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1、10申请公布号CN104045706A43申请公布日20140917CN104045706A21申请号201310078240922申请日20130312C07K14/605200601C07K1/06200601C07K1/0420060171申请人深圳翰宇药业股份有限公司地址518057广东省深圳市南山区高新技术工业园中区翰宇生物医药园办公大楼四层72发明人陈友金覃亮政马亚平袁建成74专利代理机构深圳市深佳知识产权代理事务所普通合伙44285代理人唐华明54发明名称一种利拉鲁肽的合成方法57摘要本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种利拉鲁肽的合成方法。该方法是通过将二肽片段、三肽片段或其组合。
2、与氨基酸、GLY树脂偶联，得到肽树脂，经侧链修饰、裂解、纯化、冻干，即得。本发明提供的利拉鲁肽合成方法可提高粗肽的纯度和收率，有利于纯化，缩短了合成时间，适合工业化生产。51INTCL权利要求书1页说明书16页序列表1页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书16页序列表1页附图1页10申请公布号CN104045706ACN104045706A1/1页21一种利拉鲁肽的合成方法，其特征在于，包括如下步骤获得二肽片段和/或三肽片段；获得GLY树脂；取所述二肽片段、所述三肽片段或其组合与氨基酸、所述GLY树脂偶联，得到肽树脂，经侧链修饰、裂解、纯化、冻干，即得；。
3、所述二肽片段为GLYARG、LEUVAL、TRPLEU、ALATRP、ILEALA、PHEILE或ALAALA；所述三肽片段为TRPLEUVAL、ALATRPLEU、ILEALATRP或PHEILEALA；所述肽的序列如SEQIDNO1所示。2根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述组合为GLYARG、LEUVAL、ALATRP、PHEILE或ALAALA中的任意两者或两者以上二肽片段的组合。3根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述组合为GLYARG、TRPLEU、ILEALA或ALAALA中不少于三个二肽片段的组合。4根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述组合为GLYA。
4、RG、TRPLEUVAL、PHEILEALA或ALAALA中至少包含一个三肽片段的组合。5根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述组合为ALATRPLEU与GLYARG、PHEILE或ALAALA中的一者或两者以上的组合。6根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述组合为ILEALATRP与GLYARG、LEUVAL或ALAALA中的一者或两者以上的组合。7根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述侧链修饰具体为脱除所述肽树脂中LYS的侧链保护基团，与GLU、棕榈酰氯偶联。8根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述裂解的试剂为ANISOLE、THIOANISOLE、TIS、。
5、H2O或EDT中的一者或两者以上的混合物与TFA的混合物。9根据权利要求8所述的合成方法，其特征在于，所述裂解的试剂中所述TFA、所述ANISOLE、所述THIOANISOLE、所述TIS、所述H2O与所述EDT的体积比为（9095）（05）（03）（03）（03）（03）。权利要求书CN104045706A1/16页3一种利拉鲁肽的合成方法技术领域0001本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种利拉鲁肽的合成方法。背景技术0002随着生活水平的提高和生活方式的改变，近年来，我国糖尿病的发病率有逐年增加的趋势。糖尿病是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等各种致病因子。
