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1、(10)申请公布号 CN 102499089 A (43)申请公布日 2012.06.20 C N 1 0 2 4 9 9 0 8 9 A *CN102499089A* (21)申请号 201110343415.5 (22)申请日 2011.11.03 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人贵州省园艺研究所 地址 550006 贵州省贵阳市小河区省农科院 园艺研究所 (72)发明人郑思乡 吴青青 张朝君 石乐娟 彭弘 (74)专利代理机构贵阳中新专利商标事务所 52100 代理人顾书玲 程新敏 (54) 发明名称 一种远缘百合间无性杂交育种方法 (57) 摘要 本发明公开了一种远。
2、缘百合间无性杂交育种 方法，将两个远缘百合品种的茎尖分生组织切片 并重叠放置在一起，细胞核具有自发转移遗传物 质能力的远缘百合品种育种材料切片置于下面， 然后将切片置于培养基上培养至上面切片产生不 定芽，切取不定芽，培养成百合植株。与现有技术 相比，本发明的育种方法利用百合细胞间自发的 遗传物质转移现象，可以直接的得到大量的育种 材料，育种速度快、成本低、操作简单，由于遗传物 质的转移是自发的，可很好的解决百合种间不亲 和的问题，具有很好的推广应用价值。 (51)Int.Cl. 权利要求书1页 说明书3页 附图2页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页。
3、 说明书 3 页 附图 2 页 1/1页 2 1.一种远缘百合间无性杂交育种方法，其特征在于：将两个远缘百合品种的茎尖分生 组织切片并重叠放置在一起，细胞核具有自发转移遗传物质能力的远缘百合品种育种材料 切片置于下面，然后将切片置于培养基上培养至上面切片产生不定芽，切取不定芽，培养成 百合植株。 2.按照权利要求1所述远缘百合间的杂交育种方法，其特征在于：所述茎尖分生组织 为百合种球基部中心区。 权 利 要 求 书CN 102499089 A 1/3页 3 一种远缘百合间无性杂交育种方法 技术领域 0001 本发明涉及无性杂交育种技术领域，特别是涉及一种远缘百合间无性杂交育种方 法。 背景技术。
4、 0002 百合是百合科(Liliaceae)百合属(Lillium)植物的总称，多年生草本。目前，全 球约有115种，我国已发现有55个种，l8个变种，占世界百合属植物的一半。20世纪初，国 外以荷兰、日本和美国为中心，开展了百合的育种工作，利用本身已经优良的东方系、麝香 系和亚洲系百合进行组间和种间杂交，培育出具有良好商业性状的新品种，推出OT和LA系 列杂交新品种。目前市场上主要的百合切花品种集中在亚洲系(Asiatic hybrids)、东方系 (Oriental hybrids)、麝香系(Longiflomm hybrids)、OT型、LA型等5个品系上。我国对 百合杂交后代的培育，。
5、仅局限于百合野生资源的种质之间，进行种间杂交，到现在三十多年 来没有新品种获得商业价值。 0003 种间杂交及多倍化育种是国外花卉育种的重要途径，百合育种更是如此。在百合 常规杂交育种过程中，所选配的许多杂交组合或者完全不亲和，或者虽然亲和，但胚发育不 全，致使杂交不易成功。百合种间杂交的不亲合一直是困扰国内外百合杂交育种的技术难 题。 发明内容 0004 本发明所要解决的技术问题是克服现有远缘百合杂交技术中杂交不亲和的缺陷， 提供一种远缘百合间无性杂交育种方法，该方法绕开了传统百合杂交手段遇到的生殖障 碍，直接实现遗传物质的转移，得到的新种质资源可作为后续育种的亲本材料或直接筛选 商业品种。。
6、 0005 为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案： 本发明远缘百合间无性杂交育种方法：将两个远缘百合品种的茎尖分生组织切 片并重叠放置在一起，细胞核具有自发转移遗传物质能力的远缘百合品种育种材料切片置 于下面，然后将切片置于培养基上培养至上面切片产生不定芽，切取不定芽，培养成百合植 株。 0006 上述方法中，茎尖分生组织为百合种球基部中心区。 0007 前述远缘百合间无性杂交育种方法中，具有自发转移遗传物质能力的远缘百合品 种通过如下方法鉴定： 使用通用的卡宝染色液浸染根尖分生组织，然后进行细胞学观察，如具有如图1所示 的行为，则可判定该品种百合细胞核具有转移遗传物质的能力。 00。
