《一个香豆素糖苷及其制备方法和应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一个香豆素糖苷及其制备方法和应用.pdf（6页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)申请公布号 CN 102731590 A (43)申请公布日 2012.10.17 C N 1 0 2 7 3 1 5 9 0 A *CN102731590A* (21)申请号 201210242325.1 (22)申请日 2012.07.12 C07H 15/26(2006.01) A61K 31/7048(2006.01) A01N 43/18(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A01P 15/00(2006.01) (71)申请人中国科学院南海海洋研究所 地址 510301 广东省广州市新港西路164号 (72)发明人罗雄明 张偲 尹浩 李传荣 李庆欣 (。
2、74)专利代理机构广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 代理人刘明星 (54) 发明名称 一个香豆素糖苷及其制备方法和应用 (57) 摘要 本发明公开了一个香豆素糖苷及其制备方法 和应用。香豆素糖苷，其结构式如式（）所示。本 发明从大管中分离制备得到具有抗污损生物幼虫 附着活性和抗肿瘤活性的如式（）所示的香豆素 糖苷，其能够用于制备抗污损生物幼虫附着药物 和抗肿瘤药物，为制备抗污损生物幼虫附着药物 和抗肿瘤药物提供了先导化合物，具有广阔的应 用前景。式（） (51)Int.Cl. 权利要求书1页 说明书4页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 。
3、说明书 4 页 1/1页 2 1.下述式（）所示的香豆素糖苷或其盐： 式（）。 2.一种权利要求1所示的香豆素糖苷的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： （1）将大管（Micromelum falcatum）切碎，用乙醇或乙醇水溶液浸提，提取液浓缩得到 粗提物； （2）将粗提物悬浮于水，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取物经浓缩后经硅胶柱层析， 以石油醚-丙酮作为洗脱液，从体积比9:1到3:7进行梯度洗脱，将体积比6:4梯度洗脱 的馏分点板，进行薄层层析，以体积比为8:1的氯仿-丙酮溶剂作为展开液，将比移值为 0.250.35的流分合并，脱去色素得到式（）表示的香豆素糖苷。 3.根据权利要求2所述的。
4、制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）和（2）中的浓缩为减 压浓缩。 4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述的脱去色素是经凝胶 柱层析，以甲醇为洗脱剂脱去色素。 5.权利要求1所述的的香豆素糖苷或其盐在制备抗污损生物幼虫附着药物中的应用。 6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的污损生物幼虫为藤壶幼虫。 7.权利要求1所述的的香豆素糖苷或其盐在制备抗肿瘤药物中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗乳腺癌药物或抗 肺癌药物。 9.大管在制备权利要求1所述的香豆素糖苷中的应用。 权 利 要 求 书CN 102731590 A 1/4。
5、页 3 一个香豆素糖苷及其制备方法和应用 技术领域 ： 0001 本发明属于天然产物领域，具体涉及一种香豆素糖苷及其制备方法和应用。 背景技术 ： 0002 1999年，从芸香科小芸木属大管（Micromelum falcatum）中曾经分离得到香豆素 microf alcatin isovalerate和双氢化的桂皮酸衍生物3,4-dihydro-1,2-secomicromi nutinin methylester(1),3,4-dihydro-1,2-secomicrominutinin(2)和3,4-dihydro-1, 2-secomicrominutinin-9-O-glucosi。
