洋川芎内酯A的制药用途及含有它的药物组合物与制备方法.pdf

本发明提供了洋川芎内酯A的制药用途及含有它的药物组合物与制备方法。洋川芎内酯A具有增加脑部血流量、减少脑血管阻力、抑制血栓形成的作用，可用于治疗脑血管疾病。将洋川芎内酯A制成静脉乳剂，是实现该用途的优选剂型。

1、  洋川芎内酯A在制备治疗或预防脑血管疾病药物中的应用。其特征在于：洋川芎内酯A在剂量范围为25mg～100mg/日/人时，具有增加脑部血流量、减少脑血管阻力、抑制血栓形成的作用，可用于治疗脑血管疾病。

2、  权利要求1所述脑血管疾病具体是指短暂性脑缺血发作、脑梗塞等缺血性脑血管病。

3、  权利要求1所述应用，其给药方式可以以口服或注射途径给药，注射给药可以为静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射或瘤体内注射。口服制剂可以为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、滴丸、软胶囊、悬浮液、溶液、糖浆；注射用制剂可以为冻干粉针、注射用静脉乳剂、注射液、输液。口服制剂优选为片剂、胶囊剂、颗粒剂；注射用制剂优选注射用静脉乳剂。

4、  一种治疗脑血管疾病的组合物，其特征在于：含有治疗有效量的洋川芎内酯A、药学上可作为载体的油、乳化剂和水；其配比为药物组合物1克、油3～20克、乳化剂0.5～5克，加水至40～200毫升。

5、  权利要求4的药物组合物的制备方法，其特征在于：将含有治疗有效量的药物组合物、大豆磷脂和/或蛋黄磷脂、与大豆油和/或芝麻油混合，加热至70～80℃，得油相；将甘油溶于水中形成水相，加热至70-80℃；把含有药物组合物的油相加到水相中用高速乳匀机形成初乳，所得初乳加水定容后，经高压乳匀机在压力100Mpa的条件下乳化后，分装后灭菌。

洋川芎内酯A的制药用途及含有它的药物组合物与制备方法
技术领域
本发明涉及洋川芎内酯A(SenkyunolideA)在治疗脑血管疾病的药物中的应用，还涉及含有该化合物的注射用静脉乳剂的制备方法。
背景技术
心脑血管疾病是危害人类生命与健康的常见病和多发病，具有发病率高、致残率、死亡率高和复发率高的特点，是中老年人致死、致残的主要疾病。我国心脑血管病患者人数呈逐年上升趋势，年龄呈年轻化趋势。
川芎为常用的活血化瘀中药之一，始载于《神农本草经》。药用部分为伞形科藁本属川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的根茎。
一般认为川芎嗪和挥发油为川芎中主要有效成分，但有学者专门对川芎中川芎嗪进行研究，结果发现川芎嗪在川芎中含量仅为千万分之几，证明川芎的药效作用与川芎嗪无关，是其他成分所起的作用。
川芎油的主要成分为Z-藁本内酯(Z-Ligustilide)和洋川芎内酯A(SenkyunolideA)，川芎内酯(Cnidiumlactone)、蛇床内酯(Cnidilide)、新蛇床内酯(Neocnidilide)以及正丁烯基苯酞(n-butylidenephthalide)、正丁基苯酞(n-Butylphthalide)等。其中洋川芎内酯A是含量较高的成分之一。

