治疗皮肤病的新药物组合物 本发明涉及一种治疗皮肤病的新药物组合物，具体来说，它含有小牛血液的去蛋白透析液和氨基苷抗菌素作为活性成分。
众所周知，象烧伤、创伤、普通手术伤口、冻疮、褥疮、毛囊炎、脓疮病、擦烂、放射性溃疡、寻常痤疮或感染性湿疹性皮炎形成的红斑、肿胀、大疱、糜烂或溃疡的皮肤病，都与细菌感染有关。
在这些皮肤病的治疗中，已经开发使用了能够促进已坏死的组织再生和成纤维细胞增生的组织再生活性剂(Acta.Therapeutica Vol.10，107-115(1985))。尽管如此，人们已经指出它的缺点，即在治疗过程中这些活性剂不能适当地防止病灶的细菌感染。
另外，为了同一目的人们已经开发了含有抗菌素的局部使用的剂型，并且将其与适当的皮肤保护基质配制(Journal ofAntimicrobial Chemotherapy Vol.16，519-526(1985))。这些制剂部分能够实现防止病灶的细菌感染，但是，由于它们缺乏促进已坏死组织再生和成纤维细胞增生的能力，它们不能达到最佳的治疗。
本发明人希望有这种可能性，即如果把具有不同作用机理的两种药物结合配制成一种剂型，其中这两种成分的溶解度优于相同成分在用于治疗皮肤病如具有细菌感染可能性的烧伤的常用油膏或霜剂中的溶解度，这两种药物的协同作用能够更有效地使皮肤功能正常化。然后，本发明人进行了广泛的试验来开发一种可用于治疗皮肤病地药物组合物，该药物组合物能够促进组织再生，并且同时具有抗菌的活性；结果，发现小牛血液的去蛋白透析液和氨基苷抗菌素结合治疗皮肤病时，能够获得优良的治病效果，并且减少了急性皮肤病的出现。小牛血液的去蛋白透析液具有促进组织再生的能力，而该抗菌素具有抗菌活性，小牛血液的去蛋白透析液和氨基苷抗菌素的合用弥补了各自的缺陷。
所以，本发明的目的是提供用于治疗皮肤病的新药物组合物，它能通过显著的组织的再生作用和有效的抗菌作用达到一种快速的治疗效果，缩短治疗时间。
本发明提供了一种用于治疗皮肤病的新药物组合物，它含有小牛血液的去蛋白透析液和氨基苷抗菌素作为活性成分。
本发明组合物的组织再生成分-小牛血液的去蛋白透析液是不含蛋白的血液透析液，制备方法是，抽取发育完全的小牛网状内皮系统的血液，由特殊器官提取方法再生，用透析法除去全部蛋白。该去蛋白透析液以SolcoserylR(Solco Basle Ltd.，Swiss)的商标出售。众所周知该小牛血液的透析液包含有有机化合物如氨基酸，酮酸，含氧酸，脱氧核糖苷，嘌呤和未知多肽等以及无机化合物如Na，K，Ca，Fe，Co，P，氯化物和N，它能够增加细胞对氧的利用，并且促进已坏死组织的再生和成纤维组织和上皮组织的形成(Arzneim-Forsch(Durg Res.)Vol.15，750-754(1965)；VASABand Vol.2，81-83(1973))。
本发明组合物的细菌感染抑制成分氨基苷抗菌素包括硫酸新霉素，硫酸庆大霉素，硫酸小奴霉素，硫酸六胺卡那霉素，硫酸卡钠那霉素，硫酸妥布霉素，硫酸乙基紫苏霉素，硫酸双去氧卡那霉素，硫酸紫苏霉素或硫酸阿司米星，比较优选的是硫酸小奴霉素。
硫酸小奴霉素是一种对革兰氏阳性和阴性细菌如葡萄球菌，绿脓杆菌，变形杆菌，沙雷氏菌，大肠杆菌，肺炎杆菌，肠杆菌等具有广谱抗菌作用的氨基苷抗菌素，并且对耐各种抗菌素如卡那霉素的菌株引起的感染具有有效的杀菌活性，副作用相对较小(Chemotherapy Vol.25，1844-1850(1977)；ChemotherapyVol.25，1943-1951(1977))。
按照本发明，小牛血液的去蛋白透析液和氨基苷抗菌素一起给药的治疗效果强于各组分单独给药的治疗效果。特别是，本发明药物组合物中组分剂量的控制可以在促进组织再生的过程中平衡成纤维细胞的增生和上皮组织的形成，从而使疤痕变得最小。
按照本发明，小牛血液的去蛋白透析液和氨基苷抗菌素的优选含量相对于整个组合物分别是1～30w/w％和0.1-2w/w％。小牛血液的去蛋白透析液和氨基苷抗菌素更优选的含量相对于整个组合物分别是5-20w/w％和0.3-1w/w％。
