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1、(10)申请公布号 CN 102907329 A (43)申请公布日 2013.02.06 C N 1 0 2 9 0 7 3 2 9 A *CN102907329A* (21)申请号 201210453551.4 (22)申请日 2012.11.13 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人东北林业大学 地址 150040 黑龙江省哈尔滨市香坊区和兴 路26号 (72)发明人王娜 施志娟 马欢 官志玉 杨玲 沈海龙 (74)专利代理机构哈尔滨市松花江专利商标事 务所 23109 代理人王艳萍 (54) 发明名称 一种提高色木槭茎芽增殖系数的培养方法 (57) 摘要 一种提高色木槭。
2、茎芽增殖系数的培养方法， 它涉及一种提高茎芽增殖系数的培养方法。方法： 一、取色木槭成年母树上的休眠枝条进行洗涤； 二、茎段消毒；三、消毒后的茎段经培养获得带芽 的茎段；四、带芽的茎段经培养获得伸长的嫩茎； 五、伸长的嫩茎经培养获得小植株即完成。本发明 利用色木槭野生树木休眠芽萌发枝条为材料，进 行芽增殖培养条件的研究，建立了色木槭芽直接 增殖途径的丛生芽诱导培养体系，为色木槭离体 快繁体系的建立奠定了基础。本发明繁殖周期短， 效率高，伸长的嫩茎，腋芽萌发率可达63.3，平 均高度可达15.9mm；小植株，芽增殖率可达90， 增殖倍数可达3.19，且茎芽生长正常。 (51)Int.Cl. 权利。
3、要求书1页 说明书3页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1页 2 1.一种提高色木槭茎芽增殖系数的培养方法，其特征在于提高色木槭茎芽增殖系数的 培养方法按以下步骤实现： 一、取色木槭成年母树上的休眠枝条用洗衣粉水刷洗，然后用水冲洗干净，剪成2 3cm的茎段，并且每段具有12个腋芽或1个顶芽，再将茎段在洗衣粉水中浸泡10min，其 间不停搅拌，然后在流水下冲洗40min； 二、茎段洗净后于超净工作台上用质量浓度为75的乙醇溶液浸泡30s，然后在加有 23滴Twen-20的质量浓度为2的NaClO中消毒20min，再用无菌水冲洗3。
4、5次； 三、经步骤二消毒后的茎段用无菌的滤纸吸干表面的水分，然后用镊子将芽鳞剥除，直 至仅剩12mm芽点，再将茎段两端用手术刀各切除0.5cm，按照形态学上端向上的方向 将茎段垂直插入到装有MS基本培养基的培养瓶中，插入深度为0.5cm，然后将培养瓶用塑 料封口膜封口后放于培养室中，在温度为25、光照强度为40mol.m -2 s -1 、光/暗周期为 16/8h的条件下培养2周获得带芽的茎段； 四、取步骤三所得带芽的茎段接种到装有20ml嫩茎伸长培养基的50ml培养瓶中，然后 放于培养室，在温度为25、光照强度为40mol.m -2 s -1 、光/暗周期为16/8h的条件下培养 21d获得。
5、伸长的嫩茎； 五、取步骤四所得伸长的嫩茎接种到装有20ml嫩茎增殖培养基的50ml培养瓶中，然后 放于培养室，在温度为25、光照强度为40mol.m -2 s -1 、光/暗周期为16/8h的条件下培养 21d获得小植株，即完成提高色木槭茎芽增殖系数的培养； 其中步骤四中嫩茎伸长培养基是以MS基本培养基为基本培养基，且每1L嫩茎伸长培 养基中还包含0.1mg的奈乙酸、20g的蔗糖和6g的琼脂，pH值为5.8； 步骤五中嫩茎增殖培养基是以MS基本培养基为基本培养基，且每1L嫩茎增殖培养基 中还包含0.1mg的吲哚丁酸和1mg的6-苄氨基腺嘌呤。 2.根据权利要求1所述的一种提高色木槭茎芽增殖系数。
6、的培养方法，其特征在于步骤 一中取色木槭成年母树上的休眠枝条用洗衣粉水刷洗，然后用水冲洗干净，剪成3cm的茎 段。 权 利 要 求 书CN 102907329 A 1/3页 3 一种提高色木槭茎芽增殖系数的培养方法 技术领域 0001 本发明涉及一种提高茎芽增殖系数的培养方法。 背景技术 0002 色木槭(Acer mono Maxim)，又名五角槭、色木，为槭树科槭树属落叶乔木。树势优 美，枝叶浓密，叶形秀丽，嫩叶红色，入秋变成橙黄或红色，甚为美观。此外，色木槭耐荫性较 好，在厂矿绿化中也能有较好的生长。可作为树桩盆景材料。目前，对于色木槭的研究主要 集中于播种育苗、种子萌发生理、扦插繁殖、。