洋川芎内酯A(Senkyunolide A)
我们的研究发现洋川芎内酯A对大鼠脑缺血均具有显著的保护作用，可以明显增加犬脑部血流量、减少脑血管阻力，可抑制大鼠体内动-静脉旁路血栓及静脉血栓的形成。
由于洋川芎内酯A难以溶解于水，本发明通过大量的试验，发明了洋川芎内酯A静脉乳剂，可以提高洋川芎内酯A的化学稳定性，且可静脉注射给药用以治疗脑血管疾病。
发明内容
本发明提供了洋川芎内酯A在制备治疗脑血管疾病中的药物的应用。
本发明的另一个目的是提供洋川芎内酯A静脉乳剂的制备方法。
本发明提供的静脉乳剂含有洋川芎内酯A、油、乳化剂、调等渗剂和水，其中洋川芎内酯A∶油∶乳化剂∶水的重量比为1∶3-20∶0.5-5∶40-200。
本发明所述的洋川芎内酯A是从川芎中分离得到的，具体是川芎药材经水蒸汽蒸馏法或CO₂超临界流体萃取法提取获得挥发油，挥发油经过硅胶柱层析，收集含洋川芎内酯A部分，即得。
本发明其给药方式可以是临床上可以接受的任何一种药剂学上所说给药剂型。
本发明所述的乳化剂可以是大豆磷脂、蛋黄磷脂、氢化磷脂等中的一种或几中，优选为大豆磷脂、蛋黄磷脂，更有选为蛋黄磷脂。
本发明提供的洋川芎内酯A乳剂可以加入添加剂甘油作为等渗调节剂。
本发明提供的洋川芎内酯A乳剂制备方法为将洋川芎内酯A加入至油中，混合，在乳化剂的作用下，于水中形成分散相。其优选制备方法为将洋川芎内酯A和乳化剂直接溶解到油中，在60～70℃混合至澄明。将甘油溶于水相水中，加热至60-80℃保温备用。在高速搅拌下把含有洋川芎内酯A的油溶液加到水相中形成初乳剂。所得的初乳剂通过高压均质机进一步乳化，得放置稳定、粒度均匀、无毒的乳剂。
具体实施方式
制备例1、制备川芎挥发油
川芎挥发油制备方法：取川芎饮片100g，粉碎过筛，按《中国药典》2000版一部附录XD挥发油测定法进行，连续蒸馏2h，收集挥发油，即得。
制备例2、制备川芎挥发油
川芎挥发油制备方法：取川芎饮片500g，粉碎过筛，置于5L超临界萃取设备，进行CO₂超临界流体萃取，萃取压力为25MPa、萃取温度为40℃、萃取时间为4小时、CO₂流量为2L/Kg·h，川芎萃取液过滤，滤液静置，取油层，即得。
制备例3、洋川芎内酯A的制备方法
取200-300目柱层析硅胶2kg，石油醚为溶剂，湿法装柱；取川芎油200g，1∶1硅胶拌样，上样，以石油醚洗脱，TLC检测，收集含有洋川芎内酯A部分，40℃下以旋转薄膜蒸发器真空回收溶剂，即得，HPLC外标法测得洋川芎内酯A含量90.2％。
制备例4、洋川芎内酯A的制备方法
取柱层析硅胶2kg，石油醚为溶剂，湿法装柱；取川芎油200g加适量硅胶拌样，上样，以石油醚洗脱，TLC检测，收集含有洋川芎内酯A部分，40℃下以旋转薄膜蒸发器真空回收溶剂，即得，HPLC外标法测得洋川芎内酯A含量92.2％。
制备例5：制备乳剂(10mg/ml)
取制备例3洋川芎内酯A1g、大豆磷脂0.5g，油酸0.1g加入到3g精制大豆油中，氮气保护下加热(60-65℃)，混合至澄明，得到含洋川芎内酯A的油相溶液；将2.5g甘油分散至注射用水中得水相80ml，水浴保温(60-65℃)。将含有洋川芎内酯A的油溶液加到水相中，高速乳匀机10000-20000转/分钟乳化2分钟，制成初乳，加水至100ml。将所得到的初乳在压力100Mpa的条件下，通过高压均质机进一步乳化，乳化结束，0.8um微孔滤膜滤过，分装5ml/瓶，于115℃，15min灭菌，即得25mg/ml的乳剂。激光粒度分析仪测定其平均粒径为160um。静脉滴注。
制备例6：制备乳剂(5mg/ml)
将制备例4所得洋川芎内酯A1g、蛋黄磷脂5g、油酸0.125g加入到20g精制麻油中，加热(75-80℃)，混合至澄明，得到含洋川芎内酯A的油相溶液；将2.5g甘油分散至160ml注射用水中得水相，水浴保温(65-70℃)。将含有洋川芎内酯A的油溶液加到水相中，高速乳匀机10000-20000转/分钟乳化3分钟制成初乳，加水至200ml。将所得到的初乳在压力100Mpa的条件下，通过高压均质机进一步乳化，乳化结束，0.8um微孔滤膜滤过分装10ml/瓶后于121℃，15min灭菌，即得5mg/ml的乳剂。激光粒度分析仪测定其平均粒径为200um。静脉滴注。
