标液0.5mL，1.0mL，1.5mL，再加入羧甲基纤维素钠标准溶液3mL，乙醇3.5mL，用0.02mol/L NaOH调节pH＝7.5，反应15min，激发波长223nm和发射波长335nm下，测量体系的荧光强度，用标准曲线法测定α-萘乙酸含量。
本发明利用羧甲基纤维素钠能够增强α-萘乙酸荧光强度的性质，建立了一种利用胶束增敏荧光分光光度法测定水体系中α-萘乙酸含量的方法，该方法灵敏度高，再现性好，准确度高，取样量少，操作简便，方便快速分析。
【具体实施方式】
下面通过实施例对本发明作详细说明，但并不以任何方式限制本发明。
实施例1
1仪器及主要试剂
970CRT荧光分光光度计(上海分析仪器总厂)；
SYZ-A型石英亚沸高纯水蒸馏器(江苏省金坛县医用石英玻璃仪器厂)；
SHB-3循环水多用真空泵(郑州杜甫仪器厂)；
电热恒温水浴锅(北京市长风仪器仪表公司)。
α-萘乙酸(NAA，Sanland-chem International Inc)；
羧甲基纤维素钠(CMC，天津市福晨化学试剂厂)；
甲醇(天津市彪仕奇科技发展有限公司)；
乙醇(烟台市双双化工有限公司)；
异丙醇(郑州市化学试剂工厂)；
所有试剂均为分析纯，经检测无荧光杂质。
2标准溶液的配制
1.0×10-5mol/L NAA溶液：准确称取NAA0.0190g，80℃水浴溶解后定容于100mL容量瓶中，配成1.0×10-3mol/L的NAA储备液。取NAA储备液10mL，定容于100mL容量瓶中配成1.0×10-4mol/L的溶液，再从中移取10mL，定容于100mL容量瓶中，配成1.0×10-5mol/L的标准溶液。
1.0×10-3mol/L CMC溶液：准确称取CMC1.6950g，80℃水浴溶解后定容于100mL容量瓶中。
0.02mol/L NaOH溶液：准确称取NaOH 0.2000g，溶解后定容于250mL容量瓶中。
三酸混合缓冲液：
①准确称取磷酸0.2306g，溶解后定容于50mL容量瓶中，配成0.04mol/L磷酸溶液；
②准确称取硼酸0.1237g，溶解后定容于50mL容量瓶中，配成0.04mol/L硼酸溶液；
③准确称取乙酸0.3336g，溶解后定容于50mL容量瓶中，配成0.04mol/L乙酸溶液；
将上述溶液①②③混合均匀，配成三酸混合缓冲溶液，转移到试剂瓶中储存备用。
配制上述溶液用水均为二次石英亚沸蒸馏水。
3.检出限的测定与工作曲线的绘制
检测下限简称检出限，是指能以适当的置信度被检出的组分的最低浓度或最小质量(或最小物质的量)。
CL＝3S0/m
式中m为灵敏度即分析标准曲线在低浓度范围内的斜率；S0为空白标准偏差，空白指与待测样品组成完全一致但不含待测组分的样品。
根据国际应用于纯粹化学联合会(IUPAC)的规定，灵敏度的定义是指在浓度线性范围内校正曲线的斜率，各种方法的灵敏度可以通过测量一系列的标准溶液来求得。
取10mL容量瓶10个，分别加入CMC 3mL，乙醇3.5mL，调节pH＝7.5，以水稀释至刻度，摇匀，反应15min，分别固定激发波长223nm和发射波长335nm，测定体系的荧光强度，结果见表1。
表1标准溶液的荧光强度
空白标准偏差S0＝1.23，相对标准偏差为0.025。
分别移取0，0.3，0.6，0.9，1.2，1.5，1.8mL NAA溶液于10mL容量瓶中，加入3.0mL CMC标液，3.5mL乙醇，调节pH为7.5，以水稀释至刻度，摇匀，反应15min。固定激发波长223nm和发射波长335nm测量体系的荧光强度并做标准曲线如附图。根据标准曲线求得的斜率即灵敏度m＝1.05×108。可得该法对NAA的检出限CL＝3.51×10-8mol/L。
4西流湖水样样品分析
经过检测，水样中α-萘乙酸含量均为10-9mol/L以下数量级，低于本法检出限，故采用加标回收实验考察方法的可靠性。
将所取水样用0.45μm孔径地滤膜过滤以除去水样中的悬浮的微粒。取10mL容量瓶三个，加入2mL处理过的水样，分别加入1.0×10-5mol/L的NAA标液0.5mL，1.0mL，1.5mL，再加入CMC标液3mL，乙醇3.5mL，用0.02mol/LNaOH调节pH＝7.5，使体系处于最佳测定条件下，反应15min。使用970CRT荧光分光光度计，1.0cm石英比色皿，设置狭缝宽5nm/5nm，波长测量精度0.6nm，分别固定激发波长223nm和发射波长335nm，测量体系的荧光强度，用标准曲线法测定α-萘乙酸含量。测得的结果如表2所示。
