一种依匹斯汀杂质A的制备方法技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种3-氨基-9H-二苯[c,f]咪唑并[1,5-a]氮
杂䓬（依匹斯汀杂质A）的制备方法。
背景技术
盐酸依匹斯汀（3-氨基-9,13b-二氢-1H-二苯[c,f]咪唑并[1,5-a]氮杂䓬盐酸盐，
式1）是组胺H1受体拮抗剂，对组胺、白三烯C4、PAF、5-羟色胺均有抑制作用，还能抑制组胺、
慢反应物质A（SRS-A）化学介质的释放，临床可用于过敏性鼻炎、荨麻疹、湿疹、皮炎、皮肤瘙
痒症、痒疹、伴有瘙痒的寻常型银屑病及过敏性支气管哮喘的防治。常见的不良反应有过
敏、嗜睡、消化系统症状和肝功能异常。
欧洲药典8.7版收录的盐酸依匹斯汀的标准，包含两个已知杂质：杂质A（3-氨基-9H-二
苯[c,f]咪唑并[1,5-a]氮杂䓬，式2）和杂质B（13b RS-3-氨基-7-溴-9,13b-二氢-1H-二苯
[c,f]咪唑并[1,5-a]氮杂䓬，式3）。依匹斯汀稳定性实验中发现杂质A的含量会随留样时间
延长而增长，为确保药品质量可控，有必要检测、控制盐酸依匹斯汀原料药和制剂中杂质A
的含量，使药品符合申报和临床要求。
常用的依匹斯汀杂质A检测方法是高效液相色谱法，以依匹斯汀为对照品，通过杂质A
的相对保留时间（杂质A相对保留时间=杂质A保留时间/依匹斯汀保留时间）确定杂质A色谱
峰位置，计算杂质A的含量。在该方法中，因仪器、色谱柱、试剂纯度等客观因素影响，相对保
留时间并不完全准确，杂质A的定位可能出现偏差；此外，杂质A和依匹斯汀存在紫外响应差
异，含量测定过程中也存在误差。以杂质A为对照品的高效液相色谱法能直接定位杂质A色
谱峰的位置，显著降低或消除相对保留时间、紫外响应差异带来的影响，杂质A含量测定更
直接、更准确，在该方法中需要高纯度的杂质A作为对照品。
常用的制备杂质的方法有直接合成或从原料中分离的方法，查阅文献资料发现依
匹斯汀杂质A的制备方法未见报道，如要直接合成杂质A，则需要重新设计一条合成的路线，
开发周期长，成本高。如果从原料药中直接分离制备杂质A，则需要消耗大量的原料药，同样
存在物料成本高的问题。因此，有必要找到一种操作简便、成本低廉、产率和纯度均较高的
依匹斯汀杂质A的制备方法。
发明内容
本发明提供了一种依匹斯汀杂质A的制备方法，通过氧化制备和分离纯化步骤可
获得纯度95%以上的依匹斯汀杂质A，该方法制备过程简单，成本低，收率高，制备得到的依
匹斯汀杂质A可作为盐酸依匹斯汀有关物质检测的杂质A对照品使用。
其具体步骤如下：
（1）氧化制备：将适量盐酸依匹斯汀溶解于10%~30%过氧化氢溶液中，40℃~60℃加热反
应8h~28h，冷却至室温，得到含有5%~10%依匹斯汀杂质A的溶液（用高效液相色谱法可测定
精确含量以收率计算），用碱调节溶液pH至10~12，再加入有机溶剂A进行萃取，收集、合并有
机溶剂层，浓缩得到混合物；
其中碱选自氢氧化钠、氢氧化钾或其溶液；溶剂A选自二氯甲烷、三氯甲烷和乙酸乙酯
中的一种。
（2）分离纯化：用有机溶剂B溶解步骤（1）中得到的混合物，以有机溶剂C1、C2与碱性
试剂按一定比例混合作为洗脱剂或展开剂，用柱层析或薄层层析进行分离，收集含依匹斯
汀杂质A的组分，常压或减压蒸馏除去溶剂，干燥得到依匹斯汀杂质A，并按照下式计算收
率：
其中有机溶剂B选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮中的一种；有机溶剂C1选自
二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮中的一种；有机溶剂C2选自甲醇、乙醇、正丙醇或异丙
醇中的一种；碱性试剂选自氨水、二乙胺或三乙胺中的一种；展开剂中有机溶剂C1和C2的比
例为20:1~4:1，洗脱剂中有机溶剂C1和C2的比例为20:1~8:1；碱性试剂的含量为0.5%~17%
（V/V）。
以上制备方法可进一步包括将依匹斯汀杂质A转化为药学上可接受的盐，例如加
