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1、(10)申请公布号 CN 102786529 A (43)申请公布日 2012.11.21 C N 1 0 2 7 8 6 5 2 9 A *CN102786529A* (21)申请号 201210320996.5 (22)申请日 2012.09.03 C07D 493/14(2006.01) A61K 31/357(2006.01) A61P 31/18(2006.01) (71)申请人云南民族大学 地址 650500 云南省昆明市呈贡大学城雨花 校区 (72)发明人高雪梅 胡秋芬 苏丽丹 沈艳琼 崔明珠 杨丽英 (74)专利代理机构昆明知道专利事务所(特殊 普通合伙企业) 53116 代理。
2、人姜开侠 姬介南 (54) 发明名称 一种紫檀烷类化合物及其制备方法与应用 (57) 摘要 本发明公开了一种紫檀烷类化合物及其制备 方法与应用。所述紫檀烷类化合物是从腊肠树 中分离得到，其分子式为C 17 H 14 O 6 ，具有下述结构： 所述的紫檀 烷类化合物制备方法，是以腊肠树为原料，经浸膏 提取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离步骤，具体 为：将腊肠树粉碎以乙醇超声提取，提取液合并， 过滤，减压浓缩成浸膏；浸膏用硅胶装柱进行硅 胶柱层析；以体积配比为1:00:1的氯仿-丙酮 溶液进行梯度洗脱；洗脱液的9:1部分进一步用 高压液相色谱分离纯化即得所述的紫檀烷类化合 物。本发明经试验证明，具备。
3、很好的抗HIV-1活 性，本发明化合物结构简单，人工合成容易实现， 化合物的活性好；可作为抗HIV-1药物的先导性 化合物。 (51)Int.Cl. 权利要求书2页 说明书7页 附图3页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 7 页 附图 3 页 1/2页 2 1.一种紫檀烷类化合物，其特征在于所述紫檀烷类化合物是从腊肠树中分离得到，其 分子式为C 17 H 14 O 6 ，具有下述结构： 。 2.一种权利要求1所述的紫檀烷类化合物的制备方法，其特征在于以腊肠树为原料， 经浸膏提取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离步骤，具体为： A、浸膏提取：将腊。
4、肠树粉碎到2040目，以9099%乙醇超声提取24次，每次 3060min，提取液合并，过滤，减压浓缩提取液至 1/4 1/2 体积时，静置后滤除沉淀物， 然后浓缩成浸膏； B、硅胶柱层析：浸膏用重量比1012倍量的160 - 200目硅胶装柱进行硅胶柱层析；以 体积配比为1:00:1的氯仿-丙酮溶液进行梯度洗脱，合并相同的部分，收集各部分洗脱液 并浓缩； C、高压液相色谱分离：B步骤洗脱液的9:1部分进一步用高压液相色谱分离纯化即得 所述的紫檀烷类化合物。 3.根据权利要求2所述的紫檀烷类化合物的制备方法，其特征在于所述A步骤中乙醇 浓度为9496%。 4.根据权利要求2所述的紫檀烷类化合物。
5、的制备方法，其特征在于所述B步骤中浸膏 在经硅胶柱层析粗分前，用重量比1.53倍量的丙酮溶解后用浸膏重0.81.2倍的80100 目硅胶硅胶拌样，进一步除去杂质。 5.根据权利要求2所述的紫檀烷类化合物的制备方法，其特征在于所述B步骤中氯 仿-丙酮溶液体积配比为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1。 6.根据权利要求2所述的紫檀烷类化合物的制备方法，其特征在于所述D步骤中高压 液相色谱分离纯化是采用4056的甲醇为流动相，20 250 mm, 5 m 的Zorbax SB-C 18 反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样4555 L，收集10。
6、.129.5 min的色谱峰，多次累加后蒸干。 7.根据权利要求2或6所述的紫檀烷类化合物的制备方法，其特征在于所述高压 液相色谱分离纯化是采用4551的甲醇为流动相，20 250 mm, 5 m 的Zorbax SB-C 18 反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样4749 L，收集 14.320.1min的色谱峰，多次累加后蒸干。 8.根据权利要求2所述的紫檀烷类化合物的制备方法，其特征在于高压液相色谱法分 离纯化后的物质再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用凝胶柱层析分离，以进一步分 离纯化。 权 利 要 求 书CN 102786529 A 2/2页 3 9.根。