本发明药物组合物可以含有一种或多种药物可接受的载体如基质，稳定剂，乳化剂来增加该组合物的稳定性，该组合物可以被配制成凝胶，凝胶霜或局部用液体溶液。
本发明药物组合物可以含有泊洛沙姆，羧甲基纤维素钠，或卡波姆作基质，氯化钠或氢氧化钠作稳定剂，W/O表面活性剂如辛酸十六烷基酯(ceteary octanoate)，O/W表面活性剂及其混合物，作乳化剂，丙二醇或甘油作湿润剂。
本发明药物组合物可以被配制成含有18～22w/w％泊洛沙姆，1-5w/w％丙二醇和0.5-3w/w％氯化钠的凝胶。
本发明药物组合物可以被配制成含有18～22w/w％泊洛沙姆，1-5w/w％丙二醇和5-15w/w％辛酸十六烷基酯(cetearyoctanoate)的凝胶霜。
本发明药物组合物可以被配制成含有5-15w/w％丙二醇的局部用液体溶液。
尽管如此，本发明药物组合物中的上述载体的含量还可以根据硫酸小奴霉素的溶解率和外形改变。
本发明药物组合物可以用常规的局部用剂型使用，每天1-2次使用到皮肤病的病灶上。
为了证实本发明药物组合物的优良活性，本发明人进行了长期研究来确定组分的比率，使用最佳比率制备能够更有效治疗皮肤病如伤口的药物组合物。
特别是，本发明人通过改变本发明组合物组分的比率进行了组织再生研究和局部抗菌活性研究。本发明人使用或改良了进行组织再生试验的动物模型(YAKUZAIGAKU Vol.53，No.3.185-190(1993))和进行局部抗菌活性试验的动物模型(AntimicrobialAgents and Chemotherapy Vol.10，No.1.38-44(1976))。
结果，小牛血液的去蛋白透析液和硫酸小奴霉素共同使用的治疗组在组织再生和局部抗菌活性方面显示出比单独使用小牛血液的去蛋白透析液或硫酸小奴霉素的治疗组更好的效果。这证明了含有小牛血液的去蛋白透析液和硫酸小奴霉素的本发明药物组合物比这些单一的混合物具有更强的活性。所以，这些试验表明本发明药物组合物能够促进皮肤组织的再生，具有快速治疗的功效。此外，本发明药物组合物能够减少治疗时间。
本发明人进行了该药物组合物组分间的配伍禁忌试验和对时间的稳定性试验。该结果表明本发明药物组合物的组分没有配伍禁忌，并且长期存放稳定。
仅为了详细说明本发明的某些方面给出下列实施例；它们不构成对本发明范围的任何限定。
这些实施例中所用的词语和简称除非作其他定义都有它们本身的正常含义，例如，“℃”指摄氏程度；“g”指克；“ml”指毫升。实验例1组织再生活性研究
在雄性ICR鼠的背部形成创伤(直径1厘米)。
在开裂的伤口用该药物组合物一天两次局部治疗2周。
除非另作定义，剂量都是0.3g/伤口。本发明组织再生活性试验的结果显示在表1中。
表1 试验组 组份(w/w％) CT50(day)(2) 平均值±S.D. MCR(5) 血清素(1) 小鼠数 对照只有基质(3) 1 2 3 4 5 - - - 0.50 0.50 0.50 0.50 - - 10 - 5 10 20 10 10 10 10 10 10 10 9.03±0.26 8.46±0.09 7.92±0.17 7.97±0.12 7.46±0.44 7.23±0.23(4) 7.37±0.31
(1)小牛血液的去蛋白透析液，Scolo Basle Ltd.Swiss
(2)治愈50％伤口面积的时间(平均值±标准误)
(3)只用载体治疗
(4)按照Student t-检验与第1组比较P＜0.05
(5)硫酸小奴霉素
表1表明，含小牛血液的去蛋白透析液和硫酸小奴霉素的药物组合物在治愈伤口方面显示出比单独的小牛血液去蛋白透析液或硫酸小奴霉素更好的活性。特别是，第4组具有比第1组显著突出的治疗功效，而第5组比第1组不具有显著的治疗效果。
这表明这些结果是由不平衡的成纤维细胞增生和上皮组织的形成所造成的。
因此，当使用5-20w/w％的小牛血液去蛋白透析液和0.5w/w％的硫酸小奴霉素组合时，能够获得治疗效果。特别是，含有10w/w％的小牛血液去蛋白透析液和0.5w/w％的硫酸小奴霉素的药物组合物具有最强的治疗效果。实验例2 局部抗菌活性研究
