关节病症的治疗相关申请的交叉引用
本申请要求2014年8月18日提交的美国临时申请62/038,682的优先权，其整体在
此引入作为参考。
发明领域
本发明涉及治疗关节病症的方法。该方法包括给药有效量的包含具有天冬氨酸和
丙氨酸的氨基酸侧链的二酮哌嗪(DA-DKP)的药物组合物。本发明还提供了包含DA-DKP的药
物产品的用途。
背景技术
骨关节炎是关节炎的最常见形式，在美国影响二千五百万至三千五百万人。骨关
节炎的慢性疼痛和残疾最初由关节软骨和骨中的炎症反应引起，其随着时间逐渐恶化。
10％至13％的60岁及以上的人出现膝关节的症状性骨关节炎。单独的膝关节骨关节炎增加
了丧失活动性的风险，例如行走或爬楼梯需要辅助，比65岁以上的人的任何其他医疗病症
的风险更大。
目前对膝骨关节炎的药物治疗限于止痛剂、非甾体抗炎药(NSAID)和关节内类固
醇注射，所有这些都由于不良作用而具有显著的限制。尽管有这些医学治疗，慢性膝骨关节
炎通常导致进行性残疾，需要全关节置换。由于老化和肥胖人群导致的膝骨关节炎的发病
率的增加表明对安全和有效的局部膝治疗的临床需求日益增长，这将延迟并潜在地消除对
更广泛的手术治疗的需要。
发明内容
本发明一个实施方案为治疗关节病症的方法，其通过向需要治疗的动物以多次给
药方案给药有效量的包含DA-DKP的药物组合物。所述关节病症可为关节疾病，如退行性关
节疾病，例如骨关节炎。或者，该关节病症可为关节损伤，如创伤性损伤、手术后损伤或重复
性劳损。而且，该关节病症可为炎症。
在该方法中，该组合物可通过局部给药(local administration)、外用给药
(topical administration)，或注射(如关节内注射)而给药。如果通过关节内注射给药，该
组合物可具有DA-DKP浓度为约50μM至约350μM。
在该方法中，该组合物可进一步包含N-乙酰基-色氨酸(NAT)、辛酸、辛酸盐
(caprylate)或其组合。在该实施方案中，该组合物可具有NAT、辛酸、辛酸盐或其组合浓度
为约4mM至约20mM。在另一个实施方案中，DA-DKP可以存在于通过从人血清白蛋白组合物的
溶液中除去白蛋白而制备的组合物中，例如通过选自以下的分离方法处理人血清白蛋白组
合物得到：超滤、蔗糖梯度离心、色谱、盐沉淀和超声处理。在一个具体实施方案中，除去步
骤可包括使人血清白蛋白组合物通过具有分子量截留的超滤膜(其保留白蛋白)，并且其中
所得滤液包含DA-DKP，例如通过使用以下超滤膜，其具有小于50kDa、小于40kDa、小于
30kDa、小于20kDa、小于10kDa、小于5kDa或小于3kDa的分子量截留值。
在另一实施方案中，该药物组合物可进一步包含选自止痛药、抗炎药，及其组合的
第二药物。
在该方法中，多次给药方案中的给药次数可为2至10次、2至8次、2至6次、2至4次或
为3次。而且，每次给药之间的时间可为2天至6周、2天至5周、2天至4周、2天至3周、1周至3
周，或2周。
在优选的实施方案中，本发明是通过经关节内注射到受影响的关节中，给药第一
剂、第二剂和第三剂来治疗骨关节炎的方法。在该实施方案中，第一剂、第二剂和第三剂的
每一个包含4mL的人血清白蛋白的<5000MW的级分，此外，第二剂在第一剂两周后给药，第三
剂在第二剂两周后给药。
附图简述
图1显示实施例2所述治疗的WOMAC A疼痛评分的平均百分比变化。
发明详述
本发明提供了通过以多次给药方案给药包含DA-DKP的组合物来治疗关节病症的
方法。所述治疗包括向有需要的个体给药有效量的包含天冬氨酰-丙氨酰二酮哌嗪(DA-
DKP)的药物组合物。DA-DKP具有多种抗炎和免疫调节作用，包括在转录水平上抑制多种促
炎细胞因子、趋化因子和信号传递分子，抑制T细胞和单核细胞的迁移和粘附，在G偶联蛋白
受体水平上的活性，对肌动蛋白依赖性细胞骨架事件的活性，血管通透性的降低和由血小
板活化因子诱导的炎症的抑制。如下面更详细地描述，已经发现DA-DKP对关节病症的作用
意外地持久，并且在一些研究中发现，与使用类固醇相比，DA-DKP在时间上增加。
本发明还提供了包含DA-DKP组合物的药物产品。该产品的DA-DKP可通过从人血清
白蛋白溶液去除白蛋白而制备。