7、苗木培育以及开花结实等方面。关于色木槭组 织培养方面报道较少。近几十年来，槭树属植物的组织培养研究取得了较大的进展。如国外 学者对鸡爪枫(A.palmatum)未成熟的合子胚的体细胞胚胎发生进行了研究，Wilhelm用假 挪威槭(A.pseudoplatanus)的幼芽、胚轴和胚根切段在附加BA和/或TDZ的MS培养基上 诱导出愈伤组织和不定芽。Durkovei建立了尖尾槭(A.caudatifolium)腋芽培养芽的增殖 和再生培养体系。Park等利用低温贮藏的方法实现了色木槭悬浮培养细胞的长期种质资源 保存。国内学者在槭树组织培养方面也做了大量的工作。如关于美洲糖槭(A.saccharum。
8、)、 复叶槭(A.negundo)、红翅槭(A.fabri)，白牛槭(A.mandshuricum)等的组织培养和离体快 繁研究相继得到报道。 发明内容 0003 本发明目的是提供一种提高色木槭茎芽增殖系数的培养方法。 0004 提高色木槭茎芽增殖系数的培养方法按以下步骤实现： 0005 一、取色木槭成年母树上的休眠枝条用洗衣粉水刷洗，然后用水冲洗干净，剪成 23cm的茎段，并且每段具有12个腋芽或1个顶芽，再将茎段在洗衣粉水中浸泡 10min，其间不停搅拌，然后在流水下冲洗40min； 0006 二、茎段洗净后于超净工作台上用质量浓度为75的乙醇溶液浸泡30s，然后在 加有23滴Twen-2。
9、0的质量浓度为2的NaClO中消毒20min，再用无菌水冲洗35次； 0007 三、经步骤二消毒后的茎段用无菌的滤纸吸干表面的水分，然后用镊子将芽鳞剥 除，直至仅剩12mm芽点，再将茎段两端用手术刀各切除0.5cm，按照形态学上端向上的方 向将茎段垂直插入到装有MS基本培养基的培养瓶中，插入深度为0.5cm，然后将培养瓶用 塑料封口膜封口后放于培养室中，在温度为25、光照强度为40mol.m -2 s -1 、光/暗周期为 16/8h的条件下培养2周获得带芽的茎段； 0008 四、取步骤三所得带芽的茎段接种到装有20ml嫩茎伸长培养基的50ml培养瓶中， 然后放于培养室，在温度为25、光照强度。
10、为40mol.m -2 s -1 、光/暗周期为16/8h的条件下 培养2130d获得伸长的嫩茎； 0009 五、取步骤四所得伸长的嫩茎接种到装有20ml嫩茎增殖培养基的50ml培养瓶中， 然后放于培养室，在温度为25、光照强度为40mol.m -2 s -1 、光/暗周期为16/8h的条件下 培养2130d获得小植株，即完成提高色木槭茎芽增殖系数的培养； 说 明 书CN 102907329 A 2/3页 4 0010 其中步骤四中嫩茎伸长培养基是以MS基本培养基为基本培养基，且每1L嫩茎伸 长培养基中还包含0.1mg的奈乙酸(NAA)、20g的蔗糖和6g的琼脂，pH值为5.8； 0011 步。
11、骤五中嫩茎增殖培养基是以MS基本培养基为基本培养基，且每1L嫩茎增殖培 养基中还包含0.1mg的吲哚丁酸(IBA)和1mg的6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)。 0012 本发明利用色木槭野生树木休眠芽萌发枝条为材料，进行芽增殖培养条件的研 究，建立了色木槭芽直接增殖途径的丛生芽诱导培养体系，为色木槭离体快繁体系的建立 奠定了基础。 0013 本发明中提高色木槭茎芽增殖系数的培养方法，繁殖周期短，效率高，伸长的嫩 茎，腋芽萌发率可达63.3，平均高度可达15.9mm；小植株，芽增殖率可达90，增殖倍数 可达3.19，且茎芽生长正常。 具体实施方式 0014 具体实施方式一：本实施方式提高色木槭茎芽增。
12、殖系数的培养方法按以下步骤实 现： 0015 一、取色木槭成年母树上的休眠枝条用洗衣粉水刷洗，然后用水冲洗干净，剪成 23cm的茎段，并且每段具有1个腋芽或1个顶芽，再将茎段在洗衣粉水中浸泡10min，其 间不停搅拌，然后在流水下冲洗40min； 0016 二、茎段洗净后于超净工作台上用质量浓度为75的乙醇溶液浸泡30s，然后在 加有23滴Twen-20的质量浓度为2的NaClO中消毒20min，再用无菌水冲洗35次； 0017 三、经步骤二消毒后的茎段用无菌的滤纸吸干表面的水分，然后用镊子将芽鳞剥 除，直至仅剩12mm芽点，再将茎段两端用手术刀各切除0.5cm，按照形态学上端向上的方 向将茎。