在雄性ICR鼠的背部形成创伤(直径1厘米)。
每组有10只鼠。在伤口上用1×104CFU(克隆形成单位)的金黄色葡萄球菌处理。直接感染一天后，在该伤口上用本发明药物组合物每天两次局部治疗2周。在本发明组合物的给药前后计录该伤口的CFU。除非另作定义，剂量都是0.3g/伤口。该组合物局部抗菌活性试验的结果显示在表2中。
表2 组 组份(w/w％) 平均CFU/伤口 MCR(1) 血清 素 小鼠 数 给药前 给药后(天) 1 6 9 14 对照 只有 基质(2) 1 2 3 4 5 - - - 0.50 0.25 0.50 1.00 - - 10 - 10 10 20 10 10 10 10 10 10 10 6.5×105 6.5×105 6.5×105 6.5×105 6.5×105 6.5×105 6.5×105 2.6×106 3.8×105 3.8×105 9.0×104 3.6×105 8.0×104 9.0×104 7.6×107 4.4×106 4.5×107 3.2×106 2.9×106 6.3×105 2.6×105 3.7×107 4.7×107 1.4×107 3.4×106 5.2×105 1.8×106 2.3×105 3.8×106 2.7×106 7.1×105 6.0×104 2.0×104 6.0×103 3.0×103(1)硫酸小奴霉素(2)只用载体治疗
表1表明，含小牛血液的去蛋白透析液和硫酸小奴霉素的药物组合物在局部抗菌活性方面也显示出比单独的小牛血液去蛋白透析液或硫酸小奴霉素更好的活性。这些优良的治疗效果是由增加组织再生活性和减少伤口的细菌感染所造成的。因此，本发明的药物组合物具有迅速治疗功效，通过促进组织修复缩短治疗时间。实施例1凝胶剂
硫酸小奴霉素 0.5g
血活素 5.0g
泊洛沙姆 18.0g
丙二醇 3.0g
氯化钠 0.9g
对羟基苯甲酸甲酯 0.18g
对羟基苯甲酸丙酯 0.02g
纯化水 至足量
把硫酸小奴霉素、血活素和氯化钠溶于50g提前冷却到5℃以下的纯化水中。搅拌下把泊洛沙姆部分加入上述溶液制成一种悬浮液。把该悬浮液在5℃下放置24小时形成一种澄清的溶液(溶液A)。在把悬浮于丙二醇中的防腐剂混合物加热形成一种澄清的溶液(溶液B)后，搅拌下将其加入溶液A中制成一种均匀的溶液，然后加入纯化水制成100g的凝胶。罐装步骤使用常规的方法。实施例2凝胶-霜剂
硫酸小奴霉素 0.5g
血活素 5.0g
泊洛沙姆 20.0g
丙二醇 3.0g
辛酸十六烷基酯(ceteary octanoate) 0.9g
对羟基苯甲酸甲酯 0.18g
对羟基苯甲酸丙酯 0.02g
纯化水 至足量
把硫酸小奴霉素、血活素和氯化钠溶于50g提前冷却到5℃以下的纯化水中。搅拌下把泊洛沙姆分批加入上述溶液制成一种悬浮液。把该悬浮液在5℃下放置24小时形成一种澄清的溶液(溶液A)。在把悬浮于丙二醇中的防腐剂混合物加热形成一种澄清的溶液(溶液B)后，搅拌下将其加入溶液A中制成一种均匀的溶液，然后加入辛酸十六烷基酯(ceteary octanoate)，搅拌下乳化制成100g的凝胶-霜剂。
罐装步骤使用常规的方法。实施例3局部用液体溶液I
硫酸小奴霉素 0.5g
血活素 5.0g
泊洛沙姆 8.0g
丙二醇 3.0g
对羟基苯甲酸甲酯 0.18g
对羟基苯甲酸丙酯 0.02g
纯化水 至足量
把硫酸小奴霉素和血活素溶于50g提前冷却到5℃以下的纯化水中。搅拌下把泊洛沙姆分批加入上述溶液制成一种悬浮液。在把悬浮于丙二醇中的防腐剂混合物加热形成一种澄清的溶液后，搅拌下将其加入悬浮液中制成一种均匀的溶液，然后加入纯化水制成100g的局部用液体溶液。罐装步骤使用常规的方法。实施例4局部用液体溶液II
硫酸小奴霉素 0.5g
血活素 5.0g
泊洛沙姆 8.0g
丙二醇 3.0g
乙醇 3.0g
对羟基苯甲酸甲酯 0.18g
对羟基苯甲酸丙酯 0.02g
