一种利用活性碳柱层析和结晶技术提取纯化梓醇的方法.pdf

摘要
申请专利号：	CN201110275524.8	申请日：	2011.09.16
公开号：	CN102408461A	公开日：	2012.04.11
当前法律状态：	撤回	有效性：	无权
法律详情：	发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):C07H 17/04申请公布日:20120411\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):C07H 17/04申请日:20110916\|\|\|公开
IPC分类号：	C07H17/04; C07H1/08	主分类号：	C07H17/04
申请人：	河南省中医药研究院
发明人：	刘明; 王慧森; 李更生
地址：	450004 河南省郑州市城北路7号
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内容摘要

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种从中药鲜地黄块根中分离制备梓醇的方法。即以中药地黄的新鲜块根为原料，采用活性碳柱层析分离纯化的方法，同时灵活运用溶剂提取法、硅胶柱分离法和多种结晶技术制备纯度不同的梓醇产品。目的在于提供一种工艺简捷、环保节能、适宜工业化生产制备梓醇的方法。

权利要求书

1：一种利用活性炭和结晶技术从中药地黄的新鲜块根中提取纯化梓醇的方法，其特征在于： 1) 药材的前处理取当年产鲜地黄块根，净选，除去非药用部位、杂质及霉变品、虫蛀品、灰屑等，水洗或漂除去泥沙，切薄片或小块； 2) 溶剂提取在植物材料中拌入碳酸钙或氢氧化钡，以抑制酶的活性和中和植物酸，加入原料量 4-5 倍的乙醇，以 3000 ～ 8000rpm 转速破碎提取，甩干机离心初步分离去植物破碎组织，过滤提取液，浓缩，干燥成干浸膏； 3) 活性炭柱层析分离上述提取步骤所获得的产物加水溶解，过滤，通过已处理好的分离柱 ( 颗粒状活性炭于 150℃加热处理 4.5 小时后，再加蒸馏水浸泡 1 小时，除浮粉后用蒸馏水湿法装柱 )，先以水洗脱至流出液近无色，并且糖反应试验阴性 (molish 反应阴性 ) 结合 TLC 检查至梓醇出现为止，用 75％乙醇溶液继续洗脱至无梓醇检出止，合并醇洗脱液，回收乙醇并浓缩，干燥成干浸膏； 4) 硅胶柱层析分离上述提取步骤所获得的产物加甲醇或乙醇溶解，过滤，加适量柱层层析硅胶拌样，干燥后，样品加于层析柱的顶端，乙酸乙酯 - 乙醇 (8 ∶ 2) 洗脱， TLC 检测收集合并含梓醇的洗脱液，回收溶剂，残渣 60℃以下干燥； 5) 结晶上述提取步骤所获得的产物，以丙酮 - 水 (1 ∶ 1) 为结晶溶剂，可以采用一次结晶 ( 包括冷却结晶、蒸发结晶、真空结晶、反应和盐析结晶 )、重结晶、分级结晶等技术，进行分批 ( 间歇 ) 操作或连续操作，再通过固一液分离、洗涤等操作，得到纯度较高的梓醇产品。2：根据权利要求 1 所述的制备方法，其特征在于所述药材的前处理：鲜地黄块根在切片或小块前可以削皮也可以不削皮，可以除去鲜地黄中部白色和浅黄色菊花心以外的部分也可以不去除。3：根据权利要求 1 所述的制备方法，其特征在于除采用活性炭柱层析法之外，可以用溶剂提取法、硅胶柱层析法、结晶法等任一种方法，或这些方法的任意组合进行制备得到纯度不同的梓醇产品。 4. 根据权利要求 1 所述的制备方法，其特征在于各步骤中涉及的浓缩方法包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及煎煮浓缩等；干燥方法包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。 5. 根据权利要求 1 所述的制备方法，其特征在于所述提取条件：提取原料中可以采用无氧条件下加热或直接用水蒸气热处理或拌入碳酸钙或氢氧化钡，用来抑制酶的活性和中和植物酸，也可以不灭活直接提取；所用溶剂可以是水或任意一种醇类及酮类溶剂，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂；提取方法可以是破碎提取法，也可以是浸渍、渗滤、煎煮、回流提取、连续回流提取、超声波提取、微波辅助提取、酶法提取等；提取溶液的过滤包括离心、抽滤、超滤、压滤等方法，使用或不使用以下任一种澄清剂或其组合：醇沉剂、各种树脂、 101 果汁澄清剂、甲壳素类 ( 如壳聚糖 )、 ZTC 天然澄清剂、明胶、鞣酸等。 2 6. 根据权利要求 1 所述的制备方法，其特征在于当使用活性炭柱层析时，可以选用煤质活性炭、木质活性炭、竹基活性炭或者果壳活性炭，优选椰壳活性炭；可以选用粉末状也可以用颗粒状，优选颗粒状；可以加压或减压吸附、洗脱，也可以选用常压；可以选择低温吸附、高温解吸的方式，也可以为常温操作；上样液浓度范围为 0.05 ～ 1.0g/mL，吸附流速 1 ～ 6BV/h，树脂柱径高比 1 ∶ 5 ～ 1 ∶ 20 ；水洗除杂，除杂流速为 1 ～ 6BV/h ；解析可以为 2 ～ 6 倍量柱床体积的 10％～ 100％甲醇、乙醇或丙酮等溶剂解析，解析流速为 1 ～ 6BV/h。 7. 根据权利要求 1 所述的制备方法，其特征在于：当采用硅胶柱层析法进行制备时，可以选用干柱法，也可以是湿柱法；所用的洗脱液一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷等组成的混合溶剂。 8. 根据权利要求 1 所述的制备方法，其特征在于结晶技术：结晶溶剂可以为水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷的任一种，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，优选丙酮 - 水系统；结晶类型可以为冷却结晶、蒸发结晶、真空结晶和反应与盐析结晶等传统结晶法，也可以为超临界结晶、物理场强化溶液结晶、膜结晶、加压结晶等新型结晶技术。4： 5 小时后，再加蒸馏水浸泡 1 小时，除浮粉后用蒸馏水湿法装柱 )，先以水洗脱至流出液近无色，并且糖反应试验阴性 (molish 反应阴性 ) 结合 TLC 检查至梓醇出现为止，用 75％乙醇溶液继续洗脱至无梓醇检出止，合并醇洗脱液，回收乙醇并浓缩，干燥成干浸膏； 4) 硅胶柱层析分离上述提取步骤所获得的产物加甲醇或乙醇溶解，过滤，加适量柱层层析硅胶拌样，干燥后，样品加于层析柱的顶端，乙酸乙酯 - 乙醇 (8 ∶ 2) 洗脱， TLC 检测收集合并含梓醇的洗脱液，回收溶剂，残渣 60℃以下干燥； 5) 结晶上述提取步骤所获得的产物，以丙酮 - 水 (1 ∶ 1) 为结晶溶剂，可以采用一次结晶 ( 包括冷却结晶、蒸发结晶、真空结晶、反应和盐析结晶 )、重结晶、分级结晶等技术，进行分批 ( 间歇 ) 操作或连续操作，再通过固一液分离、洗涤等操作，得到纯度较高的梓醇产品。 2. 根据权利要求 1 所述的制备方法，其特征在于所述药材的前处理：鲜地黄块根在切片或小块前可以削皮也可以不削皮，可以除去鲜地黄中部白色和浅黄色菊花心以外的部分也可以不去除。 3. 根据权利要求 1 所述的制备方法，其特征在于除采用活性炭柱层析法之外，可以用溶剂提取法、硅胶柱层析法、结晶法等任一种方法，或这些方法的任意组合进行制备得到纯度不同的梓醇产品。 4. 根据权利要求 1 所述的制备方法，其特征在于各步骤中涉及的浓缩方法包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及煎煮浓缩等；干燥方法包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。5：根据权利要求 1 所述的制备方法，其特征在于所述提取条件：提取原料中可以采用无氧条件下加热或直接用水蒸气热处理或拌入碳酸钙或氢氧化钡，用来抑制酶的活性和中和植物酸，也可以不灭活直接提取；所用溶剂可以是水或任意一种醇类及酮类溶剂，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂；提取方法可以是破碎提取法，也可以是浸渍、渗滤、煎煮、回流提取、连续回流提取、超声波提取、微波辅助提取、酶法提取等；提取溶液的过滤包括离心、抽滤、超滤、压滤等方法，使用或不使用以下任一种澄清剂或其组合：醇沉剂、各种树脂、 101 果汁澄清剂、甲壳素类 ( 如壳聚糖 )、 ZTC 天然澄清剂、明胶、鞣酸等。 26：根据权利要求 1 所述的制备方法，其特征在于当使用活性炭柱层析时，可以选用煤质活性炭、木质活性炭、竹基活性炭或者果壳活性炭，优选椰壳活性炭；可以选用粉末状也可以用颗粒状，优选颗粒状；可以加压或减压吸附、洗脱，也可以选用常压；可以选择低温吸附、高温解吸的方式，也可以为常温操作；上样液浓度范围为 0.05 ～ 1.0g/mL，吸附流速 1 ～ 6BV/h，树脂柱径高比 1 ∶ 5 ～ 1 ∶ 20 ；水洗除杂，除杂流速为 1 ～ 6BV/h ；解析可以为 2 ～ 6 倍量柱床体积的 10％～ 100％甲醇、乙醇或丙酮等溶剂解析，解析流速为 1 ～ 6BV/h。7：根据权利要求 1 所述的制备方法，其特征在于：当采用硅胶柱层析法进行制备时，可以选用干柱法，也可以是湿柱法；所用的洗脱液一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷等组成的混合溶剂。8：根据权利要求 1 所述的制备方法，其特征在于结晶技术：结晶溶剂可以为水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷的任一种，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，优选丙酮 - 水系统；结晶类型可以为冷却结晶、蒸发结晶、真空结晶和反应与盐析结晶等传统结晶法，也可以为超临界结晶、物理场强化溶液结晶、膜结晶、加压结晶等新型结晶技术。