6、作用于机体，导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等问题，继而引发机体糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三多一少”症状，一旦控制不好会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈。糖尿病分为妊娠期糖尿病、特异性糖尿病、I型糖尿病和II型糖尿病。其中，II型糖尿病又名非胰岛素依赖型糖尿病，特点是人体自身能够产生胰岛素，但细胞无法对其作出反应，使胰岛素的效果大打折扣。0003II型糖尿病主要通过口服或皮下注射降糖药治疗。针对II型糖尿病的降糖药种类很多，包括二甲双胍、磺脲类药物和胰高血糖样肽1（GLP1）的。
7、受体激动素等，GLP1的受体激动素是近年来研究的热点。其中，利拉鲁肽（LIRAGLUTIDE）是GLP1的受体激动素之一，2010年1月25日，美国FDA批准由丹麦诺和诺德公司研发的利拉鲁肽（商品名为VICTOZA）注射剂在美国上市，2011年3月4日，利拉鲁肽获得SFDA批准上市。利拉鲁肽的化学表述为ARG34LYS26NGLUNHEXADECANOYLGLP1737，分子式为C172H265N43O51，相对分子质量37512，CAS登记号为204656202，分子式如式I所示，与天然GLP1相比，药效相当且作用时间更长。00040005式I0006目前，利拉鲁肽主要采用基因重组技术和逐步。
8、偶联的固相合成方法进行制备。采用基因重组技术合成利拉鲁肽时，技术难度较大，成本相对较高，同时由于ARG34GLP1（737）OH的侧链处于未保护状态，与NHEXADECANOYLGLUONSUOTBU反应时会产生较多的杂质，不利于纯化；采用逐步偶联的固相合成方法进行利拉鲁肽制备时，由于利拉鲁肽的序列中有较多的疏水氨基酸，逐步偶联时树脂收缩严重，反应不完全，导致收率偏低，同时粗肽中与产品性质相近的杂质较多，纯化比较困难。因此，提供一种利拉鲁肽的合成方法具有重要的现实意义。说明书CN104045706A2/16页4发明内容0007有鉴于此，本发明提供了一种利拉鲁肽的合成方法。该方法通过将二肽片段、。
9、三肽片段或其组合与氨基酸、GLY树脂偶联合成利拉鲁肽，提高了粗肽的纯度和收率，有利于纯化，缩短了合成时间，适合工业化生产。0008为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案0009本发明提供了一种利拉鲁肽的合成方法，包括如下步骤0010获得二肽片段和/或三肽片段；0011获得GLY树脂；0012取二肽片段、三肽片段或其组合与氨基酸、GLY树脂偶联，得到肽树脂，经侧链修饰、裂解、纯化、冻干，即得；0013二肽片段为GLYARG、LEUVAL、TRPLEU、ALATRP、ILEALA、PHEILE或ALAALA；0014三肽片段为TRPLEUVAL、ALATRPLEU、ILEALATRP或PHE。
10、ILEALA；0015肽的序列如SEQIDNO1所示。0016作为优选，组合为GLYARG、LEUVAL、ALATRP、PHEILE或ALAALA中的任意两者或两者以上二肽片段的组合。0017GLYARG、LEUVAL、ALATRP、PHEILE或ALAALA中的任意两者或两者以上二肽片段的组合具体为0018GLYARG和LEUVAL的组合；0019GLYARG和ALATRP的组合；0020GLYARG和PHEILE的组合；0021GLYARG和ALAALA的组合；0022LEUVAL和ALATRP的组合；0023LEUVAL和PHEILE的组合；0024LEUVAL和ALAALA的组合；00。
11、25ALATRP和PHEILE的组合；0026ALATRP和ALAALA的组合；0027PHEILE和ALAALA的组合；0028GLYARG、LEUVAL和ALATRP的组合；0029GLYARG、LEUVAL和PHEILE的组合；0030GLYARG、LEUVAL和ALAALA的组合；0031GLYARG、ALATRP和PHEILE的组合；0032GLYARG、ALATRP和ALAALA的组合；0033GLYARG、PHEILE和ALAALA的组合；0034LEUVAL、ALATRP和PHEILE的组合；0035LEUVAL、ALATRP和ALAALA的组合；0036LEUVAL、PHEI。