如本文所述，术语“关节病症”是指关节的任何疾病、病或损伤。关节病症的实例包
括，但不限于，急性疾病、慢性疾病、顽固性疾病、进行性疾病(包括退行性疾病)、创伤性损
伤、重复性劳损、毒性损伤、手术后病症、和有或没有结构性损伤的炎症。
退行性关节病是覆盖关节的关节软骨的逐渐恶化。退行性关节疾病(骨关节炎)是
负重关节的非感染性进行性疾病。正常关节的关节软骨为平滑、白色和半透明的。它由嵌入
在由胶原、蛋白质多糖和水制成的海绵状基质中的软骨细胞(软骨细胞)构成。对于早期原
发性关节炎，软骨变成黄色和不透明，且局部软化和表面粗糙。随着变性的进行，软区域变
得破裂和磨损，暴露软骨下的骨。骨然后开始重塑和增加密度，而任何剩余的软骨开始磨
损。最终，在关节的边缘处形成由软骨覆盖的骨赘(新骨的刺)。随着机械磨损的增加，软骨
需要修复。软骨细胞不能产生足够的海绵状基质，因此损伤的软骨不能自身修复。软骨没有
血液供应以增强愈合。大多数退行性关节疾病是关节内的机械不稳定性或老化变化的结
果。这包括老年退行性关节炎，并且在年轻个体中，可能是例如由前交叉韧带断裂、髌骨脱
臼或分离性骨软骨炎引起的损伤、瘀伤、异常关节构型(即髋关节发育异常)或机械磨损的
结果。退行性关节病可发生在身体的任何关节，包括但不限于膝、髋、肩、手和脊柱。
关节病症的常规药物治疗包括对乙酰氨基酚、非甾体抗炎药(NSAIDS)、麻醉药和
皮质类固醇。
本文使用的“治疗”是指减少(全部或部分)病症的症状、持续时间或严重性。
本发明的包含DA-DKP的药物组合物给药于需要治疗的动物。优选地，该动物为哺
乳动物，如兔、山羊、狗、猫、马或人。有效剂量可随疾病或病症的严重程度、给药途径、治疗
持续时间、给予动物的任何其它药物的性质、动物的年龄、大小和物种、和医学和兽医领域
已知的类似因素而改变。
本发明的包含DA-DKP的组合物可通过任何合适的给药途径给药于动物患者以用
于治疗，包括局部，肠胃外(例如，注射、关节内注射、静脉内、脊柱内、腹膜内、皮下、或肌
内)，经皮和外用。优选的给药途径为关节内注射。
本发明的组合物可为具有以下DA-DKP浓度范围的药物溶液，其下端点为约10μM、
约20μM、约30μM、约40μM、约50μM、约60μM、约70μM、约80μM、约90μM、约100μM、约110μM、约120
μM、约130μM、约140μM、约150μM、约160μM、约170μM、约180μM、约190μM、约200μM、约210μM、约
220μM、约230μM、约240μM、约250μM、约260μM、约270μM、约280μM、约290μM、约300μM、约310μ
M、约320μM、约330μM、约340μM、约350μM、约360μM、约370μM、约380μM、约390μM、或约400μM。
本发明的组合物可为具有以下DA-DKP浓度范围的药物溶液，其上端点为约600μM、约580μM、
约570μM、约560μM、约550μM、约540μM、约530μM、约520μM、约510μM、约500μM、约490μM、约480
μM、约470μM、约460μM、约450μM、约440μM、约430μM、约420μM、约410μM、约400μM、约390μM、约
380μM、约370μM、约360μM、约350μM、约340μM、约330μM、约320μM、约310μM、约300μM、约290μ
M、约280μM、约270μM、约260μM、约250μM、约240μM、约230μM、约220μM、约210μM、或约200μM。
用于治疗关节病症的本发明的组合物中DA-DKP的有效量可为具有以下下端点的
范围：约10μg、约15μg、约20μg、约25μg、约30μg、约35μg、约40μg、约45μg、约50μg、约55μg、约
60μg、约65μg、约70μg、约75μg、约80μg、约85μg、约90μg、约95μg、约100μg、约110μg、约120μ
g、约130μg、约140μg、约150μg、约160μg、约170μg、约180μg、约190μg、约200μg、约210μg、约
220μg、约230μg、约240μg、约250μg、约260μg、约270μg、约280μg、约290μg、约300μg、约310μ