7、据权利要求8所述的紫檀烷类化合物的制备方法，其特征在于凝胶柱层析使用的 是Sephadex LH-20 凝胶柱。 10.一种权利要求1所述紫檀烷类化合物在制备抗HIV-1药物中的应用。 权 利 要 求 书CN 102786529 A 1/7页 4 一种紫檀烷类化合物及其制备方法与应用 技术领域 0001 本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种紫檀烷类化合物及其制备 方法与应用。 背景技术 0002 腊肠树（Cassia fistula）又称阿勃勒、波斯皂荚、猪肠豆，属于豆科，决明属的落 叶小乔木或中等乔木；原产热带非洲，圆杆形的果实，外形像大香肠，因而名之。分布于我 国广东、广西、福。
8、建、云南、台湾等省，高度可达到15m，幼枝树皮光滑，灰色，老时粗糙，暗褐 色。腊肠树是傣族民间一种常用的草药，其根、叶、茎均可入药；味苦，性凉；根用于收敛、强 壮、解热、泻下，又用于心痛；叶用于皮肤病、轮癣、风湿病、中风；花用于便秘，并作为解热 药；果实味苦，性寒，有主热病、祛痰、杀虫、通经络的功能。用于骨蒸痨热、胃烷病（胃、十二 脂肠、急慢性胃炎、胃肠神经官能症等），并对便秘、胃酸过多、食欲不振亦有改善作用。现代 研究表明：腊肠树中富含蒽醌、三萜、甾体、生物碱、黄酮等化合物。未见可以提取紫檀烷类 化合物的报道。 发明内容 0003 本发明的第一目的是提供一种紫檀烷类化合物；第二目的在于提供所。
9、述紫檀烷类 化合物的制备方法；第三目的在于提供所述紫檀烷类化合物在制备抗艾滋病药物中的应 用。 0004 本发明的第一目的是这样实现的，所述紫檀烷类化合物是从腊肠树中分离得到， 其分子式为C 17 H 14 O 6 ，具有下述结构： 本发明的第二目的是这样实现的，所述的紫檀烷类化合物制备方法，是以腊肠树为原 料，经浸膏提取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离步骤，具体为： A、浸膏提取：将腊肠树粉碎到2040目，以9099%乙醇超声提取24次，每次 3060min，提取液合并，过滤，减压浓缩提取液至 1/4 1/2 体积时，静置后滤除沉淀物， 然后浓缩成浸膏； B、硅胶柱层析：浸膏用重量比1012倍。
10、量的160 - 200目硅胶装柱进行硅胶柱层析；以 体积配比为1:00:1的氯仿-丙酮溶液进行梯度洗脱，合并相同的部分，收集各部分洗脱液 说 明 书CN 102786529 A 2/7页 5 并浓缩； C、高压液相色谱分离：B步骤洗脱液的9:1部分进一步用高压液相色谱分离纯化即得 所述的紫檀烷类化合物。 0005 以上述方法制备的紫檀烷类化合物的结构是通过以下方法测定出来的： 本发明化合物为黄色胶状物；旋光值22.5 D+267 (溶剂为甲醇c 0.020)；紫外光 谱 (溶剂为甲醇)， max (log): 345 (2.32), 296 (4.11), 210 (4.62) nm；圆二色谱。
11、 (CD) (溶剂为甲醇c 0.0200, () 287 (-3.18), 247 (+18.7), 232 (-23.6)；红外 光谱 (溴化钾压片) 3380, 2965, 2874, 1622, 1535, 1486, 1427, 1355, 1258, 1154, 1032, 860 cm -1 ；HRESIMS显示本发明化合物准分子离子峰m/z 337.0680 M+Na + (计算 值为337.0688)，结合 1 H和 13 C NMR谱(图-1和图-2,数据归属见表-1) 给出其分子式 C 17 H 14 O 6 ，不饱和度为11。 0006 1 H 和 13 C NMR谱信号。
12、表明该化合物中含17个碳和14个氢。氢谱信号 H 4.26 (dd, J=4.6, 10.5 Hz, H-4)、 H 3.53 (t, J=10.5 Hz, H-2)、 H 3.43 (m, H-3) 和 H 5.41 (d, J=6.7 Hz, H-4)显示该化合物为紫檀烷类化合物。芳环上的 4 组氢谱信号 H 6.97 (d, J=8.5 Hz, H-5)、 H 6.59 (d, J=8.5 Hz, H-6)、 H 6.46 (d,J=8.1 Hz, H-5) 和 H 6.74 (d, J=8.1 Hz, H-6)清楚的显示该化合物为 7,8,3,4-取 代紫檀烷。此外氢谱中还有1个甲氧基。
13、信号( H 3.80)和1个亚甲二氧基信号( H 5.86, 5.91 s)。碳谱和 DEPT 谱中显示有 2 个芳环(包含 4 个次甲基双键碳)、1 个亚甲基、 1个次甲基、1个氧化的次甲基、1个甲氧基和1个亚甲二氧基信号，这也支持了化合物为 7,8,3,4-取代紫檀烷。通过甲氧基质子信号( H 3.80)和 C-4( C 150.8)的 HMBC相关可证实甲氧基取代在C-4位。亚甲二氧基质子( H 5.86, 5.91)和C-7 ( C 146.7)、C-8 ( C 134.0)的HMBC相关证实亚甲二氧基取代在C-7和C-8位。由于甲氧基 和亚甲二氧基的取代位置确定，而且核磁共振谱中没有。