12、LE和ALAALA的组合；0037ALATRP、PHEILE和ALAALA的组合；0038GLYARG、ALATRP、PHEILE和ALAALA的组合；说明书CN104045706A3/16页50039GLYARG、LEUVAL、PHEILE和ALAALA的组合；0040GLYARG、LEUVAL、ALATRP和ALAALA的组合；0041GLYARG、LEUVAL、ALATRP和PHEILE的组合；0042LEUVAL、ALATRP、PHEILE和ALAALA的组合；0043或GLYARG、LEUVAL、ALATRP、PHEILE和ALAALA的组合。0044作为优选，组合为GLYARG、T。
13、RPLEU、ILEALA或ALAALA中不少于三个二肽片段的组合。0045GLYARG、TRPLEU、ILEALA或ALAALA中不少于三个二肽片段的组合具体为0046GLYARG、TRPLEU和ALAALA的组合；0047GLYARG、ILEALA和ALAALA的组合；0048TRPLEU、ILEALA和ALAALA的组合；0049GLYARG、TRPLEU和ILEALA的组合；0050或GLYARG、TRPLEU、ILEALA和ALAALA的组合。0051作为优选，组合为GLYARG、TRPLEUVAL、PHEILEALA或ALAALA中至少包含一个三肽片段的组合。0052GLYARG、T。
14、RPLEUVAL、PHEILEALA或ALAALA中至少包含一个三肽片段的组合具体为0053GLYARG和TRPLEUVAL的组合；0054GLYARG和PHEILEALA的组合；0055TRPLEUVAL和ALAALA的组合；0056PHEILEALA和ALAALA的组合；0057GLYARG、TRPLEUVAL和ALAALA的组合；0058GLYARG、PHEILEALA和ALAALA的组合；0059GLYARG、TRPLEUVAL和PHEILEALA的组合；0060TRPLEUVAL、PHEILEALA和ALAALA的组合；0061或GLYARG、TRPLEUVAL、PHEILEALA和。
15、ALAALA的组合。0062作为优选，组合为ALATRPLEU与GLYARG、PHEILE或ALAALA中的一者或两者以上的组合。0063ALATRPLEU与GLYARG、PHEILE或ALAALA中的一者或两者以上的组合具体为0064GLYARG和ALATRPLEU的组合；0065ALATRPLEU和PHEILE的组合；0066ALATRPLEU和ALAALA的组合；0067GLYARG、ALATRPLEU和PHEILE的组合；0068GLYARG、ALATRPLEU和ALAALA的组合；0069ALATRPLEU、PHEILE和ALAALA的组合；0070或GLYARG、ALATRPLEU。
16、、PHEILE和ALAALA的组合。0071作为优选，组合为ILEALATRP与GLYARG、LEUVAL或ALAALA中的一者或两者以上的组合。说明书CN104045706A4/16页60072ILEALATRP与GLYARG、LEUVAL或ALAALA中的一者或两者以上的组合具体为0073GLYARG和ILEALATRP的组合；0074LEUVAL和ILEALATRP的组合；0075ILEALATRP和ALAALA的组合；0076GLYARG、LEUVAL和ILEALATRP的组合；0077GLYARG、ILEALATRP和ALAALA的组合；0078LEUVAL、ILEALATRP和AL。
17、AALA的组合；0079或GLYARG、LEUVAL、ILEALATRP和ALAALA的组合。0080作为优选，侧链修饰具体为脱除肽树脂中LYS的侧链保护基团，与GLU、棕榈酰氯偶联。0081作为优选，裂解的试剂为ANISOLE、THIOANISOLE、TIS、H2O或EDT中的一者或两者以上的混合物与TFA的混合物。0082作为优选，裂解的试剂中TFA、ANISOLE、THIOANISOLE、TIS、H2O与EDT的体积比为（9095）（05）（03）（03）（03）（03）。0083本发明提供了一种利拉鲁肽的合成方法。该方法是通过将二肽片段、三肽片段或其组合与氨基酸、GLY树脂偶联，得到肽。
18、树脂，经侧链修饰、裂解、纯化、冻干，即得。利用本发明提供的方法制备的利拉鲁肽粗肽，收率可达909，纯度可达7246，与现有技术相比，利拉鲁肽粗肽的收率和纯度分别提高了1195、326；由于在疏水氨基酸密集区域使用片段进行偶联，减少了与产品性质相近杂质的产生，从而有利于纯化操作；在利拉鲁肽合成过程中，二肽片段、三肽片段或其组合与GLY树脂的合成可同时进行，大大缩短了合成时间。由此可见，本发明提供的利拉鲁肽的合成方法可提高粗肽的纯度和收率，有利于纯化，缩短了合成时间，适合工业化生产。附图说明0084图1示实施例20提供的HPLC图谱；0085图2示对比例1提供的HPLC图谱。具体实施方式0086本。
