粉虱座壳孢菌培养基.pdf

本发明的粉虱座壳孢菌培养基，包括粉虱座壳孢菌孢子萌发培养基、粉虱座壳孢菌菌丝生长培养基和粉虱座壳孢菌产孢培养基。本发明的培养基加入了维生素和金属离子，能满足该菌不同发育期的营养需要，显著促进粉虱座壳孢菌的生长发育。使用粉虱座壳孢菌孢子萌发培养基，孢子24小时的萌发率可达82％；使用粉虱座壳孢菌丝生长培养基，摇瓶培养7天菌丝干重可达0.355克/100毫升培养基；使用粉虱座壳孢菌产孢培养基，培养28天产孢量可达4.79×107个孢子/20毫升培养基。

1、  一种粉虱座壳孢菌孢子萌发培养基，其特征在于由肌醇、胰蛋白胨、七水硫酸锌、维生素B5、氯化钾、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、琼脂和水组成，各种原料及其含量的关系如下：
原料                    原料重量比百分率(％)
肌醇                    0.21～11.47
胰蛋白胨                0.05～2.61
七水硫酸锌              0～0.08
维生素B5                0～0.08
氯化钾                  0.04～0.05
硫酸镁                  0.04～0.05
磷酸二氢钾              0.04～0.05
磷酸氢二钠              0.05～0.06
琼脂                    1.95～4.07
水                      81.48～97.62

2、  根据权利要求1所述的一种粉虱座壳孢菌孢子萌发培养基，其特征在于各种原料及其含量的关系如下：
原料                    原料重量比百分率(％)
肌醇                    0.21
胰蛋白胨                0.38
七水硫酸锌              0.02
维生素B5                0.01
氯化钾                  0.05
硫酸镁                  0.05
磷酸二氢钾              0.05
磷酸氢二钠              0.06
琼脂                    3.35
蒸馏水                  95.82

3、  一种粉虱座壳孢菌菌丝生长培养基，其特征在于由可溶性淀粉、胰蛋白胨、氯化钙、叶酸、氯化钾、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和水组成，各种原料及其含量的关系如下：
原料                     原料重量比百分率(％)
可溶性淀粉               0.20～11.00
胰蛋白胨                 0.05～2.75
氯化钙                   0～0.04
叶酸                     0～0.09
氯化钾                   0.04～0.05
硫酸镁                   0.04～0.05
磷酸二氢钾               0.04～0.05
磷酸氢二钠               0.05～0.06
水                       85.91～99.58

4、  根据权利要求3所述的一种粉虱座壳孢菌菌丝生长培养基，其特征在于各种原料及其含量的关系如下：
原料                     原料重量比百分率(％)
可溶性淀粉               1.50
胰蛋白胨                 3.01
氯化钙                   0.01
叶酸                     0.01
氯化钾                   0.05
硫酸镁                   0.05
磷酸二氢钾               0.05
磷酸氢二钠               0.06
蒸馏水                   95.26

5、  一种粉虱座壳孢菌产孢培养基，其特征在于由可乳糖、胰蛋白胨、七水硫酸亚铁、维生素B1、氯化钾、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和水组成，各种原料及其含量的关系如下：
原料                     原料重量比百分率(％)
乳糖                     0.28～14.59
胰蛋白胨                 0.05～2.52
七水硫酸亚铁             0～0.08
维生素B1                 0～0.08
氯化钾                   0.04～0.05
硫酸镁                   0.04～0.05
磷酸二氢钾               0.04～0.05
磷酸氢二钠               0.05～0.06
琼脂                     1.95～3.93
水                       78.61～97.55

6、  根据权利要求5所述的一种粉虱座壳孢菌产孢培养基，其特征在于各种原料及其含量的关系如下：
原料                     原料重量比百分率(％)
乳糖                     1.10
胰蛋白胨                 0.37
七水硫酸亚铁             0.01
维生素B1                 0.01
氯化钾                   0.05
硫酸镁                   0.05
磷酸二氢钾               0.05
磷酸氢二钠               0.06
琼脂                     3.32
蒸馏水                   94.98