g、约320μg、约330μg、约340μg、约350μg、约360μg、约370μg、约380μg、约390μg、约400μg、约
425μg、约450μg、约475μg或约500μg。此外，用于治疗关节病症的本发明的组合物中DA-DKP
的有效量可为具有以下上端点的范围：约500μg、约490μg、约480μg、约470μg、约460μg、约
450μg、约440μg、约430μg、约420μg、约410μg、约400μg、约390μg、约380μg、约370μg、约360μ
g、约350μg、约340μg、约330μg、约320μg、约310μg、约300μg、约290μg、约280μg、约270μg、约
260μg、约250μg、约240μg、约230μg、约220μg、约210μg、约200μg、约190μg、约180μg、约170μ
g、约160μg、约150μg、约140μg、约130μg、约120μg、约110μg、约100μg、约90μg、约80μg、约70μ
g、约60μg、约50μg、约40μg、约30μg、或约20μg。
在给药DA-DKP和人血清白蛋白的低分子量级分(例如如下所述和如AmpionTM所示
例的<5000MW级分)的实施方案中，给予患者的剂量可以为约1mL至约20mL、约1mL至约15mL、
约1mL至约10mL、约1mL至约8mL、约2mL至约6mL、约3mL至约5mL，或约4mL。
用于本发明化合物的外用或经皮给药的剂型包括粉末、喷雾剂、软膏、糊剂、乳膏、
洗剂、凝胶、溶液、贴剂和滴剂。该活性成分可在无菌条件与药物可接受的载体，和与可能需
要的任何缓冲剂或推进剂混合。除了活性成分，该软膏、糊剂、乳膏和凝胶可包含赋形剂，如
动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、聚硅氧烷、膨润土、
硅酸、滑石和氧化锌、或其混合物。除了活性成分，粉末和喷雾剂可包含赋形剂如乳糖、滑
石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。喷雾剂还可包含通常的推
进剂如氯氟烃和挥发性未取代的烃，如丁烷和丙烷。
透皮贴剂具有向身体提供本发明化合物的受控递送的附加优点。这样的剂型可以
通过将一种或多种本发明的化合物溶解、分散或以其它方式掺入合适的介质例如弹性体基
质材料中来制备。吸收增强剂也可用于增加化合物穿过皮肤的通量。这种通量的速率可以
通过提供速率控制膜或将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制。
适合于胃肠外给药的本发明的药物组合物包含一种或多种本发明的化合物与一
种或多种药学上可接受的无菌等渗水性或非水性溶液、分散体、悬浮液或乳液，或可在使用
前立即重构成无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末，其可以包含抗氧化剂、缓冲剂、使制剂
与预期接受者的血液等渗的溶质或悬浮剂或增稠剂。
可用于本发明的药物组合物中的合适的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、
多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物，植物油例如橄榄油和可注射的
有机酯，例如油酸乙酯。可以例如通过使用包衣材料(例如卵磷脂)，通过在分散体的情况下
维持所需的粒径，以及通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。
这些组合物还可以含有辅助剂，例如润湿剂、乳化剂和分散剂。还可能期望在组合
物中包含等渗剂，例如糖、氯化钠等。此外，可注射药物形式的延长吸收可以通过包含延迟
吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来实现。
在一些情况下，为了延长药物的效果，期望减慢来自皮下或肌内注射的药物吸收。
这可以通过使用具有差的水溶性的结晶或无定形材料的液体悬浮液来实现。药物的吸收速
率取决于其溶解速率，而溶解速率又取决于晶体尺寸和晶体形式。或者，胃肠外给药的药物
