牛X精子分离方法及其分离装置.pdf

当前，为提高奶牛的繁殖率，迅速建立母畜繁殖群，增加牛奶及其奶制品的产量，奶牛繁殖的性别控制已成为畜牧业中主要研究的课题了。由于性别决定的主要因素是性染色体，含X染色体的卵子与含Y或X染色体的精子结合决定子代性别，所以在控制子代性别方面采取了一些相应的措施，如调节饲料、改变母牛生殖道的PH值、掌握人工授精时间等。但是，由于这些措施在目前暂无充分的理论依据，故未能达到预期的效果。为了能在人工授精时控制胎畜的性别，必须使精液中X精子与Y精子分离。本发明者曾针对牛精子性别预测方法和鉴别方法进行了研究（见辽宁畜牧兽医1985年第1期和第3期），提出了简便易行的鉴别方法，并利用电泳法进行了分离牛X及Y精子的初步研究，自行设计的电泳装置虽然取得了较为满意的分离效果，在阳极侧的精液中X精子占90.36%，但因分离出的X精子活力较差，故影响了该装置的推广应用。
    本发明的目的是提供一种牛X精子地分离方法及其分离装置，该方法可采用鲜精液或冷冻精液进行分离，分离率高。特别是该方法所使用的分离装置操作简便，所用时间短，分离出的X精子活力好。

    本发明的目的是这样实现的：首先将鲜精液装在分离装置的电泳池中，接通直流电源，在电压为3V、电流为40～100μA的条件下，通电1小时后，收集阳极处的精液，即分离出X精子。该方法所用的分离装置的结构是：放置在电泳平台上的电泳池两端各套有一螺旋形电极，电极外周缠有经支持液浸湿的药用纱布卷，两电极分别与直流电源的正、负极相接，电泳池采用可导电的网眼形半透膜袋。

    由于本发明的分离方法，采用的电泳池的结构不仅可防止精液与电极直接接触，而且能维持精子的能量来源，不影响精子的运动轨迹，因此，精子的分离率高，分离后的精子活力好。该分离装置结构简单，容易操作，分离时间短，便于携带，特别适于鲜精液的分离，故极易推广应用。

    以下结合附图和实施例对本发明作进一步描述。

    图1是本发明分离装置一种具体结构的示意图。

    图2是图1的A向视图。

    根据图1～2详细说明本发明的分离方法及其分离装置的具体结构。该分离装置可封装在一个容器中。其电泳平台6上放置一两端各套有一螺旋形金属钛丝电极2、5的电泳池4。分别与直流电源9正、负极相接的电极2、5的外周缠有经支持液浸湿的药用纱布卷1。该支持液选用可保持渗压，能维持精子能量来源的溶液。本实施例采用浓度为2.9%的柠檬酸钠溶液作为支持液。电泳池4采用可导电的网眼形半透膜袋。操作时，取鲜精液4毫升（取自黑龙江省佳木斯国营农场总局畜牧兽医总站的黑白花种公牛，牛号991），原液活力0.8，密度13亿，X精子所占比例为53.05%。将鲜精液直接置于上述的分离装置中的电泳池内，接通电压为3V的直流电源9和照明灯10的电源，调整电阻箱8使通过的电流为80μA。保持电泳池温度（温度计3显示为37℃），在电流表7的指示为80μA的条件下，通电1小时，断电后收集阳极处的精液得1.1毫升。再将该精液加稀释液3.9毫升，按常规方法制备成冷冻精液颗粒。取出一棵冷冻颗粒，检查活力及X精子所占比例为：活力0.6，X精子占总精子的89.14%，采用本发明的方法分离精液中的X精子，在同样条件下，经十次实验所得结果的平均值可达91.79±6.4，活力为0.68±0.18。如果采用冷冻后的精液分离X精子，应优先选用原料组分体积比为乳糖∶蛋黄∶丙三醇＝15∶4∶1的稀释液，稀释比为1∶3即可进行分离。