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1、(10)申请公布号 CN 102805664 A (43)申请公布日 2012.12.05 C N 1 0 2 8 0 5 6 6 4 A *CN102805664A* (21)申请号 201210307317.0 (22)申请日 2012.08.27 A61B 19/00(2006.01) (71)申请人王文艳 地址 233042 安徽省蚌埠市06信箱尚勇兵 转 (72)发明人王文艳 卫兵 张妤 范懿隽 周晓 (74)专利代理机构蚌埠鼎力专利商标事务所有 限公司 34102 代理人张建宏 (54) 发明名称 显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方 法 (57) 摘要 显示及采集人体肛提肌内神。
2、经分布图像的方 法，包括以下步骤：采用sihler神经染色方法对 肛提肌标本内的神经进行染色；制作空心透光的 硅胶模型，在硅胶模型内部放置背景光源；将完 成神经染色的肛提肌标本放在硅胶模型外表面， 在背景光源照射下用照相机采集肛提肌内神经 分布的立体形态影像；将完成神经染色的肛提肌 标本放在解剖显微镜下，在解剖显微镜下沿着肛 提肌内神经主干追溯神经的走行方向，观察镜下 标本内神经间连接的微细结构，并用连接于显微 镜上的图像采集系统记录。本发明提供的方法可 以使肛提肌呈透明状态而肛提肌内的神经呈紫蓝 色，进而在背景光源的映射下，达到完整显示肛提 肌内神经分布状态的目的。 (51)Int.Cl. 。
3、权利要求书2页 说明书3页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 3 页 1/2页 2 1.显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在于包括以下步骤：采用 sihler神经染色方法对人体肛提肌标本内的神经进行染色；制作空心透光的硅胶模型，在 硅胶模型内部放置背景光源；将完成神经染色的肛提肌标本放在硅胶模型外表面，在背景 光源照射下用照相机采集肛提肌内神经分布的立体形态影像；将完成神经染色的肛提肌标 本放在解剖显微镜下，在解剖显微镜下沿着肛提肌内神经主干追溯神经的走行方向，观察 镜下标本内神经间连接的微细结构，并用连接于显微镜上的图像采集。
4、系统记录。 2.根据权利要求1所述的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在于 对人体肛提肌标本内的神经进行染色包括以下步骤： （1）、用浓度为10%的福尔马林固定人体骨盆标本，沿骨盆内侧壁完整解剖出肛提肌标 本； （2）、将肛提肌标本浸泡入浓度为3%的KOH溶液中软化褪色，直至标本呈透明或半透明 状； （3）、将肛提肌标本浸泡入Sihler溶液中脱钙，直至脱钙导致的标本浑浊再次变得 透明或半透明； （4）、将肛提肌标本浸泡入Sihler溶液中染色，直至标本被染成深紫色； （5）、将肛提肌标本浸入Sihler溶液中脱色，直至神经纤维呈蓝紫色，细小神经末梢 清晰可辨； （6）、将肛提肌。
5、标本浸入浓度为0.05%的碳酸锂溶液中完成中和过程，直至浸泡液无明 显变色，神经纤维染色加深； （7）、将肛提肌标本依次浸入40%、60%、80%和100%甘油溶液中进行纯化； （8）、将已完成神经染色的标本用100%甘油浸泡保存。 3.根据权利要求2所述的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在 于：在所述步骤（1）中，采用福尔马林溶液浸泡固定骨盆标本48周，每周更换一次福尔 马林溶液。 4.根据权利要求2所述的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在 于：在所述步骤（2）中，每100ml的KOH溶液中用标准滴定管加入3滴浓度为3%的双氧水， 肛提肌标本浸泡入KOH溶液中。