的延迟吸收通过将药物溶解或悬浮在油载体中来实现。
可注射的储库形式通过在可生物降解的聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中形成药物
的微囊基质来制备。根据药物与聚合物的比例和所使用的特定聚合物的性质，可以控制药
物释放的速率。其它可生物降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。储库型可注
射制剂也通过将药物掺入与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备。可注射材料可以例
如通过经细菌截留过滤器过滤来灭菌。
所述制剂可以存在于单位剂量或多剂密封的容器中，例如安瓿和小瓶中，并且可
以在冻干条件下储存，只需要在使用前立即加入无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶
液和悬浮液可以由上述类型的无菌粉末、颗粒和片剂制备。
还提供了包含本发明的药物产品的试剂盒。所述试剂盒可包含配制用于通过注射
给药的DA-DKP组合物。DA-DKP可以如本文所述制备，例如通过从人白蛋白组合物的溶液中
除去白蛋白。试剂盒可以包含单位剂量或多剂密封容器，例如安瓿和小瓶，并且可以在冻干
条件下储存，只需在使用前立即加入无菌液体载体，例如注射用水。试剂盒也可以在以下条
件下储存，其中内容物即可直接使用或注射。
尽管本发明的化合物可以单独给药，但优选将该化合物作为药物制剂(组合物)给
药。本发明的药物组合物包含作为活性成分的本发明的一种或多种化合物与一种或多种药
学上可接受的载体和任选地与一种或多种其它化合物、药物或其它材料的混合物。每种载
体必须是“可接受的”，意思是与制剂的其它成分相容并且对动物无害。药学上可接受的载
体是本领域公知的。无论选择的给药途径如何，通过本领域技术人员已知的常规方法将本
发明的化合物配制成药学上可接受的剂型。参见例如Remington's Pharmaceutical
Sciences。
本发明的组合物还可包含N-乙酰基-色氨酸(NAT)、辛酸、辛酸盐或其组合。优选
地，该组合物可包含NAT。具有NAT、辛酸、辛酸盐或其组合的本发明的组合物可为具有以下
NAT、辛酸、辛酸盐或其组合的浓度范围的药物组合物，其下端点为约1mM、约2mM、约3mM、约
4mM、约5mM、约6mM、约7mM、约8mM、约9mM、约10mM、约11mM、约12mM、约13mM、约14mM、约15mM、
约16mM、约17mM、约18mM、约19mM，或约20mM。此外，本发明的具有NAT、辛酸、辛酸盐或其组合
的组合物可为具有以下NAT、辛酸、辛酸盐或其组合的浓度范围的药物组合物，其上端点为
约40mM、约39mM、约38mM、约37mM、约36mM、约35mM、约34mM、约33mM、约32mM、约31mM、约30mM、
约29mM、约28mM、约27mM、约26mM、约25mM、约24mM、约23mM、约22mM，或约21mM。优选地，该浓
度范围为约4mM至约20mM。
此外，本发明的组合物还可包含第二药物如止痛药(如利多卡因或对乙酰氨基
酚)、抗炎药(如倍他米松、非甾体抗炎药(NSAIDS)、对乙酰氨基酚、布洛芬、萘普生)，和/或
其它合适的药物。
制备二酮哌嗪(如DA-DKP)的方法是本领域众所周知的，这些方法可用于合成本发
明的二酮哌嗪。参见，例如，美国专利号4,694,081、5,817,751、5,990,112、5,932,579和6,
555,543，美国专利申请公开号2004/0024180，PCT申请WO 96/00391和WO 97/48685，和
Smith等人，Bioorg.Med.Chem.Letters，8，2369-2374(1998)，其完整公开在此引入作为参
考。
例如，二酮哌嗪(例如DA-DKP)可以通过首先合成二肽来制备。二肽可以通过本领
域熟知的方法使用L-氨基酸、D-氨基酸或D-和L-氨基酸的组合合成。优选固相肽合成方法。
当然，二肽也可从许多来源商购，包括DMI Synthesis Ltd.，Cardiff，UK(定制合成)，
