一类具抗肿瘤活性的甘草查尔酮A二氢氨基嘧啶类化合物及其合成方法技术领域
本发明涉及医药化学领域，具体涉及一类具抗肿瘤活性的甘草查尔酮A二氢氨基
嘧啶类化合物及其合成方法。
背景技术
肿瘤已严重威胁到人类的健康，寻找有效安全、毒副作用小的抗肿瘤药物一直是
肿瘤药物研发工作者孜孜以求的目标。随着药物化学的发展，以嘧啶环为结构母核的化合
物在肿瘤治疗中的作用引起广泛关注。
甘草查尔酮A被视为胀果甘草的种属特异性成分，其结构如下所示。
近年来，研究发现甘草查尔酮A具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤、降脂、解痉和抗疟
抗寄生虫等多种生物活性，在医药领域具有很大的开发价值。但甘草查尔酮A是平面性强的
分子，水溶性差，所以，通过合理、安全的结构修饰来增强甘草查尔酮A的水溶性，开发天然
产物甘草查尔酮A的更多生物活性成为亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一类具抗肿瘤活性的甘草查尔酮A二氢氨基嘧啶类化合物
及其合成方法。
本发明的实现过程如下：
结构通式(I)所示的化合物：
其中：R为C1-C4的烷基，C1-C4的烷氧基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的苄基、
硝基；所述的取代基为：卤素、C1-C4的烷氧基、氰基、三氟甲基、苯氧基。
结构通式（I）所示的化合物的合成方法，以甘草查尔酮A、胍类化合物为原料，以有
机碱作为催化剂，在乙醇作为反应溶剂的条件下进行合成；
。
具体包括如下步骤，
（1）向反应器中按摩尔比为1:1~1:1.5加入甘草查尔酮A和胍类化合物，加入有机溶剂
混合均匀，加入有机碱催化剂，加热到60℃~85℃，回流反应3~8小时；
（2）将步骤（1）反应体系的固液混合物减压浓缩后，过滤，柱层析分离提纯，干燥得到目
标产物。
步骤（1）中所述的甘草查尔酮A：胍类化合物的摩尔比范围为1:1 ~1:1.3；有机溶
剂为乙醇；反应温度为70℃~80℃；有机碱催化剂为三乙胺。
嘧啶环是很多天然化合物和合成药物中的核心结构单元，作为杂环化合物中的一
个重要分支，嘧啶类化合物因其具有高效、低毒，以及其环上取代基可以多方位的变换而在
药物领域中得到广泛应用。将嘧啶环引入甘草查尔酮A的化学结构中，有望增强其生物活
性，提高选择性，具有重要的理论价值和实际应用价值。
本发明的优点在于：原料环保，生产成本低，操作安全性高，反应条件温和，可实现
反应原料的充分利用，适用于工业化生产，解决了现有技术产率低的问题，同时将嘧啶环引
入到甘草查尔酮A的化学结构中，对探究该类化合物的生物活性与总结构效关系具有重要
的理论价值和应用价值。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述。这些实施例仅是出于解释说明的目
的，而不限制本发明的范围和实质。
一类具抗肿瘤活性的甘草查尔酮A二氢氨基嘧啶类化合物的合成方法，具体包含
如下步骤：
（1）向反应器中按摩尔比为1:1~1:1.5加入甘草查尔酮A、胍类化合物，加乙醇混合均
匀，其中溶剂体积小于反应器容积的2/3，加入有机碱催化剂三乙胺，置于磁力搅拌器上搅
拌，加热到60℃~85℃，回流反应3~8小时；
（2）反应过程中使用薄层色谱追踪，及时监测反应的进行程度，待原料反应完全后停止
加热，撤去冷凝装置；
（3）将上述反应体系的混合物经减压浓缩后，过滤，柱层析分离提纯，干燥得到目标产
物。
本发明部分优选实施方案中的化合物结构式如下所示：
实施例1
4-（6-（4-羟基苯基）-2-亚氨基-3-甲基-2,3,4,5-四氢嘧啶-4-基）-5-甲氧基-2-（2-甲
基丁-3-烯-2-基）苯酚（1）的制备。
向反应器中加入甘草查尔酮A200mg(1mmol)和1-甲基胍56.16mg（1.3mmol），加
50mL乙醇做溶剂，加0.5mL三乙胺作为催化剂，置于磁力搅拌器上搅拌，加热到75℃，回流反
应3小时。反应过程中使用薄层色谱追踪，及时监测反应的进行程度，待原料反应完全后停
止加热，撤去冷凝装置。将上述反应体系的混合物经减压浓缩后，过滤，柱层析分离提纯，干
燥得到目标产物127.87mg，收率为54.98%。
棕黄色固体粉末。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d), 6.95
(1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98
(2H, t), 3.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 3.04 (3H, s), 1.76 (1H, m), 1.69 (6H, s)
1.51 (1H, m); 13CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 156.1, 155.0,
153.6, 148.8, 133.2, 129.1, 125.2, 116.4, 116.0, 111.1, 103.8, 57.1, 56.1,
40.8, 39.8, 31.0, 28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 395.3635, found:
395.3042。
实施例2
4-（3-苄基-6-（4-羟基苯基）-2-亚氨基-2,3,4,5-四氢嘧啶-4-基）-5-甲氧基-2-（2-甲
基丁-3-烯-2-基）苯酚（2）的制备。
向反应器中加入甘草查尔酮A200mg(1mmol)和1-苄基胍114.63mg（1.3mmol），加