实施例2
1仪器及主要试剂
所用仪器及试剂同实施例1。
2标准溶液的配制
1.0×10-5mol/L NAA溶液：准确称取NAA0.0190g，70℃水浴溶解后定容于100mL容量瓶中，配成1.0×10-3mol/L的NAA储备液。取NAA储备液10mL，定容于100mL容量瓶中配成1.0×10-4mol/L的溶液，再从中移取10mL，定容于100mL容量瓶中，配成1.0×10-5mol/L的标准溶液。
1.0×10-3mol/L CMC溶液：准确称取CMC1.6950g，70℃水浴溶解后定容于100mL容量瓶中。
0.02mol/L NaOH溶液：准确称取NaOH 0.2000g，溶解后定容于250mL容量瓶中。
三酸混合缓冲液：
①准确称取磷酸0.2306g，溶解后定容于50mL容量瓶中，配成0.04mol/L磷酸溶液；
②准确称取硼酸0.1237g，溶解后定容于50mL容量瓶中，配成0.04mol/L硼酸溶液；
③准确称取乙酸0.3336g，溶解后定容于50mL容量瓶中，配成0.04mol/L乙酸溶液；
将上述溶液①②③混合均匀，配成三酸混合缓冲溶液，转移到试剂瓶中储存备用。
配制上述溶液用水均为二次石英亚沸蒸馏水。
3.检出限的测定与工作曲线的绘制
方法同实施例1。
4熊耳河水样样品分析
经过检测，水样中α-萘乙酸含量均为10-9mol/L以下数量级，低于本法检出限，故采用加标回收实验考察方法的可靠性。
将所取水样用0.40μm孔径的滤膜过滤以除去水样中的悬浮的微粒。取10mL容量瓶三个，加入2mL处理过的水样，分别加入1.0×10-5mol/L的NAA标液0.5mL，1.0mL，1.5mL，再加入CMC标液3mL，乙醇3.5mL，用0.02mol/LNaOH调节pH＝7.5，使体系处于最佳测定条件下，反应15min。使用970CRT荧光分光光度计，1.0cm石英比色皿，设置狭缝宽5nm/5nm，波长测量精度0.6nm，分别固定激发波长223nm和发射波长335nm，测量体系的荧光强度，用标准曲线法测定α-萘乙酸含量。测得的结果如表2所示。
实施例3
1仪器及主要试剂
所用仪器及试剂同实施例1。
2标准溶液的配制
1.0×10-5mol/L NAA溶液：准确称取NAA0.0190g，90℃水浴溶解后定容于100mL容量瓶中，配成1.0×10-3mol/L的NAA储备液。取NAA储备液10mL，定容于100mL容量瓶中配成1.0×10-4mol/L的溶液，再从中移取10mL，定容于100mL容量瓶中，配成1.0×10-5mol/L的标准溶液。
1.0×10-3mol/L CMC溶液：准确称取CMC1.6950g，90℃水浴溶解后定容于100mL容量瓶中。
0.02mol/L NaOH溶液：准确称取NaOH 0.2000g，溶解后定容于250mL容量瓶中。
三酸混合缓冲液：
方法同实施例1。
3.检出限的测定与工作曲线的绘制
方法同实施例1。
4金水河水样样品分析
经过检测，水样中α-萘乙酸含量均为10-9mol/L以下数量级，低于本法检出限，故采用加标回收实验考察方法的可靠性。
将所取水样用0.50μm孔径的滤膜过滤以除去水样中的悬浮的微粒。取10mL容量瓶三个，加入2mL处理过的水样，分别加入1.0×10-5mol/L的NAA标液0.5mL，1.0mL，1.5mL，再加入CMC标液3mL，乙醇3.5mL，用0.02mol/LNaOH调节pH＝7.5，使体系处于最佳测定条件下，反应15min。使用970CRT荧光分光光度计，1.0cm石英比色皿，设置狭缝宽3nm/5nm，波长测量精度0.6nm，分别固定激发波长223nm和发射波长335nm，测量体系的荧光强度，用标准曲线法测定α-萘乙酸含量。测得的结果如表2所示。
实施例4
采用与实施例1相同的检测方法，测定八里沟水样中α-萘乙酸含量，测得的结果如表2所示。
实施例5
采用与实施例1相同的检测方法，测定东风渠水样中α-萘乙酸含量，测得的结果如表2所示。
表2样品分析结果