说明书

一种利用活性碳柱层析和结晶技术提取纯化梓醇的方法
    【技术领域】
     本发明属于医药技术领域，具体涉及一种从中药鲜地黄块根中分离制备梓醇的方法。背景技术地黄为常用中药， 2010 年版《中国药典》一部的成方制剂中有近二百种 (194 种 ) 选用了地黄，是我国著名的 “四大怀药” 道地药材之一，地黄来源于玄参科植物地黄 Rehmannia glutinosa Libosch. 的新鲜或干燥块根，具清热凉血、养阴、生津之功效 [1]。
     我们课题组成员长期从事地黄化学成分和药理学研究，先后承担了国家七 . 五攻关课题 “常用中药材地黄品种整理和质量研究” 、国家九 . 五攻关课题 “地黄质量标准规范化研究” (NO ： 969030204)、国家青年基金课题 “标准物质地黄甙 D 的研究” (NO ： 95Y3411，合同： 95C018)、河南省自然基金课题 “鲜地黄与地黄、熟地黄有效成分比较研究” (NO ： 0111021700)、 “中药地黄、白芷、连翘标准品的研究” (NO ： 0511043800) 以及国家自然科学基金 “地黄一源三性物质基础及血清相关性的比较研究” ( 编号： 30873442) 等一系列有关中药 “地黄” 的国家和省级科研课题，对地黄中环烯醚萜苷类成分进行了系统的分离鉴定研究，并大量的富集制备了梓醇等标准品，为地黄的质量控制及药效学评价奠定了基础。其结构如下：
     经研究发现，梓醇属于 7， 8- 环氧醚型环烯醚萜苷类化合物，其 4- 位无取代基， 1- 位上的羟基与糖缩合成单糖苷，它是中药地黄中降血糖作用的有效成分，并有很好的利尿作用和迟发性的缓下作用，这些都与地黄药效相一致。近年来，国内学者报道了梓醇具 [2] 有改善东莨菪碱诱导的学习记忆障碍、抗脑缺血损伤促神经修复和重塑 [3]、抗老年性痴 [4] [5] 呆改善记忆和治疗骨质疏松等等多种药理活性。同时，梓醇也是地黄的指标性成分， 2010 年版《中国药典》一部规定生地黄药材按干燥品计算含梓醇不得少于 0.20％ [1]。
     现有标准品梓醇系我们在国家七五期间及河南省自然基金课题研究成果，已经推广应用于地黄药材的质量控制。我们曾对梓醇成分进行分离制备，研究发现梓醇分子量不大，在溶解性方面偏于亲水性，易溶于水和甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇，难溶于氯仿、苯、石油醚等亲脂性有机溶媒，但其热稳定性较差，对酸很敏感，苷键易为酸水解断裂，所得苷元因具有半缩醛结构，性质活泼容易进一步发生氧化聚合等反应。从鲜品加工成生地黄及熟地黄，梓醇的含量降低至原来的 1/10[6-11]。
     对于梓醇的分离和提取，其它已有的报道多集中在从地黄中溶出梓醇方面，包括
     所用溶剂、提取时间、提取方法等因素 [12-14] ；王明道 [15-16] 等采用了酶法和微波辅助进行怀地黄梓醇的提取工艺研究；樊海燕 [17]、张秀丽 [18] 等采用了大孔吸附树脂方法分离纯化梓醇；温学森 [19]、张发成 [20]、刘东锋 [21] 等亦采用大孔吸附树脂分离纯化的必备步骤对鲜地黄中的梓醇进行制备。为了寻找一种更适宜工业化生产的方法，我们在相关课题资助下，经多年的试验和研究，优选了活性碳柱层析同时灵活运用多种结晶手段等方法用于梓醇的分离纯化，经反复验证表明工艺稳定、可靠。
     活性炭是一种孔结构发达、比表面积巨大的含碳物质，具有吸附量大、再生简单、成本低等特点，活性炭广泛应用于天然产物有效成分的分离，是分离有机化合物，尤其是水溶性化合物的有效手段，在天然产物化学成分的提纯等方面显示了独特的优势，王贤纯 [22] [23] [24] 、皮文霞、张虎极等采用活性炭柱层析法已经成功分离纯化了姜黄素、山茱萸总苷和莽草酸。
     结晶技术作为一种制备纯物质的有效方法之一，在传统医药化工生产中一直占有相当重要的位置。与其他分离方法相比，结晶法具有产品纯度高、能量消耗少、操作温度低、对设备腐蚀程度小、操作简单、成本低等特点，应用非常广泛。
     迄今，未见涉及以地黄新鲜块根为原料，采用活性碳柱层析分离纯化的方法，同时灵活运用多种结晶等技术分离制备梓醇的专利报道。
     参考文献
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     发明内容
     本发明是以中药地黄的新鲜块根为原料，采用活性碳层析分离纯化的方法，同时灵活运用溶剂提取法、硅胶柱分离法和多种结晶技术分离制备纯度不同的梓醇产品。目的在于提供一种工艺简捷、环保节能、适宜工业化生产大量分离制备梓醇的方法。
     本发明的目的是这样来实现的：
     1) 药材的前处理
     取当年产鲜地黄块根，净选，除去非药用部位、杂质及霉变品、虫蛀品、灰屑等，水洗或漂除去泥沙，切薄片或小块。
     2) 溶剂提取
     在植物材料中拌入碳酸钙或氢氧化钡，以抑制酶的活性和中和植物酸，加入原料量 4-5 倍的乙醇，以 3000 ～ 8000rpm 转速破碎提取，甩干机离心初步分离去植物破碎组织，过滤提取液，浓缩，干燥成干浸膏。
     3) 活性炭柱层析上述提取步骤所获得的产物加水溶解，过滤，通过已处理好的分离柱 ( 颗粒状活性炭于 150℃加热处理 4.5 小时后，再加蒸馏水浸泡 1 小时，除浮粉后用蒸馏水湿法装柱 )，先以水洗脱至流出液近无色，并且糖反应试验阴性 (molish 反应阴性 ) 结合 TLC 检查至梓醇出现为止，用 75％乙醇溶液继续洗脱至无梓醇检出止，合并醇洗脱液，回收乙醇并浓缩，干燥成干浸膏。