纯化水 至足量
为了加速使用后液膜的形成，用乙醇代替一部分纯化水重复实施例3中所述的相同步骤来制备100局部用液体溶液。该步骤如下：把硫酸小奴霉素、血活素和乙醇溶于50g提前冷却到5℃以下的纯化水中。搅拌下把泊洛沙姆分批加入上述溶液制成一种悬浮液。在把悬浮于丙二醇中的防腐剂混合物加热形成一种澄清的溶液后，搅拌下将其加入悬浮液中制成一种均匀的溶液，然后加入纯化水制成100g的局部用液体溶液。罐装步骤使用常规的方法。对比实施例1油膏
硫酸小奴霉素 0.5g
血活素 5.0g
白凡士林 70.64g
无水羊毛脂 17.66g
液体石蜡 6.0g
对羟基苯甲酸甲酯 0.18g
对羟基苯甲酸丙酯 0.02g
在一个容器中把白凡士林、无水羊毛脂、液体石蜡、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯的混合物在80℃-85℃加热形成一种澄清的溶液。
该溶液混合均匀后，将其冷却到50℃(溶液A)。把溶于血活素中的硫酸小奴霉素加入溶液A后，再搅拌得到100的油膏。罐装步骤使用常规的方法。对比实施例2霜剂
硫酸小奴霉素 0.5g
血活素 5.0g
蜡 6.7g
黄原胶 0.3g
十八烷醇 6.7g
液体石蜡 4.7g
肉豆蔻酸辛基十二烷基酯 6.0g
丁基化羟基苯甲醚 0.05g
丁基化羟基甲苯 0.05g
环糊精溶液 1.0g
柠檬酸钠 0.03g
丙二醇 3.3g
胶体二氧化硅 0.5g
微晶纤维素 0.5g
丙二醇单硬脂酸酯 2.0g
Arlacel 165 1.0g
乙二胺四乙酸钠 0.1g
二甲硅油 0.5g
对羟基苯甲酸甲酯 0.15g
对羟基苯甲酸丙酯 0.05g
纯化水 至足量
把蜡、十八烷醇、arlacerl 165、丙二醇单硬脂酸酯、对羟基苯甲酸丙酯、二甲硅油、丁基化羟基甲苯、丁基化羟基苯甲醚、肉豆蔻酸辛基十二烷基酯和液体石蜡的混合物加热，并在75～80℃的真空乳化系统中溶解均匀形成一种溶液(溶液A)。在75℃～80℃把胶体二氧化硅、黄原胶、对羟基苯甲酸甲酯和微晶纤维素与一定量的纯化水加热，并均匀溶解形成一种澄清溶液(溶液B)。向溶液A中分批加入溶液B，并在真空乳化系统中乳化(溶液C)。在一个分开的容器中把硫酸小奴霉素、丙二醇、乙二胺二乙酸钠、液体石蜡和柠檬酸钠加入一定量的纯化水中，然后，均匀溶解(溶液D)。
乳化完成后把溶液C冷却到50℃，把溶液D加入溶液C中混合制成100g的霜剂。试验实施例3硫酸小奴霉素的体内溶解试验
为了测定从实施例和对比实施例所生产的各种制剂如凝胶、凝胶霜、局部用液体溶液、油膏和霜中硫酸小奴霉素的释放率，在37℃下于Muller Hinton broth中把1环的枯草杆菌ATCC6633孵育18小时，然后用Muller Hinton Agar把该培养基肉汤稀释为1：100。把该混合物例入一种生物测定仪的盘(245×245×20mm)中，并将其固化。使用纸盘(直径6mm)把标准硫酸小奴霉素溶液和上述所说制剂置于固化的培养基上。该培养基在室温下放置1小时后，在37℃把该培养基孵育18小时，测定其抑制直径。从标准硫酸小奴霉素的标准曲线计算硫酸小奴霉素的释放量，结果显示在表3中。
表3 剂型 试验数硫酸小奴霉素的释放率(％，平均值±S.D.) 凝胶剂 实施例1 5 98.5±14.7 凝胶霜剂 实施例2 5 95.1±12.9 局部用液体溶液 实施例3 5 100.7±5.1 油膏 对比实施例1 5 67.1±10.2 霜剂 对比实施例2 5 70.3±8.8
表3显示了凝胶、凝胶霜剂和局部用液体溶液比霜剂或油膏的释放率高。这些结果证实了本发明组合物的凝胶、凝胶霜剂和局部用液体溶液是比较理想的剂型。试验实施例4剂型的稳定性试验
为了测定从实施例和对比实施例所生产的各种制剂如凝胶、凝胶霜、局部用液体溶液、油膏和霜剂的稳定性，把油膏、霜剂、凝胶和凝胶霜剂放入封闭的铝管内，把局部用的液体溶液放入封闭的塑料容器中，然后在40±1℃，75±5％RH(相对湿度)将其放置6个月。