14、观察到其它取代基信号，化合物中 还应该有1个羟基取代在C-3位来支持7,8,3,4-取代紫檀烷；这也和高分辨质谱 测定的分子式一致。化合物中有2个手性碳、根据其旋光值和CD谱数据和文献 ( J. Braz. Chem. Soc. 2012，23，1239-1243) 对比可推断化合物的构型为(3S, 4S)。以上信息可确定 新化合物结构。命名为 3-羟基-4-甲氧基-8-亚甲二氧基-紫檀烷。 0007 表-1. 化合物的 1 H NMR和 13 C NMR数据(溶剂为CD 3 OD) No. C (mult.) H (mult,J,Hz) 267.3t 4.26,dd,J=4.6,10.5 2。
15、67.3t 3.53,t,J=10.5 3 41.9d 3.43m 4 80.1d 5.41,d,J=6.7 5 122.0d 6.97,d,J=8.5 6 110.1d 6.59,d,J=8.5 7 146.7s 8 134.0s 9 145.3s 10 113.4s 1122.5s 2148.5s 3132.1s 4150.8s 说 明 书CN 102786529 A 3/7页 6 5106.2d 6.46,d,J=8.1 6115.7d 6.74,d,J=8.1 OMe-456.3q 3.80s -OCH 2 O- 101.2t 5.86,5.91s 本发明的第三目的是这样实现的，即将所。
16、述紫檀烷类化合物应用于抗HIV-1药物的制 备。 0008 本发明紫檀烷类化合物是首次被分离出来的，通过核磁共振和质谱测定方法确定 了为紫檀烷类化合物，并表征了其具体结构。经抗细胞毒活性检测试验，试验结果清楚地表 明，CC 50 值大于200 g/mL，EC 50 值为1.08 g/mL，其治疗指数TI值大于185.2，该化合物 显示出很好的抗HIV-1活性，揭示了本发明的化合物在制备抗HIV-1药物中有良好的应用 前景。本发明化合物结构简单，人工合成容易实现，化合物的活性好；可作为抗HIV-1药物 的先导性化合物。 附图说明 0009 图1为化合物的核磁共振碳谱（ 13 C NMR）； 图2。
17、为化合物的核磁共振氢谱（ 1 H NMR）； 图3为化合物的主要HMBC相关。 具体实施方式 0010 下面结合附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基 于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。 0011 本发明所述紫檀烷类化合物是从腊肠树枝条干品中分离得到，其分子式为 C 17 H 14 O 6 ，具有下述结构： 本发明所述的紫檀烷类化合物制备方法，是以腊肠树枝条干品为原料，经浸膏提取、硅 胶柱层析、高压液相色谱分离步骤，具体为： A、浸膏提取：将腊肠树粉碎到2040目，以9099%乙醇超声提取24次，每次 3060min，提取液合并，过滤，减压浓缩提。
18、取液至 1/4 1/2 体积时，静置后滤除沉淀物， 然后浓缩成浸膏； B、硅胶柱层析：浸膏用重量比1012倍量的160 - 200目硅胶装柱进行硅胶柱层析；以 体积配比为1:00:1的氯仿-丙酮溶液进行梯度洗脱，合并相同的部分，收集各部分洗脱液 并浓缩； C、高压液相色谱分离：B步骤洗脱液的9:1部分进一步用高压液相色谱分离纯化即得 说 明 书CN 102786529 A 4/7页 7 所述的紫檀烷类化合物。 0012 所述A步骤中乙醇浓度为9496%。 0013 所述B步骤中浸膏在经硅胶柱层析粗分前，用重量比1.53倍量的丙酮溶解后用 浸膏重0.81.2倍的80100目硅胶硅胶拌样，进一步除。
19、去杂质。 0014 所述B步骤中氯仿-丙酮溶液体积配比为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1。 0015 所述D步骤中高压液相色谱分离纯化是采用4056的甲醇为流动相，20 250 mm, 5m 的Zorbax SB-C 18 反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进 样4555 L，收集10.129.5 min的色谱峰，多次累加后蒸干。 0016 所述高压液相色谱分离纯化是采用4551的甲醇为流动相，20 250 mm, 5 m 的Zorbax SB-C 18 反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样 4749 L，收集1。
20、8.2 min的色谱峰，多次累加后蒸干。 0017 所述高压液相色谱法分离纯化后的物质再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动 相，用凝胶柱层析分离，以进一步分离纯化。 0018 所述凝胶柱层析使用的是Sephadex LH-20 凝胶柱。 0019 本发明所述紫檀烷类化合物应用是其在制备抗HIV-1药物中的应用。 0020 实施例1 取采自于云南省西双版纳地区的腊肠树样品3.5 kg粉碎到40目，以99%的乙醇用超 声提取5次，每次60min，提取液合并，过滤，减压浓缩提取液至1/4，静置后滤除沉淀物，然 后浓缩成浸膏，得浸膏135 g。浸膏用重量比1.5倍量的丙酮溶解后加入108g的100目硅 。