6、de(3)等化合物。（参考文献：Kamperdick C,Phuong NM,Sung TV，Schmidt J,Adam G.Cou marins and dihydrocinnamic acid derivatves from Micromeolum falcatum.Phytochemistry，1999,52:1671-1676）。 发明内容 ： 0003 本发明的第一个目的是提供一种具有抗污损生物幼虫附着活性和抗肿瘤活性的 香豆素糖苷。 0004 本发明的香豆素糖苷或其盐，其结构式如式（）所示： 0005 0006 式（）。 0007 本发明的第二个目的是提供如式（）所示的香豆素糖苷。
7、的制备方法，其特征在 于，包括以下步骤： 0008 （1）将大管（Micromelum falcatum）切碎，用乙醇或乙醇水溶液浸提，提取液浓缩 得到粗提物； 0009 （2）将粗提物悬浮于水，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取物经浓缩后经硅胶柱层 析，以石油醚-丙酮作为洗脱液，从体积比9:1到3:7进行梯度洗脱，将体积比6:4梯度洗 脱的馏分点板，进行薄层层析，以体积比为8:1的氯仿-丙酮溶剂作为展开液，将比移值为 0.250.35的流分合并，脱去色素得到式（）表示的香豆素糖苷。 0010 步骤（1）和（2）中的浓缩可以采用常规的方法浓缩，例如减压浓缩等。 0011 步骤（2）中所述的脱去色素可。
8、以采用常规的方法如凝胶色谱柱等，并以甲醇为洗 脱溶剂。 0012 本发明经过实验发现，如式（）所示的香豆素糖苷对藤壶幼虫的抗附着活性浓度 IC 50 是25.33g/mL；对乳腺癌细胞F10的平均半数抑制率IC 50 为35.8g/mL；对肺癌细胞 HvEvc的平均半数抑制率IC 50 为77.2g/mL。 说 明 书CN 102731590 A 2/4页 4 0013 因此，本发明的第三个目的是提供如式（）所示的香豆素糖苷或其盐在制备抗污 损生物幼虫附着药物中的应用。 0014 所述的污损生物幼虫优选为藤壶幼虫。 0015 本发明的第四个目的是如式（）所示的香豆素糖苷或其盐在制备抗肿瘤药物中。
9、 的应用。 0016 所述的抗肿瘤药物优选为抗乳腺癌药物或抗肺癌药物。 0017 本发明的第五个目的是提供大管在制备如式（）所示的香豆素糖苷中的应用。 0018 本发明从大管中分离制备得到具有抗污损生物幼虫附着活性和抗肿瘤活性的如 式（）所示的香豆素糖苷，其能够用于制备抗污损生物幼虫附着药物和抗肿瘤药物，为制 备抗污损生物幼虫附着药物和抗肿瘤药物提供了先导化合物，具有广阔的应用前景。 具体实施方式 ： 0019 以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。 0020 实施例1：如式（）所示的香豆素糖苷的制备 0021 以10kg大管枝为原料，切碎后用体积分数95%的乙醇水溶液浸提3。
10、次，将提取液 浓缩，合并得粗提取物。 0022 将粗提取物悬溶于2000mL水中，用乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，减压浓缩后得 到乙酸乙酯萃取物113g，将乙酸乙酯萃取物进行常压硅胶柱层析（高1.5m，直径10cm的玻 璃柱，硅胶200300目），以石油醚-丙酮溶剂系统为洗脱液，从体积比9:1到3:7进行梯度 洗脱，将体积比6:4梯度洗脱的馏分点板，进行TLC(GF 254 )分析，以体积比为8:1的氯仿-丙 酮溶剂系统为展开液，将R f 值为0.250.35的流分合并，再用凝胶Sephadex LH-20柱层析， 以甲醇为洗脱溶剂除色素，得到化合物1共11.3mg，外观为无色油状。 0023。
11、 化合物1的结构鉴定： 0024 高分辨质谱HR-EIMS m/z466.1829(C 23 H 30 O 10 + M + ,计算值：466.1833).氢谱 ( 1 H-NMR)数据和碳谱( 13 C-NMR)数据见表1,这些数据都是以四甲基硅烷（TMS）为内标， 分别在500MHz和125MHz的核磁共振仪上测定，溶剂都是CDCl 3 ，化学位移以ppm为单位， 耦合常数J，单位为Hz。紫外UV：246.0,323.5nm表明具有7-甲基取代香豆素骨架，红外 IR：3540,1732,1605,1546,1451,1220,1061cm -1 表明具有苯环和羟基。通过分析表1中一 维和二。
