喹唑啉类化合物及其制备方法和用途技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种喹唑啉类化合物及其制备方法和用途。
背景技术
黏着斑激酶(Focal adhesion kinase,FAK)是一种120KDa的非受体型酪氨酸激
酶，因最早在细胞黏着斑中被发现而得名，在整合素介导的细胞信号通路中扮演着中枢的
角色。FAK存在激活与非激活两种构象，处于非激活状态的FAK在整合素的作用下，构象发生
改变，使得酪氨酸残基Y397发生磷酸化，FAK转变为激活状态，激活后的FAK与Src家族蛋白
结合形成复合物，共同激活下游复杂的信号通路，调节细胞的黏附、迁移、增殖、分化以及生
物体内的血管新生。有研究表明，FAK在多种肿瘤细胞中有显著高表达，同时，FAK表达和活
性的增高与肿瘤的转移和不良预后成正相关。因此，FAK是肿瘤治疗的一个潜在靶点。
目前，已经进入临床研究的FAK抑制剂主要有辉瑞公司的PF-562271，Poniard制药
公司的PND-1186以及Verastem公司的Defactinib(结构式如下)，但仍未见有药物被批准上
市用于肿瘤临床治疗。
基于上述技术背景，有必要对结构新颖，活性显著的FAK小分子抑制剂进行开发研
究，以满足临床肿瘤治疗的需求。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一类喹唑啉类化合物，该类化合物具有抑制黏着
斑激酶(FAK)作用，可用于黏着斑激酶相关疾病的治疗，尤其是用于黏着斑激酶高表达肿瘤
的治疗。
为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现:
在本发明的一个方面，提供了一种式(I)化合物或其可药用盐，
其中，L为0或1；
Z为苯基、取代的苯基、五元及六元内酰胺环并苯基、烯丙酰基、或N,N-二甲基氨
基-2-丁烯酰基，当Z为取代的苯基时，该苯基上的取代基选自-OCH3、-NO2、-CN、-F、-Cl、-
(CH2)mCH3、-(CH2)mOH、-(CH2)mNH2、-(CH2)mNHCOCH3、吗啉基、哌嗪基或4-甲基哌嗪基，m为0-3
的整数；
X和Y是相同或不相同的原子，选自C或N原子；
R1、R2、R3、R4和R5是相同或不相同的取代基，选自：-H、-(CH2)nCH3、-O(CH2)nCH3、-NH
(CH2)nCH3、-N(CH3)SO2(CH2)nCH3、-NHSO2(CH2)nCH3、-NHCO(CH2)nCH3、-CONH(CH2)nCH3或-SO2
(CH2)nCH3，n为0-2的整数；
R6位于所在苯环的任意位置，其包括-H、-CN、-OH、-Cl、-F、-CH3、-CH2CH3或-OCH3。
优选的，所述式(I)化合物包括下述结构的化合物：
所述盐为式(I)化合物与酸形成的加成盐，所述酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、柠檬
酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、甲磺酸、或对甲苯磺酸。
在本发明的另一方面，还提供了一种药物组合物，该组合物包含安全有效量的上
述化合物或其可药用盐及药学上可接受的载体。
上述可接受的载体是无毒的、能辅助施用并且对化合物的治疗效果没有不利影
响。此类载体可以是本领域的技术人员通常能得到的任何固体赋形剂、液体赋形剂、半固体
赋形剂或者在气雾剂组合物中的气体赋形剂。固体药物赋形剂包括淀粉、纤维素、滑石、葡
萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸镁、硬脂酸钠、甘油硬脂酰酯、