19、发明公开了一种利拉鲁肽的合成方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。0087说明书和权利要求书中所使用的缩写具体含义如下0088说明书CN104045706A5/16页700890090本发明提供的利拉鲁肽的合成方法中所用试剂均可由市场购得。0091下面结合实施例，进一步阐述本发明0092实施例1FMOCGLYAR。
20、G（PBF）OH的制备0093将FMOCGLYOH（297G，100MMOL）和HONB（197G，110MMOL）溶解在200MLTHF中，冰浴条件下加入DCC（227G，110MMOL），冰浴搅拌1H，撤掉冰浴，室温反应4H，滤掉不溶物，得到FMOCGLYONB溶液。0094将LARG（PBF）OH（427G，100MMOL）和NAHCO3（168G，200MMOL）溶解在THF/H2O（200ML200ML）中，冰浴条件下将上述FMOCGLYONB溶液滴加到上述THF/H2O中，滴加完毕后撤掉冰浴，室温搅拌反应2H。真空浓缩掉THF，水相中加入200MLH2O，EA洗涤3次，柠檬酸酸化水。
21、相PH至3，EA萃取（500ML2），有机相用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到油状物用DCMET2O重结晶，PE研磨后得到FMOCGLYARG（PBF）OH白色粉末状固体556G，纯度9854，收率789。说明书CN104045706A6/16页80095实施例2FMOCLEUVALOH的制备0096将FMOCLEUOH（353G，100MMOL）和HONB（197G，110MMOL）溶解在200MLTHF中，冰浴条件下加入DCC（227G，110MMOL），冰浴搅拌1H，撤掉冰浴，室温反应6H，滤掉不溶物，得到FMOCLEUONB溶液。0097将LVALOH（117G，10。
22、0MMOL）和NAHCO3（168G，200MMOL）溶解在THF/H2O（200ML200ML）中，冰浴条件下将上述FMOCLEUONB溶液滴加到上述THF/H2O中，滴加完毕后撤掉冰浴，室温搅拌反应2H。真空浓缩掉THF，水相中加入200MLH2O，ET2O洗涤3次，柠檬酸酸化水相PH至3，EA萃取（500ML2），有机相用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到油状物用MEOHH2O重结晶，离心干燥后得到FMOCLEUVALOH白色粉末状固体231G，纯度994，收率511。0098实施例3FMOCTRP（BOC）LEUOH的制备0099将FMOCTRP（BOC）OH（527G。
23、，100MMOL）和HONB（197G，110MMOL）溶解在200MLTHF中，冰浴条件下加入DCC（227G，110MMOL），冰浴搅拌1H，撤掉冰浴，室温反应2H，滤掉不溶物，得到FMOCTRP（BOC）ONB溶液。0100将LLEUOH（131G，100MMOL）和NAHCO3（168G，200MMOL）溶解在THF/H2O（200ML200ML）中，冰浴条件下将上述FMOCTRP（BOC）ONB溶液滴加到上述THF/H2O中，滴加完毕后撤掉冰浴，室温搅拌反应2H。真空浓缩掉THF，水相中加入200MLH2O，EA洗涤3次，柠檬酸酸化水相PH至3，EA萃取（500ML2），有机相用饱和。
24、食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到蓬松固体用THFPE重结晶，过滤收集，得到FMOCTRP（BOC）LEUOH白色粉末状固体409G，纯度981，收率640。0101实施例4FMOCALATRP（BOC）OH的制备0102将FMOCALAOH（311G，100MMOL）和HONB（197G，110MMOL）溶解在200MLTHF中，冰浴条件下加入DCC（227G，110MMOL），冰浴搅拌1H，撤掉冰浴，室温反应4H，滤掉不溶物，得到FMOCALAONB溶液。0103将HTRP（BOC）OH（304G，100MMOL）和NAHCO3（168G，200MMOL）溶解在THF/H2O（。
25、200ML200ML）中，冰浴条件下将上述FMOCALAONB溶液滴加到上述THF/H2O中，滴加完毕后撤掉冰浴，室温搅拌反应2H。真空浓缩掉THF，水相中加入200MLH2O，EA洗涤3次，柠檬酸酸化水相PH至3，EA萃取（500ML2），有机相用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到油状物用MEOHH2O重结晶，离心干燥后得到FMOCALATRP（BOC）OH白色粉末状固体312G，纯度986，收率522。0104实施例5FMOCILEALAOH的制备0105将FMOCILEOH（353G，100MMOL）和HONB（197G，110MMOL）溶解在200MLTHF中，冰浴条件。