     4) 硅胶柱分离
     上述提取步骤所获得的产物加甲醇或乙醇溶解，过滤，加适量柱层层析硅胶拌样，干燥后，样品加于层析柱的顶端，乙酸乙酯 - 乙醇 (8 ∶ 2) 洗脱， TLC 检测收集合并含梓醇的洗脱液，回收溶剂，残渣 60℃以下干燥。
     5) 结晶
     上述提取步骤所获得的产物，以丙酮 - 水 (1 ∶ 1) 为结晶溶剂，可以采用一次结晶 ( 包括冷却结晶、蒸发结晶、真空结晶、反应和盐析结晶 )、重结晶、分级结晶等技术，进行分批 ( 间歇 ) 操作或连续操作，再通过固一液分离、洗涤等操作，得到纯度较高的梓醇产品。
     上述从中药地黄的新鲜块根中提取纯化梓醇的制备方法，其特征在于所述药材的前处理：鲜地黄块根在切片或小块前可以削皮也可以不削皮，可以除去鲜地黄中部白色和浅黄色菊花心以外的部分也可以不去除。其特征在于除采用活性炭柱分离法之外，可以用溶剂提取法、硅胶柱分离法、结晶法等任一种方法，或这些方法的任意组合进行制备得到纯度不同的梓醇产品。
     其特征在于各步骤中涉及的浓缩方法包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及煎煮浓缩等；干燥方法包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。
     其特征在于所述提取条件：提取原料中可以采用无氧条件下加热或直接用水蒸气热处理或拌入碳酸钙或氢氧化钡，用来抑制酶的活性和中和植物酸，也可以不灭活直接提取；所用溶剂可以是水或任意一种醇类及酮类溶剂，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂；提取方法可以是破碎提取法，也可以是浸渍、渗滤、煎煮、回流提取、连续回流提取、超声波提取、微波辅助提取、酶法提取等；提取溶液的过滤包括离心、抽滤、超滤、压滤等方法，使用或不使用以下任一种澄清剂或其组合：醇沉剂、各种树脂、 101 果汁澄清剂、甲壳素类 ( 如壳聚糖 )、 ZTC 天然澄清剂、明胶、鞣酸等。
     其特征在于当使用活性炭柱层析时，可以选用煤质活性炭、木质活性炭、竹基活性炭或者果壳活性炭，优选椰壳活性炭；可以选用粉末状也可以用颗粒状，优选颗粒状；可以加压或减压吸附、洗脱，也可以选用常压；可以选择低温吸附、高温解吸的方式，也可以为常温操作。上样液浓度范围为 0.05 ～ 1.0g/mL，吸附流速 1 ～ 6BV/h，树脂柱径高比 1 ∶ 5 ～ 1 ∶ 20 ；水洗除杂，除杂流速为 1 ～ 6BV/h ；解析可以为 2 ～ 6 倍量柱床体积的 10％～ 100％甲醇、乙醇或丙酮等溶剂解析，解析流速为 1 ～ 6BV/h。
     其特征在于：当采用硅胶柱层析法进行制备时，可以选用干柱法，也可以是湿柱法；所用的洗脱液一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷等组成的混合溶剂。
     其特征在于结晶技术：结晶溶剂可以为水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷的任一种，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，优选丙酮 - 水系统；结晶类型可以为冷却结晶、蒸发结晶、真空结晶和反应与盐析结晶等传统结晶法，也可以为超临界结晶、物理场强化溶液结晶、膜结晶、加压结晶等新型结晶技术。
     本发明存在以下优点：
     ① 2010 年版中国药典一部地黄药材项下明确规定了其药用部位是块根，以其为原料相比从地黄茎叶等其它非药用部位提取得到的不同纯度的梓醇产品，与原药材 “地黄” 具有更多的相似性和药理活性，本发明以地黄新鲜块根为原料保证了梓醇不会因干燥而损失，有利于提高产品纯度降低分离纯化难度。
     ②本发明使用活性炭柱层析不仅仅是脱色，其主要目的是除糖，同时根据梓醇分子结构特征和活性炭吸附特点使用柱层析的方法使产品纯度得到有效富集。其特点是样品上样量大，分离效果好，活性炭来源较易，价格便宜，适用于工业化制备性分离。
     ③本发明可以选用溶剂提取法、硅胶柱层析分离法、结晶法等任一种方法，或这些方法的任意组合进一步制备得到纯度不同的梓醇产品。其中多种结晶方法的灵活运用保证了产品的高纯度，环保节能。
     本发明是在国家自然科学基金 ( 编号： 30873442) 和河南省自然科学基金项目 (0511043800) 资助下完成。
     下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。附图说明：
     图 1 为生产原料 -- 鲜地黄块根图 2 为活性炭层析柱图 3 为结晶溶剂中的梓醇晶体图 4 为高纯度的梓醇产品具体实施方式
     实施例 1