21、胶拌样，1.35Kg的 200目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用体积比为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、 1:1、1:2、0:1的氯仿-丙酮溶液梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分，得到8个部分；洗脱 液的9:1部分8.22 g 用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以40的甲醇为流动相， Zorbax SB-C 18 (20 250 mm, 5 m)反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样55 L，收集29.5 min的色谱峰，多次累加后蒸干，再次用纯甲醇溶解，再以纯 甲醇为流动相，用Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，可得该新化合物。 0021 实施例2。
22、 取采自于广东省的腊肠树样品 5 kg粉碎到2040目，以90%的乙醇用超声提取3次， 每次30min，提取液合并，过滤，减压浓缩提取液至1/2，静置后滤除沉淀物，然后浓缩成浸 膏，得浸膏200 g。浸膏用重量比3倍量的丙酮溶解后加入200g的 80目硅胶拌样，2.4Kg 的 160目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用体积比为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1的 氯仿-丙酮溶液梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分，得到8个部分；洗脱液的9:1部分12 g 用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以45的甲醇为流动相，Zorbax SB-C 18 (20 250 mm, 5 。
23、m)反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样45 L， 收集20.1 min的色谱峰，多次累加后蒸干，再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用 Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，可得该新化合物。 0022 实施例3 取采自于广西省的腊肠树样品4 kg粉碎到2040目，以94%的乙醇用超声提取4次，每 次45min，提取液合并，过滤，减压浓缩提取液至1/3，静置后滤除沉淀物，然后浓缩成浸膏， 得浸膏160 g。浸膏用重量比3倍量的丙酮溶解后加入176g的90目硅胶拌样，1.92Kg的 说 明 书CN 102786529 A 5/7页 8 180目硅胶装柱进行硅胶。
24、柱层析，用体积比为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1的氯 仿-丙酮溶液梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分，得到8个部分；洗脱液的9:1部分9.6g 用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以48的甲醇为流动相，Zorbax SB-C 18 (20 250 mm, 5 m)反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样48 L， 收集18.2 min的色谱峰，多次累加后蒸干，再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用 Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，可得该新化合物。 0023 实施例4 取采自于福建省的腊肠树样品4.5 kg粉碎到25目，。
25、以95的乙醇用超声提取4次，每 次50min，提取液合并，过滤，减压浓缩提取液至1/2，静置后滤除沉淀物，然后浓缩成浸膏， 得浸膏180 g。浸膏用重量比2倍量的丙酮溶解后加入216g的 90目硅胶拌样，1.8Kg的 170目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用体积比为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1的氯 仿-丙酮溶液梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分，得到8个部分；洗脱液的9:1部分10.8g 用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以51的甲醇为流动相，Zorbax SB-C 18 (20 250 mm, 5 m)反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，。