氯化钠、无水脱脂乳等。液体和半固体赋形剂可以选自甘油、丙二醇、水、乙醇和各种油，包
括那些源于石油、动物、植物或人工合成的油，例如，花生油、豆油、矿物油、芝麻油等、优选
的液体载体，特别是用于可注射溶液的，包括水、盐水、葡萄糖水溶液和甘醇。另外还可以在
组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。
本发明的化合物以治疗上的有效量施用，其施用方式可以是口服、全身施用(例
如，透过皮肤的、鼻吸入的或者用栓剂)或肠胃外施用(例如，肌肉内、静脉内或皮下)。优选
的施用方式是口服，它可根据疾病程度调节。
本发明的化合物的实际施用量(即活性组分)依赖于许多因素，如待治疗疾病的严
重性、治疗对象的年龄和相对健康程度、所使用的化合物的效能、施用途径和形式，以及其
他因素。
本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规方法制备。例如使该化合
物与一种或者多种载体混合，然后将其制成所需的剂型，如片剂、药丸、胶囊、半固体、粉末、
缓释剂型、溶液、混悬液、配剂、气雾剂等等。
在本发明的另一方面，还提供了上述化合物的制备方法，包括以下步骤：
第一步4位取代氨基的引入即中间体化合物式(II)的制备，由原料化合物A与式
(III)所示胺试剂在适当溶剂中经催化反应制得，具体可通过以下两种方法获得：方法1，原
料化合物A与1-1.5当量式(III)胺试剂在适当溶剂中，在碱性试剂的催化下，通过亲核取代
反应获得；或者方法2，原料化合物A与1-1.5当量式(III)胺试剂在适当溶剂中，在钯试剂与
含磷配体的催化下，通过偶联反应获得；
其中，原料化合物A选自购买或者自制的5-取代-2,4-二氯吡咯并[2,3-d]嘧啶，其
取代基R6位于所在苯环的任意位置，包括-H、-CN、-OH、-Cl、-F、-CH3、-CH2CH3或-OCH3；
式(III)胺试剂为取代的芳胺或者取代的芳基甲胺，其中，X和Y是C或者N；R1、R2、
R3、R4和R5是相同或不相同的取代基，选自-H、-(CH2)nCH3、-O(CH2)nCH3、-NH(CH2)nCH3、-N
(CH3)SO2(CH2)nCH3、-NHSO2(CH2)nCH3、-NHCO(CH2)nCH3、-CONH(CH2)nCH3或-SO2(CH2)nCH3，n为
0-2的整数；
溶剂选自乙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、四氢呋喃、二氧六环、或者N,N-二甲基甲
酰胺等；
碱性试剂选自吡啶、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸钾、或碳酸铯等；
钯试剂选自醋酸钯、氯化钯、三(二亚苄基丙酮)二钯、或四(三苯基膦)钯等；
含磷配体选自Xantphos、Xphos、或BINAP等。
第二步2位取代氨基的引入即式(II)中间体化合物与Z-NH2胺试剂在适当溶剂中，
经催化反应制得式(I)所示的喹唑啉类化合物，具体可通过以下两种方法获得：方法1，上述
第一步反应产物即式(II)中间体化合物与1-1.5当量Z-NH2胺试剂在适当溶剂中，在碱性试
剂的催化下，通过亲核取代反应获得；或者方法2，式(II)中间体化合物与1-1.5当量Z-NH2
胺试剂在适当溶剂中，在钯试剂与含磷配体催化下，通过偶联反应获得；
其中，Z-NH2胺试剂中Z为苯基、取代的苯基、五元及六元内酰胺环并苯基、烯丙酰
基、或N,N-二甲基氨基-2-丁烯酰基；当Z为取代的苯基时，该苯基上的取代基选自-OCH3、-
NO2、-CN、-F、-Cl、-(CH2)mCH3、-(CH2)mOH、-(CH2)mNH2、-(CH2)mNHCOCH3、吗啉基、哌嗪基或4-甲