试验例1：洋川芎内酯A乳剂对大鼠局部脑缺血损伤的影响
1.1材料
受试样品：洋川芎内酯A乳剂，按制备例5的方法制备。规格：10mg/ml，批号：20050330。临用前稀释至所需浓度。
盐酸川芎嗪注射液，河南省安阳市益康制药厂，规格：100ml：含盐酸川芎嗪40mg，批号：050127，批准文号：国药准字H20033180，用前以生理盐水配成合适浓度的混悬液。
红四氮唑：美国Sigma公司产品，临用前用生理盐水配成4.0％溶液。
实验动物：普通级SD大鼠，雄性，体重300g-350g，海南省人民医院提供，合格证号：琼动质字200503002号。
1.2方法与结果
动物禁食12小时后，各组动物分别静脉注射相应药。2小时后，水合氯醛(360mg/kg，ip.)麻醉，分离右侧颈总动脉，夹闭颈内、颈总动脉，颈外动脉近心端及远心端结扎，中间剪断。将颈外动脉游离端拉至与颈内动脉成一条直线，将栓线(选用直径0.24mm尼龙线，长度5.0cm)由颈外动脉插入至颅内，遇轻微阻力时停止，插入深度约为2cm。结扎颈外动脉开口，并打开颈总动脉动脉夹，消毒缝合伤口，造成左侧大脑中动脉缺血模型；假手术组仅进行右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉的分离(以上实验均在23℃～25℃进行)。24小时后按文献^[1]方法及标准观察并记录大鼠的行为障碍：(1)提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称伸向地面，计为0分，如手术对侧前肢出现腕屈曲计为1分，肘屈曲计为2分，肩内旋计为3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩内旋者，计为4分。(2)将动物置于平地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力，计为0分，如向手术对侧推动时阻力下降者，根据下降程度不同分为轻、中、重三度，分别计为1，2和3分。(3)将动物双前肢置一金属网上，观察双前肢的肌张力。双前肢肌张力对等且有力者计为0分。同样根据手术对侧肌张力下降程度不同计为1，2和3分。(4)动物有不停地向一侧转圈者，计为1分。根据标准评分，满分为11分，分数越高，表示动物行为障碍越严重。数据用表示，以参比差值法进行统计学检验。
行为评分后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冠状切成5片，脑片用红四氮唑(TTC)染色，正常组织经染色后呈红色，梗塞组织呈白色，染色后照相，用中国航空航天大学病理图像分析软件求梗塞面积比。
动物随机分为假手术组(生理盐水)，模型对照组(生理盐水)，川芎嗪注射液组(10mg/kg)，洋川芎内酯A乳剂小剂量组(2.5mg/kg)，洋川芎内酯A乳剂中剂量组(5mg/kg)，洋川芎内酯A乳剂大剂量组(10mg/kg)，每组10只。禁食12小时后，各组动物分别静脉注射相应药物。2小时后，按前述方法制作大鼠右侧大脑中动脉缺血模型，并行为评分、脑片染色。数据用表示，以参比差值法对行为评分进行统计学检验；脑缺血坏死面积进行F检验。
结果显示，缺血24小时后，模型大鼠表现出明显的行为障碍，大鼠脑组织也出现明显的灶状缺血区，坏死面积达到全脑的25％左右；给予不同剂量的注射液(小剂量2.5mg/kg、中剂量5mg/kg、大剂量10mg/kg)，动物行为障碍有不同程度的减轻，大鼠脑缺血区坏死面积也有明显降低，且呈剂量依赖性(表1)。
表1洋川芎内酯A对大鼠局部脑缺血损伤的影响(n＝10，