Sigma-Aldrich，St.Louis，MO(主要定制合成)，Phoenix Pharmaceuticals，Inc.，Belmont，
CA(定制合成)，Fisher Scientific(定制合成)和Advanced ChemTech，Louisville，KY。
一旦合成或购买了二肽，其被环化以形成二酮哌嗪。这可以通过多种技术来实现。
例如，美国专利申请公开号2004/0024180描述了环化二肽的方法。简言之，将二肽在有机溶
剂中加热，同时通过蒸馏除去水。优选地，有机溶剂是与水的低沸点共沸物，例如乙腈、烯丙
醇、苯、苯甲醇、正丁醇、2-丁醇、叔丁醇、乙酸丁酯、四氯化碳、氯苯氯仿、1,2-二氯乙烷、二
乙基乙缩醛、二甲基乙缩醛、乙酸乙酯、庚烷、甲基异丁基酮、3-戊醇、甲苯和二甲苯。温度取
决于发生环化的反应速度和所用共沸剂的类型。反应优选在50-200℃，更优选在80-150℃
下进行。发生环化的pH范围可以容易地由本领域技术人员确定。其有利地为2-9，优选3-7。
当二肽的一个或两个氨基酸具有或衍生为在其侧链上具有羧基(例如天冬氨酸或
谷氨酸)时，优选如美国专利号6,555,543中所述使二肽环化。简言之，在中性条件下加热具
有保护的侧链羧基的二肽。通常，二肽将在约80℃至约180℃，优选在约120℃加热。溶剂将
是中性溶剂。例如，溶剂可以包括醇(例如丁醇、甲醇、乙醇和高级醇，但不是苯酚)和共沸共
溶剂(例如甲苯、苯或二甲苯)。优选地，醇是丁-2-醇，并且共沸共溶剂是甲苯。继续加热直
到反应完成，这种时间可以凭经验确定。通常，二肽将通过回流约8-24小时，优选约18小时
而环化。最后，从二酮哌嗪除去保护基。在这样做时，应避免使用强酸(无机酸，例如硫酸或
盐酸)，强碱(碱性碱，例如氢氧化钾或氢氧化钠)和强还原剂(例如氢化铝锂)，以便保持最
终化合物的手性。
在固相树脂上制备的二肽可以环化并在一个步骤中从树脂释放。参见例如美国专
利号5,817,751。例如，在乙酸(例如1％)或三乙胺(例如4％)的存在下，将连接有N-烷基化
二肽的树脂悬浮在甲苯或甲苯/乙醇中。通常，优选碱性环化条件以使其具有更快的环化时
间。
环化二肽和制备二酮哌嗪的其它方法是本领域已知的，并且可用于制备用于本发
明实践的二酮哌嗪。参见例如上面列出的那些参考文献。此外，适合用于本发明的许多二酮
哌嗪可以如下所述由蛋白质和肽制备。此外，用于本发明实践中的二酮哌嗪可以从例如DMI
Synthesis Ltd.，Cardiff，UK(定制合成)商购获得。
本发明的DA-DKP组合物和/或产品可以通过公知的方法从含有DA-DKP的溶液制
备，所述含有DA-DKP的溶液包括来自市售的包含白蛋白(例如人血清白蛋白)的药物组合
物，所述公知的方法例如超滤、尺寸排阻色谱、亲和色谱(例如，使用连接有针对所需二酮哌
嗪的一种或多种抗体或针对截短蛋白或肽的一种或多种抗体的珠的柱)、阴离子交换色谱
或阳离子交换色谱、蔗糖梯度离心、色谱、盐沉淀或超声处理，其将去除溶液中的一些或全
部白蛋白。所得的含DA-DKP的组合物和/或产物可以使用并掺入如上所述的药物组合物中。
使用超滤分离方法，人血清白蛋白组合物可以通过具有保留白蛋白的分子量截留
值的超滤膜，同时DA-DKP进入所得滤液或级分。该滤液可以包含具有小于约50kDa、小于约
40kDa、小于30kDa、小于约20kDa、小于约10kDa、小于约5kDa或小于约3kDa的分子量的组分。
优选地，该滤液包含分子量小于约5Da(也称为“<5000MW”)的组分。该<5000MW级分或滤液含
有在二肽天冬氨酸-丙氨酸从白蛋白裂解并随后环化成二酮哌嗪后形成的DA-DKP。
本发明的DA-DKP的生理学上可接受的盐也可以用于本发明的实践中。生理上可接
受的盐包括常规的无毒盐，例如衍生自无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等)，有
机酸(例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、谷氨酸、天冬
氨酸、苯甲酸、水杨酸、草酸、抗坏血酸等)或碱(例如药物可接受的金属阳离子或衍生自N,