     取鲜地黄块根 20Kg，净选，切薄片，立即拌入 0.5％碳酸钙，混匀，加 95％乙醇 100L 于破碎提取器中破碎提取 ( 转速： 3000rpm)15min，甩干机离心初步分离去除植物破碎组织，滤过，滤液减压回收乙醇，真空干燥得干浸膏 1.12Kg。干浸膏加水 5.0L 溶解，滤过，通过已处理好的活性炭分离柱 ( 颗粒状活性炭于 150℃加热处理 4.5 小时后，再加蒸馏水浸泡 1 小时，除浮粉后用蒸馏水湿法装柱 )，先以水洗脱至流出液近无色，流速为 2BV/ 小时，并且糖反应试验阴性 (molish 反应阴性 )，结合 TLC 检查至梓醇出现为止，用 75％乙醇溶液继续洗脱至无梓醇检出止，流速为 3BV/ 小时，合并醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得梓醇粗品 210g。梓醇粗品加甲醇 500mL 溶解，过滤，加适量柱层析硅胶拌样，干燥后，样品加于硅胶层析柱的顶端，乙酸乙酯 - 乙醇 (8 ∶ 2) 洗脱， TLC 检测收集合并含梓醇的洗脱液，回收溶剂，残渣 60℃以下干燥，以丙酮 - 水 (1 ∶ 1) 为结晶溶剂，于 50 ～ 60℃加热制备过饱和溶液，趁热过滤，滤液置于 10℃冷库静置 24 小时析晶，抽滤，丙酮 - 水 (1 ∶ 1) 溶剂洗涤结晶，得梓醇结晶 73g( 纯度在 98％以上 ) ；母液采用分级重结晶的方法，得到纯度不同的梓醇系列产品。
     实施例 2
     取鲜地黄块根 100Kg，净选，切薄片，投入提取罐内，加 95％乙醇 400L 回流提取 3次，每次 1h，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，真空干燥得干浸膏 8.56Kg。干浸膏加水 50.0L 溶解，滤过，分次通过已处理好的活性炭分离柱 ( 颗粒状活性炭于 150℃加热处理 4.5 小时后，再加蒸馏水浸泡 1 小时，除浮粉后用蒸馏水湿法装柱 )，先以水洗脱至流出液近无色，流速为 3BV/ 小时，并且糖反应试验阴性 (molish 反应阴性 ) 结合 TLC 检查至梓醇出现为止，用 75％乙醇溶液继续洗脱至无梓醇检出止，流速为 3BV/ 小时，合并醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得梓醇粗品 890g。梓醇粗品加甲醇 2L 溶解，过滤，加适量柱层层析硅胶拌样，干燥后，样品分次加于硅胶层析柱的顶端，乙酸乙酯 - 乙醇 (8 ∶ 2) 洗脱， TLC 检测收集合并含梓醇的洗脱液，回收溶剂，残渣 60℃以下干燥，以丙酮 - 水 (3 ∶ 1) 为结晶溶剂，于 50 ～ 60℃加热制备过饱和溶液，趁热过滤，滤液置于 10℃冷库静置 24 小时析晶，过滤，丙酮 - 水 (3 ∶ 1) 溶剂洗涤结晶，得梓醇结晶 302g( 纯度在 98％以上 ) ；母液采用分级重结晶的方法，得到纯度不同的梓醇系列产品。
     实施例 3
     取鲜地黄块根 50Kg，净选，切成厚度为 1 ～ 2mm 的薄片，立即将其加热至 40 ～ 50 ℃，保温 100 ～ 120min，于破碎提取器中破碎提取加乙醇 200L 以 5000rpm 转速匀浆 15min，甩干机离心初步分离去植物破碎组织，残渣加 50％乙醇 200L 室温浸渍 2 次，合并匀浆滤液和浸渍液，回收乙醇，减压浓缩，真空干燥得干浸膏 4.87Kg。干浸膏加水 40.0L 溶解，滤过，分次通过已处理好的活性炭分离柱 ( 颗粒状活性炭于 150 ℃加热处理 4.5 小时后，再加蒸馏水浸泡 1 小时，除浮粉后用蒸馏水湿法装柱 )，先以水洗脱至流出液近无色，流速为 2BV/ 小时，并且糖反应试验阴性 (molish 反应阴性 ) 结合 TLC 检查至梓醇出现为止，用 75％乙醇溶液继续洗脱至无梓醇检出止，流速为 2BV/ 小时，合并醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得梓醇粗品 487g。梓醇粗品加适量甲醇溶解，过滤，加硅胶 H 拌样，干燥后，样品分次加于硅胶层析柱的顶端，三氯甲烷 - 乙酸乙酯 - 甲醇 - 水 (6 ∶ 4 ∶ 1 ∶ 0.5) 洗脱， TLC 检测收集合并含梓醇的洗脱液，回收溶剂，残渣 60℃以下干燥，以丙酮 - 水 (1 ∶ 3) 为结晶溶剂，于 50 ～ 60℃加热制备过饱和溶液，趁热过滤，滤液置于 10℃冷库静置 24 小时析晶，抽滤，丙酮 - 水 (1 ∶ 3) 溶剂洗涤结晶，得梓醇结晶 194g( 纯度在 98％以上 ) ；母液采用分级重结晶的方法，得到纯度不同的梓醇系列产品。
     实施例 4
     取鲜地黄块根 50Kg，净选，切成厚度为 1 ～ 2mm 的薄片，投入提取罐内，加甲醇 400L 回流提取 3 次，每次 1h，合并提取液，滤过，减压浓缩回收甲醇，真空干燥得干浸膏 5.36Kg。干浸膏加水 40.0L 溶解，滤过，分次通过已处理好的活性炭分离柱 ( 颗粒状活性炭于 150℃加热处理 4.5 小时后，再加蒸馏水浸泡 1 小时，除浮粉后用蒸馏水湿法装柱 )，先以水洗脱至流出液近无色，流速为 1BV/ 小时，并且糖反应试验阴性 (molish 反应阴性 ) 结合 TLC 检查至梓醇出现为止，用 75％乙醇溶液继续洗脱至无梓醇检出止，流速为 2BV/ 小时，合并醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得梓醇粗品 0.51Kg。梓醇粗品加适量 1 ∶ 2.5 倍量乙醇溶解，过滤，滤液减压回收乙醇，硅胶层析柱湿法装柱湿法上样，乙酸乙酯 - 乙醇 - 水 (7 ∶ 3 ∶ 1) 洗脱， TLC 检测收集合并含梓醇的洗脱液，回收溶剂，残渣 60℃以下干燥，以丙酮 - 水 (1 ∶ 1) 为结晶溶剂，于 50 ～ 60℃加热制备过饱和溶液，趁热过滤，滤液置于 10℃冷库静置 24 小时析晶，抽滤，丙酮 - 水 (1 ∶ 1) 溶剂洗涤结晶，得梓醇结晶 172g( 纯度在 98％以上 ) ；母液采用分级重结晶的方法，得到纯度不同的梓醇系列产品。

