直接微量简便快速的全血免疫测试方法及工艺.pdf

本发明涉及一种直接微量简便快速的全血免疫测试技术。
    众所周知，当前采用的EIA、RIA、FIA等免疫测定技术都是用血清样本进行测试，需要抽取全血，待血清析出后，通过离心、分离，取出血清后才能进行。一般需要30～60分钟，也有的以滤纸取全血通过浸出后，再进行测试，这同样烦锁，在进行流行病学调查、鉴测时需要对大量人员进行普查，采取血清进行测试，使用器械多，分离时间长，很难在现场直接进行，给调查带来不少困难。在临床进行测试时给病人带来痛苦，而且需要早晨空腹抽血，等待血清析出后才能检测，最快也要一天才有检查报告，这样延长整个检测时间，另外到外地进行检测时携带使用保管都很不方便。虽然当前国内外已有供测试药盒，但未能提供直接用全血进行测试的技术和器材。

    本发明的的目的是克服上述不足之处，和根据医疗技术迫切要求而发明一种直接微量、简便快速的全血免疫测试技术。通常免疫测试技术是用血清进行检测的免疫反应（Ag-Ab反应）或其它能在固相载体（聚苯乙烯、聚乙烯、聚氯乙烯等塑料或纤维素、葡聚糖、琼脂糖等）上进行的反应，其参入反应的有效部分是通过载体的联接而发挥作用的，而采用全血快速直接反应时，其中红细胞纤维蛋白等非有效部分是不参入反应，它们的存在并不阻碍抗原、抗体等其它有效部分的反应，主要是通过血液凝固而干扰后续反应的进行，只要阻止血液凝固或除去凝块其反应就能在全血条件下照常进行本发明就是根据这一原理而设计的。

    本发明的直接快速的全血免疫测试方法如下：

    （1）将抗原、抗体及其它反应物在PH8.0，0.01MTris，HCl，3mM  KCl的缓冲体系中按2-20μg/ml浓度包被于聚苯乙烯等塑料反应板，膜、管、球上，室温反应两小时或4℃过夜取出，用NS洗一次在低于45℃时凉干放入装有干燥硅胶的塑料袋中，排气、扎紧、密封、保存。（37～39℃可以保存一个月以上无影响）便于邮寄和保管。

    2、用40孔、96孔、聚苯乙烯反应板和4×0.7Cm塑料管即在板的每孔和管中放入少量不影响结合反应的纤维物（如尼龙纤维或其它织物5～10mg）以便于血液地凝固和避免血块的粘附，然后每孔加100μl  NS，每管加0.5ml  NS，将血红蛋白吸管采吸的20μl全血样本放入或取手指头的全血一滴直接放入让被测物在血液的凝固的同时与载体上的反应物结合0.5～2小时后甩掉纤维，用NS溶液洗三次后，即进行跡踪的后续反应或放入盛有硅胶干燥的塑料袋中进行抽气、扎紧密封4℃保存，便于邮寄和携带。在盛夏置于室温中一个月以上不影造测试。如果被测物是血细胞或其中的组份可在孔管中不放纤维，溶液由NS改为DW（蒸馏水）即可。如果被测物是血液凝固中的物质，可在孔管中不加纤维，而加100μl或0.5ml的CID血液保存液即可。

    3、被测物的跡踪检测：将以上全血反应后经NS洗过三次的板或管，每孔放入100μl或每管放入0.2～0.5ml快速反应迹踪试剂在室温中反应5～15分钟后用NS洗甩三次后，每孔加OPD或TmB底物100μl（管加0.2～0.5ml）10～15分钟显色观察，在相应的492和590nM渡长下测定OD值与空白阴性、阳性对照比较进行判断。如果加其它的跡踪物如抗人ZgG-HRP、SPA-HRP等反应时间需延长很多。

    本发明的直接微量简便快速的全血免疫测试技术，适用于抗原抗体和其它活性物质的测试，便于到现场直接进行病疫防治和普查，应用范围广。并具有操作程序简单，检测速度快，经济效益高、准确性好，便于异地检查等特点，本发明的测试方法和工艺应用在血吸虫等病的普查、诊断、防治过程中，取得了显著的社会经济效益，减轻了防治人员的劳动强度和减轻了广大病人的痛苦，每天能对数百人进行检查，深受广大基层防治人员和人民群众欢迎。