N-二苄基乙二胺、D-葡糖胺或乙二胺的有机阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)。所述
盐以常规方式制备，例如通过用酸中和化合物的游离碱形式。
本发明涉及治疗关节病症的方法，其包括以多次给药方案向需要的动物给药有效
量的包含DA-DKP的药物组合物。已经令人惊讶地发现，与单次给药方案相比，通过使用多次
给药方案给药本发明的药物组合物，可以实现疼痛减轻和功能改善的显著改善。Bar-Or等
人的美国专利8,980,834(“Bar-Or”，转让给Ampio Pharmaceuticals，Inc.)公开了通过注
射<5000MW级分的人血清白蛋白(称为AmpionTM)来治疗骨关节炎。Bar-Or没有公开多次给药
方案，并且实际上表明，由于治疗的长期效果，单次给药对于长达6个月的时间段是足够的。
不受理论的束缚，认为多次给药方案的改善效果不仅仅是通过给药的活性组合物的量的简
单增加而实现。如下文实施例1所示，通过将单剂量给药从4mL AmpionTM增加至10mL，没有看
到益处。然而，如实施例2所示，当三个4mL剂量的AmpionTM(总共12mL)相隔两周给药时，看到
显著的益处。因此，至少一些作用通过关节对治疗的延长暴露(通过延长的多次给药方案)
而实现，其与所给药的活性组合物的总量无关。
多次给药方案是指以时间上分开的多个剂量向患者给药本发明的药物组合物。多
次给药方案中的两个重要变量是给药次数和每次给药之间的时间。在本发明中，给药次数
大于2次，且可以是2至10次、2至8次、2至6次、2至4次，或3次。在本发明中，任意两次给药之
间的时间可以是2天至6周、2天至5周、2天至4周、2天至3周、1周至2周，或可以是约2周。
与单次给药治疗相比，本发明可以对关节病症(如骨关节炎，特别是在膝关节中)
提供显著的疼痛改善。疼痛可以在数值量度上评估，一种合适的疼痛量表是WOMAC A。本发
明可以将WOMAC A评分或其他疼痛评分改善10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％
或90％，相对基线评分。
本发明的该实施方案可以提供关节功能(特别是膝关节的功能)的显著改善。关节
的功能可以在数值量度上评估，一种合适的量表是WOMAC C。本发明可以将WOMAC C评分或
其他关节功能评分改善10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％，相对基线评
分。
如本文所述，"一个"或"一种"是指一个/种或多个/种。
如本文所用，“包含”和“包括”在其范围内包括所有较窄术语，例如“基本上由……
组成”和“由……组成”作为本文通过“包含”或“包括”表征的本发明的替代实施方案。关于
“基本上由……组成”的使用，该短语将权利要求的范围限制为指定的步骤和材料以及不实
质上影响本文公开的本发明的基本和新颖的特征的范围。
通过考虑以下非限制性实施例，本发明的另外的目的、优点和新颖的特征对于本
领域技术人员将变得显而易见。提供以下实验结果是为了说明的目的，并不意在限制本发
明的范围。
实施例
实施例1
进行了随机、安慰剂对照的双盲研究，以在具有膝的骨关节炎(OAK)引起的疼痛的
成人中评价两个剂量的关节内(IA)注射AmpionTM的功效和安全性。
主要目的
为了评估在改善膝痛中，当给药患有OAK的患者时，10mL AmpionTM对比10mL安慰剂
的功效是否大于4mL AmpionTM对比4mL安慰剂IA注射的功效。
研究对象
研究对象是40岁至85岁(含)的男性和女性成年患者。符合条件的患者是可走动
的，但在所指膝(index knee)中患有中度至中重度OAK疼痛，如在筛选时WOMAC指数3.1(五
点Likert疼痛子量表)上的评级为至少1.5所证实。患者必须具有大于6个月的症状且临床
诊断为OAK的所指膝，其由在筛选前不超过6个月获得的放射学证据(2至4级Kellgren-
Lawrence(KL))支持。患者还需要在所指膝中具有中度至中重度的OAK疼痛，即使在筛选前
四周内长期服用NSAID也是如此。患者在疗效测量前12小时不能服用镇痛剂(包括对乙酰氨
基酚)。
治疗