6、软化褪色23周，每周更换KOH溶液一次。 5.根据权利要求2所述的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在 于：在所述步骤（3）中，肛提肌标本浸泡入Sihler溶液中24周，每周更换Sihler 溶液一次。 6.根据权利要求2所述的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在 于：在所述步骤（4）中，肛提肌标本浸泡入Sihler溶液中34周，每周更换Sihler 溶液一次。 7.根据权利要求2所述的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征 在于：在所述步骤（5）中，肛提肌标本浸入Sihler溶液中24小时，每半小时更换 Sihler溶液一次。 8.根据权利要求2所述的显。
7、示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在 于：在所述步骤（6）中，肛提肌标本浸入碳酸锂溶液12小时，每半小时更换碳酸锂溶液 一次。 权 利 要 求 书CN 102805664 A 2/2页 3 9.根据权利要求2所述的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在 于：在所述步骤（7）中肛提肌标本依次浸入40%、60%、80%和100%甘油溶液中各24小时。 权 利 要 求 书CN 102805664 A 1/3页 4 显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法 技术领域 0001 本发明涉及神经染色技术，具体地说是一种显示及采集人体肛提肌内神经分布图 像的方法。 背景技术 0002。
8、 肛提肌为位于骨盆深部血管神经丛下方和坐骨直肠窝上方的薄层肌肉组织,肛 提肌病变是引起盆底功能障碍性疾病（包括尿失禁，盆腔器官脱垂，大便失禁，慢性盆腔疼 痛）等临床疾病的主要原因，明确肛提肌内的神经分布有助于发现导致肛提肌病变的神经 源性疾病的发病机制，减少微创盲法穿刺术对肛提肌内神经主干损伤的机会，降低由于肛 提肌神经损伤引起的相关并发症。 0003 由于肛提肌的位置特殊、组成复杂（肛提肌由耻骨直肠肌、耻骨尾骨肌和髂骨尾骨 肌组成的不规则形肌肉，部分耻骨直肠肌与男性尿道或女性尿道和阴道周围的括约肌融 合），对肛提肌及其支配神经肌肉内外走行的研究困难大。目前，解剖学研究中对肛提肌的 研究较少，。
9、很多学者试图采用大体解剖、影像学、免疫组化、构建动物模型等研究方法对肛 提肌内的神经来源和神经分布方式进行深入阐述。大体解剖过程中由于存在损伤小的神经 分支、小的神经分支与细小血管和筋膜分辨不清、解剖过程中引起解剖部位的神经血管位 置发生偏移等缺陷，因此针对肛提肌内神经的大体解剖学研究的结果常存在差异；影像学 研究虽能客观反映肌肉组织形态，却无法显示肌肉组织内的神经走行方向；免疫组化和免 疫荧光技术仅能显示标本局部断层的细节，无法勾勒出标本的整体形态和标本内部的神经 走向；构建动物模型时即使用与人类组织结构最为相近的猿类哺乳动物，也无法完全等同 于人类的组织结构和神经分布。同时上述研究方法均不。
10、能在不破坏标本完整性的情况下， 整体显示肛提肌内神经的立体分布状态。 0004 由于肛提肌与尿道、阴道、直肠和肛管等内脏器官关系密切，多数妇产科、泌尿外 科和肛肠外科的临床学者误把肛提肌当做内脏肌肉，而不是全是骨骼肌组成的一部分，同 时由于相关专业的临床学者欠缺解剖学神经染色方法方面的专业知识，而经典基础解剖学 研究中针对肛提肌及其支配神经的研究较少。虽然Sihler神经染色方法是一种比较经典 的研究骨骼肌内部神经分布的解剖学染色方法，但该方法也只主要用于体表骨骼肌（包括 四肢和胸腹肌肉）内神经分布的研究。至今未有采用sihler神经染色方法针对肛提肌内神 经分布研究的报道。 发明内容 000。
11、5 本发明的目的在于提供一种显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，该方 法能在不破坏标本完整性的情况下，准确地获得肛提肌内神经的分布图像。 0006 为实现上述目的，本发明提供的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法 为：采用sihler神经染色方法对人体肛提肌标本内的神经进行染色；制作空心透光的硅胶 模型，在硅胶模型内部放置背景光源；将完成神经染色的肛提肌标本放在硅胶模型外表面， 说 明 书CN 102805664 A 2/3页 5 在背景光源照射下用照相机采集肛提肌内神经分布的立体形态影像；将完成神经染色的 肛提肌标本放在解剖显微镜下，在解剖显微镜下沿着肛提肌内神经主干追溯神经的走行。