基哌嗪基，m为0-3的整数；
溶剂选自乙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、四氢呋喃、二氧六环、或者N,N-二甲基甲
酰胺等；
碱性试剂选自吡啶、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸钾、或碳酸铯等；
钯试剂选自醋酸钯、氯化钯、三(二亚苄基丙酮)二钯、或四(三苯基膦)钯等；
含磷配体选自Xantphos、Xphos、或BINAP等。
在本发明的另一方面，还提供了一种式(II)所示的药物中间体，
其中，L为0或1；
X和Y是相同或不相同的原子，选自C或N原子；
R1、R2、R3、R4和R5是相同或不相同的取代基，选自：-H、-(CH2)nCH3、-O(CH2)nCH3、-NH
(CH2)nCH3、-N(CH3)SO2(CH2)nCH3、-NHSO2(CH2)nCH3、-NHCO(CH2)nCH3、-CONH(CH2)nCH3或-SO2
(CH2)nCH3，n为0-2的整数；
R6位于所在苯环的任意位置，其包括-H、-CN、-OH、-Cl、-F、-CH3、-CH2CH3或-OCH3。
在本发明的另一方面，还提供了上述化合物或其可药用盐在制备治疗黏着斑激酶
相关疾病的药物中的应用。
本发明化合物具有明显的黏着斑激酶(FAK)抑制活性，可用于黏着斑激酶相关疾
病的治疗。
在本发明的另一方面，还提供了上述化合物或其可药用盐在制备治疗癌症的药物
中的应用。
由于黏着斑激酶(FAK)是潜在的抗肿瘤药物靶点，而本发明的化合物具有显著的
黏着斑激酶(FAK)抑制活性，通过实验证实这些化合物对FAK增高表达的各种癌细胞增殖具
有抑制作用，因此本发明化合物适用于治疗各种癌症。
本发明的喹唑啉类化合物，能够抑制FAK激酶的生物活性，能有效抑制肿瘤细胞生
长，可用于黏着斑激酶(FAK)相关疾病的治疗，尤其适用于对FAK增高表达的癌症的治疗，应
用前景非常广阔。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1是本发明实施例1化合物抑制癌细胞生长的曲线图；
图2是本发明实施例5化合物抑制癌细胞生长的曲线图；
图3是本发明实施例7化合物抑制癌细胞生长的曲线图；
图4是本发明实施例8化合物抑制癌细胞生长的曲线图。
具体实施方式
实施例1化合物1的合成
297mg(1.28mmol)化合物A-1、275mg(1.28mmol)化合物N-(3-(氨甲基)吡啶-2-
基)-N-甲基甲磺酰胺以及0.356mL(2.56mmol)三乙胺溶于15mL二氯甲烷，室温搅拌。4h后停
止反应，减压蒸去溶剂，所得粗品用乙醚洗涤，得到白色固体B-1,收率43.0％。
100mg(0.24mmol)化合物B-1及36mg(0.24mmol)5-氨基吲哚啉-2-酮溶于3mL异丙
醇，微波100℃反应1h。反应液过滤，滤饼用少量异丙醇及乙醚洗涤，干燥得淡黄色固体，即
为化合物1，收率61.9％。m.p.183-190℃.1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ＝3.03(s,3H),3.10(s,
3H),3.27(s,2H),4.89(s,2H),6.66(brs,1H),7.05(brs,1H),7.16(s,1H),7.39(dd,J＝
7.52Hz,J＝4.76Hz,1H),7.49-7.55(m,2H),7.73-7.79(m,2H),8.47(d,J＝4.16Hz,1H),
9.33(brs,1H),10.23(brs,1H),10.40(s,1H)ppm.ESI-MS m/z 523.8[M+H]+.