7、08 在上述技术方案中，诱导产生不定芽的培养基和不定芽培养成植株所用的培养基 为本领域常规使用的培养基。 0009 申请人在研究中发现，有些百合品种的细胞核具有特殊的行为：细胞核伸长并进 说 明 书CN 102499089 A 2/3页 4 入其它相邻的细胞核，从而发生遗传物质的转移，如图1所示。利用这种细胞核自身具有的 自发转移遗传物质的能力，在两个百合远缘品种的细胞紧贴的情况下，凭借遗传物质从一 个细胞转移到另一个细胞的能力，来实现遗传物质在两个远缘品种之间的传递，以此来造 成百合基因组的改变，获得新的可遗传性状，得到新的品种。通过这种植物细胞自发的遗传 物质转移，可以绕过杂交、辐射等以前。
8、常用的育种方法，直接、快速、简易、低成本的得到大 量的育种材料。目前，申请人已成功将OTO-1与贵阳红采用分生组织切片叠加的方法培育 成出贵阳红二代新品种。 0010 本发明是建立在新的细胞遗传学发现基础上的新方法，表面来看两个生长点部位 的叠加的形式与嫁接类似，但其实两者在理论和实际上完全不同。嫁接最终两个生长点是 长在了一起，获得的新性状是不能遗传的，而本方法使用两个生长点的切片叠加，本质上只 是为了让两个百合远缘品种的细胞贴的足够近，这样才能实现“相邻”细胞间的遗传物质转 移，两片生长点薄片并不会长在一起，培养一段时间后，由于生长变形，两片切片就会分开， 并且SSR的分子标记结果表明，确。
9、实有遗传物质的转移，再生植株遗传物质的改变，这是可 以遗传的，与嫁接造成的性状改变不同。遗传物质从一个品种转移到了另一个品种，使得后 者的遗传信息发生改变，是一种全新的育种技术。 0011 与现有技术相比，本发明的育种方法利用百合细胞间自发的遗传物质转移现象， 可以直接得到大量的育种材料，育种速度快、成本低、操作简单，由于遗传物质的转移是自 发的，可很好的解决百合种间不亲和的问题，具有很好的推广应用价值。 附图说明 0012 图1是百合细胞间遗传物质的自发转移现象，是新发现的一种细胞核行为； 图2是生长点切取位置示意图，H是切口位置，I是百合种球基部生长点； 图3是生长点切片重叠示意图，J为M。
10、S培养基，K为OTO-1生长点切片，L为“贵阳红” 生长点切片； 图4是微卫星多态性比对图谱，A：OTO-1，B：贵阳红，C-G：不同性状再生植株。 具体实施方式 0013 实施例1：（1）选取细胞分裂活动旺盛的生长点部作为杂交育种材料，百合种球的 生长点位于种球的基部，种球基部向上分裂生长出百合种球的鳞片，这个位置细胞分裂旺 盛，必然伴随大量的遗传物质转移发生。切取OTO-1（OTO-1是由Manissa 和Siberia 通过离体受精和胚胎挽救技术杂交获得）试管球的基部生长点部位作为无性杂交育种材 料，要求切面平滑，切取示意见图2所示。同样方法切取另外一个品种“贵阳红”的基部生 长点。 0。
11、014 （2）在无菌条件下，将两个品种的生长点切片重叠放置在一起，OTO-1种球基部切 片置于下面，“贵阳红”种球基部切片置于上面，使其充分接触，置于MS培养基（MS+30%蔗糖 +0.8%琼脂+6-BA0.2mg/L）上，如图3所示。培养40天左右，位于上面的“贵阳红”切片上 会得到大量的不定芽，切取这些不定芽置于培养基中进行再培养直至成百合再生植株，与 原先的“贵阳红”“如意”在外观上有明显的区别。 0015 采集不同性状的再生植株、OTO-1、“贵阳红”的叶片，提取DNA后用SSR分子标记 说 明 书CN 102499089 A 3/3页 5 进行微卫星多态性比对，图谱如图4所示，新的再生植株具有一些OTO-1品种特有的条带， 是原来“贵阳红”所没有的，证实为OTO-1的遗传物质进入了“贵阳红”。 说 明 书CN 102499089 A 1/2页 6 图1 图2 图3 说 明 书 附 图CN 102499089 A 2/2页 7 图4 说 明 书 附 图CN 102499089 A 。