腧穴经络识别方法 【技术领域】
本发明涉及医学方法，特别涉及腧穴经络识别方法。
背景技术
经络理论在中医基础理论与临诊实践中中占有极其重要的地位，中医的理法方药与经络联系甚密。但经络学研究的重要应用基础之一——经络识别，目前国内外均未能取得突破性进展，限制了经络理论和医疗实践，如脏腑—经络相关、药物归经、气至病所、通经活络、活血化淤等方面。
【发明内容】
经络是人体气血运行之通道，具有平衡阴阳，营养周身之功能。理论和实验都证实经络具备质能代谢和信使物质传递的功能，接受刺激，产生响应。许多经络实验结果证实：①Ca2+在腧穴内外(旁开1厘米)的分布不同；②刺激腧穴时，Ca2+在经络腧穴中的动态响应极为显著，而非经穴区则无这种变化。因此认为：这些重要的实验现象说明：Ca2+对经络的活动极为敏感，可以作经络识别的标识依据。本发明利用Ca2+在经络腧穴与对照点对刺激响应的差异性，将经络活动的特点与经络识别联系起来，构建经络识别的方法与技术。
Ca2+传感针是本发明提供的一种新型的医学测量传感器，与P Ca2+测试仪组成Ca2+浓度在体测量设备，实时、动态、在体地监测被测对象Ca2+的浓度变化。因此，可以通过传感针监测：1)经络腧穴内外Ca2+浓度的分布差异；2)在非刺激状态下，Ca2+浓度的在所测腧穴内外的含量水平；3)在刺激条件下Ca2+浓度在所测腧穴内外的含量水平。上述测量结果由P Ca2+测试仪(传感针与毫伏计)给出。通过观察上述结果，即可达到识别腧穴与经络之目地。
经络腧穴的刺激源，采用超声刺激器，避免光、电、磁等激励源带来的干扰。并通过量化刺激参数，增强测量结果的可靠性。所用的超声刺激器为1MH，mW。
腧穴识别的方法包括以下步骤：
1、参考中医经络图谱和指压反应法，定出被识别腧穴的位置。
2、将Ca2+传感针插入被测部位，连接好P Ca2+测试仪连线。记录该测量仪的测量值。
3、使用超声刺激器在被测部位附近缓慢扫描，给予一定量刺激，观察P Ca2+的读数变化。
4、当P Ca2+测试仪读数有一个较大的变化时，超声刺激器所在位置即为被测腧穴位置至此，完成腧穴识别的过程。
经络识别的方法包括以下步骤：
1、用腧穴识别方法，连续确定同经上数个腧穴的位置，这些腧穴位置之间的连线即为所识别的经络线。因经脉内外对刺激的响应值不同，借助传感针可直接扫描出经脉线。
2、记录Ca2+传感针进入人体组织的深度，即为所识别的经络线的深度。
为实现腧穴经络识别，本发明提供了钙离子传感针。
钙离子传感针通过模拟生物膜，具有高敏感性的特点，能迅速、准确的反映出外界钙离子浓度的变化，其线形范围为10-2-10-6mol/l，在此范围内其响应时间均为2秒左右，响应斜率为32±4.8mV/Dec。在体实验能连续动态观察体内钙离子活度的变化，操作简单，实验结果可靠，对动物的损伤度小。
本发明的实验资料
1、仪器和试剂：
①试剂：
中性载体-ETH129，Fluka Chemie GmbH，CH-9471 Buchs
溶剂-四氢呋喃(THF)，分析纯，中国医药(集团)上海化学试剂公司
添加剂-四苯硼钠(TPNa)，分析纯，中国医药(集团)上海化学试剂公司
增塑剂-邻苯二甲酸二异辛酯，北京福星化工厂
PVC粉，葛店化工厂赠送
EDTA，汕头市化学试剂厂
②仪器：
PHS-3C数字式精密酸度计，武汉市仪器仪表研究所
222型饱和甘汞电极，江苏电分析仪器厂
红外灯照射仪(自制)
800型离心沉淀器(4000转/分)，上海鑫昌医疗器械厂
电热恒温干燥箱，上海跃进医疗器械一厂
2、传感针的制作：