测试产品是AmpionTM，4mL或10mL，作为单次IA注射在膝中给药。对照产品是盐水安
慰剂，4mL或10mL，作为单次IA注射在膝中给药。符合研究入围标准的患者以1:1:1:1的比例
随机分配到以下四个研究组：4mL AmpionTM、4mL安慰剂、10mL AmpionTM和10mL安慰剂。
对OAK疼痛治疗的临床效果通过以下评估：使用在6周和12周，任选地在20周在诊
所访问患者的WOMAC和整体评价(PGA)，以及在两周、四周、八周和十周的电话访问。研究的
总持续时间为12周，任选多达20周，排除在第0天之前多达四周的筛选期。
主要功效终点
该研究的主要功效终点是在基线(第0天)和第12周之间的五点Likert量表上
WOMAC A疼痛子评分的变化。
次要功效终点
该研究的次要功效终点为：
·在基线和第2、4、6、8和10周以及任选第20周之间的WOMAC A疼痛子评分的变化；
·在基线和第2、4、6、8、10和12周之间WOMAC B僵硬子评分的变化；
·在基线和第2、4、6、8、10和12周以及任选第20周之间WOMAC C躯体功能子评分的
变化；
·在基线与第6、8、10和12周以及任选第20周之间PGA的变化；
·基于OMERACT-OARSI标准在第2、4、6、8、10和12周的应答状态；
·在基线和第2、4、6、8、10和12周之间问题1和2(运动疼痛)平均的WOMAC A疼痛子
评分变化；
·在基线和第2、4、6、8、10和12周之间问题3至5(休息期疼痛)平均的WOMAC A疼痛
子评分变化；
·使用援救镇痛法(使用对乙酰氨基酚的量)；和
·TEAE的发生率和严重程度。
安全性评估
安全性评估包括收集伴随药物数据、身体检查、生命体征测量、临床实验室测量和
TEAE监测。
人口学和基线特征
该研究群体代表预期将接受AmpionTM治疗的群体。各治疗组的基线特征相似：每组
中的大多数患者是白人和女性，并且具有约62岁的中值年龄。
功效结果
与接受安慰剂的那些相比，接受AmpionTM的受试者实现了从基线到第12周的WOMAC
A疼痛子评分的显著更大的降低(改善)(P＝0.0038)，表示相对于基线的疼痛减少约42％。
此外，疼痛的这种改善在具有更严重的OAK疾病的患者中更显著；例如，在第12周时与安慰
剂相比，具有3和4级KL疾病的患者的疼痛改善更大。与接受安慰剂的患者相比，接受
AmpionTM的患者在功能上(WOMAC C)从基线到第12周也获得显著更大的改善(P＝0.04)。另
外，与接受安慰剂的患者相比，接受AmpionTM的患者在从基线到第12周的通过PGA测量的整
体生活质量测量中也经历显著更大的改善(P＝0.01)。仅在单次AmpionTM IA注射到膝中后，
就观察到这些临床上和统计学上显著的疼痛、功能和总体生活质量测量值的改善。
表1 WOMAC A疼痛子评分–平均值和从基线至第12周的变化
在参与第20周访问的全部受试者组中，在WOMAC A疼痛子评分中自基线的平均值
变化没有统计学显著性；然而，在4级KL亚组中有统计学显著的改善(P＝0.036)。
表2 4级Kellgren-Lawrence(KL)受试者中的WOMAC A疼痛子评分–平均值和从基
线至第20周的变化
结论
该研究的结果确立了AmpionTM在用于在OAK患者的膝中单次IA注射后12周减轻疼
痛的安全性和功效。4mL和10mL剂量的AmpionTM是安全、有效和良好耐受的。在4mL和10mL
AmpionTM剂量的功效没有差异的情况下，在进一步的研究中评价4mL的较低剂量。在第20周
组合的4mL和10mL组中，4级KL患者的WOMAC A疼痛子评分平均值的减少为约34％。在第20周
评估的全部患者(包括4级KL以外的全部患者)组中没有统计学显著的变化。
实施例2
进行了预期的I/II期研究以在具有膝的骨关节炎引起的疼痛的成人中评价间隔
两周给药三次关节内注射AmpionTM(4mL)的安全性和功效。
主要目标
I期的主要目的是评价在从基线到第20周，在患有膝的OAK的患者中作为三次IA注
射(间隔两周)给药AmpionTM 4mL的安全性。
II期的主要目的是评估为了改善患有膝OAK的患者的膝痛，当作为三次IA注射给