50mL乙醇做溶剂，加0.5mL三乙胺作为催化剂，置于磁力搅拌器上搅拌，加热到75℃，回流反
应6小时。反应过程中使用薄层色谱追踪，及时监测反应的进行程度，待原料反应完全后停
止加热，撤去冷凝装置。将上述反应体系的混合物经减压浓缩后，过滤，柱层析分离提纯，干
燥得到目标产物164.53mg，收率为59.28%。
棕黄色固体粉末。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.85 (2H, d), 7.26-
7.23 (5H, m), 6.95 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35
(2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 3.9 (1H, s), 3.83 (3H, s), 3.81 (2H, s), 1.76
(1H, m), 1.69 (6H, s), 1.51 (1H, m) ; 13CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6,
160.8, 156.1, 155.0, 153.0, 153.6, 148.8, 136.4, 133.2, 129.1, 128.5, 127.9,
127.0, 125.2, 116.4,116.0,111.1, 103.8, 56.1, 54.5, 47.3, 41.1, 39.8,28.6 ;
HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 450.4595, found: 450.3804。
实施例3
4-（6-（4-羟基苯基）-2-亚氨基-3-苯基-2,3,4,5-四氢嘧啶-4-基）-5-甲氧基-2-（2-甲
基丁-3-烯-2-基）苯酚（3）的制备。
向反应器中加入甘草查尔酮A200mg(1mmol)和1-苯基胍103.85mg（1.3mmol），加
50mL乙醇做溶剂，加0.5mL三乙胺作为催化剂，置于磁力搅拌器上搅拌，加热到75℃，回流反
应5小时。反应过程中使用薄层色谱追踪，及时监测反应的进行程度，待原料反应完全后停
止加热，撤去冷凝装置。将上述反应体系的混合物经减压浓缩后，过滤，柱层析分离提纯，干
燥得到目标产物136.54mg，收率为50.71%。
棕黄色固体粉末。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d), 7.23
(2H, t), 6.98 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.77 (1H, t), 6.60 (2H, d), 6.41 (1H,
s), 6.30 (1H, t), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 3.9 (1H, t), 3.83 (3H, s),
1.88 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.63 (1H, m) ; 13CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm):
164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 144.4, 133.2, 129.5, 129.1, 125.2, 121.6,
120.8, 119.4, 116.9, 116.0,111.1, 103.8, 65.2, 56.1, 40.1, 39.8, 28.6 ; HRMS
(ESI) for (M+H)+: calcd: 457.3329, found: 457.2917。
实施例4
4-（3-（2-氟苯基）-6-（4-羟基苯基）-2-亚氨基-2,3,4,5-四氢嘧啶-4-基）-5-甲氧基-
2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（4）的制备。
向反应器中加入甘草查尔酮A200mg(1mmol)和1-（2-氟苯基）胍117.68mg
（1.3mmol），加50mL乙醇做溶剂，加0.5mL三乙胺作为催化剂，置于磁力搅拌器上搅拌，加热
到75℃，回流反应6小时。反应过程中使用薄层色谱追踪，及时监测反应的进行程度，待原料
反应完全后停止加热，撤去冷凝装置。将上述反应体系的混合物经减压浓缩后，过滤，柱层
析分离提纯，干燥得到目标产物131.69mg，收率为47.05%。
棕色固体粉末。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d), 7.02
(1H, d), 7.00 (1H, t), 6.98 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.83 (1H, d), 6.59 (1H,
t), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 3.9 (1H, m),
3.83 (3H, s), 1.88 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.63 (1H, m) ; 13CNMR (75MHz, DMSO-
d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 133.2, 130.5, 129.1, 128.3,