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1、(10)申请公布号 CN 102408461 A (43)申请公布日 2012.04.11 C N 1 0 2 4 0 8 4 6 1 A *CN102408461A* (21)申请号 201110275524.8 (22)申请日 2011.09.16 C07H 17/04(2006.01) C07H 1/08(2006.01) (71)申请人河南省中医药研究院地址 450004 河南省郑州市城北路7号 (72)发明人刘明王慧森李更生 (54) 发明名称一种利用活性碳柱层析和结晶技术提取纯化梓醇的方法 (57) 摘要本发明属于医药技术领域，具体涉及一种从中药鲜地黄块根中分离制备梓。

2、醇的方法。即以中药地黄的新鲜块根为原料，采用活性碳柱层析分离纯化的方法，同时灵活运用溶剂提取法、硅胶柱分离法和多种结晶技术制备纯度不同的梓醇产品。目的在于提供一种工艺简捷、环保节能、适宜工业化生产制备梓醇的方法。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书 2 页说明书 6 页附图 1 页 CN 102408465 A 1/2页 2 1.一种利用活性炭和结晶技术从中药地黄的新鲜块根中提取纯化梓醇的方法，其特征在于： 1)药材的前处理取当年产鲜地黄块根，净选，除去非药用部位、杂质及霉变品、虫蛀品、灰屑等，水洗或漂除去泥沙，切。

3、薄片或小块； 2)溶剂提取在植物材料中拌入碳酸钙或氢氧化钡，以抑制酶的活性和中和植物酸，加入原料量4-5 倍的乙醇，以30008000rpm转速破碎提取，甩干机离心初步分离去植物破碎组织，过滤提取液，浓缩，干燥成干浸膏； 3)活性炭柱层析分离上述提取步骤所获得的产物加水溶解，过滤，通过已处理好的分离柱(颗粒状活性炭于150加热处理4.5小时后，再加蒸馏水浸泡1小时，除浮粉后用蒸馏水湿法装柱)，先以水洗脱至流出液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)结合TLC检查至梓醇出现为止，用75乙醇溶液继续洗脱至无梓醇检出止，合并醇洗脱液，回收乙醇并浓缩，干燥成干浸膏； 4)硅胶。

4、柱层析分离上述提取步骤所获得的产物加甲醇或乙醇溶解，过滤，加适量柱层层析硅胶拌样，干燥后，样品加于层析柱的顶端，乙酸乙酯-乙醇(82)洗脱，TLC检测收集合并含梓醇的洗脱液，回收溶剂，残渣60以下干燥； 5)结晶上述提取步骤所获得的产物，以丙酮-水(11)为结晶溶剂，可以采用一次结晶(包括冷却结晶、蒸发结晶、真空结晶、反应和盐析结晶)、重结晶、分级结晶等技术，进行分批 (间歇)操作或连续操作，再通过固一液分离、洗涤等操作，得到纯度较高的梓醇产品。 2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述药材的前处理：鲜地黄块根在切片或小块前可以削皮也可以不削皮，可以除去鲜地黄中部白色和浅黄。

5、色菊花心以外的部分也可以不去除。 3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于除采用活性炭柱层析法之外，可以用溶剂提取法、硅胶柱层析法、结晶法等任一种方法，或这些方法的任意组合进行制备得到纯度不同的梓醇产品。 4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于各步骤中涉及的浓缩方法包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及煎煮浓缩等；干燥方法包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。 5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述提取条件：提取原料中可以采用无氧条件下加热或直接用水蒸气热处理或拌入碳酸钙或氢氧化钡，用来抑制酶的活性和中和植物酸，也可以不灭活直接提取；所用溶剂可以是水或任意一。

6、种醇类及酮类溶剂，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂；提取方法可以是破碎提取法，也可以是浸渍、渗滤、煎煮、回流提取、连续回流提取、超声波提取、微波辅助提取、酶法提取等；提取溶液的过滤包括离心、抽滤、超滤、压滤等方法，使用或不使用以下任一种澄清剂或其组合：醇沉剂、各种树脂、 101果汁澄清剂、甲壳素类(如壳聚糖)、ZTC天然澄清剂、明胶、鞣酸等。权利要求书CN 102408461 A CN 102408465 A 2/2页 3 6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于当使用活性炭柱层析时，可以选用煤质活性炭、木质活性炭、竹基活性炭或者果壳活性炭，优选椰壳活性炭；可以选用粉末。

7、状也可以用颗粒状，优选颗粒状；可以加压或减压吸附、洗脱，也可以选用常压；可以选择低温吸附、高温解吸的方式，也可以为常温操作；上样液浓度范围为0.051.0g/mL，吸附流速 16BV/h，树脂柱径高比15120；水洗除杂，除杂流速为16BV/h；解析可以为 26倍量柱床体积的10100甲醇、乙醇或丙酮等溶剂解析，解析流速为16BV/h。 7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：当采用硅胶柱层析法进行制备时，可以选用干柱法，也可以是湿柱法；所用的洗脱液一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷等组成的混合溶剂。 8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于结晶技术：结晶溶剂可。

8、以为水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷的任一种，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，优选丙酮-水系统；结晶类型可以为冷却结晶、蒸发结晶、真空结晶和反应与盐析结晶等传统结晶法，也可以为超临界结晶、物理场强化溶液结晶、膜结晶、加压结晶等新型结晶技术。权利要求书CN 102408461 A CN 102408465 A 1/6页 4 一种利用活性碳柱层析和结晶技术提取纯化梓醇的方法技术领域 0001 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种从中药鲜地黄块根中分离制备梓醇的方法。背景技术 0002 地黄为常用中药，2010年版中国药典一部的成方制剂中有近二百种(194种)选用。

