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1、(10)申请公布号 CN 104230403 A (43)申请公布日 2014.12.24 CN 104230403 A (21)申请号 201410505136.8 (22)申请日 2014.09.28 C05F 11/00(2006.01) A01C 21/00(2006.01) C12N 5/04(2006.01) (71)申请人 深圳前海万物生生物科技控股有限 公司 地址 518052 广东省深圳市前海深港合作区 前湾一路1 号 A 栋 201 室 ( 入驻深圳市 前海商务秘书有限公司 ) (72)发明人 唐蘋 邱明全 (54) 发明名称 一种蔬菜用有机肥料及其制备方法 (57) 摘要。
2、 一种蔬菜用有机肥料的制备方法， 包含以下 步骤 ： (1) 以质量份数计， 将质量含量为 5-8的 棕榈树精华溶液200份、 质量含量为5-8的竹子 精华溶液 290 份、 竹子干细胞 50 份混合后， 加水 并发酵 7-8 天 ； (2) 再次混合质量含量为 5-8的 莫兰或印茄精华溶液 100 份以及莫兰或印茄干细 胞 30 份， 加水并发酵 7-9 天 ； (3) 将质量含量为 5-8的布袋莲或浮萍精华溶液 180 份以及布袋 莲或浮萍干细胞30份加入步骤(2)得到的混合物 中， 加水并发酵 8-9 天 ； (4) 将质量含量为 5-8 的攀藤寄生植物精华 100 份以及攀藤寄生植物干。
3、 细胞 20 份加入步骤 (3) 得到的混合物中， 加水并 发酵 6-8 天 ； (5) 将步骤 (4) 制得的发酵产物经 15000转/分的离心分离机旋转分离两小时， 随后 30-35下发酵 6-8 天。 (51)Int.Cl. 权利要求书 4 页 说明书 10 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书4页 说明书10页 (10)申请公布号 CN 104230403 A CN 104230403 A 1/4 页 2 1. 一种蔬菜用有机肥料的制备方法， 其特征在于， 包含以下步骤 ： (1)以质量份数计， 将质量含量为5-8的棕榈树精华溶液200份、 质量含。
4、量为5-8的 竹子精华溶液 290 份、 竹子干细胞 50 份混合后， 加入适量蒸馏水并搅拌均匀， 35-40下发 酵 7-8 天 ； (2) 在步骤 (1) 得到发酵混合物中再次混合质量含量为 5-8的莫兰或印茄精华溶液 100 份以及莫兰或印茄干细胞 30 份， 加入适量蒸馏水并搅拌均匀， 35-45下发酵 7-9 天 ； (3) 将质量含量为 5-8的布袋莲或浮萍精华溶液 180 份以及布袋莲或浮萍干细胞 30 份加入步骤 (2) 得到的混合物中， 再次加入适量蒸馏水并搅拌均匀， 35-40下发酵 8-9 天 ； (4) 将质量含量为 5-8的攀藤寄生植物精华 100 份以及攀藤寄生植物。
5、干细胞 20 份加 入步骤 (3) 得到的混合物中， 再次加入适量蒸馏水并搅拌均匀， 30-35下发酵 6-8 天 ； (5) 将步骤 (4) 制得的发酵产物经 15000 转 / 分的离心分离机旋转分离两小时， 随后 30-35下发酵 6-8 天， 产物即所述蔬菜用有机肥料。 2. 如权利要求 1 所述的一种蔬菜用有机肥料的制备方法， 其特征在于 ： 所述竹子干细 胞的提取方法包括如下步骤 ： (1) 提取竹子干细胞 ： 选择生长状况良好的竹子的树干、 枝干， 用无菌蒸馏水冲洗 10 分 钟， 洗净后， 将竹子的树干、 枝干首先切割成长度 10-20 厘米的小块， 然后将整理后的竹子 原料放。
6、入在搅拌设备中粉碎成细末 ； (2) 将步骤 (1) 中粉碎制得的竹子细末原料， 放入多个盛有固态培养基的培养器皿中， 在受控暗室内培养， 培养温度 251 度 ； (3) 形成层细胞的诱导 ： 在整个培养过程中保持 251 摄氏度的恒温， 培养器皿外空间 湿度保持在 861 左右， 培养 20-30 天后， 竹子内部组织的细胞系增量放大， 形成层细胞系 与韧皮组织分离， 细胞系组织有大量的液泡存在， 并且接触后易碎 ； (4) 将步骤 (3) 中形成层细胞群体用接种铲轻轻将其移入盛有液态培养基的培养器皿 中， 在暗室中， 用旋转摇床， 以 100rpm、 251 度下培养， 培养时间设定为 。
