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1、10申请公布号CN104046615A43申请公布日20140917CN104046615A21申请号201410283009822申请日20140624C12N15/1020060171申请人南通惠然生物科技有限公司地址226000江苏省南通市港闸区江海大道639号1幢72发明人不公告发明人54发明名称一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法57摘要本发明涉及一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法，其包括脱氧胸苷三磷酸模版DNA、限制性切刻酶、至少一种具有链置换能力的DNA聚合酶、至少一种具有链置换能力的DNA聚合酶、至少两种与靶核酸序列3末端互补的寡核苷酸引物、聚氧乙烯失水山梨醇单脂肪酸。
2、脂表面活性剂。本发明基本上在恒温的条件下扩增靶核酸序列，以外通过添加限制性切刻酶而不需要额外添加任何另外的试剂，而且时间短，工艺结构简单，降低了生产成本。51INTCL权利要求书1页说明书2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书2页10申请公布号CN104046615ACN104046615A1/1页21一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法，其特征在于其包括脱氧胸苷三磷酸模版DNA、限制性切刻酶、DNA聚合酶、脱氧核苷三磷酸、与靶核酸序列3末端互补的寡核苷酸引物、表面活性剂，所述方法包括以下步骤A、在样品脱氧胸苷三磷酸模版DNA培养液中加入一种或多种能够在所。
3、选限制位点切割DNA的限制性切刻酶，该限制性切刻酶在该DNA的一条链上形成特定的3末端；B、加入寡核苷酸引物，该启动子引物5区域包含被DNA的RNA聚合酶所识别的启动子序列，且其3区域与步骤A形成的DNA特定的3末端互补；C、向样品中加入DNA聚合酶，脱氧核苷三磷酸，表面活性剂；D、控制温度，将如此形成的混合物保持足够的时间，以进行扩增。2根据权利要求1所述一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法，其特征在于至少两种与靶核酸序列3末端互补的寡核苷酸引物。3根据权利要求1所述一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法，其特征在于至少一种具有链置换能力的DNA聚合酶。4根据权利要求1所述一种通过生物。
4、技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法，其特征在于至少一种脱氧核苷三磷酸。5根据权利要求1所述一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法，其特征在于所述表面活性剂为聚氧乙烯失水山梨醇单脂肪酸脂。6根据权利要求1所述一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法，其特征在于所述培养液的温度控制在4050内。7根据权利要求16任意一项所述一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法，其特征在于所述溶液在基本恒温的条件下进行扩增的时间为4560分钟。8根据权利要求16任意一项所述一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法，其特征在于所述溶液的PH值控件在7080。权利要求书CN104046615A1/2页3一种通过生物技术。
5、扩增脱氧胸苷三磷酸的方法技术领域0001本发明涉及一种生物技术，尤其涉及一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法。背景技术0002聚合酶链反应POLYMERASECHAINREACTION，PCR由美国CENTUS公司的KARYMULLIS发明，于1985年由SAIKI等在SCIENCE杂志上首次报道，是近年来开发的体外快速扩增DNA的技术。通过PCR可以简便、快速地从微量生物材料中以体外扩增的方式获得大量特定的核酸，并且有很高的灵敏度和特异性，可在动物检疫中用于微量样品的检测。0003DNA分子是由四种脱氧核糖核苷酸分子结合成的两条互补多聚核苷酸链。合成这些多聚核苷酸的前体是四种脱氧核苷三磷。
6、酸，脱氧胸苷三磷酸作为四种原料之一参与核酸分子的体内或体外扩增。附着生物技术工业的发展特别是DNA生物合成和聚合酶链式反应的推广，市场上对DNA扩增所需要的脱氧核苷三磷酸的需求量将会明显地持续升高。另外，由于脱氧胸苷三磷酸在抗病毒抗肿瘤，治疗心血管疾病等方面应用的推广，同样也会对本发明所阐述的产品，脱氧胸苷三磷酸的需求量的提高起到促进作用。发明内容0004本发明的目的是提供一种一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法，采用的技术方案是一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法，其包括脱氧胸苷三磷酸模版DNA、限制性切刻酶、DNA聚合酶、脱氧核苷三磷酸、与靶核酸序列3末端互补的寡核苷酸引物、表面活。
7、性剂，所述方法包括以下步骤A、在样品脱氧胸苷三磷酸模版DNA培养液中加入一种或多种能够在所选限制位点切割DNA的限制性切刻酶，该限制性切刻酶在该DNA的一条链上形成特定的3末端；B、加入寡核苷酸引物，该启动子引物5区域包含被DNA的RNA聚合酶所识别的启动子序列，且其3区域与步骤A形成的DNA特定的3末端互补；C、向样品中加入DNA聚合酶，脱氧核苷三磷酸，表面活性剂；D、控制温度，将如此形成的混合物保持足够的时间，以进行扩增。0005至少两种与靶核酸序列3末端互补的寡核苷酸引物。0006至少一种具有链置换能力的DNA聚合酶。0007至少一种脱氧核苷三磷酸。0008所述表面活性剂为聚氧乙烯失水山。
8、梨醇单脂肪酸脂。0009所述培养液的温度控制在4050内。0010所述溶液在基本恒温的条件下进行扩增的时间为4560分钟。0011所述溶液的PH值控件在7080。0012本发明的有益效果是本发明基本上在恒温的条件下扩增靶核酸序列，以外通过说明书CN104046615A2/2页4添加限制性切刻酶而不需要额外添加任何另外的试剂，而且时间短，工艺结构简单，降低了生产成本。具体实施方式0013一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法，其包括脱氧胸苷三磷酸模版DNA、限制性切刻酶、至少一种具有链置换能力的DNA聚合酶、至少一种具有链置换能力的DNA聚合酶、至少两种与靶核酸序列3末端互补的寡核苷酸引物、聚。
9、氧乙烯失水山梨醇单脂肪酸脂表面活性剂，所述方法包括以下步骤A、在样品脱氧胸苷三磷酸模版DNA培养液中加入一种或多种能够在所选限制位点切割DNA的限制性切刻酶，该限制性切刻酶在该DNA的一条链上形成特定的3末端；B、加入寡核苷酸引物，该启动子引物5区域包含被DNA的RNA聚合酶所识别的启动子序列，且其3区域与步骤A形成的DNA特定的3末端互补；C、向样品中加入DNA聚合酶，脱氧核苷三磷酸，表面活性剂；D、控制温度，将如此形成的混合物保持足够的时间，以进行扩增。所述培养液的温度控制在4050内，所述溶液在基本恒温的条件下进行扩增的时间为4560分钟，所述溶液的PH值控件在7080。说明书CN104046615A。