9、了地黄，是我国著名的“四大怀药”道地药材之一，地黄来源于玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的新鲜或干燥块根，具清热凉血、养阴、生津之功效 1 。 0003 我们课题组成员长期从事地黄化学成分和药理学研究，先后承担了国家七.五攻关课题“常用中药材地黄品种整理和质量研究”、国家九.五攻关课题“地黄质量标准规范化研究” (NO：969030204)、国家青年基金课题“标准物质地黄甙D的研究” (NO：95Y3411，合同：95C018)、河南省自然基金课题“鲜地黄与地黄、熟地黄有效成分比较研究” (NO： 0111021700)、“中药地黄、白芷、连翘标准品。

10、的研究” (NO：0511043800)以及国家自然科学基金“地黄一源三性物质基础及血清相关性的比较研究” (编号：30873442)等一系列有关中药“地黄”的国家和省级科研课题，对地黄中环烯醚萜苷类成分进行了系统的分离鉴定研究，并大量的富集制备了梓醇等标准品，为地黄的质量控制及药效学评价奠定了基础。其结构如下： 0004 0005 经研究发现，梓醇属于7，8-环氧醚型环烯醚萜苷类化合物，其4-位无取代基， 1-位上的羟基与糖缩合成单糖苷，它是中药地黄中降血糖作用的有效成分，并有很好的利尿作用和迟发性的缓下作用，这些都与地黄药效相一致。近年来，国内学者报道了梓醇具有改善东莨菪碱诱导。

11、的学习记忆障碍 2 、抗脑缺血损伤促神经修复和重塑 3 、抗老年性痴呆改善记忆 4 和治疗骨质疏松 5 等等多种药理活性。同时，梓醇也是地黄的指标性成分， 2010年版中国药典一部规定生地黄药材按干燥品计算含梓醇不得少于0.20 1 。 0006 现有标准品梓醇系我们在国家七五期间及河南省自然基金课题研究成果，已经推广应用于地黄药材的质量控制。我们曾对梓醇成分进行分离制备，研究发现梓醇分子量不大，在溶解性方面偏于亲水性，易溶于水和甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇，难溶于氯仿、苯、石油醚等亲脂性有机溶媒，但其热稳定性较差，对酸很敏感，苷键易为酸水解断裂，所得苷元因具有半缩醛结构，性质活泼。

12、容易进一步发生氧化聚合等反应。从鲜品加工成生地黄及熟地黄，梓醇的含量降低至原来的1/10 6-11 。 0007 对于梓醇的分离和提取，其它已有的报道多集中在从地黄中溶出梓醇方面，包括说明书CN 102408461 A CN 102408465 A 2/6页 5 所用溶剂、提取时间、提取方法等因素 12-14 ；王明道 15-16 等采用了酶法和微波辅助进行怀地黄梓醇的提取工艺研究；樊海燕 17 、张秀丽 18 等采用了大孔吸附树脂方法分离纯化梓醇；温学森 19 、张发成 20 、刘东锋 21 等亦采用大孔吸附树脂分离纯化的必备步骤对鲜地黄中的梓醇进行制备。为了寻找一种更适宜工业。

13、化生产的方法，我们在相关课题资助下，经多年的试验和研究，优选了活性碳柱层析同时灵活运用多种结晶手段等方法用于梓醇的分离纯化，经反复验证表明工艺稳定、可靠。 0008 活性炭是一种孔结构发达、比表面积巨大的含碳物质，具有吸附量大、再生简单、成本低等特点，活性炭广泛应用于天然产物有效成分的分离，是分离有机化合物，尤其是水溶性化合物的有效手段，在天然产物化学成分的提纯等方面显示了独特的优势，王贤纯 22 、皮文霞 23 、张虎极 24 等采用活性炭柱层析法已经成功分离纯化了姜黄素、山茱萸总苷和莽草酸。 0009 结晶技术作为一种制备纯物质的有效方法之一，在传统医药化工生产中一直占有相当重。

14、要的位置。与其他分离方法相比，结晶法具有产品纯度高、能量消耗少、操作温度低、对设备腐蚀程度小、操作简单、成本低等特点，应用非常广泛。 0010 迄今，未见涉及以地黄新鲜块根为原料，采用活性碳柱层析分离纯化的方法，同时灵活运用多种结晶等技术分离制备梓醇的专利报道。 0011 参考文献 0012 1国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部M.北京：中国医药科技出版社，2010：115. 0013 2王红利，薛莉君，万东，等.梓醇改善东莨菪碱诱导的学习记忆障碍及机制研究J.中国药理学通报，2011，22(8)：1267-1271. 0014 3祝慧凤，万东，张芬.地黄梓醇脑保护的药理作用及机。

15、制研究进展J.中国中药杂志，2009，34(23)：2983-2986. 0015 4刘明，刘洋，张易，等.梓醇上调NGF、BDNF及mRNA表达伴随缺血性脑卒中大鼠神经功能恢复J.中华中医药杂志，2011，19(5)：977-981. 0016 5武密山，赵素芝，李恩，等.地黄活性成分梓醇对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响J中国药理学通报，2010，21(4)：509-513. 0017 6李更生，王慧森，都恒青，等.液相层析法制备地黄活性成分梓醇J.中成药， 1998，20(6)：36. 0018 7刘明，李更生.鲜地黄中梓醇提取工艺J.时珍国医国药，2000，11。

16、(4)： 301-302. 0019 8王慧森，李更生，刘明，等.鲜地黄中环烯醚萜苷的分离鉴定J.中医研究， 2005，18(4)：17-19. 0020 9吕杨，王慧森，李更生，等.正交试验优选鲜地黄提取工艺J.中医研究， 2009，22(2)：18-20. 0021 10刘明，李更生，王慧森.熟地黄药材质量标准的研究J.药物分析杂志， 2007，27(9)：1311-1314. 0022 11李更生，刘明，王慧森，等.地黄药材炮制过程中环烯醚萜苷类成分动态变化的研究J.中国中医药科技，2008，15(6)：440-442. 说明书CN 102408461 A CN 102408465。

17、 A 3/6页 6 0023 12刘海洋，李冀，雷勇，等.地黄中梓醇的含量测定及其提取分离工艺研究J. 中医药信息，2010，27(1)：86-88. 0024 13张玲，徐新刚，时延增，等.地黄提取工艺研究J.中草药，1998，29(5)： 308-310. 0025 14杨菁，刘影，白剑，等.生地黄中梓醇纯化工艺优选J.中成药，2010，22(3)： 416-417. 0026 15王明道，原增艳，刘新育，等.响应面法优化酶法提取怀地黄梓醇的工艺J. 江苏农业学报，2010，26(1)：163-167. 0027 16王明道，何江华，刘新育，等.微波辅助提取怀地黄梓醇工艺研究J.信阳师范。