7、20 天， 使液态培养 基中的干细胞充分生长， 在生长期内始终保持极高的活力 ； (5) 竹子干细胞的提取 ： 首先， 将培养液细胞系通过分子质量截留值 4 万的中空纤维 超滤柱进行超滤， 然后将过滤后的全部细胞混合液经另一容器内快速搅拌 3 小时， 再进行 经旋转式真空蒸发器， 间接加热 80 度进行旋转吸空蒸发， 浓缩至小于原体液 5 分之 1 时取 出， 在放入真空冷冻干燥机内真空冷冻干燥， 30 小时后， 在含水分小于 3以下时取出， 粉 碎 100 目， 装袋收藏备用。 3. 如权利要求 1 所述的一种蔬菜用有机肥料的制备方法， 其特征在于 ： 所述莫兰或印 茄干细胞的提取方法包括如。
8、下步骤 ： (1) 提取莫兰或印茄树木枝干的干细胞 ： 选择生长状况良好的莫兰或印茄的树干， 用 无菌蒸馏水冲洗 10 分钟， 洗净后， 将其切割成边长小于 20 厘米的方块， 然后将所述方块放 入在搅拌设备中粉碎成细末 ； (2) 将步骤 (1) 中粉碎制得的树干细末原料， 放入多个盛有固态培养基的培养器皿中， 在受控暗室内培养， 培养温度 251 度 ； (3) 形成层细胞的诱导 ： 在整个培养过程中保持 351 度的恒温， 培养器皿外空间湿度 权 利 要 求 书 CN 104230403 A 2 2/4 页 3 保持在 901 左右， 培养 15-25 天后， 树干内部组织的细胞系增量放。
9、大， 形成层细胞系与韧 皮组织分离， 细胞系组织有大量的液泡存在， 并且接触后易碎 ； (4) 将形成层细胞群体用接种铲轻轻将其移入盛有液态培养基的培养器皿中， 在暗室 中， 用旋转摇床， 以100rpm、 351度下培养， 培养时间设定为16天， 使液态培养基中的干细 胞充分生长， 在生长期内始终保持极高的活力 ； (5) 莫兰或印茄干细胞的提取 ： 首先， 将培养液细胞系通过分子质量截留值 4 万的中 空纤维超滤柱进行超滤， 然后将过滤后的全部细胞混合液经另一容器内快速搅拌 3 小时， 再进行经旋转式真空蒸发器， 间接加热 80 度进行旋转吸空蒸发， 浓缩至小于原体液 5 分之 1 时取出。
10、， 再放入真空冷冻干燥机内真空冷冻干燥， 25-30 小时后， 在含水分小于 3以下时 取出， 粉碎 100 目， 装袋收藏备用。 4. 如权利要求 2 或 3 所述的一种蔬菜用有机肥料的制备方法， 其特征在于 ： 所述固态 培养基成分的组成为 ： 硝酸钾1010mg/L， 硫酸镁120mg/L， 硫酸锰9.5mg/L， 硫酸锌2mg/L， 氯 化钙 113mg/L， 硫酸铜 0.023mg/L， 碘化钾 0.72mg/L， 磷酸二氢钠 130mg/L， 氯化钴 0.023mg/ L， 硼酸 3.1mg/L， 钼酸钠 0.24mg/L， 乙二胺四乙酸铁钠盐 37mg/L ； 肌醇 452mg/。
11、L， 盐酸噻 胺 (VB1)21mg/L， 吡哆醇 (VB6)1.9mg/L， 尼克酸 1.9mg/L， L- 抗坏血酸 110mg/L， 柠檬酸 114mg/L ； 光氨酸 170mg/L， 酪蛋白水解物 510mg/L ； 蔗糖 30.100mg/L ； 2， 4-D2.5mg/L， 赤霉 素 0.6mg/L ； 琼脂 39.000mg/L ； 活性碳 3000mg/L ； 磁化水 1 升。 5. 如权利要求 2 或 3 所述的一种蔬菜用有机肥料的制备方法， 其特征在于 ： 所述液态 培养基成分的组成 ： 硝酸钾 1010mg/L， 硫酸镁 120mg/L， 硫酸锰 9.5mg/L， 硫酸。
12、锌 2mg/L， 氯 化钙 113mg/L， 硫酸铜 0.023mg/L， 碘化钾 0.72mg/L， 磷酸二氢钠 130mg/L， 氯化钴 0.023mg/ L， 硼酸 3mg/L， 钼酸钠 0.24mg/L， 乙二胺四乙酸铁钠盐 37mg/L， 肌醇 200mg/L， 盐酸噻胺 (VB1)21mg/L， 吡哆醇 (VB6)1.9mg/L， 尼克酸 1.9mg/L， L- 抗坏血酸 110mg/L， 柠檬酸 148mg/ L， 2， 4-D2.5mg/L， 赤霉素 0.1mg/L， 天冬氨酸 134mg/L， 精氨酸 180mg/L， 脯氨酸 118mg/L， 甘 氨酸 60mg/L， 色氨。