125.2, 121.8, 121.6, 116.9, 116.3, 116.0, 115.3, 111.1, 103.8, 65.2, 56.1,
40.7, 39.8, 28.6, 17.2; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 474.4599, found：
474.4302。
实施例5
4-（3-（3-溴苯基）-6-（4-羟基苯基）-2-亚氨基-2,3,4,5-四氢嘧啶-4-基）-5-甲氧基-
2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（5）的制备。
向反应器中加入甘草查尔酮A200mg(1mmol)和1-（3-溴苯基）胍164.47mg
（1.3mmol），加50mL乙醇做溶剂，加0.5mL三乙胺作为催化剂，置于磁力搅拌器上搅拌，加热
到75℃，回流反应8小时。反应过程中使用薄层色谱追踪，及时监测反应的进行程度，待原料
反应完全后停止加热，撤去冷凝装置。将上述反应体系的混合物经减压浓缩后，过滤，柱层
析分离提纯，干燥得到目标产物137.33mg，收率为43.48%。
棕色固体粉末。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.85 (2H, d), 6.92
(1H, m), 6.85 (2H, d), 6.79 (1H, s), 6.66 (1H, s), 6.59 (1H, m), 6.41 (1H,
s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, t), 3.9 (1H, m), 3.83 (3H, s),
1.88 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.63 (1H, m); 13CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm):
164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 146.6, 133.2, 130.6, 129.1, 128.4, 125.2,
123.9, 121.6, 120.0, 118.4, 116.9, 116.0, 112.7, 111.1, 103.8, 65.2, 56.1,
40.7, 39.8, 28.6 ; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 475.3234, found：475.2763。
实施例6
4-（3-（3-氯苯基）-6-（4-羟基苯基）-2-亚氨基-2,3,4,5-四氢嘧啶-4-基）-5-甲氧基-
2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（6）的制备。
向反应器中加入甘草查尔酮A200mg(1mmol)和1-（3-氯苯基）胍130.32mg
（1.3mmol），加50mL乙醇做溶剂，加0.5mL三乙胺作为催化剂，置于磁力搅拌器上搅拌，加热
到70℃，回流反应6小时。反应过程中使用薄层色谱追踪，及时监测反应的进行程度，待原料
反应完全后停止加热，撤去冷凝装置。将上述反应体系的混合物经减压浓缩后，过滤，柱层
析分离提纯，干燥得到目标产物138.93mg，收率为47.97%。
棕色固体粉末。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.85 (2H, d), 7.17
(1H, t), 6.98 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.81 (1H, d), 6.78 (1H, m), 6.48 (1H,
m), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, t), 3.9 (1H, m),
3.89 (3H, s), 1.88 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.63 (1H, m) ; 13CNMR (75MHz, DMSO-
d6) δ(ppm):164.4, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 145.8, 135.1, 133.2, 130.9,
129.1, 128.5, 127.7, 125.2, 121.6, 120.7, 118.3 116.9, 116.0, 111.1, 103.8,
65.2, 56.1, 40.7, 39.8, 28.6, HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd:490.7919, found:
490.6086。
实施例7
4-（6-（4-羟基苯基）-2-亚氨基-3-（3-甲氧基苯基）-2,3,4,5-四氢嘧啶-4-基）-5-甲氧
基-2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（7）的制备。
向反应器中加入甘草查尔酮A200mg(1mmol)和1-（3-甲基苯基）胍126.92mg
（1.3mmol），加50mL乙醇做溶剂，加0.5mL三乙胺作为催化剂，置于磁力搅拌器上搅拌，加热
到80℃，回流反应6小时。反应过程中使用薄层色谱追踪，及时监测反应的进行程度，待原料
反应完全后停止加热，撤去冷凝装置。将上述反应体系的混合物经减压浓缩后，过滤，柱层