13、段垂直插入到装有MS基本培养基的培养瓶中，插入深度为0.5cm，然后将培养瓶用 塑料封口膜封口后放于培养室中，在温度为25、光照强度为40mol.m -2 s -1 、光/暗周期为 16/8h的条件下培养2周获得带芽的茎段； 0018 四、取步骤三所得带芽的茎段接种到装有20ml嫩茎伸长培养基的50ml培养瓶中， 然后放于培养室，在温度为25、光照强度为40mol.m -2 s -1 、光/暗周期为16/8h的条件下 培养21d获得伸长的嫩茎； 0019 五、取步骤四所得伸长的嫩茎接种到装有20ml嫩茎增殖培养基的50ml培养瓶中， 然后放于培养室，在温度为25、光照强度为40mol.m -2。
14、 s -1 、光/暗周期为16/8h的条件下 培养21d获得小植株，即完成提高色木槭茎芽增殖系数的培养； 0020 其中步骤四中嫩茎伸长培养基是以MS基本培养基为基本培养基，且每1L嫩茎伸 长培养基中还包含0.1mg的奈乙酸(NAA)、20g的蔗糖和6g的琼脂，pH值为5.8； 0021 步骤五中嫩茎增殖培养基是以MS基本培养基为基本培养基，且每1L嫩茎增殖培 养基中还包含0.1mg的吲哚丁酸(IBA)和1mg的6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)。 0022 本实施方式步骤一中色木槭成年母树上的休眠枝条，于4月份取自东北林业大学 帽儿山实验林场，枝条取回后于室内水培(温度1622)34d，期间每天换。
15、一次水，为 实验备用。 0023 本实施方式中嫩茎伸长培养基和嫩茎增殖培养基，均经过121灭菌20min，自然 冷却。 说 明 书CN 102907329 A 3/3页 5 0024 本实施方式步骤四中一个嫩茎增殖培养基中接种一个带芽的茎段。 0025 本实施方式步骤五中一个嫩茎增殖培养基中接种一个伸长的嫩茎。 0026 具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同是步骤一中取色木槭成年 母树上的休眠枝条用洗衣粉水刷洗，然后用水冲洗干净，剪成3cm的茎段。其它步骤及参数 与具体实施方式一相同。 0027 实施例： 0028 提高色木槭茎芽增殖系数的培养方法按以下步骤实现： 0029 一、取。
16、色木槭成年母树上的休眠枝条用洗衣粉水刷洗，然后用水冲洗干净，剪成 3cm的茎段，并且每段具有1个腋芽或1个顶芽，再将茎段在洗衣粉水中浸泡10min，其间不 停搅拌，然后在流水下冲洗40min； 0030 二、茎段洗净后于超净工作台上用质量浓度为75的乙醇溶液浸泡30s，然后在 加有2滴Twen-20的质量浓度为2的NaClO中消毒20min，再用无菌水冲洗4次； 0031 三、经步骤二消毒后的茎段用无菌的滤纸吸干表面的水分，然后用镊子将芽鳞剥 除，直至仅剩1mm芽点，再将茎段两端用手术刀各切除0.5cm，按照形态学上端向上的方向 将茎段垂直插入到装有MS基本培养基的培养瓶中，插入深度为0.5c。
17、m，然后将培养瓶用塑 料封口膜封口后放于培养室中，在温度为25、光照强度为40mol.m -2 s -1 、光/暗周期为 16/8h的条件下培养2周获得带芽的茎段； 0032 四、取步骤三所得带芽的茎段接种到装有20ml嫩茎伸长培养基的50ml培养瓶中， 然后放于培养室，在温度为25、光照强度为40mol.m -2 s -1 、光/暗周期为16/8h的条件下 培养30d获得伸长的嫩茎； 0033 五、取步骤四所得伸长的嫩茎接种到装有20ml嫩茎增殖培养基的50ml培养瓶中， 然后放于培养室，在温度为25、光照强度为40mol.m -2 s -1 、光/暗周期为16/8h的条件下 培养30d获得小植株，即完成提高色木槭茎芽增殖系数的培养； 0034 其中步骤四中嫩茎伸长培养基是以MS基本培养基为基本培养基，且每1L嫩茎伸 长培养基中还包含0.1mg的奈乙酸、20g的蔗糖和6g的琼脂，pH值为5.8； 0035 步骤五中嫩茎增殖培养基是以MS基本培养基为基本培养基，且每1L嫩茎增殖培 养基中还包含0.1mg的吲哚丁酸和1mg的6-苄氨基腺嘌呤。 0036 本实施例步骤四中所得伸长的嫩茎，腋芽萌发率可达63.3，平均高度可达 15.9mm。 0037 本实施例步骤五中所得小植株，芽增殖率可达90，增殖倍数可达3.19，且茎芽 生长正常。 说 明 书CN 102907329 A 。