13、酸 80mg/L， 蔗糖 21.000mg/L， 麦饭石 2000mg/L， 锗石 2000mg/L， 磁化水 1 升。 6. 如权利要求 1 所述的一种蔬菜用有机肥料的制备方法， 其特征在于 ： 布袋莲或浮萍 干细胞的提取方法包括如下步骤 ： (1) 将布袋莲或浮萍用无菌水冲洗 10 分钟， 洗净 ； (2) 制备固态培养基 ： 硝酸钾 2500mg/L， 硫酸镁 122mg/L， 硫酸锰 11mg/L， 硫酸锌 2.5mg/L， 硫酸铜 0.025mg/L， 硫酸胺 135mg/L ； 氯化钙 112mg/L， 碘化钾 0.7mg/L， 氯化钴 0.025mg/L， 磷酸二氢钠 132mg。
14、/L， 硼酸 2.6mg/L， 钼酸钠 0.23mg/L， 烟酸 2.0mg/L， 吡哆醇 2.1mg/L， L- 抗坏血酸 53mg/L， 柠檬酸 78mg/L， L- 天冬氨酸 140mg/L， L- 精氨酸 180mg/L， 甘氨酸 75mg/L， 脯氨酸 120mg/L ； a- 萘乙酸 2.2mg ； 蔗糖 10.200mg/L ； 活性炭 500mg/ ； 琼脂 3800mg/L ； 磁化水 0.7 升 ； (3) 形成层分离培养 ： 将水生植物用小刀切碎后放进固态培养基中， 在受控暗室内培 养 15 天， 培养温度 251 ； 随后将形成层细胞系用接种铲轻轻将其移入另一同样培养基。
15、 培养器皿内， 在放大培养 20 天， 最后将其放大培养的细胞系群体移入液态培养基中， 在暗 室内用摇床旋转培养， 在 160rpm、 251环境中培养， 培养时间设定为 20 天 ； 所述液态培养基的成分为 ： 硫酸钾 995mg/L， 磷酸氢钾 160mg/L， 硫酸镁 185mg/L， 硫 权 利 要 求 书 CN 104230403 A 3 3/4 页 4 酸锌 9mg/L， 硫酸锰 22mg/L， 硫酸铜 0.25mg/L， 氯化钙 70mg/L， 硝酸钙 480mg/L， 钼酸钠 0.26mg/L， 硼酸 6.5mg/L， 硝酸胺 420mg/L， 乙二胺四乙酸铁钠盐 38mg/L。
16、， 肌醇 230mg/L， 硫 胺素 22mg/L， 烟酸 2mg/L， 吡哆醇 2.5mg/L， L- 抗坏血酸 65mg/L， 柠檬酸 72mg/L， L- 天冬氨 酸 140mg/L， L- 精氨酸 180mg/L， 甘氨酸 80mg/L， 脯氨酸 120mg/L， a- 萘乙酸 2.2mg/L ； 蔗糖 31000mg/L ； 麦饭石颗粒60000mg/L， 锗石颗粒60000mg/L， 硒矿石颗粒主90000mg/L ； 磁化水 0.7 升 ； (4) 布袋莲或浮萍干细胞的分离 ： 将液态培养基用 1um 过滤器过滤， 然后将过滤后的全 部细胞混合液经另一容器内快速搅拌 2-3 小时。
17、， 在进行经旋转式真空蒸发器， 间接加热 60 度进行旋转吸空蒸发， 浓缩至小于原体液5分之1时取出， 再放入真空冷冻干燥机内真空冷 冻干燥， 20-22 小时后， 在含水分小于 3以下时取出， 粉碎 100 目， 装袋收藏备用。 7. 如权利要求 1 所述的一种蔬菜用有机肥料的制备方法， 其特征在于 ： 攀藤寄生植物 干细胞的提取方法包括如下步骤 ： (1) 将攀藤寄生植物用无菌蒸馏水冲洗 15 分钟， 洗净 ； (2) 固态培养基的制备 ： 固态培养基原料为 ： 硝酸钾 2510mg， 硫酸胺 136mg， 硫酸镁 123mg， 硫酸锰 10mg， 硫酸锌 2.5mg， 硫酸铜0.026m。
18、g， 氯化钙114mg， 碘化钾0.7mg， 氯化钴0.026mg， 磷酸二氢钠131mg， 硼 酸2.8mg， 钼酸钠0.26mg， 乙二胺四乙酸铁钠盐37mg ； 肌醇210mg， 硫胺素21mg， 烟酸2.2mg， 吡哆醇 2.2mg， L- 抗坏血酸 52mg， 柠檬酸 74mg ； L- 天冬氨酸 135mg， L- 精氨酸 176mg， 甘氨 酸 76mg， 脯氨酸 116mg， - 萘乙酸 2.2mg， 蔗糖 10.100mg， 活性炭 200mg， 琼脂 3.100mg， 磁 化水 0.63 升 ； 所述固态培养基的制备过程 ： 将无机盐类各养分分别用 20mL 磁化水稀释， 。
