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1、(10)申请公布号 CN 102827112 A (43)申请公布日 2012.12.19 C N 1 0 2 8 2 7 1 1 2 A *CN102827112A* (21)申请号 201210346073.7 (22)申请日 2012.09.18 C07D 307/58(2006.01) (71)申请人南京泽朗医药科技有限公司 地址 210046 江苏省南京市栖霞区尧化街道 甘家边108号05幢6楼 (72)发明人刘东锋 (54) 发明名称 一种卷团素C的制备方法 (57) 摘要 本发明涉及一种操作简单、污染少的卷团素C 的制备方法，工艺步骤为：（1）取粘液卷团叶，经 粉碎处理，用醇类溶。
2、液进行连续逆流超声提取，过 滤得到提取液；（2）提取液通过膜分离系统，浓缩 干燥得粗提物；（3）采用高速逆流色谱法分离纯 化粗提物中的卷团素C，其两相溶剂系统为石油 醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相为固定相，下相为 流动相，收集卷团素C组分；（4）将卷团素C组分 进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85%甲 醇回流溶解，放置重结晶。本发明制备卷团素C， 产品纯度高，易于实现产业化放大。 (51)Int.Cl. 权利要求书1页 说明书3页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1页 2 1.一种卷团素C的制备方法，其特征在于包括以下步骤。
3、： （1）取粘液卷团叶，经粉碎处理，加8-15倍50-80%乙醇溶液在30-45的温度下进行 连续逆流超声提取30-80min，过滤，得到提取液； （2）提取液通过截留分子量为1000-3000的超滤膜超滤和截留分子量为100-500的纳 滤膜浓缩，操作压力为0.5-2.5MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物； （3）采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，其两相溶剂系统为石油醚-乙 酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动 相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集卷团素C组分； （4）将卷团素C组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，。
4、加入90%甲醇回流溶解，放置 重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C。 2.根据权利要求1所述的一种卷团素C的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中超声 频率为40-65KHz。 3.根据权利要求1所述的一种卷团素C的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中石油 醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为5-7:5-7:4-7:3-5。 权 利 要 求 书CN 102827112 A 1/3页 3 一种卷团素 C 的制备方法 技术领域 0001 本发明属于中药提取分离技术领域，涉及一种从粘液卷团叶中分离制备卷团素C 的方法。 背景技术 0002 卷团素C来源于番荔枝科植物番荔枝科(Annonaceae。
5、)粘液卷团Rollinia mucosa(Jacq.)Vaill.的叶。 0003 粘液卷团叶主要有效成分为乙酰精宁类化合物，以卷团素C含量最高。卷团素C具 有细胞毒活性，有显著的选择性细胞毒活性，对A-549、MCF-7、HT-29、A-498、PC-3和PACA-2 的细胞株ED 50 (g/ml)依次为1.3、1.1、0.063、1.4、0.29和0.11。目前，番荔枝科植物次生 代谢物乙酰精宁类（annonanceous acetogenins，AAGs）化合物被视为新的抗肿瘤药物的潜 在资源，AAGs能抑制人卵巢瘤IA9细胞复制、诱导癌细胞凋亡，是强效的复合物I抑制剂， 抗肿瘤药物的。
6、候选药物。 0004 目前，尚未见高含量卷团素C的制备方法相关专利报道。 发明内容 0005 本发明的目的是提供一种卷团素C的制备方法。 0006 本发明的目的是通过以下技术方案实现的： （1）取粘液卷团叶，经粉碎处理，加8-15倍50-80%乙醇溶液在30-45的温度下进行 连续逆流超声提取30-80min，过滤，得到提取液； （2）提取液通过截留分子量为1000-3000的超滤膜超滤和截留分子量为100-500的纳 滤膜浓缩，操作压力为0.5-2.5MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物； （3）采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，其两相溶剂系统为石油醚-乙 酸乙酯-甲醇-水，上。
7、相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动 相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集卷团素C组分； （4）将卷团素C组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入90%甲醇回流溶解，放置 重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C。 0007 所述步骤（1）中超声频率为40-65KHz。 0008 所述步骤（3）中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为 5-7:5-7:4-7:3-5。 0009 本方法的积极效果是： （1）本方法采用连续逆流超声提取，实现了超声提取和连续逆流提取同时进行，提取效 果好，同时实现连续作业； （2）本方法采用膜分离技术，能有效去除多种杂质，。
8、且不会破坏有效成分的生物活性， 而且与连续逆流超声提取相结合，实现提取浓缩连续作业； （3）本方法采用高速逆流色谱法，收率高、制备量大、制备周期短，解决了柱层析效率低 说 明 书CN 102827112 A 2/3页 4 而且污染严重的技术缺陷； （4）本方法工艺步骤操作较简单，易操作，所得产品纯度高。 0010 下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。 0011 具体实施方式： 实施例1： 取粘液卷团叶，经粉碎处理，称取1kg，加8倍80%乙醇溶液在45的温度下进行连续 逆流超声提取30min，超声频率为60KHz，过滤，得到提取液，提取液通过。
9、截留分子量为3000 的超滤膜超滤和截留分子量为500的纳滤膜浓缩，操作压力为0.8MPa，膜浓缩液减压浓缩 干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，以体积比5:5:6:3石 油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主 机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长 为222nm，收集卷团素C组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入90%甲醇回流溶解， 放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C，含量95.7%。 0012 实施例2： 取粘液卷团叶，经粉碎处理，称取1kg，加12倍50%乙醇溶液在30的。
10、温度下进行连续 逆流超声提取80min，超声频率为45KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为1000 的超滤膜超滤和截留分子量为500的纳滤膜浓缩，操作压力为1.8MPa，膜浓缩液减压浓缩 干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，以体积比7:7:7:4石 油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主 机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长 为222nm，收集卷团素C组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入90%甲醇回流溶解， 放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C，含量96.4%。 。
11、0013 实施例3： 取粘液卷团叶，经粉碎处理，称取2kg，加10倍70%乙醇溶液在35的温度下进行连续 逆流超声提取60min，超声频率为40KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为1000 的超滤膜超滤和截留分子量为200的纳滤膜浓缩，操作压力为2.8MPa，膜浓缩液减压浓缩 干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，以体积比6:6:7:5石 油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主 机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长 为222nm，收集卷团素C组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出。
12、结晶，加入90%甲醇回流溶解， 放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C，含量96.5%。 0014 实施例4： 取粘液卷团叶，经粉碎处理，称取5kg，加8倍70%乙醇溶液在40的温度下进行连续 逆流超声提取40min，超声频率为50KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为3000 的超滤膜超滤和截留分子量为300的纳滤膜浓缩，操作压力为0.5MPa，膜浓缩液减压浓缩 干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，以体积比5:6:7:5石 油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主 机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫。
13、外检测器在线监测，检测波长 说 明 书CN 102827112 A 3/3页 5 为222nm，收集卷团素C组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入90%甲醇回流溶解， 放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C，含量97.8%。 0015 实施例5： 取粘液卷团叶，经粉碎处理，称取10kg，加15倍80%乙醇溶液在45的温度下进行 连续逆流超声提取70min，超声频率为65KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量 为1000的超滤膜超滤和截留分子量为100的纳滤膜浓缩，操作压力为2.5MPa，膜浓缩液 减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，以体积比 7:6:7:4石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定 相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测， 检测波长为222nm，收集卷团素C组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入90%甲醇回 流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C，含量97.9%。 说 明 书CN 102827112 A 。