26、下加入DCC（227G，110MMOL），冰浴搅拌1H，撤掉冰浴，室温反应4H，滤掉不溶物，得到FMOCILEONB溶液。0106将LALAOH（89G，100MMOL）和NAHCO3（168G，200MMOL）溶解在THF/H2O（200ML200ML）中，冰浴条件下将上述FMOCALAONB溶液滴加到上述THF/H2O中，滴加完毕后撤掉冰浴，室温搅拌反应2H。真空浓缩掉THF，水相中加入200MLH2O，EA洗涤3次，柠檬酸酸化水相PH至3，EA萃取（500ML2），有机相用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到蓬松固体用MEOHH2O重结晶，过滤收集，得到FMOCILEALA。
27、OH白色粉末状固体说明书CN104045706A7/16页9246G，纯度980，收率579。0107实施例6FMOCPHEILEOH的制备0108将FMOCPHEOH（387G，100MMOL）和HONB（197G，110MMOL）溶解在200MLTHF中，冰浴条件下加入DCC（227G，110MMOL），冰浴搅拌1H，撤掉冰浴，室温反应4H，滤掉不溶物，得到FMOCPHEONB溶液。0109将LILEOH（131G，100MMOL）和NAHCO3（168G，200MMOL）溶解在THF/H2O（200ML200ML）中，冰浴条件下将上述FMOCPHEONB溶液滴加到上述THF/H2O中，滴。
28、加完毕后撤掉冰浴，室温搅拌反应4H。真空浓缩掉THF，水相中加入200MLH2O，EA洗涤3次，柠檬酸酸化水相PH至3，EA萃取（500ML2），有机相用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到油状物用THFPE重结晶，过滤收集，得到FMOCPHEILEOH白色粉末状固体305G，纯度996，收率609。0110实施例7FMOCALAALAOH的制备0111将FMOCALAOH（311G，100MMOL）和HONB（197G，110MMOL）溶解在200MLTHF中，冰浴条件下加入DCC（227G，110MMOL），冰浴搅拌1H，撤掉冰浴，室温反应4H，滤掉不溶物，得到FMOCALA。
29、ONB溶液。0112将HALAOH（89G，100MMOL）和NAHCO3（168G，200MMOL）溶解在THF/H2O（200ML200ML）中，冰浴条件下将上述FMOCALAONB溶液滴加到上述THF/H2O中，滴加完毕后撤掉冰浴，室温搅拌反应2H。真空浓缩掉THF，水相中加入200MLH2O，EA洗涤3次，柠檬酸酸化水相PH至3，EA萃取（500ML2），有机相用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，THFEAPE重结晶，过滤收集，得到FMOCALAALAOH白色粉末状固体206G，纯度989，收率539。0113实施例8FMOCTRP（BOC）LEUVALOH的制备0114取。
30、实施例3制得的FMOCTRP（BOC）LEUOH（640G，100MMOL）和HONB（197G，110MMOL）溶解在200MLTHF中，冰浴条件下加入DCC（227G，110MMOL），冰浴搅拌1H，撤掉冰浴，室温反应4H，滤掉不溶物，得到FMOCTRP（BOC）LEUONB溶液。0115将HVALOH（117G，100MMOL）和NAHCO3（168G，200MMOL）溶解在THF/H2O（200ML200ML）中，冰浴条件下将上述FMOCTRP（BOC）LEUONB溶液滴加到上述THF/H2O中，滴加完毕后撤掉冰浴，室温搅拌反应2H。真空浓缩掉THF，水相中加入200MLH2O，EA洗。
31、涤3次，柠檬酸酸化水相PH至3，EA萃取（500ML2），有机相用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，乙腈H2O重结晶，过滤收集，得到FMOCTRP（BOC）LEUVALOH白色粉末状固体324G，纯度976，收率438。0116实施例9FMOCALATRP（BOC）LEUOH的制备0117取实施例4制得的FMOCALATRP（BOC）OH（598G，100MMOL）和HONB（197G，110MMOL）溶解在200MLTHF中，冰浴条件下加入DCC（227G，110MMOL），冰浴搅拌1H，撤掉冰浴，室温反应4H，滤掉不溶物，得到FMOCALATRP（BOC）ONB溶液。0118将。