析分离提纯，干燥得到目标产物139.42mg，收率为48.58%。
棕色固体粉末。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, 300K):d 7.85(2H, d, J=7.52Hz),
7.12(1H, t), 6.95(1H, s), 6.85 (2H, d, J=7.52Hz), 6.41(1H, s), 6.31(1H, m),
6.30(1H, q), 6.16(1H, m), 6.15(1H, m), 5.35(2H, s), 5.00-4.98(2H, m), 3.9(1H,
t), 3.83(6H, s), 1.88-1.63(2H, m), 1.69(6H, s). 13CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ
(ppm): 164.6, 161.4, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 145.4, 133.2, 129.1, 128.3,
125.2, 124.6, 121.6, 117.3, 116.4, 111.4, 109.2, 103.8, 65.2, 56.1, 55.8,
40.7, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 486.23, found:486.57。
实施例8
4-（6-（4-羟基苯基）-2-亚氨基-3-（3-苯氧基苯基）-2,3,4,5-四氢嘧啶-4-基）-5-甲氧
基-2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（8）的制备。
向反应器中加入甘草查尔酮A200mg(1mmol)和1-（3-苯氧基苯基）胍174.61mg
（1.3mmol），加50mL乙醇做溶剂，加0.5mL三乙胺作为催化剂，置于磁力搅拌器上搅拌，加热
到75℃，回流反应6小时。反应过程中使用薄层色谱追踪，及时监测反应的进行程度，待原料
反应完全后停止加热，撤去冷凝装置。将上述反应体系的混合物经减压浓缩后，过滤，柱层
析分离提纯，干燥得到目标产物139.44mg，收率为43.08%。
棕色固体粉末。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, 300K):d 7.85(2H, d, J=7.52Hz),
7.41(2H, t), 7.19(1H, m), 7.17(1H, m), 7.14(2H, m), 6.95(1H, s), 6.85(2H, d,
J=7.52Hz), 6.41(1H, s), 6.32(1H, m), 6.30(2H, m), 6.19(1H, m), 5.35(2H, s),
5.00-4.98(2H, m), 3.9(1H, t), 3.83(3H, s), 1.88-1.63(2H, m), 1.69(6H, s).
13CNMR(75MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 164.6, 160.8, 157.8, 157.0, 155.1, 154.7,
148.8, 144.1, 133.2, 129.1, 128.3, 125.2, 121.7, 118.9, 116.4, 112.5, 111.1,
107.3, 103.8, 99.8, 65.2, 56.1, 40.7, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd:
548.25, found:548.64。
实施例9
4-（6-（4-羟基苯基）-2-亚氨基-3-（4-甲氧基苯基）-2,3,4,5-四氢嘧啶-4-基）-5-甲氧
基-2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（9）的制备。
向反应器中加入甘草查尔酮A200mg(1mmol)和1-（4-甲基苯基）胍126.92mg
（1.3mmol），加50mL乙醇做溶剂，加0.5mL三乙胺作为催化剂，置于磁力搅拌器上搅拌，加热
到60℃，回流反应6小时。反应过程中使用薄层色谱追踪，及时监测反应的进行程度，待原料
反应完全后停止加热，撤去冷凝装置。将上述反应体系的混合物经减压浓缩后，过滤，柱层
析分离提纯，干燥得到目标产物132.43mg，收率为46.15%。
棕色固体粉末。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, 300K):d 7.85(2H, d, J=7.52Hz),
6.95(1H, s), 6.85(2H, d, J=7.52Hz), 6.77(2H, d, J=7.43Hz), 6.71(2H, d, J=
7.34Hz), 6.41(1H, s), 6.30(1H, q), 5.35(2H, s), 5.00-4.98(2H, m), 3.9(1H, t),
3.83(6H, s), 1.88-1.63(2H, m), 1.69(6H, s). 13CNMR(75MHz, DMSO-d6) δ (ppm):
164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 151.7, 148.8, 136.7, 133.2, 129.1, 128.3, 125.2,
121.6, 116.4, 115.1, 114.5, 111.1, 103.8, 65.2, 56.1, 55.8, 40.7, 39.8, 28.6.
HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 486.23, found:486.57。
实施例10
4-（6-（4-羟基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羟基苯基）-2-亚氨
基-5,6-二氢吡啶1（2H） - 基）苄腈(10)的制备。
向反应器中加入甘草查尔酮A200mg(1mmol)和1-（4-氰基苯基）胍123.07mg
（1.3mmol），加50mL乙醇做溶剂，加0.5mL三乙胺作为催化剂，置于磁力搅拌器上搅拌，加热
到75℃，回流反应6小时。反应过程中使用薄层色谱追踪，及时监测反应的进行程度，待原料
反应完全后停止加热，撤去冷凝装置。将上述反应体系的混合物经减压浓缩后，过滤，柱层
析分离提纯，干燥得到目标产物140.42mg，收率为49.44%。
棕色固体粉末。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, 300K):d 7.85(2H, d, J=7.52Hz),
7.42(2H, d, J=7.43Hz), 6.95 (1H, s), 6.85(2H, d, J=7.52Hz), 6.78(2H, d, J=
7.43Hz), 6.41(1H, s), 6.30(1H, q), 5.35(2H, s), 5.0-4.98(2H, m), 3.9(1H, t),
3.83(3H, s), 1.88-1.63(2H, m), 1.69(6H, s). 13CNMR(75MHz, DMSO-d6) δ (ppm):
164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 133.1, 129.1, 128.3, 125.2, 121.6, 118.6,
116.4, 114.2, 111.1, 103.8, 101.0, 65.2, 56.1, 40.7, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for
(M+H)+: calcd: 481.22, found:482.56。
实施例11
4-（3-（4-氟苯基）-6-（4-羟基苯基）-2-亚氨基-2,3,4,5-四氢嘧啶-4-基）-5-甲氧基-
2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（11）的制备。
向反应器中加入甘草查尔酮A200mg(1mmol)和1-（4-氟苯基）胍117.68mg
（1.3mmol），加50mL乙醇做溶剂，加0.5mL三乙胺作为催化剂，置于磁力搅拌器上搅拌，加热
到85℃，回流反应6小时。反应过程中使用薄层色谱追踪，及时监测反应的进行程度，待原料
反应完全后停止加热，撤去冷凝装置。将上述反应体系的混合物经减压浓缩后，过滤，柱层
析分离提纯，干燥得到目标产物142.63mg，收率为50.96%。
棕色固体粉末。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, 300K):d 7.85(2H, d, J=7.52Hz),
7.02(2H, t), 6.95(1H, s), 6.85(2H, d, J=7.52Hz), 6.58(2H, m), 6.41(1H, s),
6.30(1H, q), 5.35(2H, s), 5.00-4.98(2H, m), 3.9(1H, t), 3.83(3H, s), 1.88-
1.63(2H, m), 1.69(6H, s). 13CNMR(75MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 164.6, 160.8, 155.4,
154.7, 148.8, 140.0, 133.2, 129.1, 128.3, 125.2, 121.6, 116.4, 115.1, 111.1,
103.8, 65.2, 56.1, 40.7, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 474.21,
found:474.54。
实施例12
4-（6-（4-羟基苯基）-2-亚氨基-3-（4-苯氧基苯基）-2,3,4,5-四氢嘧啶-4-基）-5-甲氧
基-2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（12）的制备。
向反应器中加入甘草查尔酮A200mg(1mmol)和1-（4-苯氧基苯基）胍174.61mg