19、将维生素类 合并放入50mL无菌磁化水中稀释， 将氨基酸类合并放入50mL无菌磁化水中稀释， 将生长素 放入 10mL 无菌磁化水中稀释 ； 然后将稀释后的无机盐类分别注入烧瓶磁化水中， 边注入边 搅拌， 在将糖类、 固化剂、 活性炭放入， 全部溶解后， 封口， 进行高压灭菌 30 分钟， 降温取出 后， 在将稀释的维生素和氨基酸溶液、 生长素溶液分别放入搅匀后， 冷凝 ； (3) 形成层分离培养 ： 将攀藤寄生植物的主干或叶子用刀切成 1-2cm 长的小段， 移入固 态培养基中， 在受控的暗室内避光培养 28 天， 培养温度 251； 培养 28 天后， 将形成层细 胞群体用接种勺或接种铲轻。
20、轻将其移入另一同样培养基器皿内在放大培养 23 天 ； (4) 将其放大培养的细胞系群体移入液态培养基中， 在暗室中， 用旋转摇床以 100rpm， 251培养， 培养时间为 20 天 ； 其中， 液态培养基的组成为 ： 硫酸镁181mg， 硫酸锰23mg， 硫酸锌8.9mg， 硫酸铜0.23mg， 硝酸钙 473mg， 硝酸胺 400mg， 氯化钙 60mg， 碘化钾 995mg， 钼酸钠 0.24mg， 硼酸 6mg， 磷酸氢 钠 170mg， 乙二胺四乙酸铁钠盐 37mg， 肌醇 210mg， 硫胺素 21mg， 烟酸 2.2mg， 吡哆醇 2.2mg， L- 抗坏血酸 60mg， 柠檬。
21、酸 75mg ； L- 天冬氨酸 135mg， L- 精氨酸 178mg， 甘氨酸 75mg， 脯氨酸 116mg， - 萘乙酸 2mg， 蔗糖 30.100mg， 麦饭石颗粒 50000mg， 锗石 50000mg， 磁化水 1 升 ； (5) 攀藤寄生植物干细胞的提取 ： 将液态培养基用 1.5um 过滤器过滤， 然后将过滤后的 全部细胞混合液经另一容器内快速搅拌 2 小时， 再进行经旋转式真空蒸发器， 间接加热 65 度进行旋转吸空蒸发， 浓缩至小于原体液5分之1时取出， 再放入真空冷冻干燥机内真空冷 冻干燥， 20 小时后， 在含水分小于 3以下时取出， 粉碎 100 目， 装袋收藏备。
22、用。 权 利 要 求 书 CN 104230403 A 4 4/4 页 5 8. 如权利要求 1 所述的一种蔬菜用有机肥料的制备方法， 其特征在于 ： 所述棕榈树精 华溶液是通过将棕榈树的种子在650-680的温度下蒸2-2.5个小时， 然后用15000转/分 的粉碎机粉碎， 随后注入蒸馏水并发酵 10-20 天， 然后经渣液分离器分离， 随后经 1um 过滤 器过滤， 滤液间接加热 65-85 度进行旋转吸空蒸发， 浓缩至矿物质含量为 5-8蒸发完成， 最终制得的溶液 ； 所述布袋莲或浮萍精华溶液是通过将布袋莲或浮萍用 15000 转 / 分的粉 碎机将其粉碎后注入蒸馏水并发酵 12-15 。
23、天， 然后经 1um 过滤器过滤后间接加热 65-85 度 进行旋转吸空蒸发， 浓缩至矿物质含量为 5-8制得的溶液 ； 所述攀藤寄生植物精华溶液 是通过将攀藤寄生植物用 15000 转 / 分的粉碎机将其粉碎后注入蒸馏水并发酵 15-18 天， 然后经 1um 过滤器过滤， 滤液间接加热 65-85 度进行旋转吸空蒸发， 浓缩至矿物质含量为 5-8制得的溶液 ； 所述竹子精华溶液是通过将竹子的枝干和叶子燃烧后， 注入蒸馏水并发 酵 14-16 天， 经 1um 过滤器过滤后间接加热 65-85 度进行旋转吸空蒸发， 浓缩至矿物质含量 为 5-8制得的溶液 ； 所述莫兰、 印茄精华溶液是通过将。
24、莫兰、 印茄枝干用 15000 转 / 分的 粉碎机将其粉碎后注入蒸馏水并发酵 10-15 天， 然后经 1um 过滤器过滤后间接加热 65-85 度进行旋转吸空蒸发， 浓缩至矿物质含量为 5-8制得的溶液。 9. 一种蔬菜用有机肥料， 其特征在于 ： 该蔬菜用有机肥料由权利要求 1-8 任一所述的 一种蔬菜用有机肥料的制备方法制备而成。 10. 一种蔬菜用有机肥料的使用方法， 其特征在于 ： 将权利要求 9 中制得的蔬菜用有机 肥料按照体积比例110-30加入水分稀释后， 由机器或人工喷洒在蔬菜的叶子和枝干上。 权 利 要 求 书 CN 104230403 A 5 1/10 页 6 一种蔬菜。
25、用有机肥料及其制备方法 技术领域 ： 0001 本发明属于生物肥料技术领域， 具体涉及一种蔬菜用有机肥料及其制备方法。 背景技术 0002 肥料大体可以分为两大类， 即无机肥和有机肥两大类。 其中无机肥， 就是我们平常 所称的化肥， 具有养分含量高、 元素单一、 肥效快、 清洁卫生、 施用方便等优点， 但是长期施 用化肥， 在增产的同时， 也带来了很多副作用 ： 0003 1) 从化肥原料开采到加工生产， 不可避免地将一些重金属元素或有毒物质带入化 肥， 施用后被作物吸收， 危害人体健康 ； 同时无论是酸性土壤、 微酸性土壤还是石灰性土壤， 长期施用化肥会造成土壤中重金属元素富集， 被作物吸收。