32、HLEUOH（131G，100MMOL）和NAHCO3（168G，200MMOL）溶解在THF/H2O（200ML200ML）中，冰浴条件下将上述FMOCALATRP（BOC）ONB溶液滴加到上述THF/H2O中，滴加完毕后撤掉冰浴，室温搅拌反应2H。真空浓缩掉THF，水相中加入200MLH2O，EA洗涤3次，柠檬酸酸化水相PH至3，EA萃取（500ML2），有机相用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干说明书CN104045706A8/16页10燥，真空浓缩，MEOHH2O重结晶，过滤收集，得到FMOCALATRP（BOC）LEUOH白色粉末状固体295G，纯度982，收率415。0119实施例1。
33、0FMOCILEALATRP（BOC）OH的制备0120取实施例5制得的FMOCILEALAOH（425G，100MMOL）和HONB（197G，110MMOL）溶解在200MLTHF中，冰浴条件下加入DCC（227G，110MMOL），冰浴搅拌1H，撤掉冰浴，室温反应4H，滤掉不溶物，得到FMOCILEALAONB溶液。0121将HTRP（BOC）OH（304G，100MMOL）和NAHCO3（168G，200MMOL）溶解在THF/H2O（200ML200ML）中，冰浴条件下将上述FMOCILEALAONB溶液滴加到上述THF/H2O中，滴加完毕后撤掉冰浴，室温搅拌反应2H。真空浓缩掉TH。
34、F，水相中加入200MLH2O，EA洗涤3次，柠檬酸酸化水相PH至3，EA萃取（500ML2），有机相用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，MEOHH2O重结晶，过滤收集，得到FMOCILEALATRP（BOC）OH白色粉末状固体334G，纯度989，收率470。0122实施例11FMOCPHEILEALAOH的制备0123取实施例6制得的FMOCPHEILEOH（501G，100MMOL）和HONB（197G，110MMOL）溶解在200MLTHF中，冰浴条件下加入DCC（227G，110MMOL），冰浴搅拌1H，撤掉冰浴，室温反应4H，滤掉不溶物，得到FMOCPHEILEONB溶。
35、液。0124将HALAOH（89G，100MMOL）和NAHCO3（168G，200MMOL）溶解在THF/H2O（200ML200ML）中，冰浴条件下将上述FMOCPHEILEONB溶液滴加到上述THF/H2O中，滴加完毕后撤掉冰浴，室温搅拌反应2H。真空浓缩掉THF，水相中加入200MLH2O，EA洗涤3次，柠檬酸酸化水相PH至3，EA萃取（500ML2），有机相用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，THFPE重结晶，过滤收集，得到FMOCPHEILEALAOH白色粉末状固体247G，纯度985，收率432。0125实施例12FMOCGLY王树脂的制备0126称取替代度为075M。
36、MOL/G的王树脂50G，加入固相反应柱中，DMF洗涤2次，DMF溶胀30分钟，抽干。将FMOCGLYOH（5575G，1875MMOL）和HOBT（2787G，20625MMOL）溶解于200MLDMF中，冰浴条件下加入DIC（317ML，20625MMOL）活化5分钟，将上述溶液加入装有王树脂的固相反应柱中，同时加入DMAP（0206G，1875MMOL），氮气搅拌反应2H，DMF洗涤4次，DCM洗涤2次，加入300MLAC2O/吡啶76（V/V）封闭6小时，DCM洗涤6次，MEOH收缩，真空干燥得到FMOCGLY王树脂，检测替代度为0108MMOL/G。0127实施例13FMOCGLY王。
37、树脂的制备0128称取替代度为075MMOL/G的王树脂50G，加入固相反应柱中，DMF洗涤2次，DMF溶胀30分钟，抽干。将FMOCGLYOH（16724G，5625MMOL）和HOBT（836G，61875MMOL）溶解于300MLDMF中，冰浴条件下加入DIC（958ML，61875MMOL）活化5分钟，将上述溶液加入装有王树脂的固相反应柱中，同时加入DMAP（0687G，6188MMOL），氮气搅拌反应2H，DMF洗涤4次，DCM洗涤2次，加入300MLAC2O/吡啶76（V/V）封闭6小时，DCM洗涤6次，MEOH收缩，真空干燥得到FMOCGLY王树脂，检测替代度为0279MMOL/。