采用抗菌素的说明和测定方法(见韩国卫生部所公布的1992-70号文件)中硫酸小奴霉素注射液部分的试验方法测定硫酸小奴霉素，采用混合的L-苏氨酸，山梨醇、缬氨酸(valin)、氨基酸注射液部分(见韩国卫生部1985年10月10日公布的85-9号文件)的试验方法测定血活素。结果显示在表4中。
表4剂型 组份 含量(％) 开始 2个月 4个月 6个月凝胶剂(实施例1) 硫酸小奴霉素 100.4 99.9 100.8 99.8血清素氨基乙酸 101.9 100.8 102.8 101.1L-丙氨酸 102.0 101.5 101.7 101.4凝胶霜剂(实施例2) 硫酸小奴霉素 101.2 101.3 100.9 100.7血清素氨基乙酸 99.8 98.4 98.0 99.2L-丙氨酸 100.5 100.8 101.0 102.3局部用液体溶液(实施例3) 硫酸小奴霉素 100.5 99.8 99.6 100.4血清素氨基乙酸 101.4 100.8 101.0 100.5L-丙氨酸 104.2 106.6 103.3 103.4油膏(对比实施例1) 硫酸小奴霉素 100.7 100.3 99.7 100.3血清素氨基乙酸 103.4 103.3 98.9 99.6L-丙氨酸 100.4 100.2 100.0 100.6霜剂(对比实施例2) 硫酸小奴霉素 99.8 100.0 99.9 99.7血清素氨基乙酸 102.3 101.2 100.9 99.2L-丙氨酸 101.6 101.2 99.6 100.3表4显示了本发明组合物的凝胶、凝胶霜、局部用液体溶液、油膏和霜剂至少有3年的稳定性。
尽管如此，在生产经济、活性成分的溶解、使用方便、优良多孔粘合性、活性成分的连续作用、除去膜的容易程度方面，优选凝胶剂型，这是由于它不象常规的油膏或霜剂，一旦被使用就形成膜，通过保护伤口不受污染和潮湿作用的影响以及活性成分的主要作用增加了治疗效果。局部用液体溶液比泥敷剂更优选，这是因为它具有连续的治疗功效和便利。试验实施例5硫酸小奴霉素与载体比率的洗脱试验
对用实施例和对比实施例的相同方法制备的含有不同含量的泊洛沙姆。氯化钠、丙二醇和辛酸十六烷基酯(ceteary octanoate)的各种组合物，采用试验实施例3的相同方法测试硫酸小奴霉素的释放率和外观。结果显示在表5中。
表5 组合物 载体的组份比例 (w/w％)剂型外观硫酸小奴霉素的释放率(％)(平均值±SD) 泊洛 沙姆 氯化 钠 丙二 醇 辛酸十 六烷基 酯组合物1组合物2组合物3组合物4组合物5组合物6组合物7组合物8组合物9组合物10组合物11组合物12组合物13组合物14组合物15组合物16组合物17组合物18组合物19组合物20组合物21 18 18 18 18 18 18 18 18 18 20 20 20 20 20 20 20 20 20 22 22 22 0.9 0.9 0.9 2.0 2.0 2.0 3.0 3.0 3.0 0.9 0.9 0.9 2.0 2.0 2.0 3.0 3.0 3.0 0.9 0.9 0.9 1 3 5 1 3 5 1 3 5 1 3 5 1 3 5 1 3 5 1 3 5 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶凝胶 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 99.2±12.2 98.5±14.7 99.8±10.6 98.1±8.1 99.3±12.8 99.6±9.7 97.8±10.2 95.1±10.7 96.2±12.5 94.2±8.1 95.3±7.8 96.7±9.7 94.2±11.8 92.8±13.7 93.2±11.8 93.8±12.1 94.7±10.9 95.1±9.3 92.7±13.9 91.9±10.7 90.8±7.6 组合物 载体的组份比例 (w/w％) 剂型外观 硫酸小奴霉 素的释放率(平均值±SD) 泊洛 沙姆 