实施例2化合物1b的合成
297mg(1.28mmol)化合物A-2、275mg(1.28mmol)化合物N-(3-(氨甲基)吡啶-2-
基)-N-甲基甲磺酰胺以及0.356mL(2.56mmol)三乙胺溶于15mL二氯甲烷，室温搅拌。反应4h
后停止，减压蒸去溶剂，所得粗品用乙醚洗涤，得到米白色固体B-2(540mg)，收率99.0％。
100mg(0.24mmol)化合物B-2及36mg(0.24mmol)5-氨基吲哚啉-2-酮溶于3mL异丙
醇，微波100℃反应1h。将反应液过滤，滤饼用少量异丙醇及乙醚洗涤，干燥得淡绿色固体
62mg，即为化合物1b，收率48.8％。m.p.209-213℃.1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ＝3.06(s,
3H),3.11(s,3H),3.35(s,2H),4.84(brs,2H),6.70(brs,1H),7.11(d,J＝5.44Hz,1H),7.22
(brs,1H),7.42(t,J＝5.52Hz,1H),7.60(d,J＝9.24Hz,1H),7.84-7.86(m,2H),8.49(m,
2H),10.01(brs,1H),10.26(brs,1H),10.42(s,1H)ppm.ESI-MS m/z 523.8[M+H]+.
实施例3化合物1c的合成
297mg(1.28mmol)化合物A-3、275mg(1.28mmol)化合物N-(3-(氨甲基)吡啶-2-
基)-N-甲基甲磺酰胺以及0.356mL(2.56mmol)三乙胺溶于15mL二氯甲烷，室温搅拌。反应4h
后停止，减压蒸去溶剂，所得粗品用乙醚洗涤，得到白色固体B-3，收率70.3％。
100mg(0.24mmol)化合物B-3及36mg(0.24mmol)5-氨基吲哚啉-2-酮溶于3mL异丙
醇，微波100℃反应1h。反应液过滤，滤饼用少量异丙醇及乙醚洗涤，干燥得淡黄色固体，即
为化合物1c，收率50.5％。m.p.>250℃.1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ＝3.05(s,3H),3.11(s,
3H),4.84(s,2H),6.70(s,1H),7.10(s,1H),7.21(s,1H),7.41(t,J＝5.16Hz,1H),7.53(d,J
＝8.76Hz,1H),7.67(s,1H),7.83(s,1H),8.40(d,J＝8.80Hz,1H),8.48(d,J＝4.42Hz,1H),
10.19(s,1H),10.38(s,1H),10.44(s,1H)ppm.ESI-MS m/z 523.8[M+H]+.
实施例4化合物1d的合成
297mg(1.28mmol)化合物A-4、275mg(1.28mmol)化合物N-(3-(氨甲基)吡啶-2-
基)-N-甲基甲磺酰胺以及0.356mL(2.56mmol)三乙胺溶于15mL二氯甲烷，室温搅拌。反应4h
后停止，减压蒸去溶剂，所得粗品用乙醚洗涤，得到白色固体B-4，收率68.9％。
100mg(0.24mmol)化合物B-4及36mg(0.24mmol)5-氨基吲哚啉-2-酮溶于3mL异丙
醇，微波100℃反应1h。将反应液过滤，滤饼用少量异丙醇及乙醚洗涤，干燥得淡绿色固体，
即为化合物1d，收率70.8％。m.p.231-236℃.1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ＝3.03(s,3H),
3.11(s,3H),3.28(s,2H),4.87(d,J＝4.96Hz,2H),6.61(d,J＝8.12Hz,1H),7.11(brs,1H),
7.23(brs,1H),7.37-7.45(m,2H),7.82(d,J＝7.68Hz,1H),8.00(d,J＝6.72Hz,1H),8.33
(d,J＝7.24Hz,1H),8.48(d,J＝4.08Hz,1H),10.36(s,2H),11.18(brs,1H),11.97(brs,1H)
ppm.ESI-MS m/z 523.8[M+H]+.