（1.3mmol），加50mL乙醇做溶剂，加0.5mL三乙胺作为催化剂，置于磁力搅拌器上搅拌，加热
到75℃，回流反应6小时。反应过程中使用薄层色谱追踪，及时监测反应的进行程度，待原料
反应完全后停止加热，撤去冷凝装置。将上述反应体系的混合物经减压浓缩后，过滤，柱层
析分离提纯，干燥得到目标产物167.35mg，收率为51.70%。
棕色固体粉末。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, 300K):d 7.85(2H, d, J=7.52Hz),
7.41(2H, t), 7.17(1H, m), 7.14(2H, m), 6.95(1H, s), 6.85(2H, d, J=7.52Hz),
6.79(2H, m), 6.78(2H, m), 6.41(1H, s), 6.30(1H, q), 5.35(2H, s), 5.0-4.98(2H,
m), 3.9(1H, t), 3.83(3H, s), 1.88-1.63(2H, m), 1.69(6H, s). 13CNMR(75MHz,
DMSO-d6) δ (ppm): 164.6, 160.8, 157.0, 154.7, 155.1, 148.8, 142.6, 137.5,
133.2, 129.1, 128.4, 125.2, 121.7, 118.9, 116.3, 113.2, 111.1, 103.8, 65.2,
56.1, 40.7, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 548.25, found:548.64。
实施例13
本发明化合物的抗肿瘤活性测试
对本发明的化合物进行了肿瘤细胞增殖抑制试验，试验方法采用常规的MTT法。
细胞株选用：人肝癌细胞(HepG2)，人肺癌细胞(A-549)，人胃癌细胞(SGC-7901)。培养
液为DMEM+15%NBS+双抗。
样品液的配制：用DMSO(Merck)溶解后，加入PBS(-)配成的100 μmol/L的溶液或者
均匀的混悬液，然后用DMSO的PBS(-)稀释，最终浓度分别为0.1，1，10，20，40，60，80，100 μ
mol/L。
将上市的抗肿瘤药物阿糖胞苷(Ara-C)以同样的条件配成对照品溶液。
细胞培养：贴壁生长肿瘤细胞细胞培养于含10% 灭活新生牛血清和青霉素、链霉
素（各100万U/L）的1640培养液中，置于37℃，5% CO2，饱和湿度的二氧化碳培养箱中培养。
细胞贴壁生长，每2～3 天传代1 次，传代时首先倒出培养液，PBS洗2次，胰酶消化后，加入
新鲜的培养液吹打均匀，调整细胞至适当浓度移入新的培养瓶中，添加培养液至适量。取对
数生长期细胞用于实验。
MTT法检测细胞活性及IC50的测定：
实验原理：活细胞线粒体中脱氢酶能将黄色的MTT还原成不溶于水的蓝紫色产物甲臜
(MTT formazan)，并沉积在细胞中，生成的量与活细胞数目成正比，而死细胞没有这种功
能。DMSO能溶解蓝紫色结晶物，颜色深浅与所含的量成正比，因此用酶标仪测定的光吸收值
可反映细胞存活率。
实验方法：取对数生长期细胞，消化、计数，以 2×104/mL 的密度接种于 96 孔
培养板中，每孔100 μl。培养 24小时后，将待测化合物以0.1，1，10，20，40，60，80，100 μ
mol/L浓度处理细胞。实验组每个浓度设5个复孔，以含0.4% DMSO的培养液作对照。药物作
用 48小时后，去上清，每孔加入100 μl MTT（2-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-3，5-二苯基-2H-
四唑氢溴酸盐）(1mg/mL)，继续培养 4小时，弃上清，每孔加入100μl DMSO，振荡混匀，用酶
标仪在570 nm处测定吸光度值，采用 IC50 计算软件求出半数抑制浓度(IC50)。
试验结果详见表1，其中，样品是指相应实施例中制备的甘草查尔酮A二氢氨基嘧
啶类衍生物，样品编号对应制备实施例中所得到的化合物的具体编号。
化合物5和化合物2在所测试的3种细胞株中均表现出了良好的抗肿瘤活性，化合
物1和11次之，在不同的细胞株中也表现出了良好的抗肿瘤活性。以上实验结果表明，本发
明的化合物具有良好的抗肿瘤活性，特别是部分甘草查尔酮A二氢氨基嘧啶类衍生物的活
性在特定细胞株中抗肿瘤活性优于或等同于阿糖胞苷，可用于抗肿瘤药物的研究。
表1 化合物对不同肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50（单位：μmol/L）