氯化 钠 丙二 醇 辛酸十 六烷基 硝组合物22组合物23组合物24组合物25组合物26组合物27组合物28组合物29组合物30组合物31组合物32组合物33组合物34组合物35组合物36组合物37组合物38组合物39组合物40组合物41组合物42组合物43 22 22 22 22 22 22 18 18 18 18 18 18 20 20 20 20 20 20 22 22 22 22 2.0 2.0 2.0 3.0 3.0 3.0 - - - - - - - - - - - - - - - - 1 3 5 1 3 5 1 3 1 3 1 3 1 3 1 3 1 3 1 3 1 3 - - - - - - 5 5 10 10 15 15 5 5 10 10 15 15 5 5 10 10 凝胶 凝胶 凝胶 凝胶 凝胶 凝胶 G.C.(1) G.C. G.C. G.C. G.C. G.C.(1) G.C. G.C. G.C. G.C. G.C. G.C. G.C. G.C. G.C. G.C. 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 93.7±10.7 91.8±11.8 90.9±12.7 92.3±8.8 94.2±12.9 90.1±10.8 96.8±9.5 96.2±11.7 95.8±10.6 96.2±9.7 96.7±8.2 95.5±11.7 93.8±10.2 92.8±11.2 95.7±10.1 95.1±12.9 94.8±9.7 94.7±11.6 93.8±10.1 92.7±10.1 92.5±9.9 91.1±12.1 组合物 载体的组份比例 (w/w％) 剂型外观 硫酸小奴霉 素的释放率 (平均值± SD) 泊洛 沙姆 氯化 钠 丙二 醇 辛酸十 六烷基 硝组合物44组合物45组合物46组合物47组合物48组合物49组合物50组合物51组合物52组合物53组合物54组合物55组合物56组合物57组合物58组合物59组合物60 22 22 5 5 5 8 8 8 10 10 10 12 12 12 15 15 15 - - - - - - - - - - - - - - - - - 1 3 1 3 5 1 3 5 1 3 5 1 3 5 1 3 5 15 15 - - - - - - - - - - - - - - - G.C. G.C. T.S.(2) T.S. T.S. T.S. T.S. T.S. T.S. T.S. T.S. T.S. T.S. T.S. T.S. T.S. T.S. 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 好 90.2±13.2 91.9±10.1 101.2±7.3 102.7±8.1 100.8±8.7 99.7±7.8 100.7±5.1 100.5±7.6 99.8±6.1 101.7±3.5 105.6±10.2 101.8±5.4 100.2±6.2 103.1±7.1 101.8±4.6 102.7±5.1 101.3±6.5(1)C.C.：凝胶霜剂(2)T.S.：局部用液体溶液试验实施例6 毒性试验1.急性毒性试验 1)试验物品
由小牛血液去蛋白透析液和硫酸小奴霉素以20∶1重量比组成的药物组合物。 2)动物
9周龄的雄性和雌性SD小鼠 3)试验物品的制备
把硫酸小奴霉素溶于小牛血液去蛋白透析液的溶液中。 4)方法
使试验动物禁食18小时，然后在该试验动物的躯干背部把剂量为33/kg的试验物品皮下给药。以给药试验物品之前所测定的体重计算治疗量。连续7天仔细观察所有动物的任何毒性症状或死亡。 5)结果
(1)临床症状
把试验物品以33,200mg/kg的剂量皮下给药后，全部雄性动物(6只)和5只雌性动物死亡。剂量为27,600mg/kg时，5只雄性动物和全部雌性动物死亡。剂量为23,100mg/kg时，3只雄性动物和3只雌性动物死亡。剂量为192100mg/kg时，分别有1只雄性动物和1只雌性动物死亡。