38、G。0129实施例14FMOCGLY王树脂的制备0130称取替代度为075MMOL/G的王树脂50G，加入固相反应柱中，DMF洗涤2次，DMF溶胀30分钟，抽干。将FMOCGLYOH（33448G，1125MMOL）和HOBT（1672G，12375MMOL）说明书CN104045706A109/16页11溶解于400MLDMF中，冰浴条件下加入DIC（1916ML，12375MMOL）活化5分钟，将上述溶液加入装有王树脂的固相反应柱中，同时加入DMAP（1374G，12376MMOL），氮气搅拌反应2H，DMF洗涤4次，DCM洗涤2次，加入400MLAC2O/吡啶76（V/V）封闭6小时，D。
39、CM洗涤6次，MEOH收缩，真空干燥得到FMOCGLY王树脂，检测替代度为0498MMOL/G。0131实施例15肽树脂的制备0132取实施例13制得的358GFMOCGLY王树脂（0279MMOL/G）装入固相反应柱中，DMF洗两次，DMF溶胀30分钟，DBLK脱保护（57MIN），DMF洗涤6次，茚三酮检测呈阳性。0133将实施例1提供的FMOCGLYARG（PBF）OH（2117G，3MMOL）和HOBT（0426G，315MMOL）溶解在15MLDMF中，冰浴条件下加入DIC（049ML，315MMOL）活化5分钟，将活化好的溶液加入到上述固相反应柱中，氮气搅拌反应2H，茚三酮检测呈阴。
40、性，得到FMOCGLYARG（PBF）GLY王树脂。抽干反应液，DMF洗涤3次，DBLK脱保护（57MIN），DMF洗涤6次，茚三酮检测呈阴性，得到HGLYARG（PBF）GLY王树脂。0134按照上述FMOCGLYARG（PBF）OH偶联的方法，在HGLYARG（PBF）GLY王树脂上依次偶联FMOCARG（PBF）OH、实施例2提供的FMOCLEUVALOH、实施例4提供的FMOCALATRP（BOC）OH、实施例6提供的FMOCPHEILEOH、FMOCGLU（OTBU）OH、FMOCLYS（ALLOC）OH、实施例7提供的FMOCALAALAOH、FMOCGLN（TRT）OH、FMOC。
41、GLYOH、FMOCGLU（OTBU）OH、FMOCLEUOH、FMOCTYR（TBU）OH、FMOCSER（TBU）OH、FMOCSER（TBU）OH、FMOCVALOH、FMOCASP（OTBU）OH、FMOCSER（TBU）OH、FMOCTHR（TBU）OH、FMOCPHEOH、FMOCTHR（TBU）OH、FMOCGLYOH、FMOCGLU（OTBU）OH、FMOCALAOH。0135将BOCHIS（TRT）OH（1858G，3MMOL）和HOBT（0426G，315MMOL）溶解于15MLDMF中，冰浴条件下加入DIC（049ML，315MMOL）活化5分钟，将活化好的溶液加入到上述。
42、固相反应柱中，氮气搅拌2H，茚三酮检测呈阴性，DMF洗涤4次，DCM洗涤2次。0136向上述固相反应柱中加入15MLDCM和108G苯硅烷，氮气搅拌1分钟后加入0289G四（三苯基膦）钯，反应05H，抽干，DCM洗涤6次，茚三酮检测呈阳性。0137将FMOCGLUOTBU（2128G，5MMOL）、HOBT（0709G，525MMOL）和PYBOP（2602G，5MMOL）溶解在25MLDMF中，冰浴条件下加入DIPEA（175ML，10MMOL）活化3分钟，将活化好的溶液加入上述固相反应柱，氮气搅拌反应2H，茚三酮检测呈阴性，抽干，DMF洗涤4次，DCM洗涤2次。0138向上述固相反应柱中加。
43、入20MLDCM和DIPEA（175ML，10MMOL），氮气搅拌均匀后缓慢滴加棕榈酰氯（1374G，5MMOL），滴加完毕后继续反应2H，茚三酮检测呈阴性，抽干，DCM洗涤6次，MEOH收缩，真空干燥后得到肽树脂794G。0139实施例16肽树脂的制备0140取实施例12制得的358GFMOCGLY王树脂（0108MMOL/G）装入固相反应柱中，DMF洗两次，DMF溶胀30分钟，DBLK脱保护（57MIN），DMF洗涤6次，茚三酮检测呈阳性。0141将实施例1提供的FMOCGLYARG（PBF）OH（2117G，3MMOL）和HOBT（0426G，315MMOL）溶解在15MLDMF中，冰浴。