12、方 向，观察镜下标本内神经间连接的微细结构，并用连接于显微镜上的图像采集系统记录。 0007 本发明提供的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法可以使肛提肌呈透 明状态而肛提肌内的神经呈紫蓝色，进而在背景光源的映射下，达到完整显示肛提肌内神 经分布状态的目的，为明确人体肛提肌内神经的走行分布规律提供有效的研究方法。 0008 本发明提供的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法具有以下积极效 果： 1、可以从不同的角度观察、准确的了解肛提肌内神经分支的位置和神经主干及神经末 梢的分布规律，为解剖学、生理学和临床医学的相关研究提供准确的肛提肌内神经分布的 理论基础。 0009 2、明确肛提肌内。
13、的神经分布规律对于了解肛提肌的功能、进行肛提肌内神经肌电 图的研究，发展创新盆底微创神经手术具有重要的指导意义。 0010 3、进一步了解产伤，肌肉萎缩等生理病理变化对肛提肌及肌肉内神经的影响，为 减少、延缓和治疗产伤，肛提肌萎缩等生理病理性改变导致的盆底器官脱垂等疾病提供研 究基础。 0011 4、为探讨由于肛提肌功能及结构异常引起的泌尿道、生殖道和肠道功能的异常的 发病机制提供解剖学依据。 具体实施方式 0012 以下通过一具体实施例进一步说明本发明。 0013 首先，对人体肛提肌标本内的神经进行染色包括以下步骤： 1、收集新鲜尸体标本。 0014 2、福尔马林固定：采用浓度为10%的福尔。
14、马林溶液浸泡固定骨盆标本48周，每 周更换福尔马林溶液一次。 0015 3、标本取材：去除盆腔脏器，沿骨盆内侧壁完整切除盆底肌肉和软组织，解剖出肛 提肌标本。 0016 4、软化褪色：将标本浸泡入浓度为3%的KOH溶液中软化褪色23周，每周更换 KOH溶液一次，直至标本呈透明或半透明状。另外，所采用的每100ml的KOH溶液中用标准 滴定管加入3滴浓度为3%的双氧水。 0017 5、脱钙：将标本浸泡入Sihler溶液中24周，每周更换Sihler溶液一次， 直至脱钙导致的标本浑浊再次变得透明或半透明。 0018 6、染色：将标本浸泡入Sihler溶液中34周，每周更换Sihler溶液一次， 直。
15、至标本被染成深紫色。 0019 7、脱色:将标本浸入Sihler溶液中24小时，每小时在解剖显微镜下观察， 直至肌肉呈淡紫色，神经纤维呈蓝紫色，细小神经末梢清晰可辨。 0020 8、中和：将标本浸入浓度为0.05%的碳酸锂溶液12小时，每半小时更换一次碳 酸锂溶液，直至浸泡液无明显变色，神经纤维染色加深。 0021 9、纯化：将标本依次浸入40%、60%、80%和100%甘油溶液中各24小时，使染色的肌 说 明 书CN 102805664 A 3/3页 6 肉颜色变淡，神经纤维在透光照射下显示的更加清晰。 0022 10透明：将已完成神经染色的标本用100%甘油浸泡保存，使标本的透明度得到改 。
16、善和加强。 0023 上述所采用的Sihler溶液由1体积的冰醋酸，1体积的甘油和6体积1%水合氯 醛水溶液组成；上述所采用的Sihler溶液由1体积Ehrlich氏苏木精，1体积的甘油和6 体积1%水合氯醛水溶液组成。另外，在进行上述各操作步骤前，均需要用流水冲洗标本上 的浸泡液。 0024 完成上述步骤后，即可进行以下采集大体和解剖显微镜下的图像的工作： （1）、制作空心透光硅胶模型，模型的外表面为曲面，如球面或抛物面，模型为半球形或 近似于半球形，在硅胶模型内部放置背景光源，背景光源采用白炽灯，将完成神经染色的肛 提肌标本放在硅胶模型表面，在背景光源照射下用照相机采集肛提肌内神经分布的立体形 态影像，照相机采用单反数码照相机。 0025 （2）、将完成神经染色的肛提肌放在解剖显微镜下，在解剖显微镜下沿着肛提肌内 神经主干追溯神经的走行方向，观察镜下标本内神经间连接的微细结构，并用连接于显微 镜上的图像采集系统记录。 0026 完成以上工作后，即可了解肛提肌内神经分布和走行的整体特点，绘制出肛提肌 内的神经分布图，并应用于临床以及解剖和生理等基础研究中。 说 明 书CN 102805664 A 。