实施例5化合物2的合成
300mg(1.38mmol)化合物A-5、297mg(1.38mmol)化合物N-(3-(氨甲基)吡啶-2-
基)-N-甲基甲磺酰胺以及0.4mL三乙胺溶于15mL二氯甲烷，室温搅拌。反应4h后停止，减压
蒸去溶剂，所得粗品用乙醚洗涤，得到米白色固体B-5，收率49.0％。
100mg(0.25mmol)化合物B-5及37mg(0.25mmol)5-氨基吲哚-2-酮溶于3mL异丙醇，
微波100℃反应1h。将反应液过滤，滤饼用少量异丙醇及乙醚洗涤，干燥得淡绿色固体，即为
化合物2，收率52.8％。m.p.187-190℃.1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ＝3.03(s,3H),3.10(s,
3H),3.27(s,2H),4.89(s,2H),6.66(brs,1H),7.05(brs,1H),7.16(s,1H),7.39(dd,J＝
7.52Hz,J＝4.76Hz,1H),7.49-7.55(m,2H),7.73-7.79(m,2H),8.47(d,J＝4.16Hz,1H),
9.33(brs,1H),10.23(brs,1H),10.40(s,1H)ppm.ESI-MS m/z 508.58[M+H]+.
实施例6化合物3的合成
300mg(1.34mmol)化合物A-6、288mg(1.34mmol)化合物N-(3-(氨甲基)吡啶-2-
基)-N-甲基甲磺酰胺以及0.5mL三乙胺溶于15mL二氯甲烷，室温搅拌。反应4h后停止，减压
蒸去溶剂，所得粗品用乙醚洗涤，得到白色固体B-6，收率65.0％。
100mg(0.25mmol)化合物1-13a及37mg(0.25mmol)5-氨基吲哚-2-酮溶于3mL异丙
醇，微波100℃反应1h。将反应液过滤，滤饼用少量异丙醇及乙醚洗涤，干燥得淡黄色固体，
即为化合物3，收率63％。m.p.192-195℃.1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ＝3.03(s,3H),3.10(s,
3H),3.27(s,2H),4.89(s,2H),6.66(brs,1H),7.05(brs,1H),7.16(s,1H),7.39(dd,J＝
7.52Hz,J＝4.76Hz,1H),7.49-7.55(m,2H),7.73-7.79(m,2H),8.47(d,J＝4.16Hz,1H),
9.33(brs,1H),10.23(brs,1H),10.40(s,1H)ppm.ESI-MS m/z 515.5[M+H]+.
实施例7化合物4的合成
298mg(1.28mmol)化合物A-7、150mg(1.28mmol)化合物间乙炔基苯胺以及0.356mL
(2.56mmol)三乙胺溶于15mL二氯甲烷，室温搅拌过夜，减压蒸去溶剂，所得粗品用乙醚洗
涤，得到白色固体B-7，收率72％。
100mg(0.32mmol)化合物B-7及30mg(0.42mmol)烯丙酰胺溶于3mL异丙醇，微波100
℃反应1h。将反应液过滤，滤饼用少量异丙醇及乙醚洗涤，干燥得淡绿色固体，即为化合物
4，收率71％。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ＝10.67(1H,s),10.40(1H,s),8.88(1H,s),7.87
(1H,d,J＝9.39Hz),7.71(1H,dd,J1＝8.61Hz,J2＝3.91Hz),7.49(1H,dd,J1＝7.82Hz,J2＝
4.69Hz),7.35(1H,dd,J1＝7.83Hz,J2＝3.91Hz),7.26(1H,dd,J1＝8.22Hz,J2＝4.31Hz),
6.50～6.57(1H,m),6.32(1H,dd,J1＝16.83Hz,J2＝1.57Hz),5.82(1H,dd,J1＝11.74Hz,J2
＝1.57Hz)ppm.ESI-MS m/z 349.8[M+H]+.
