人胎肝细胞库的制备方法.pdf

本发明涉及一种药品的保存方法，具体说来是人胎肝细胞库的制备方法。
    七十年代初就有人利用胎肝细胞治疗再生障碍性贫血，继后用于治疗白血病、急性放射性病等。据北京医科大学第一附属医院田庚善报道：《肝细胞移植在治疗各种肝病中的应用》（《国外医学》1988年，第三期，第124-127页）及上海第二医科大学重症肝炎研究室谢青综述《重症肝炎治疗新进展-胎肝细胞移植的研究》（《国外医学》1988年，第四期，第174-177页）报导中国目前利用胎肝细胞治疗重症肝炎。然而，胎肝细胞的制备不能超过12小时，需新鲜、立即使用。可是人流胎儿来源无定时，病人需要亦不可予计，因此，作为一种治疗药品缺少及时性、连续性、计划性及必要检查，给临床工作带来困难，所以迫切需肝细胞的储存，而目前肝细胞的制备采用机械磨碎法，细胞分散度不好，营养条件差，致使在制备过程中有较多死细胞，细胞团块也较大、较多，对病人地使用和保存不利。为了解决上述问题，可以采用本发明。本发明能提高细胞分散度、提高细胞的营养条件，解决临床使用及时、连续和计划性，并提高了安全性检查，从而利用本发明可以建立胎肝细胞库，能更大限度的挽救病人死亡，延续人的生命。

    本发明的胎肝细胞库的制备方法如下：（一）对需要中止妊娠16-22周的健康孕妇（体检、胸透、血常规及肝功能均正常）采用水囊引产或小刮宫引产（胎儿在宫内应存活、无畸形）所得胎儿;（二）血清检查应HBsAg及抗HBC（一）：具体做法是取腹腔或心血分离血清，检查HB sAg，抗HBC、AFP及必要的其他项目;（三）取出胎肝除去结缔组织及包膜、胆囊;（四）用生理盐水冲洗;（五）将肝组织剪碎，如剪成2～3mm;（六）加生理盐水洗去红血球;（七）加入胶原酶及透明脂酸酶;（八）恒温（例如：37℃）摇床消化，加入营养液每次10～50分钟，直至消化分散成单细胞;（九）再加入新鲜的营养液反复沉淀，洗去胶原酶制成10⁸10¹⁰细胞/ml，取样进行细胞活性及分散度检查等>必要时亦可进行其他带毒情况检查。具体做法是作无菌培养证明细菌及霉菌存在否，并用小鼠进行急性毒性试验合格者可冻存;（十）加入助冻液;（十一）放入液氮中保存。

    营养液成份：血清、胰岛素、氢化考的松

    助冻液成份：二甲基亚砜、血清蛋白、营养液