入过量盐酸，挥干溶剂，干燥可得依匹斯汀杂质A盐酸盐。
在步骤（2）中也能收集依匹斯汀溶液，干燥后得到依匹斯汀，进一步与盐酸制得盐
酸依匹斯汀，所得盐酸依匹斯汀可用于循环制备依匹斯汀杂质A及其盐酸盐。
本发明制得的依匹斯汀杂质A色谱纯度不低于95%，满足作为杂质A对照品使用的
要求。制备过程简单、周期短且收率高，可循环制备。
步骤（2）中柱层析选用的是硅胶H、柱层析硅胶自装层析柱，也可采用本领域常用
的其他填料柱，如中性氧化铝柱，通过适当调整洗脱剂配比亦可实现类似的分离效果。
图1 实施例1 氧化制备所得溶液的高效液相色谱图
图2 实施例1分离纯化制得的依匹斯汀杂质A纯度检测高效液相色谱图
图3 盐酸依匹斯汀片有关物质检测的高效液相色谱图
具体实施方式
下述实施例仅用于进一步说明本发明，并不限制本发明。
实施例1 依匹斯汀杂质A的制备
取盐酸依匹斯汀2g，溶解于25%过氧化氢溶液25mL，置50℃水浴加热反应18h，取出后自
然冷却至室温，得到含有依匹斯汀杂质A的溶液，高效液相色谱法检测盐酸依匹斯汀杂质A
的含量（图1）；
色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相A为醋酸盐缓冲溶液（称取1.61g
氯化铵、1.54g乙酸铵、3.84g戊烷磺酸钠，加1000mL水溶解，用冰醋酸调pH至5.0）-甲醇（85:
15），流动相B为甲醇；流速0.7ml/min；检测波长为220nm；柱温为40℃；梯度程序如下：
时间（min）
A%
B%
0
86
14
3
86
14
7
70
30
15
30
70
17
30
70
17.01
86
14
20
86
14
用6N氢氧化钠溶液调节反应液pH至10，加入30ml乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，重复
萃取3次，合并收集的乙酸乙酯溶液，用旋转蒸发仪浓缩干燥，得到混合物；
将上述混合物用乙酸乙酯溶解，点于GF254薄层硅胶制备板上，以乙酸乙酯-乙醇-氨水
混合溶液作为展开剂进行展开，其中乙酸乙酯-乙醇=4:1，氨水的含量（V/V）为总体积17%，
挥干溶剂，在254nm紫外灯下观察暗斑，刮取Rf值约为0.7的暗斑，用甲醇洗脱，洗脱液室温
下氮气吹干，减压干燥得到橙黄色固体172mg，收率86%，HPLC色谱纯度97%（图2）。
上述橙黄色固体中加入过量盐酸，挥干溶剂，干燥得依匹斯汀杂质A盐酸盐。
HRMS：calcd for C16H13N3，247.11793[M+]，247.11095，found 248.11793[M+H]+，
270.09980[M+Na]+。 1H-NMR（400Hz，CDCl3）δppm：3.60（1H，d，12-H）4.04（1H，d，12-H），6.93
（1H，s，4-H），7.18~7.60（m，8H，H-7，H-8，H-9，H-10，H-14，H-15，H-16，H-17）。13C-NMR（100Hz，
CDCl3）δppm：39.1（C-12），120.5（C-4），123.5（C-7），127.5（C-8），127.6（C-9），127.7（C-
10），127.9（C-5），128.0（C-14），128.1（C-15），128.7（C-16），129.1（C-17），129.4（C-13），
133.8（C-11），137.1（C-18），138.3（C-6），148.3（C-2）。
实施例2 依匹斯汀杂质A的制备
取盐酸依匹斯汀2g，溶解于10%过氧化氢溶液40mL，置60℃水浴加热反应28h，放置冷却
至室温，得到含有依匹斯汀杂质A的溶液，用4N氢氧化钠溶液调节pH至11，加入30ml二氯甲
烷萃取，收集二氯甲烷层，重复萃取3次，合并收集的二氯甲烷溶液，用旋转蒸发仪浓缩，干
燥得到混合物；
二氯甲烷溶解上述混合物，点于GF254薄层硅胶制备板上，以二氯甲烷-甲醇-三乙胺混
合溶液作为展开剂进行展开，其中二氯甲烷-甲醇=20:1，三乙胺的含量（V/V）为总体积