18、学院学报(自然科学版)，2009，22(1)：114-117. 0028 17樊海燕，杨坤，张晨晓，等.地黄中梓醇的超声提取-树脂分离纯化工艺J. 化工学报，2008，59(9)：2283-2288. 0029 18张秀丽，王静云，姜波，等.大孔吸附树脂分离纯化地黄中梓醇工艺的研究 J.中国生物工程杂志，2008，28(1)：65-69. 0030 19温学森，赵宇，刘彦飞.鲜地黄中分离梓醇的方法：中国专利， 200810016005.8P.2008-09-17. 0031 20张发成，毛志英，范淦彬.一种梓醇的制备方法：中国专利， 200910232807.7P.2010-05-12. 00。

19、32 21刘东锋，张翼，杨成东.一种从新鲜地黄中制备梓醇和地黄多糖的方法：中国专利，200910264454.9P.2010-09-01. 0033 22王贤纯.活性炭柱层析法分离姜黄素J.生物学杂志，2000，17(6)：8-10. 0034 23皮文霞，蔡宝昌，潘扬，等.大孔树脂与活性炭富集山茱萸总苷的实验研究 J.中国中药杂志，2002，27(8)：583-584. 0035 24张虎极，桂本，刘黎明，等.活性炭对八角茴香中莽草酸吸附分离性能的研究 J.化学与生物工程，2009，26(1)：32-35. 发明内容 0036 本发明是以中药地黄的新鲜块根为原料，采用活性碳层析分离纯化的方。

20、法，同时灵活运用溶剂提取法、硅胶柱分离法和多种结晶技术分离制备纯度不同的梓醇产品。目的在于提供一种工艺简捷、环保节能、适宜工业化生产大量分离制备梓醇的方法。 0037 本发明的目的是这样来实现的： 0038 1)药材的前处理 0039 取当年产鲜地黄块根，净选，除去非药用部位、杂质及霉变品、虫蛀品、灰屑等，水洗或漂除去泥沙，切薄片或小块。 0040 2)溶剂提取 0041 在植物材料中拌入碳酸钙或氢氧化钡，以抑制酶的活性和中和植物酸，加入原料量4-5倍的乙醇，以30008000rpm转速破碎提取，甩干机离心初步分离去植物破碎组织，过滤提取液，浓缩，干燥成干浸膏。 0042 3)活性炭。

21、柱层析说明书CN 102408461 A CN 102408465 A 4/6页 7 0043 上述提取步骤所获得的产物加水溶解，过滤，通过已处理好的分离柱(颗粒状活性炭于150加热处理4.5小时后，再加蒸馏水浸泡1小时，除浮粉后用蒸馏水湿法装柱)，先以水洗脱至流出液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)结合TLC检查至梓醇出现为止，用75乙醇溶液继续洗脱至无梓醇检出止，合并醇洗脱液，回收乙醇并浓缩，干燥成干浸膏。 0044 4)硅胶柱分离 0045 上述提取步骤所获得的产物加甲醇或乙醇溶解，过滤，加适量柱层层析硅胶拌样，干燥后，样品加于层析柱的顶端，乙酸乙酯-乙醇。

22、(82)洗脱，TLC检测收集合并含梓醇的洗脱液，回收溶剂，残渣60以下干燥。 0046 5)结晶 0047 上述提取步骤所获得的产物，以丙酮-水(11)为结晶溶剂，可以采用一次结晶 (包括冷却结晶、蒸发结晶、真空结晶、反应和盐析结晶)、重结晶、分级结晶等技术，进行分批(间歇)操作或连续操作，再通过固一液分离、洗涤等操作，得到纯度较高的梓醇产品。 0048 上述从中药地黄的新鲜块根中提取纯化梓醇的制备方法，其特征在于所述药材的前处理：鲜地黄块根在切片或小块前可以削皮也可以不削皮，可以除去鲜地黄中部白色和浅黄色菊花心以外的部分也可以不去除。 0049 其特征在于除采用活性炭柱分离法之外，可。

23、以用溶剂提取法、硅胶柱分离法、结晶法等任一种方法，或这些方法的任意组合进行制备得到纯度不同的梓醇产品。 0050 其特征在于各步骤中涉及的浓缩方法包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及煎煮浓缩等；干燥方法包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。 0051 其特征在于所述提取条件：提取原料中可以采用无氧条件下加热或直接用水蒸气热处理或拌入碳酸钙或氢氧化钡，用来抑制酶的活性和中和植物酸，也可以不灭活直接提取；所用溶剂可以是水或任意一种醇类及酮类溶剂，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂；提取方法可以是破碎提取法，也可以是浸渍、渗滤、煎煮、回流提取、连续回流提取、超声波提取、微波辅助提取、。

24、酶法提取等；提取溶液的过滤包括离心、抽滤、超滤、压滤等方法，使用或不使用以下任一种澄清剂或其组合：醇沉剂、各种树脂、101果汁澄清剂、甲壳素类(如壳聚糖)、ZTC天然澄清剂、明胶、鞣酸等。 0052 其特征在于当使用活性炭柱层析时，可以选用煤质活性炭、木质活性炭、竹基活性炭或者果壳活性炭，优选椰壳活性炭；可以选用粉末状也可以用颗粒状，优选颗粒状；可以加压或减压吸附、洗脱，也可以选用常压；可以选择低温吸附、高温解吸的方式，也可以为常温操作。上样液浓度范围为0.051.0g/mL，吸附流速16BV/h，树脂柱径高比15 120；水洗除杂，除杂流速为16BV/h；解析可以为26倍量柱床体积。

25、的10100 甲醇、乙醇或丙酮等溶剂解析，解析流速为16BV/h。 0053 其特征在于：当采用硅胶柱层析法进行制备时，可以选用干柱法，也可以是湿柱法；所用的洗脱液一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷等组成的混合溶剂。 0054 其特征在于结晶技术：结晶溶剂可以为水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷的任一种，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，优选丙酮-水系统；结晶类型可以为冷却结晶、蒸发结晶、真空结晶和反应与盐析结晶等传统结晶法，也可以为超临界结晶、物理场强化溶液结晶、膜结晶、加压结晶等新型结晶技术。说明书CN 102408461 A CN 102408465 。

26、A 5/6页 8 0055 本发明存在以下优点： 0056 2010年版中国药典一部地黄药材项下明确规定了其药用部位是块根，以其为原料相比从地黄茎叶等其它非药用部位提取得到的不同纯度的梓醇产品，与原药材“地黄” 具有更多的相似性和药理活性，本发明以地黄新鲜块根为原料保证了梓醇不会因干燥而损失，有利于提高产品纯度降低分离纯化难度。 0057 本发明使用活性炭柱层析不仅仅是脱色，其主要目的是除糖，同时根据梓醇分子结构特征和活性炭吸附特点使用柱层析的方法使产品纯度得到有效富集。其特点是样品上样量大，分离效果好，活性炭来源较易，价格便宜，适用于工业化制备性分离。 0058 本发明可以选用溶剂提。