26、每次进样49 L， 收集14.3 min的色谱峰，多次累加后蒸干，再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用 Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，可得该新化合物。 0024 实施例5 取采自于台湾省的腊肠树样品4.6kg粉碎到30目，以96%的乙醇用超声提取3次，每 次50min，提取液合并，过滤，减压浓缩提取液至1/4，静置后滤除沉淀物，然后浓缩成浸膏， 得浸膏184g。浸膏用重量比3倍量的丙酮溶解后加入170g的 90目硅胶拌样，2.024Kg的 190目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用体积比为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1的氯 仿-丙酮溶液梯度洗脱，T。
27、LC监测合并相同的部分，得到8个部分；洗脱液的9:1部分11.04 g 用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以56的甲醇为流动相，Zorbax SB-C 18 (20 250 mm, 5 m)反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样47 L， 收集10.1 min的色谱峰，多次累加后蒸干，再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用 Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，可得该新化合物。 0025 实施例6 取实施例1制备的化合物，为黄色胶状物；旋光值22.5 D+267 (溶剂为甲醇c 0.020)； 测定方法为：用核磁共振，结合其它波谱技术鉴定结构。 0026。
28、 1）紫外光谱 (溶剂为甲醇)， max (log): 345 (2.32), 296 (4.11), 210 (4.62) nm； 2）圆二色谱(CD) (溶剂为甲醇c 0.0200, () 287 (-3.18), 247 (+18.7), 232 (-23.6)； 3)红外光谱 (溴化钾压片) 3380, 2965, 2874, 1622, 1535, 1486, 1427, 1355, 1258, 1154, 1032, 860 cm -1 ； HRESIMS显示本发明化合物准分子离子峰m/z 337.0680 M+Na + (计算值为 337.0688)，结合 1 H和 13 C N。
29、MR谱(图-1和图-2,数据归属见表-1) 给出其分子式C 17 H 14 O 6 ， 不饱和度为11。 说 明 书CN 102786529 A 6/7页 9 0027 1 H 和 13 C NMR谱信号表明该化合物中含17个碳和14个氢。氢谱信号 H 4.26 (dd, J=4.6, 10.5 Hz, H-4)、 H 3.53 (t, J=10.5 Hz, H-2)、 H 3.43 (m, H-3) 和 H 5.41 (d, J=6.7 Hz, H-4)显示该化合物为紫檀烷类化合物。芳环上的 4 组氢谱信号 H 6.97 (d, J=8.5 Hz, H-5)、 H 6.59 (d, J=8.。
30、5 Hz, H-6)、 H 6.46 (d,J=8.1 Hz, H-5) 和 H 6.74 (d, J=8.1 Hz, H-6)清楚的显示该化合物为 7,8,3,4-取 代紫檀烷。此外氢谱中还有1个甲氧基信号( H 3.80)和1个亚甲二氧基信号( H 5.86, 5.91 s)。碳谱和 DEPT 谱中显示有 2 个芳环(包含 4 个次甲基双键碳)、1 个亚甲基、 1个次甲基、1个氧化的次甲基、1个甲氧基和1个亚甲二氧基信号，这也支持了化合物为 7,8,3,4-取代紫檀烷。通过甲氧基质子信号( H 3.80)和 C-4( C 150.8)的 HMBC相关可证实甲氧基取代在C-4位。亚甲二氧基质。
31、子( H 5.86, 5.91)和C-7 ( C 146.7)、C-8 ( C 134.0)的HMBC相关证实亚甲二氧基取代在C-7和C-8位。由于甲氧基 和亚甲二氧基的取代位置确定，而且核磁共振谱中没有观察到其它取代基信号，化合物中 还应该有1个羟基取代在C-3位来支持7,8,3,4-取代紫檀烷；这也和高分辨质谱 测定的分子式一致。化合物中有2个手性碳、根据其旋光值和CD谱数据和文献 ( J. Braz. Chem. Soc. 2012，23，1239-1243) 对比可推断化合物的构型为(3S, 4S)。以上信息可确定 新化合物结构。命名为 3-羟基-4-甲氧基-8-亚甲二氧基-紫檀烷。 。