26、， 对人体造成危害。 0004 2) 土壤微生物是个体小而能量大的活体， 它们既是土壤有机质转化的执行者， 又 是植物营养元素的活性库， 具有转化有机质、 分解矿物和降解有毒物质的作用。 中科院南京 土壤研究所的试验表明， 施用不同的肥料对微生物的活性有很大影响， 土壤微生物数量、 活 性大小的顺序为 ： 有机肥配施无机肥单施有机肥单施无机肥。 目前， 中国施用的化肥以 氮肥为主， 而磷肥、 钾肥和有机肥的施用量低， 降低土壤微生物的数量和活性。同时使土壤 营养失调， 加剧土壤中磷、 钾耗竭， 导致 NO3-N 累积。NO3-N 本身无毒， 但若未被作物充分同 化可使其含量迅速增加， 摄入人体。
27、后被微生物还原为 NO2-， 使血液的载氧能力下降， 诱发高 铁血红蛋白血症， 严重时可使人窒息死亡。同时， NO3-N 还可以在体内转变成强致癌物质亚 硝胺， 诱发各种消化系统癌变， 危害人体健康。在保护地栽培条件下， 即使是以施用有机肥 为主的 100cm 土层中 NO3-N 累积量也在 240 740kg/hm2。 0005 3)长期施用化肥会加速土壤酸化。 一方面与氮肥在土壤中的硝化作用产生硝酸盐 的过程相关 ； 铵先转变成亚硝酸盐， 亚硝酸盐再转变成硝酸盐， 形成 H+， 导致土壤酸化。另 一方面， 一些生理酸性肥料， 比如磷酸钙、 硫酸铵、 氯化铵在植物吸收肥料中的养分离子后， 使。
28、得土壤中 H+ 增多， 许多耕地土壤的酸化和生理性肥料长期施用有关。在作物选择吸收造 成土壤逐渐变酸的同时， 大气中的 NH3、 N2 可经过氧化与水解作用转化成 HNO3 降落到土壤 中引起土壤酸化。但化肥施用促进土壤酸化现象在酸性土壤中最为严重， 土壤酸化后可加 速 Ca、 Mg 从耕作层淋溶， 从而降低盐基饱和度和土壤肥力。 0006 蔬菜是人们普遍食用的大众化蔬菜， 日常消费量大， 但是近年来由于肥料的使用 不当以及农药的过度使用， 关于蔬菜安全隐患的问题时有发生， 给人们的健康与环境带来 很大的伤害。为此专利公布号为 CN103524250A 的中国专利公开了一种绿色蔬菜专用肥料， 。
29、由下列重量份的原料制成 ： 污泥 200-230、 秸秆 120-140、 红薯粉 110-130、 统糠 100-120、 糠 醛渣 70-90、 糖蜜 20-24、 蓖麻根粉 30-35、 硝酸铵 35-40、 氯化钾 16-19、 硫酸锰 3-5、 硫酸亚 铁 3-4、 碘化钾 1-2、 硼砂 4-5、 乙二胺四乙酸二钠 1-2、 EM 菌剂 6-9、 土壤调理剂 10-15、 水 适量。实际应用中发现， 上述绿色蔬菜专用肥料与其他常用肥料一样， 均需直接施用在土 壤中， 肥料成分只有少部分能被蔬菜吸收， 大量肥料会从土壤中流失， 利用率低， 增大了实 际生产和使用成本， 其次， 上述绿。
30、色蔬菜专用肥料对蔬菜表面病虫害防治效果非常有限， 仍 说 明 书 CN 104230403 A 6 2/10 页 7 然需要使用一定量的农药来进行配合使用， 人们在食用蔬菜时仍存在较高的风险， 此外， 该 绿色蔬菜专用肥料种使用了硝酸铵、 硫酸锰、 碘化钾等化学品， 仍然会对土壤造成污染和破 坏， 在蔬菜生产中， 该绿色蔬菜专用肥料仍不满足现有蔬菜生产的需求。 发明内容 0007 针对现有技术存在的上述问题， 本发明提供了一种蔬菜用有机肥料及其制备方 法。 0008 为实现上述目的， 本发明采用如下技术方案 ： 0009 一种蔬菜用有机肥料的制备方法， 包含以下步骤 ： 0010 (1) 以质。
31、量份数计， 将质量含量为 5-8的棕榈树精华溶液 200 份、 质量含量 为 5-8的竹子精华溶液 290 份、 竹子干细胞 50 份混合后， 加入适量蒸馏水并搅拌均匀， 35-40下发酵 7-8 天 ； 0011 (2) 在步骤 (1) 得到发酵混合物中再次混合质量含量为 5-8的莫兰或印茄精华 溶液 100 份以及莫兰或印茄干细胞 30 份， 加入适量蒸馏水并搅拌均匀， 35-45下发酵 7-9 天 ； 0012 (3) 将质量含量为 5-8的布袋莲或浮萍精华溶液 180 份以及布袋莲或浮萍干细 胞 30 份加入步骤 (2) 得到的混合物中， 再次加入适量蒸馏水并搅拌均匀， 35-40下发。