27、取法、硅胶柱层析分离法、结晶法等任一种方法，或这些方法的任意组合进一步制备得到纯度不同的梓醇产品。其中多种结晶方法的灵活运用保证了产品的高纯度，环保节能。 0059 本发明是在国家自然科学基金(编号：30873442)和河南省自然科学基金项目 (0511043800)资助下完成。 0060 下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。附图说明： 0061 图1为生产原料-鲜地黄块根 0062 图2为活性炭层析柱 0063 图3为结晶溶剂中的梓醇晶体 0064 图4为高纯度的梓醇产品具体实施方式 0065 实施例1 0066 取鲜地黄块根20。

28、Kg，净选，切薄片，立即拌入0.5碳酸钙，混匀，加95乙醇100L 于破碎提取器中破碎提取(转速：3000rpm)15min，甩干机离心初步分离去除植物破碎组织，滤过，滤液减压回收乙醇，真空干燥得干浸膏1.12Kg。干浸膏加水5.0L溶解，滤过，通过已处理好的活性炭分离柱(颗粒状活性炭于150加热处理4.5小时后，再加蒸馏水浸泡1 小时，除浮粉后用蒸馏水湿法装柱)，先以水洗脱至流出液近无色，流速为2BV/小时，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，结合TLC检查至梓醇出现为止，用75乙醇溶液继续洗脱至无梓醇检出止，流速为3BV/小时，合并醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得梓醇粗品。

29、210g。梓醇粗品加甲醇500mL溶解，过滤，加适量柱层析硅胶拌样，干燥后，样品加于硅胶层析柱的顶端，乙酸乙酯-乙醇(82)洗脱，TLC检测收集合并含梓醇的洗脱液，回收溶剂，残渣60以下干燥，以丙酮-水(11)为结晶溶剂，于5060加热制备过饱和溶液，趁热过滤，滤液置于10冷库静置24小时析晶，抽滤，丙酮-水(11)溶剂洗涤结晶，得梓醇结晶73g(纯度在98以上)；母液采用分级重结晶的方法，得到纯度不同的梓醇系列产品。 0067 实施例2 0068 取鲜地黄块根100Kg，净选，切薄片，投入提取罐内，加95乙醇400L回流提取3 说明书CN 102408461 A CN 1024。

30、08465 A 6/6页 9 次，每次1h，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，真空干燥得干浸膏8.56Kg。干浸膏加水50.0L溶解，滤过，分次通过已处理好的活性炭分离柱(颗粒状活性炭于150加热处理 4.5小时后，再加蒸馏水浸泡1小时，除浮粉后用蒸馏水湿法装柱)，先以水洗脱至流出液近无色，流速为3BV/小时，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)结合TLC检查至梓醇出现为止，用75乙醇溶液继续洗脱至无梓醇检出止，流速为3BV/小时，合并醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得梓醇粗品890g。梓醇粗品加甲醇2L溶解，过滤，加适量柱层层析硅胶拌样，干燥后，样品分次加于硅胶层析柱的顶端，。

31、乙酸乙酯-乙醇(82)洗脱，TLC检测收集合并含梓醇的洗脱液，回收溶剂，残渣60以下干燥，以丙酮-水(31)为结晶溶剂，于 5060加热制备过饱和溶液，趁热过滤，滤液置于10冷库静置24小时析晶，过滤，丙酮-水(31)溶剂洗涤结晶，得梓醇结晶302g(纯度在98以上)；母液采用分级重结晶的方法，得到纯度不同的梓醇系列产品。 0069 实施例3 0070 取鲜地黄块根50Kg，净选，切成厚度为12mm的薄片，立即将其加热至40 50，保温100120min，于破碎提取器中破碎提取加乙醇200L以5000rpm转速匀浆 15min，甩干机离心初步分离去植物破碎组织，残渣加50乙醇200L室温。

32、浸渍2次，合并匀浆滤液和浸渍液，回收乙醇，减压浓缩，真空干燥得干浸膏4.87Kg。干浸膏加水40.0L溶解，滤过，分次通过已处理好的活性炭分离柱(颗粒状活性炭于150加热处理4.5小时后，再加蒸馏水浸泡1小时，除浮粉后用蒸馏水湿法装柱)，先以水洗脱至流出液近无色，流速为2BV/小时，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)结合TLC检查至梓醇出现为止，用 75乙醇溶液继续洗脱至无梓醇检出止，流速为2BV/小时，合并醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得梓醇粗品487g。梓醇粗品加适量甲醇溶解，过滤，加硅胶H拌样，干燥后，样品分次加于硅胶层析柱的顶端，三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(641。

33、0.5)洗脱，TLC检测收集合并含梓醇的洗脱液，回收溶剂，残渣60以下干燥，以丙酮-水(13)为结晶溶剂，于5060加热制备过饱和溶液，趁热过滤，滤液置于10冷库静置24小时析晶，抽滤，丙酮-水(13)溶剂洗涤结晶，得梓醇结晶194g(纯度在98以上)；母液采用分级重结晶的方法，得到纯度不同的梓醇系列产品。 0071 实施例4 0072 取鲜地黄块根50Kg，净选，切成厚度为12mm的薄片，投入提取罐内，加甲醇 400L回流提取3次，每次1h，合并提取液，滤过，减压浓缩回收甲醇，真空干燥得干浸膏 5.36Kg。干浸膏加水40.0L溶解，滤过，分次通过已处理好的活性炭分离柱(颗粒状活性。

34、炭于150加热处理4.5小时后，再加蒸馏水浸泡1小时，除浮粉后用蒸馏水湿法装柱)，先以水洗脱至流出液近无色，流速为1BV/小时，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性) 结合TLC检查至梓醇出现为止，用75乙醇溶液继续洗脱至无梓醇检出止，流速为2BV/小时，合并醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得梓醇粗品0.51Kg。梓醇粗品加适量12.5倍量乙醇溶解，过滤，滤液减压回收乙醇，硅胶层析柱湿法装柱湿法上样，乙酸乙酯-乙醇-水 (731)洗脱，TLC检测收集合并含梓醇的洗脱液，回收溶剂，残渣60以下干燥，以丙酮-水(11)为结晶溶剂，于5060加热制备过饱和溶液，趁热过滤，滤液置于10冷库静置24小时析晶，抽滤，丙酮-水(11)溶剂洗涤结晶，得梓醇结晶172g(纯度在98 以上)；母液采用分级重结晶的方法，得到纯度不同的梓醇系列产品。说明书CN 102408461 A CN 102408465 A 1/1页 10 图1 图2 图3 图4 说明书附图CN 102408461 A 。

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