实施例8化合物5的合成
300mg(1.38mmol)化合物A-8、236mg(1.38mmol)化合物间溴苯胺以及0.4mL三乙胺
溶于15mL二氯甲烷，室温搅拌过夜后停止反应，减压蒸去溶剂，所得粗品用乙醚洗涤，得到
米白色固体B-8，收率69.0％。
100mg(0.34mmol)化合物B-8及30mg(0.42mmol)烯丙酰胺溶于3mL异丙醇，微波100
℃反应1h。将反应液过滤，滤饼用少量异丙醇及乙醚洗涤，干燥得淡绿色固体，即为化合物
5，收率58％。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ＝10.47(1H,s,-NH-),10.35(1H,s,-NH-),8.88(1H,
d,J＝9.00Hz,7-H),8.03(1H,s,2’-H),7.83(1H,dd,J1＝9.00Hz,J2＝1.95Hz,7-H),7.78
(1H,d,J＝7.04Hz,8-H),7.71(1H,d,J＝8.61Hz,6’-H),7.35～7.39(2H,m,5’-H,4’-H),
6.46～6.57(1H,m,-CH),6.32(1H,dd,J1＝18.78Hz,J2＝1.57Hz,CH2＝CH),5.82(1H,dd,J1
＝12.13Hz,J2＝1.57Hz,CH2＝CH).
实施例9化合物6的合成
75mg(0.195mmol)实施例5步骤(1)所得固体(化合物B-5)、56mg(0.293mmol)4-(4-
甲基哌嗪)苯胺、81mg(0.585mmol)碳酸钾、9mg(0.00975mmol)Pd2(dba)3及9.3mg
(0.0195mmol)Xphos溶于4mL叔丁醇，氮气保护，外浴100℃搅拌。反应15h后停止，向反应液
中加入水与乙酸乙酯进行萃取，有机相干燥后柱层析，洗脱剂极性为二氯甲烷：甲醇＝15:
1，得到玫红色固体12mg，即为化合物6。收率11.4％。m.p.188-192℃.1H-NMR(DMSO-d6,
400MHz)δ＝2.24(s,3H),2.50(s,4H),3.00(s,4H),3.17(s,3H),3.19(s,3H),4.80(d,J＝
5.08Hz,2H), 6.68(s,1H),6.72(d,J＝8.52Hz,2H),7.22(brs,1H),7.42-7.45(m,3H),7.84
(d,J＝7.64Hz,1H),8.41(s,2H),10.78(s,1H)ppm.ESI-MS m/z539.9[M+H]+.
实施例10化合物7的合成
75mg(0.195mmol)实施例5步骤(1)所得固体(化合物B-5)、36mg(0.390mmol)苯胺、
81mg(0.585mmol)碳酸钾、9mg(0.00975mmol)Pd2(dba)3及9.3mg(0.0195mmol)Xphos溶于4mL
叔丁醇，氮气保护，外浴100℃搅拌。反应15h后停止，向反应液中加入水与乙酸乙酯进行萃
取，有机相干燥后柱层析，洗脱剂极性为二氯甲烷：甲醇＝150:1，得到淡黄色固体29mg，即
为化合物7。收率33.7％。m.p.209-213℃.1H-NMR(DMSO-d6,400MHz)δ＝3.18(s,3H),3.20
(s,3H),4.83(d,J＝5.28Hz,2H),6.74(s,1H),6.78(t,J＝7.24Hz,1H),7.09(t,J＝7.48Hz,
2H),7.31(brs,1H),7.41(t,J＝4.76Hz,1H),7.62(d,J＝7.72Hz,2H),7.85(d,J＝7.28Hz,
1H),8.43(s,1H),8.70(s,1H),10.88(s,1H)ppm.ESI-MS m/z441.9[M+H]+.
