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体外细胞低温保存的保护剂
    本发明涉及一种体外低温条件下保存血细胞的保护剂。

    造血干细胞移植是治疗白血病及恶性肿瘤的一项根本性措施，可使不少不治之症患者启死回生。造血干细胞的保存是造血干细胞移植，特别是外周血干细胞移植的一个重要技术环节。为了使收集到的干细胞达到能在体内植入的阈剂量，需用血细胞分离器多次重复分离，首尾3-5天，在此期间，所分离的细胞保存在4-6℃冰箱中，但随着保存时间的延长，造血干细胞的的死亡迅速增加。有人用二甲基亚砜和血型相同的血清作冷冻保存液4℃保存入骨髓(张效民等两种骨髓保存方法在自体骨髓移植中的应用。临床血液学杂志1992；5：89)。本发明使用超氧化物歧化酶(SOD)作为4℃保存的低温保护剂以长时间体外保存人造血干细胞，在这方面，国外曾有人报道在器官移植中将羊的离体心肺放在4℃条件下保存，在保存前和保存过程中灌注SOD，对改善器官功能和活存情况有良好效果(LeGY et al.Heart-Lung Protection from ischemic injury during 8 hour hypothermicpresservation.Acta Biomed Ateneo Parmense 1994；65：181)。

    本发明的目的在于提供一种体外造血干细胞低温保存的保护剂。

    本发明是在保养液中加入超氧化物歧化酶，以减低造血细胞地死亡。

    本发明的具体实施方法如下：

    1、造血干细胞悬液的制备：以外周血干细胞制备为例，给供血者或病人自身输注造血干细胞动员剂，待造血干细胞达到高峰时用血细胞分离器从肘静脉分离单个核细胞2-4小时，每日或隔日分离1次，连续3-4次。

    2、取冻干粉剂SOD，用生理盐水溶解，稀释至适当浓度，加入细胞悬液中，使SOD终浓度在0.16-6U/ml之间。在4-6℃冰箱保存1-7天，根据需要随时可以取出按计划给病人输入。与此同时进行有核细胞计数、活细胞检测和造血祖细胞培养，旨在给出病人移植的造血干细胞的数量。

    3、如是自体骨髓保存，在采集的骨髓细胞悬液中按比例加入SOD后置于4-6℃冰箱保存，需要时从冰箱取出给病人输注。

    SOD进入人体后，在细胞外发挥清除超氧化物的作用，经亚急性和慢性实验，证明无明显不良反应。

    本发明(体外细胞低温保存的保护剂)实施后，与以往多种方法相比，具有以下优点：4-6℃条件下保存造血细胞，保养液中加SOD与常规不加SOD的方法比较，造血祖细胞回收率明显不同。以保存入骨髓造血干细胞不同时间的CFU-GM产率为例，加SOD保存3天时CFU-GM活存率提高两倍，保存5天提高5倍，从而可以明显增加了输入的干细胞的数量，减少了干细胞的分离次数。每减少一次分离，可节省经费开支约2000元。

    实施例：

    4-6℃保存自体外周血造血干细胞当肿瘤病人注射造血干细胞动员剂后，在造血于细胞的高峰期通过血细胞分离器采集外周血干细胞，所采集的干细胞一般浓度在1-2×108/ml左右，4℃保存前用细胞培养液将细胞稀释1-2倍，并使保存体系含人10％AB血清和0.16-6U/ml的SOD。上述体系置于4-6℃冰箱保存，保存期间防止冰箱温度变化。一般情况所采集的外周血干细胞需在冰箱中保存3-5天。在此期间给病人进行大剂量放化疗，并保证大部分药物已从体内清除。自体造血于细胞回输时，从冰箱中取出保存体系，在无菌条件下取出约2ml进行造血祖细胞体外集落测定及细胞活性测定，加SOD保存3天时CFU-GM活存率提高两倍，保存5天提高5倍。保存的细胞可不经处理直接回输给病人，不必再洗涤除去所加的SOD。