32、酵 8-9 天 ； 0013 (4) 将质量含量为 5-8的攀藤寄生植物精华 100 份以及攀藤寄生植物干细胞 20 份加入步骤 (3) 得到的混合物中， 再次加入适量蒸馏水并搅拌均匀， 30-35下发酵 6-8 天 ； 0014 (5)将步骤(4)制得的发酵产物经15000转/分的离心分离机旋转分离两小时， 随 后 30-35下发酵 6-8 天， 产物即所述蔬菜用有机肥料。 0015 进一步地， 所述竹子干细胞的提取方法包括如下步骤 ： 0016 (1) 提取竹子干细胞 ： 选择生长状况良好的竹子的树干、 枝干， 用无菌蒸馏水冲洗 10 分钟， 洗净后， 将竹子的树干、 枝干首先切割成长度 。
33、10-20 厘米的小块， 然后将整理后的 竹子原料放入在搅拌设备中粉碎成细末 ； 0017 (2) 将步骤 (1) 中粉碎制得的竹子细末原料， 放入多个盛有固态培养基的培养器 皿中， 在受控暗室内培养， 培养温度 251 度 ； 0018 (3) 形成层细胞的诱导 ： 在整个培养过程中保持 251 摄氏度的恒温， 培养器皿外 空间湿度保持在 861 左右， 培养 20-30 天后， 竹子内部组织的细胞系增量放大， 形成层细 胞系与韧皮组织分离， 细胞系组织有大量的液泡存在， 并且接触后易碎 ； 0019 (4) 将步骤 (3) 中形成层细胞群体用接种铲轻轻将其移入盛有液态培养基的培养 器皿中，。
34、 在暗室中， 用旋转摇床， 以 100rpm、 251 度下培养， 培养时间设定为 20 天， 使液态 培养基中的干细胞充分生长， 在生长期内始终保持极高的活力 ； 0020 (5) 竹子干细胞的提取 ： 首先， 将培养液细胞系通过分子质量截留值 4 万的中空纤 维超滤柱进行超滤， 然后将过滤后的全部细胞混合液经另一容器内快速搅拌 3 小时， 再进 行经旋转式真空蒸发器， 间接加热 80 度进行旋转吸空蒸发， 浓缩至小于原体液 5 分之 1 时 取出， 在放入真空冷冻干燥机内真空冷冻干燥， 30 小时后， 在含水分小于 3以下时取出， 说 明 书 CN 104230403 A 7 3/10 页。
35、 8 粉碎 100 目， 装袋收藏备用。 0021 进一步地， 所述莫兰或印茄干细胞的提取方法包括如下步骤 ： 0022 (1) 提取莫兰或印茄树木枝干的干细胞 ： 选择生长状况良好的莫兰或印茄的树 干， 用无菌蒸馏水冲洗10分钟， 洗净后， 将其切割成边长小于20厘米的方块， 然后将所述方 块放入在搅拌设备中粉碎成细末 ； 0023 (2) 将步骤 (1) 中粉碎制得的树干细末原料， 放入多个盛有固态培养基的培养器 皿中， 在受控暗室内培养， 培养温度 251 度 ； 0024 (3) 形成层细胞的诱导 ： 在整个培养过程中保持 351 度的恒温， 培养器皿外空间 湿度保持在 901 左右，。
36、 培养 15-25 天后， 树干内部组织的细胞系增量放大， 形成层细胞系 与韧皮组织分离， 细胞系组织有大量的液泡存在， 并且接触后易碎 ； 0025 (4) 将形成层细胞群体用接种铲轻轻将其移入盛有液态培养基的培养器皿中， 在 暗室中， 用旋转摇床， 以100rpm、 351度下培养， 培养时间设定为16天， 使液态培养基中的 干细胞充分生长， 在生长期内始终保持极高的活力 ； 0026 (5) 莫兰或印茄干细胞的提取 ： 首先， 将培养液细胞系通过分子质量截留值 4 万 的中空纤维超滤柱进行超滤， 然后将过滤后的全部细胞混合液经另一容器内快速搅拌 3 小 时， 再进行经旋转式真空蒸发器， 。
37、间接加热80度进行旋转吸空蒸发， 浓缩至小于原体液5分 之1时取出， 再放入真空冷冻干燥机内真空冷冻干燥， 25-30小时后， 在含水分小于3以下 时取出， 粉碎 100 目， 装袋收藏备用。 0027 进一步地， 所述固态培养基成分的组成为 ： 硝酸钾 1010mg/L， 硫酸镁 120mg/L， 硫 酸锰 9.5mg/L， 硫酸锌 2mg/L， 氯化钙 113mg/L， 硫酸铜 0.023mg/L， 碘化钾 0.72mg/L， 磷酸 二氢钠 130mg/L， 氯化钴 0.023mg/L， 硼酸 3.1mg/L， 钼酸钠 0.24mg/L， 乙二胺四乙酸铁钠 盐 37mg/L ； 肌醇 45。
