CN90110394.2
1990.12.30
CN1055202A
1991.10.09
驳回
无权
|||公开|||
C12P19/38; C12P19/36
陕西省微生物研究所;
谢伯泰; 齐凡
710043陕西省西安市西影路铁炉庙
中国科学院西安专利事务所
任越
本发明公开了一种用多核苷酸磷酸化酶对核酸进行磷酸解,反应直接生产核苷二磷酸的工艺方法,具有在较高底物浓度下,直接制备四种核苷二磷酸的特点,适合于大规模的工业生产,并有工艺简单、产率高、成本低、无污染等优点。
1: 1、一种利用多核苷酸磷酸化酶(PNPase)对核酸进行磷酸解反应,生产核苷二磷酸的工艺方法。本发明的特征在于:用0.1-0.6Mol/L(PH8.2)的磷酸缓冲液,把核酸配成60-150g/L的溶液,并使溶液中含KClMol/L;MgCl 2 0.01Mol/L,CuSO 4 0.004Mol/L,脲0.3Mol/L,PNPase1000-3000单位/L,37±2℃反应34-48小时,结束反应后,分离浓缩、沉淀、干燥,即得成品。 2、根据权利要求1所述的工艺方法,其特征在于:核酸原料选用脱磷脱脂二级结构的核酸。 3、根据权利要求2: 2所述的工艺方法,其特征在于,分离方法是按每克树脂吸附4-5克核酸的比例,把反应液直接上国产D 296 大孔阴离子交换树脂柱,选用0.02Mol/L\的甲酸洗脱CDP,再用0.15Mol/L的甲酸洗脱ADP,用0.01Mol/L甲酸-0.05Mol/L甲酸钠溶液洗脱UDP,最后用0.1Mol/L甲酸-0.Mol/L甲酸钠溶液洗脱GDP。 4、根据权利要求3所述的工艺方法,其特征在于,浓缩的方法是把洗脱下来的四种核苷二磷酸溶液,分别调PH至4.5-5.0,按每克树脂吸附3克核苷二磷酸的比例上国产D 001-cc 大孔阴离子交换树脂柱,用0.05N盐酸洗脱。
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本发明公开了一种用多核苷酸磷酸化酶对核酸进行磷酸解,反应直接生产核苷二磷酸的工艺方法,具有在较高底物浓度下,直接制备四种核苷二磷酸的特点,适合于大规模的工业生产,并有工艺简单、产率高、成本低、无污染等优点。。
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