12、维数据表明存在8位取代-7位甲氧基的香豆素基团,一个异戊烯基和一个葡萄 糖基。HMBC谱表明H-1(5.57)/C-2(85.4),H-2(5.18)/C-1(68.0)/ C-4(117.0),H-4(4.71,4.77)/C-2/C-3(143.2)/C-5(17.5)和 H-5(1.65)/C-2/C-3/C-4相关，和H-1(5.57 )/C-7(162.2)/C-8(117.1)/ C-9(152.9)的HMBC信号相关，证明具有一个异戊烯基支链的C-1位与香豆素基团在 C-8位相联。 H 3.95(3H,s)与C-7(162.2)的HMBC信号相关证明甲基在C-7，COSY相 关H。
13、-1/H-2,H-2/H-3,H-3/H-4,H-4/H-5,H-5/H-6和HMBC相关 H-1(4.28)/C-2(85.4),与H-2(5.18)/C-1(100.9)，证明糖苷C-1与 异戊烯基支链的C-2相联。HMBC相关H-6(4.11)/C-1(68.0)/C-7(18.2), 与H-7(1.95)/C-6(71.5)，证明甲乙基与异戊烯基支链的C-1相联。由此 鉴定化合物1为香豆素糖苷，其结构式如式（）所示，化学命名为7-甲基-8-(1-羟乙 说 明 书CN 102731590 A 3/4页 5 基-2-O-吡喃葡萄糖基-3-甲基-4-丁烯-1-取代)香豆素。 0025 002。
14、6 式（）。 0027 表1：式(1)化合物1的氢谱和碳谱数据 0028 0029 实施例2：噻唑蓝(MTT)法测试化合物1的抗乳腺癌活性试验 0030 收集乳腺癌细胞F10，接种100L于96孔板中，每孔细胞数大约为1.010 5 个， 孔板放入CO 2 培养箱中，37，5%CO 2 培养24小时。加入超纯水10倍稀释，实施例1得到的 化合物1100L，取3个平行，放入CO 2 培养箱中，37，5%CO 2 培养24小时，阴性对照不加药 物。再吸出培养液，每孔加完全培养基150L和浓度2mg/mL的MTT50L，培养4小时后吸 出液体，加DMSO150L，振荡10min，酶标仪490nm下测。
15、定结果。计算细胞生长抑制率，计算 公式如下：生长抑制率（%）（A 阴性 A 试验 ）/(A 阴性 A 空白 )100%。再利用SPSS软件计 算，得出结构用式()表示的化合物1对乳腺癌细胞的平均半数抑制率IC 50 为35.8g/ mL，表现了明显活性。 0031 实施例3：MTT法测试化合物抗肺癌的活性试验 0032 收集肺癌细胞HvEvc，接种100L于96孔板中，每孔细胞数大约为1.010 5 个， 孔板放入CO 2 培养箱中，37，5%CO 2 培养24小时。加入超纯水10倍稀释，实施例1得到的 化合物1100L，取3个平行，放入CO 2 培养箱中，37，5%CO 2 培养24小时，阴。
16、性对照不加药 说 明 书CN 102731590 A 4/4页 6 物。再吸出培养液，每孔加完全培养基150L和浓度2mg/mL的MTT50L，培养4小时后吸 出液体，加DMSO150L，振荡10min，酶标仪490nm下测定结果。按照实施例2的方法计算 细胞生长抑制率，再利用SPSS软件计算，得出结构用式()表示的化合物1对肺癌细胞 的平均半数抑制率IC 50 为77.2g/mL，表现了明显活性。 0033 实施例4：抗污损生物幼虫的附着活性 0034 采用24孔板分别测定实施例1得到化合物1的抗藤壶幼虫附着活性。 0035 每个板孔中加入1mL含有1015个成熟的藤壶幼虫的培养液，将实施例。
17、1得到 的化合物分别溶于DMSO，然后用灭菌海水稀释成浓度100g/mL，10g/mL，1.0g/mL和 0.1g/mL。每个浓度3个平行，并以无菌海水做空白对照。将培养板置于室温下培养24 小时，在解剖镜下统计附着的幼虫数，用SPSS程序进行统计分析。统计结果显示，化合物1 在浓度100g/mL，10g/mL，1.0g/mL和0.1g/mL时，对藤壶幼虫的平均附着率分别是 18.7%，37.4%，58.5%，61.4%；空白对照组对藤壶幼虫的平均附着率为63.2%。根据幼虫附着 抑制率（空白对照附着率）/空白对照100%的公式计算化合物1的抗幼虫附着活性， 得出化合物1的抗幼虫附着活性浓度IC 50 是25.33g/mL。由此可见，本发明的化合物1具 有抗污损生物幼虫的附着活性，可以用于制备抗污损生物幼虫附着药物。 说 明 书CN 102731590 A 。