38、2mg/L， 盐酸噻胺 (VB1)21mg/L， 吡哆醇 (VB6)1.9mg/L， 尼克酸 1.9mg/ L， L- 抗坏血酸 110mg/L， 柠檬酸 114mg/L ； 光氨酸 170mg/L， 酪蛋白水解物 510mg/L ； 蔗糖 30.100mg/L ； 2， 4-D2.5mg/L， 赤霉素0.6mg/L ； 琼脂39.000mg/L ； 活性碳3000mg/L ； 磁化水1 升。 0028 进一步地， 所述液态培养基成分的组成 ： 硝酸钾 1010mg/L， 硫酸镁 120mg/L， 硫酸 锰 9.5mg/L， 硫酸锌 2mg/L， 氯化钙 113mg/L， 硫酸铜 0.023m。
39、g/L， 碘化钾 0.72mg/L， 磷酸二氢 钠 130mg/L， 氯化钴 0.023mg/L， 硼酸 3mg/L， 钼酸钠 0.24mg/L， 乙二胺四乙酸铁钠盐 37mg/ L， 肌醇 200mg/L， 盐酸噻胺 (VB1)21mg/L， 吡哆醇 (VB6)1.9mg/L， 尼克酸 1.9mg/L， L- 抗坏 血酸 110mg/L， 柠檬酸 148mg/L， 2， 4-D2.5mg/L， 赤霉素 0.1mg/L， 天冬氨酸 134mg/L， 精氨酸 180mg/L， 脯氨酸118mg/L， 甘氨酸60mg/L， 色氨酸80mg/L， 蔗糖21.000mg/L， 麦饭石2000mg/ L。
40、， 锗石 2000mg/L， 磁化水 1 升。 0029 进一步地， 布袋莲或浮萍干细胞的提取方法包括如下步骤 ： 0030 (1) 将布袋莲或浮萍用无菌水冲洗 10 分钟， 洗净 ； 0031 (2) 制备固态培养基 ： 硝酸钾 2500mg/L， 硫酸镁 122mg/L， 硫酸锰 11mg/L， 硫酸 锌 2.5mg/L， 硫酸铜 0.025mg/L， 硫酸胺 135mg/L ； 氯化钙 112mg/L， 碘化钾 0.7mg/L， 氯化钴 0.025mg/L， 磷酸二氢钠 132mg/L， 硼酸 2.6mg/L， 钼酸钠 0.23mg/L， 烟酸 2.0mg/L， 吡哆醇 2.1mg/L，。
41、 L- 抗坏血酸 53mg/L， 柠檬酸 78mg/L， L- 天冬氨酸 140mg/L， L- 精氨酸 180mg/L， 甘氨酸 75mg/L， 脯氨酸 120mg/L ； a- 萘乙酸 2.2mg ； 蔗糖 10.200mg/L ； 活性炭 500mg/ ； 琼脂 说 明 书 CN 104230403 A 8 4/10 页 9 3800mg/L ； 磁化水 0.7 升 ； 0032 (3) 形成层分离培养 ： 将水生植物用小刀切碎后放进固态培养基中， 在受控暗室 内培养 15 天， 培养温度 251 ； 随后将形成层细胞系用接种铲轻轻将其移入另一同样培 养基培养器皿内， 在放大培养 20 。
42、天， 最后将其放大培养的细胞系群体移入液态培养基中， 在暗室内用摇床旋转培养， 在 160rpm、 251环境中培养， 培养时间设定为 20 天 ； 0033 所述液态培养基的成分为 ： 硫酸钾 995mg/L， 磷酸氢钾 160mg/L， 硫酸镁 185mg/L， 硫酸锌 9mg/L， 硫酸锰 22mg/L， 硫酸铜 0.25mg/L， 氯化钙 70mg/L， 硝酸钙 480mg/L， 钼酸钠 0.26mg/L， 硼酸 6.5mg/L， 硝酸胺 420mg/L， 乙二胺四乙酸铁钠盐 38mg/L， 肌醇 230mg/L， 硫 胺素 22mg/L， 烟酸 2mg/L， 吡哆醇 2.5mg/L，。
43、 L- 抗坏血酸 65mg/L， 柠檬酸 72mg/L， L- 天冬氨 酸 140mg/L， L- 精氨酸 180mg/L， 甘氨酸 80mg/L， 脯氨酸 120mg/L， a- 萘乙酸 2.2mg/L ； 蔗糖 31000mg/L ； 麦饭石颗粒60000mg/L， 锗石颗粒60000mg/L， 硒矿石颗粒主90000mg/L ； 磁化水 0.7 升 ； 0034 (4) 布袋莲或浮萍干细胞的分离 ： 将液态培养基用 1um 过滤器过滤， 然后将过滤后 的全部细胞混合液经另一容器内快速搅拌 2-3 小时， 在进行经旋转式真空蒸发器， 间接加 热 60 度进行旋转吸空蒸发， 浓缩至小于原体液。