粉虱座壳孢菌培养基
所属技术领域  本发明涉及一种昆虫病原真菌培养基，特别是粉虱座壳孢菌培养基。
背景技术  粉虱座壳孢菌(Aschersonia aleyrodis Webber)属于丝孢菌类，腔孢纲，球壳目，鲜壳孢科，座壳孢属，广泛分布于拉丁美洲、南亚和东南亚。粉虱座壳孢菌作为重要的病原真菌在害虫(主要是粉虱和介壳虫)的生物防治中发挥着重要作用。利用虫生真菌粉虱座壳孢来防治白粉虱如甘薯白粉虱和温室白粉虱这两种世界性经济害虫，已取得了成功。前苏联高加索及黑海沿岸，从我国四川引进粉虱座壳孢防治柑桔粉虱，防治效果达95％以上。福建省用挂枝法引进粉虱座壳孢，10多年来推广应用面积达10万亩(次)，四川省应用推广面积达2万亩(次)，有效地控制了柑桔粉虱发生。华南、西南、浙江、台湾等省推广这一技术，也收到明显效果。与挂枝法相似的是四川省芦山县苗溪茶场采用在茶园中放置带有座壳孢虫尸的枝叶，成功地控制了1000多亩角蜡蚧、牡蛎蚧等介壳虫的为害。但是，目前国内外尚无关于粉虱座壳孢菌培养基研究的报道，真菌通用的培养基不能很好满足该菌生长发育的需求，这极大地限制了该菌的开发利用。
技术内容  本发明目的是综合利用多种碳源、氮源、金属离子和维生素配制成适合于粉虱座壳孢菌孢子萌发、菌丝生长和产孢的培养基。
本发明的粉虱座壳孢菌培养基，包括粉虱座壳孢菌孢子萌发培养基、粉虱座壳孢菌菌丝生长培养基和粉虱座壳孢菌产孢培养基。
本发明的粉虱座壳孢菌培养基，除水外各原料为干燥化合物，纯度为分析纯。
一种粉虱座壳孢菌孢子萌发培养基，由肌醇、胰蛋白胨、七水硫酸锌、维生素B5、氯化钾、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、琼脂和水组成，各种原料及其含量的关系如下：
原料             原料重量比百分率(％)
肌醇             0.21～11.47
胰蛋白胨         0.05～2.61
七水硫酸锌       0～0.08
维生素B5    0～0.08
氯化钾      0.04～0.05
硫酸镁      0.04～0.05
磷酸二氢钾  0.04～0.05
磷酸氢二钠  0.05～0.06
琼脂        1.95～4.07
水          81.48～97.62
一种粉虱座壳孢菌菌丝生长培养基，由可溶性淀粉、胰蛋白胨、氯化钙、叶酸、氯化钾、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和水组成，各种原料及其含量的关系如下：
原料         原料重量比百分率(％)
可溶性淀粉   0.20～11.00
胰蛋白胨     0.05～2.75
氯化钙       0～0.04
叶酸         0～0.09
氯化钾       0.04～0.05
硫酸镁       0.04～0.05
磷酸二氢钾   0.04～0.05
磷酸氢二钠   0.05～0.06
水           85.91～99.58
一种粉虱座壳孢菌产孢培养基，由可乳糖、胰蛋白胨、七水硫酸亚铁、维生素B1、氯化钾、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和水组成，各种原料及其含量的关系如下：
原料         原料重量比百分率(％)
乳糖         0.28～14.59
胰蛋白胨     0.05～2.52
七水硫酸亚铁 0～0.08
维生素B1     0～0.08
氯化钾       0.04～0.05
硫酸镁       0.04～0.05
磷酸二氢钾   0.04～0.05
磷酸氢二钠   0.05～0.06
琼脂         1.95～3.93
水    78.61～97.55
生防制剂在商业化之前，培养基的选择尤为重要，合适的培养基能充分发挥其致病力和毒力。同样地，培养基能影响真菌杀虫剂的孢子萌发、菌丝生长和产孢。本发明各物质性能稳定，分别以肌醇、可溶性淀粉和乳糖为碳源，以胰蛋白胨为氮源，提供了该菌生长繁殖所需的碳元素和氮元素；加入的生长因子—维生素则是调节微生物正常代谢所必需的；加入的无机盐是微生物细胞内分子的结构成分，并具有生理调节物质和酶激活剂的功能；还使用磷酸氢盐调节培养基的酸碱度，维持该菌生长所需的最适pH值；满足了该菌不同发育期的营养需要。本发明的粉虱座壳孢菌培养基能显著促进粉虱座壳孢菌的生长发育，其中，使用粉虱座壳孢菌孢子萌发培养基，孢子24小时的萌发率可达82％；使用粉虱座壳孢菌丝生长培养基，摇瓶培养7天菌丝干重可达0.355克/100毫升培养基；使用粉虱座壳孢菌产孢培养基，培养28天产孢量可达4.79×10⁷个孢子/20毫升培养基。
具体实施例  为了更充分地公开本发明的一种粉虱座壳孢菌培养基，下面结合实施例加以说明。
实施例一：一种粉虱座壳孢菌孢子萌发培养基，各种原料及其含量的关系如下：
原料            原料重量比百分率(％)
肌醇            0.21
胰蛋白胨        0.38
七水硫酸锌      0.02
维生素B5        0.01
氯化钾          0.05
硫酸镁          0.05
磷酸二氢钾      0.05
磷酸氢二钠      0.06
琼脂            3.35
蒸馏水          95.82
实施例二：一种粉虱座壳孢菌菌丝生长培养基，各种原料及其含量的关系如下：
原料           原料重量比百分率(％)
可溶性淀粉     1.50
胰蛋白胨        3.01
氯化钙          0.01
叶酸            0.01
氯化钾          0.05
硫酸镁          0.05
磷酸二氢钾      0.05
磷酸氢二钠      0.06
蒸馏水          95.26
实施例三：一种粉虱座壳孢菌产孢培养基，各种原料及其含量的关系如下：
原料              原料重量比百分率(％)
乳糖              1.10
胰蛋白胨          0.37
七水硫酸亚铁      0.01
维生素B1          0.01
氯化钾            0.05
硫酸镁            0.05
磷酸二氢钾        0.05
磷酸氢二钠        0.06
琼脂              3.32
蒸馏水            94.98
按上述各种培养基配方混合溶解后高压灭菌30分钟即可使用。
具体培养方法如下：
孢子萌发：将固体培养基倒入直径7.5厘米的培养皿中(5毫升/皿)，冷却后每皿接孢子液0.05毫升，涂布均匀，置于相对湿度、温度分别为74％、25±1℃下培养。
菌丝生长：将0.1毫升孢子液接种于装有100毫升液体培养基的250毫升锥形瓶中，置于恒温摇床(150转/分钟)上25±1℃培养7天。
产孢：用0.2毫升孢子液接种到盛有15毫升固体培养基的培养皿中(9毫升)，在培养箱中培养(相对湿度：74％、温度：25±1℃)28天。