0.5%，挥干溶剂，在254nm紫外灯下观察暗斑，刮取目标杂质暗斑，用甲醇洗脱，室温氮气吹
干，减压干燥得橙黄色固体165mg，HPLC色谱纯度96%。
实施例3 依匹斯汀杂质A的制备
取盐酸依匹斯汀2g，溶解于30%过氧化氢溶液15mL，置40℃水浴加热反应8h，放置冷却
至室温，得到含有依匹斯汀杂质A的溶液，用4N氢氧化钾溶液调节pH至12，加入30ml三氯甲
烷萃取，收集三氯甲烷层，重复萃取3次，合并收集的三氯甲烷溶液，用旋转蒸发仪浓缩至
干，得到混合物；
用丙酮溶解将上述混合物，点于GF254薄层硅胶制备板上，以丙酮-异丙醇-氨水混合溶
液作为展开剂进行展开，其中丙酮-异丙醇=8:1，氨水的含量（V/V）为总体积10%，挥干溶剂，
在254nm紫外灯下观察暗斑，刮取目标杂质暗斑，用甲醇洗脱，洗脱液室温氮气吹干，减压干
燥得橙黄色固体160mg，HPLC色谱纯度96%。
实施例4 依匹斯汀杂质A的制备
取盐酸依匹斯汀2g，溶解于25%过氧化氢溶液25mL，置50℃水浴加热反应18h，取出后自
然冷却至室温，得到含有依匹斯汀杂质A的溶液，用6N氢氧化钠溶液调节反应液pH至10，加
入30ml乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，重复萃取3次，合并收集的乙酸乙酯溶液，用旋转蒸
发仪浓缩干燥，得到混合物；
将上述混合物上样于硅胶H自装层析柱中，以丙酮-乙醇-氨水混合溶液作为洗脱剂进
行洗脱，其中丙酮-异丙醇=16:1，氨水的含量（V/V）为总体积17%，等体积收集柱层析流分，
采用GF254薄层硅胶板检测各流分，合并纯度高的目标杂质化合物流分，室温氮气吹干，减
压干燥得橙黄色固体151mg，HPLC色谱纯度96%。
实施例5 依匹斯汀杂质A的制备
取盐酸依匹斯汀2g，溶解于10%过氧化氢溶液40mL，置60℃水浴加热反应28h，放置冷却
至室温，得到含有依匹斯汀杂质A的溶液，用4N氢氧化钠溶液调节pH至11，加入30ml二氯甲
烷萃取，收集二氯甲烷层，重复萃取3次，合并收集的二氯甲烷溶液，用旋转蒸发仪浓缩，干
燥得到混合物；
将上述混合物上样于柱层析硅胶自装层析柱中，以二氯甲烷-甲醇-二乙胺混合溶液作
为洗脱剂进行洗脱，其中二氯甲烷-甲醇=20:1，二乙胺的含量（V/V）为总体积0.5%，等体积
收集柱层析流分，采用GF254薄层硅胶板检测各流分，合并纯度高的目标杂质化合物流分，
室温氮气吹干，减压干燥得橙黄色固体161mg，HPLC色谱纯度97%。
实施例6 依匹斯汀杂质A的制备
取盐酸依匹斯汀2g，溶解于30%过氧化氢溶液15mL，置40℃水浴加热反应8h，放置冷却
至室温，得到含有依匹斯汀杂质A的溶液，用4N氢氧化钾溶液调节pH至12，加入30ml三氯甲
烷萃取，收集三氯甲烷层，重复萃取3次，合并收集的三氯甲烷溶液，用旋转蒸发仪浓缩至
干，得到混合物；
将上述混合物上样于硅胶H自装层析柱中，以乙酸乙酯-甲醇-氨水混合溶液作为洗脱
剂进行洗脱，其中乙酸乙酯-甲醇=8:1，氨水的含量（V/V）为总体积8%，等体积收集柱层析流
分，采用GF254薄层硅胶板检测各流分，合并纯度高的目标杂质化合物流分，室温氮气吹干，
减压干燥得橙黄色固体149mg，HPLC色谱纯度97%。
实施例7 高效液相色谱法测定盐酸依匹斯汀片中杂质A含量
取供试品10片（相当于盐酸依匹斯汀约200mg），置100mL量瓶中，加50mL稀释剂（30%甲
醇-水）振摇超声5min至完全崩解，加稀释剂至刻度，摇匀，10000rpm离心5min，取上清液作
为供试品溶液；精密称取依匹斯汀杂质A对照品适量，用少量0.1N盐酸溶解，并用稀释剂定
量稀释成1ml中约含10μg的对照品溶液（0.5%）；取供试品溶液及对照品溶液各5μl，以实施
例1中杂质A的检查方法检测样品。
盐酸依匹斯汀片中的杂质A保留时间6.065min（图3），杂质A与相邻色谱峰互不干
扰，根据本方法制备得到的杂质A可作为杂质对照品对盐酸依匹斯汀片进行质量控制。