实施例11黏着斑激酶(FAK)抑制活性实验
将上述实施例1-10的化合物进行黏着斑激酶(FAK)抑制活性的检测。
1.方法
40mM Tris(pH 7.4)、10nM MgCl2、0.1mg/mL BSA、1mM DTT、10μM ATP、240ng FAK、
0.2mg/mL Poly(Glu,Tyr)以及待测浓度的化合物组成50μL的反应体系，化合物的浓度梯度
为0.1nM、0.33nM、1nM、3.3nM、10nM、33nM、100nM、333nM、1μM。反应体系在30℃下反应120min
后，向体系中加入50μL Kinase-Glo Plus检测剂，30℃反应10min，MD-SpectraMax M5多功
能酶标仪Luminecesce模式下检测发光，收集数据，依据公式酶活性％＝{(Lu无酶—Lu加药)/
(Lu无酶—Lu有酶无药)}*100％计算得到各浓度下的酶活性，再用Graphpad Prism5软件处理，拟
合得到IC50值。
2.实验结果
表1实施例1-8的化合物对FAK激酶的抑制活性
编号
FAK IC50(μM)
实施例1
0.210
实施例2
10
实施例3
10
实施例4
10
实施例5
0.055
实施例6
0.206
实施例7
0.750
实施例8
0.702
实施例9
0.013
实施例10
0.0325
PF-562271
0.0011
由表1的数据可知，本发明上述实施例的化合物具有FAK激酶的抑制活性。
实施例10肿瘤细胞生长抑制实验
1.方法
(1)消化细胞，计数，吸取2X105细胞(SMMC7721、YY-8103等)，稀释至6mL；根据其生
长特性按1×103/100μl/孔计算细胞总量，并充分稀释后，种入96孔板内。每组每天3复孔，
一般按6天接种细胞；
(2)待半小时左右，细胞基本贴壁后观察细胞状态和数目。用显色剂显色反应，以
确定细胞实际的起始密度，作为生长相对零点。显色剂Cell counting kit-8(CCK-8,
Dojindo，Japan)的用法：每100μl培液加10μl CCK-8，37℃、5％CO2放置1h，在酶标仪上测定
450nm处的吸光度；
(3)按照1:10稀释配制待测化合物的培养基各200ul，阳性化合物:200ul DMEM(含
10％FBS)+3ul阳性化合物(10mM)；
(4)在E-plate中每孔加入150ul含化合物的培养基或阳性对照化合物的培养基；
取出E-plate，向每孔中加入300ul细胞悬液、混匀；
(5)光镜下观察细胞形态，以确定细胞生长状态。利用美国Biosciences公司ACEA
RTCA细胞分析仪定时测量，每天记录一次生长状况；一般需要测5至7天；
(6)根据测量结果，绘制实验结果曲线。
2.实验结果
上述实施例化合物的检测结果如下表2和图1-4所示：
表2实施例化合物对癌细胞生长的抑制结果
编号
IC50(μM)
实施例5(化合物2)
32.7
实施例7(化合物4)
13.4
实施例8(化合物5)
15.5
实施例9(化合物6)
2.98
PF-562271(阳性对照)
10.1
图1是实施例1化合物抑制癌细胞生长的曲线图，实验为单测试浓度，测试浓度为
50uM，其中A为肝癌细胞SMMC7721的检测结果，B为肝癌细胞YY-8103的检测结果。由图1可
知，实施例1化合物(化合物1)能抑制肝癌细胞的生长。
图2是实施例5化合物抑制癌细胞生长的曲线图，实验为多浓度测试，测试浓度从
上至下依次为：1,10,20,50,100,150,200uM七个浓度，IC50＝32.7μM。由图2可知，实施例5化
合物(化合物2)能抑制癌细胞的生长。
图3是实施例7化合物抑制癌细胞生长的曲线图，实验为多浓度测试，测试浓度从
上至下依次为：1,5,10,20,30,50,100uM七个浓度，IC50＝13.4uM。由图3可知，实施例7化合
物(化合物4)能抑制癌细胞的生长。
图4是实施例8化合物抑制癌细胞生长的曲线图，实验为多浓度测试，测试浓度从
上至下依次为：1,5,10,20,50,100uM六个浓度，IC50＝15.5uM。由图4可知，实施例8化合物
(化合物5)能抑制癌细胞的生长。
由上述表2和图1-4可知，本发明的化合物通过抑制FAK酪氨酸激酶的活性，能够有
效抑制人肝癌细胞等各种有FAK增高表达特征的癌细胞的生长，适用于此类癌症的治疗。
以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能
因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，
在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范
围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。