32、0028 实施例7 取实施例2制备的化合物，为黄色胶状物，旋光值22.5 D+267 (溶剂为甲醇c 0.020)。测定方法与实施例6相同，确认实施例2制备的化合物为所述的紫檀烷类化合 物 3-羟基-4-甲氧基-8-亚甲二氧基-紫檀烷。 0029 实施例8 取实施例3制备的化合物，为黄色胶状物，旋光值22.5 D+267 (溶剂为甲醇c 0.020)。测定方法与实施例6相同，确认实施例3制备的化合物为所述的紫檀烷类化合 物 3-羟基-4-甲氧基-8-亚甲二氧基-紫檀烷。 0030 实施例9 取实施例4制备的化合物，为黄色胶状物，旋光值22.5 D+267 (溶剂为甲醇c 0.020)。测定方法。
33、与实施例6相同，确认实施例4制备的化合物为所述的紫檀烷类化合 物 3-羟基-4-甲氧基-8-亚甲二氧基-紫檀烷。 0031 实施例10 取实施例5制备的化合物，为黄色胶状物，旋光值22.5 D+267 (溶剂为甲醇c 0.020)。测定方法与实施例6相同，确认实施例5制备的化合物为所述的紫檀烷类化合 物 3-羟基-4-甲氧基-8-亚甲二氧基-紫檀烷。 0032 实施例11 取实施例15制备的紫檀烷类化合物进行抗HIV-1活性试验，试验情况如下： 1）HIV-1感染性滴定 按JohnsonByington所述的方法改良进行滴定；按ReedMuench方法计算病毒的 TCID 50 （50Tiss。
34、ue Culture Infection Dose）。 0033 2）样品对C8166宿主细胞的细胞毒性检测 410 5 /ml C8166细胞悬液100l与待测化合物溶液混合，设三个重复孔。同时设置不 说 明 书CN 102786529 A 7/7页 10 含化合物的对照孔，温度37，5% CO 2 培养2d，采用MTT比色法检测细胞毒性。ELx800 ELISA 仪测定OD值，测定波长为595nm，参考波长为630 nm。计算得到CC 50 值（50Cytotoxic Concentration），即对50%的正常T淋巴细胞系C8166产生毒性时的化合物浓度。 0034 3）样品对HIV-。
35、1 IIIB 诱导C8166细胞病变（CPE）的抑制试验 将810 5 /mL C8166细胞50 L/孔接种到含有100L/孔倍比稀释化合物的96孔细 胞培养板上，然后加入50 L的HIV-1 IIIB 稀释上清（M.O.I. 0.0016）。设三个重复孔。同 时设置不含化合物的正常细胞对照孔。37, 5%CO 2 培养3d，倒置显微镜下（100）计数 合胞体的形成。EC 50 （50% Effective Concentration）为抑制合胞体形成50%时的化合物 浓度。 0035 4）样品对HIV-1感染细胞的保护作用试验 将810 5 /ml MT 4 细胞50ul/孔接种到含有10。
36、0l/孔倍比稀释化合物的96孔细胞培 养板上，培养板的一半孔加入50l的HIV-1 IIIB 稀释（M.O.I.0.006），另一半孔加入50l培 养基。每个浓度梯度2个重复孔，同时设置不含化合物的对照孔和空白对照孔，37、5% CO 2 培养，第三天每孔补加100l新鲜培养基，第五天或第六天采用MTT比色法检测细胞存活 率。ELx800 ELISA仪测定OD值，测定波长为595nm，参考波长为630 nm。用公式计算出化 合物对正常细胞的毒性和对HIV-1 IIIB 感染细胞的保护作用。 0036 5）计算公式 根据试验结果绘制剂量反应曲线，按ReedMuench法计算出化合物抑制病毒的 5。
37、0%有效浓度（EC 50 ），50抑制细胞生长浓度（CC 50 ）及抗HIV-1活性的治疗指数TI值 （Therapeutic index）为：TI = CC 50 /EC 50 。 0037 细胞生长存活率（%）试验孔OD值/对照孔OD值100 细胞生长抑制率（%）（1-试验孔OD值/对照孔OD值）100 HIV-1致细胞病变的抑制率（%）（1-试验孔合胞体数/对照孔合胞体数）100 感染细胞的保护率（%）=（试验孔OD值-阳性对照孔OD值）/（阴性对照孔OD值-阳 性对照孔OD值）100 6）试验结果 试验结果清楚地表明，CC 50 值大于200g/mL，EC 50 值为1.08g/mL，其治疗指数TI值 大于185.2，因此该紫檀烷类化合物显示出很好的抗HIV-1活性，揭示了本发明的紫檀烷类 化合物在制备抗HIV-1药物中有良好的应用前景。 说 明 书CN 102786529 A 10 1/3页 11 图1 说 明 书 附 图CN 102786529 A 11 2/3页 12 图2 说 明 书 附 图CN 102786529 A 12 3/3页 13 图3 说 明 书 附 图CN 102786529 A 13 。