药时，从基线到第20周AmpionTM 4mL相对安慰剂注射的安全性和功效。
研究对象
对于I期和II期研究，受试者是具有OAK膝痛的40岁至85岁(含)的男性和女性成年
患者。符合条件的患者需要为能走动的，且所指膝必须已经有症状超过6个月，且临床诊断
为OAK，如筛选时获得的放射学证据(2至4级KL)支持。患者必须已经在所指膝中具有中度至
中重度的OAK疼痛(在WOMAC指数3.1五点Likert疼痛子量表上至少1.5的等级)，其在筛选时
评估且在随机化时确认。即使已经或正在使用长期剂量的NSAID(其在筛选前四周内没有改
变)，所指膝中的中度至中重度的OAK疼痛也必须存在。患者在疗效测量前12小时不能服用
镇痛剂。推荐患者应在对侧膝中具有小于1.5的WOMAC五点Likert疼痛子量表评分，其在筛
选时评估。
在I期，总共招募了7名患者，2级KL患者的招募限于不超过2名患者。在所有7名患
者完成第4周的随访评估之后，医疗监测者进行安全性评价。如果没有观察到严重的药物相
关AE或意外的药物相关AE，将开始II期招募。在安全性审查中，该七名患者在I期研究中继
续直到第52周。
在II期，招募了约40名患者并且在两个研究组中以1:1随机化(每个研究组20名患
者)。2级KL患者的招募限于II期总入选人数的25％，即总共8名患者，并在两个研究组中以
1:1随机化。
治疗
I期和II期的测试产品都是AmpionTM，II期研究的对照产品是盐水安慰剂。
对于I期，符合研究入选标准的患者在基线(第0天)和第2周和第4周在膝中接受
4mL AmpionTM的三次IA注射。对于II期，符合研究入选标准的患者以1:1比例被随机分配到
4mL AmpionTM研究组或4mL安慰剂研究组。受试者在基线(第0天)和第2周和第4周在膝中接
受三次IA注射的研究药物(AmpionTM或安慰剂)。
受试者在第6周、第12周、第20周、第24周和第52周进行门诊访问。每个患者的最大
研究持续时间为52周，不包括长达四周的筛选期。
终点
在I期，测定TEAE和SAE的发生率和严重性。
II期的主要功效终点是从基线(第0天)至第20周的五点Likert量表的WOMAC A疼
痛子评分的变化。II期的次要终点为：
·从基线(第0天)至第2、4、6、12、24和52周的WOMAC A疼痛子评分的变化；
·从基线(第0天)至第2、4、6、12、20、24和52周的WOMAC C躯体功能子评分的变化；
·从基线(第0天)至第2、4、6、12、20、24和52周的PGA变化；
·在20周期间使用援救镇痛药(使用对乙酰氨基酚的量)；和
·TEAE的发生率和严重程度
安全性评估
安全性评估包括记录所有门诊访问和注射后24小时的电话访问中的TEAE；在基线
(第0天)和第2、4、6、12、20、24和52周的门诊访问中的体检和生命体征记录；和标准实验室
测试。
暴露
在I期，招募了7名受试者并接受所有三次AmpionTM的注射。在II期，招募了40名受
试者(20名AmpionTM，20名安慰剂)并接受所有三次研究药物的注射。
人口学和基线特征
各治疗组的基线特征相似：每个治疗组的大多数患者为白人和女性，中值年龄为
62.5岁，且具有3级(58％)或4级(38％)KL。
功效结果
与接受安慰剂的患者相比，接受AmpionTM的受试者实现了从基线到第20周的WOMAC
A疼痛子评分的显著更大的降低(改善)(P＝0.0231)。这表示与安慰剂组中约40％的降低相
比，在AmpionTM组中的疼痛平均值从基线降低约64％(P＝0.0313)，如图1所示。
表3 WOMAC A疼痛子评分–从基线至第20周的平均值和变化
在第2、4、6、12或24周，接受AmpionTM的患者的自基线WOMAC A疼痛子评分与接受安
慰剂的患者相比没有显著差异。
结论
该研究的结果确立了AmpionTM在三次IA注射(间隔两周)后，在二十周内，用于减轻
OAK患者膝中的疼痛的安全性和功效。4mL剂量的AmpionTM是安全、有效和良好耐受的。
虽然已经详细描述了本发明的各种实施方案，但是显然，本领域技术人员将想到
这些实施方案的修改和调整。然而，应当清楚地理解，这样的修改和调整在本发明的范围
内，如在随附的示例性权利要求中所阐述的。