44、 5 分之 1 时取出， 再放入真空冷冻干燥机内 真空冷冻干燥， 20-22 小时后， 在含水分小于 3以下时取出， 粉碎 100 目， 装袋收藏备用。 0035 进一步地， 攀藤寄生植物干细胞的提取方法包括如下步骤 ： 0036 (1) 将攀藤寄生植物用无菌蒸馏水冲洗 15 分钟， 洗净 ； 0037 (2) 固态培养基的制备 ： 0038 固态培养基原料为 ： 硝酸钾 2510mg， 硫酸胺 136mg， 硫酸镁 123mg， 硫酸锰 10mg， 硫酸锌 2.5mg， 硫酸铜 0.026mg， 氯化钙 114mg， 碘化钾 0.7mg， 氯化钴 0.026mg， 磷酸二氢钠 131mg， 。
45、硼酸 2.8mg， 钼酸钠 0.26mg， 乙二胺四乙酸铁钠盐 37mg ； 肌醇 210mg， 硫胺素 21mg， 烟酸 2.2mg， 吡哆醇 2.2mg， L- 抗坏血酸 52mg， 柠檬酸 74mg ； L- 天冬氨酸 135mg， L- 精氨酸 176mg， 甘氨酸 76mg， 脯氨酸 116mg， - 萘乙酸 2.2mg， 蔗糖 10.100mg， 活性炭 200mg， 琼脂 3.100mg， 磁化水 0.63 升 ； 0039 所述固态培养基的制备过程 ： 将无机盐类各养分分别用 20mL 磁化水稀释， 将维生 素类合并放入50mL无菌磁化水中稀释， 将氨基酸类合并放入50mL无菌。
46、磁化水中稀释， 将生 长素放入 10mL 无菌磁化水中稀释 ； 然后将稀释后的无机盐类分别注入烧瓶磁化水中， 边注 入边搅拌， 在将糖类、 固化剂、 活性炭放入， 全部溶解后， 封口， 进行高压灭菌 30 分钟， 降温 取出后， 在将稀释的维生素和氨基酸溶液、 生长素溶液分别放入搅匀后， 冷凝 ； 0040 (3) 形成层分离培养 ： 将攀藤寄生植物的主干或叶子用刀切成 1-2cm 长的小段， 移 入固态培养基中， 在受控的暗室内避光培养 28 天， 培养温度 251； 培养 28 天后， 将形成 层细胞群体用接种勺或接种铲轻轻将其移入另一同样培养基器皿内在放大培养 23 天 ； 0041 (。
47、4) 将其放大培养的细胞系群体移入液态培养基中， 在暗室中， 用旋转摇床以 100rpm， 251培养， 培养时间为 20 天 ； 0042 其中， 液态培养基的组成为 ： 硫酸镁 181mg， 硫酸锰 23mg， 硫酸锌 8.9mg， 硫酸铜 0.23mg， 硝酸钙 473mg， 硝酸胺 400mg， 氯化钙 60mg， 碘化钾 995mg， 钼酸钠 0.24mg， 硼酸 6mg， 磷酸氢钠 170mg， 乙二胺四乙酸铁钠盐 37mg， 肌醇 210mg， 硫胺素 21mg， 烟酸 2.2mg， 吡哆醇 2.2mg， L- 抗坏血酸 60mg， 柠檬酸 75mg ； L- 天冬氨酸 135m。
48、g， L- 精氨酸 178mg， 甘氨酸 75mg， 说 明 书 CN 104230403 A 9 5/10 页 10 脯氨酸 116mg， - 萘乙酸 2mg， 蔗糖 30.100mg， 麦饭石颗粒 50000mg， 锗石 50000mg， 磁化水 1 升 ； 0043 (5) 攀藤寄生植物干细胞的提取 ： 将液态培养基用 1.5um 过滤器过滤， 然后将过滤 后的全部细胞混合液经另一容器内快速搅拌 2 小时， 再进行经旋转式真空蒸发器， 间接加 热 65 度进行旋转吸空蒸发， 浓缩至小于原体液 5 分之 1 时取出， 再放入真空冷冻干燥机内 真空冷冻干燥， 20 小时后， 在含水分小于 3。
49、以下时取出， 粉碎 100 目， 装袋收藏备用。 0044 进一步地， 所述棕榈树精华溶液是通过将棕榈树的种子在 650-680的温度下蒸 2-2.5个小时， 然后用15000转/分的粉碎机粉碎， 随后注入蒸馏水并发酵10-20天， 然后经 渣液分离器分离， 随后经 1um 过滤器过滤， 滤液间接加热 65-85 度进行旋转吸空蒸发， 浓缩 至矿物质含量为 5-8蒸发完成， 最终制得的溶液 ； 所述布袋莲或浮萍精华溶液是通过将 布袋莲或浮萍用15000转/分的粉碎机将其粉碎后注入蒸馏水并发酵12-15天， 然后经1um 过滤器过滤后间接加热 65-85 度进行旋转吸空蒸发， 浓缩至矿物质含量为 5-8制得的溶 液 ； 所述攀藤寄生植物精华溶液是通过将攀藤寄生植物用 15000 转 / 分的粉碎机将其粉碎 后注入蒸馏水并发酵 15-18 天， 然后经 1um 过滤器过滤， 滤液间接加热 65-85 度进行旋转吸 空蒸发， 浓缩至矿物质含量为 5-。