在死亡的小鼠中，活动性和呼吸率明显下降。死亡出现的时间是24小时内。在存活的小鼠中，偶尔观察到活动性和呼吸率的下降、流涎、发抖和失去知觉。尽管如此，给药1天后，这些动物能够恢复到正常状态。 (2)体重
用试验物品治疗体重没有显著变化。 (3)总体表现
试验物品没有造成总体表现的异常。
从上述皮下给药的试验结果来看，在一般症状，体重和总体表现视觉所见上没有与试验物品相关的毒性。估计LD50超过23,047mg/kg。所以，认为检查的试验物品为非常低毒的物质。结果显示在表6中。
表6用小牛血液去蛋白透析液和硫酸小奴霉素组合物皮下治疗雄性和雌性SD小鼠的死亡率性别 剂量 (mg/kg) 治疗后的天数 最终致 死量 LD50 (mg/kg) 0 1 2 3 4 5 6 7雄性 33,200 27,600 23,100 19,200 16,000 0 6 - - - - - - - 5 - - - - - - - 3 - - - - - - - 1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 6/6 5/6 3/6 1/6 0/6 0/6 23,047.08雌性 33,200 27,600 23,100 19,200 16,000 0 5 - - - - - - - 6 - - - - - - - 3 - - - - - - - 1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 5/6 6/6 3/6 1/6 0/6 0/6 23,725.592.亚急性毒性试验1)试验物品
由小牛血液去蛋白透析液和硫酸小奴霉素以20∶1重量比组成的药物组合物。 2)动物
5周龄的雄性和雌性SD小鼠 3)试验物品的制备
把试验物品与各种载体以组合物比率溶于蒸馏水中。 4)暴露条件
在试验前约24小时，用刀片去掉动物躯干背部的毛。统一在2.5×2.5cm大小的面积上，一天一次分别以1.97g/kg，3.94g/kg和7.88g/kg的剂量把试验物品用于该动物。对安全参数来说，治疗期间进行的检查是临床表现，眼科检查，体重食物和水的摄取。
观察期后，把所有动物进行尸体剖检。接着进行总体观察，器官重量测定，血液检查，血液化学分析，尿分析和病理组织学检查。 5)结果
当把试验物品每天一次分别以1.97g/kg，3.94g/kgh 7.88g/kg的剂量对SD小鼠给药30天时，观察到了下列结果。
(1)在临床症状，体重变化和食物及水的摄取方面没有与试验物品相关的变化。
(2)在血液检查，血液化学分析和尿分析上没有与试验物品相关的变化。
(3)在病理组织学检查上没有与试验物品相关的变化。
从上述结果来看，估计在这种试验条件下无效含量(NOVEL)为7.88g/kg。3.皮肤刺激试验 1)试验物品
由小牛血液去蛋白透析液和硫酸小奴霉素以20∶1重量比组成的药物组合物。 2)动物
体重在1.3kg和1.8kg的雄性新西兰白兔。 3)试验物品的制备
把试验物品与各种载体以组合物比率溶于蒸馏水中。 4)试验步骤
在试验前约24小时，用刀片去掉动物躯干背部的毛。每只动物刮去皮肤的四个区，把两个区作为治疗区。各区以0.5g的剂量使用该试验物品24小时。暴露结束后，除去残留的试验物质，7天内检查所有动物的红斑和水肿的症状，采用Draize的方法给反应打分。 5)结果
使用0.5g试验物品24小时后，进行临床症状和的观察和体重的测量。
(1)一般症状
在24小时的观察期间，每隔4小时的检查，没有发现似乎与试验物品治疗相关的死亡或症状。全部动物恢复到正常状态，没有任何迟缓的毒性。
(2)体重
治疗第一天和第二天后，动物体重显出轻微的下降，但是以后变得正常，没有任何问题。所以，这种情况应当是由试验物品引起的轻度作用，但不认为是毒性作用。
(3)皮肤反应
初级刺激指标计算为0.35。从上述结果来看在鼠模型中所检测的试验物品可以被认为是一种轻度刺激物质。