44、条件下加入DIC（049ML，315MMOL）活化5分钟，将活化好的溶液加入到上述固相反应柱中，氮气搅拌反应2H，茚三酮检测呈阴性，得到FMOCGLYARG（PBF）GLY王树脂。抽干反应液，DMF洗涤3次，DBLK脱保护（57MIN），DMF洗涤6次，茚三酮检测呈阴性，得到HGLYARG（PBF）GLY王树脂。说明书CN104045706A1110/16页120142按照上述FMOCGLYARG（PBF）OH偶联的方法，在HGLYARG（PBF）GLY王树脂上依次偶联FMOCARG（PBF）OH、FMOCVALOH、实施例3提供的FMOCTRP（BOC）LEUOH、实施例5提供的FMOCIL。
45、EALAOH、FMOCPHEOH、FMOCGLU（OTBU）OH、FMOCLYS（ALLOC）OH、实施例7提供的FMOCALAALAOH、FMOCGLN（TRT）OH、FMOCGLYOH、FMOCGLU（OTBU）OH、FMOCLEUOH、FMOCTYR（TBU）OH、FMOCSER（TBU）OH、FMOCSER（TBU）OH、FMOCVALOH、FMOCASP（OTBU）OH、FMOCSER（TBU）OH、FMOCTHR（TBU）OH、FMOCPHEOH、FMOCTHR（TBU）OH、FMOCGLYOH、FMOCGLU（OTBU）OH、FMOCALAOH。0143将BOCHIS（TRT）O。
46、H（1858G，3MMOL）和HOBT（0426G，315MMOL）溶解于15MLDMF中，冰浴条件下加入DIC（049ML，315MMOL）活化5分钟，将活化好的溶液加入到上述固相反应柱中，氮气搅拌2H，茚三酮检测呈阴性，DMF洗涤4次，DCM洗涤2次。0144向上述固相反应柱中加入15MLDCM和108G苯硅烷，氮气搅拌1分钟后加入0289G四（三苯基膦）钯，反应05H，抽干，DCM洗涤6次，茚三酮检测呈阳性。0145将FMOCGLUOTBU（2128G，5MMOL）、HOBT（0709G，525MMOL）和PYBOP（2602G，5MMOL）溶解在25MLDMF中，冰浴条件下加入DIPE。
47、A（175ML，10MMOL）活化3分钟，将活化好的溶液加入上述固相反应柱，氮气搅拌反应2H，茚三酮检测呈阴性，抽干，DMF洗涤4次，DCM洗涤2次。0146向上述固相反应柱中加入20MLDCM和DIPEA（175ML，10MMOL），氮气搅拌均匀后缓慢滴加棕榈酰氯（1374G，5MMOL），滴加完毕后继续反应2H，茚三酮检测呈阴性，抽干，DCM洗涤6次，MEOH收缩，真空干燥后得到肽树脂798G。0147实施例17肽树脂的制备0148取实施例14制得的358GFMOCGLY王树脂（0498MMOL/G）装入固相反应柱中，DMF洗两次，DMF溶胀30分钟，DBLK脱保护（57MIN），DMF洗。
48、涤6次，茚三酮检测呈阳性。0149将实施例1提供的FMOCGLYARG（PBF）OH（2117G，3MMOL）和HOBT（0426G，315MMOL）溶解在15MLDMF中，冰浴条件下加入DIC（049ML，315MMOL）活化5分钟，将活化好的溶液加入到上述固相反应柱中，氮气搅拌反应2H，茚三酮检测呈阴性，FMOCGLYARG（PBF）GLY王树脂。抽干反应液，DMF洗涤3次，DBLK脱保护（57MIN），DMF洗涤6次，茚三酮检测呈阴性，得到HGLYARG（PBF）GLY王树脂。0150按照上述FMOCGLYARG（PBF）OH偶联的方法，在HGLYARG（PBF）GLY王树脂上依次偶联F。
49、MOCARG（PBF）OH、实施例8提供的FMOCTRP（BOC）LEUVALOH、实施例11提供的FMOCPHEILEALAOH、FMOCGLU（OTBU）OH、FMOCLYS（ALLOC）OH、实施例7提供的FMOCALAALAOH、FMOCGLN（TRT）OH、FMOCGLYOH、FMOCGLU（OTBU）OH、FMOCLEUOH、FMOCTYR（TBU）OH、FMOCSER（TBU）OH、FMOCSER（TBU）OH、FMOCVALOH、FMOCASP（OTBU）OH、FMOCSER（TBU）OH、FMOCTHR（TBU）OH、FMOCPHEOH、FMOCTHR（TBU）OH、FMOCGLYOH、FMOCGLU（OTBU）OH、FMOCALAOH。0151将BOCHIS（TRT）OH（1858G，3MMOL）和HOBT（0426G，315MMOL）溶解于15MLDMF中，冰浴条件下加入DIC（049ML，315MMOL）活化5分钟，将活化好的溶液加入到上述固相反应柱中，氮气搅拌2H，茚三酮检测呈阴性，DMF洗涤4次，DCM洗涤2次。0152向上述固相反应柱中加入15MLDCM和108G苯硅烷，氮气搅拌1分钟后加入0289G四（三苯基膦）钯，反应05H，抽干，DCM洗涤6次，茚三酮检测呈阳性。说明书。