①、针灸针的处理：用无水乙醇浸泡24小时后，将针放入洁净的玻璃皿中，在红外灯下烤干；
②、敏感膜溶液的配制：四苯硼钠1.0mg，ETH129 2.75mg，PVC 17.5mg，邻苯二甲酸二异辛酯32.5mg，用四氢呋喃溶解至0.5ml，保存于冰箱中。
③、针的绝缘：在PVC粉中加入增塑剂和四氢呋喃制成绝缘膜溶液。用微量进样器吸取绝缘膜溶液，沿针近柄端滴注，使整个针壁均匀的涂上一层绝缘膜，然后将针放入离心机中以500转/min离心5分钟，再将针放入恒温箱中130℃ 15分钟后取出，再重做一遍，如此针外表面均匀涂布一层透明的薄层绝缘膜。
④、敏感膜的制作：将针尖面作为反应面而针的其它部分仍保持绝缘状态。用微量进样器滴0.1-0.2ul的敏感膜溶液于水面，待溶液在水面上均匀展开，再将针灸针迅速垂直地插入水面下1.5-2.0cm，再迅速提起，敏感膜便在针尖面上形成单层薄膜，恒温箱中130℃烘烤。30分钟后取出，再重复上述操作。便在针斜面上形成拟BLM的敏感膜。传感针示意图见附图1。
3.实验结果：
①离体实验部分(PH＝7.4，室温)：
a)标准曲线(线性范围及斜率)：结果如图2，线性范围为10-2-10-6mol/l，斜率为32±4.8mV/Dec；
表1响应结果 Ca2+离子浓度 (mol/L) 空白 10-6 10-5 10-4 10-3 10-2电位(mV) -176 -88 -49 -12.5 17.1 43.6
b)响应时间：不同浓度下(10-6-10-2mol/l)响应时间均为2秒；
c)在10-2mol/l的溶液中电动势漂移为2.3mV/h。
②在体实验部分(大白鼠)：
a)动物麻醉：用20％的乌拉坦(5ml/kg)经腹腔注射麻醉大白鼠；
b)实验装置(如图3)：固定已麻醉的大白鼠，将钙离子传感针插在大白鼠腿部的肌肉中，甘汞电极和大白鼠的尾巴则放入0.9％的生理盐水中，两电极都接入PHS-3C记录仪构成一回路。
c)实验过程：待所显示之记录电压稳定(稳定时电压为-48.3mV)，在钙离子传感针附近人为的注射0.1mol/l的CaCl2溶液200ul，观察电压的变化，待电压稳定后再注射0.5mol/l的EDTA溶液200ul，观察电压变化，其结果如表2。
若动物腿部肌肉收缩可见电压明显升高，平静后又逐渐下降。
测试在体实验对敏感膜的影响(PH＝7.4，T＝25℃)，结果如表3。
Ca2+浓度 (mol/L) 空白 10-6 10-5 10-4 电压(mV) -49.0 -45.6 -36.9 -16.0
此传感针的目的在于将钙离子浓度的变化转换为电信号，动态观测生物体内钙离子浓度的变化。实验结果证明，新型钙离子传感针响应时间很快，对钙离子浓度的变化很敏感，在体外的响应效果较佳，根据其响应时间和响应斜率，可以用其对钙离子的选择性进行定量动态监测。在体肌肉注射钙离子后，钙离子通过扩散到达针表面从而使得针表面局部钙离子浓度升高这个变化趋势可以被传感针检测到，反映为电位的升高；而注射EDTA后，钙离子因为与EDTA络合而浓度下降，这种钙离子浓度的下降亦可为传感针所检测到，表现为电位的下降；动物肌肉收缩，钙离子浓度升高，亦可观察到电压呈现上升趋势。在体实验后重新测量传感针的活性，传感针对钙离子的变化仍有响应，但结果有所变化，斜率稍减，说明传感针在动物体内测量时由于动物体内温度、pH与体外并不相同，另外此型传感针的在重复体外测量之前并未很好的清洗电极表面，因此可以导致测量前后传感针响应斜率的变化。总体来说，此传感针在体测量后仍可以保持其对钙离子的响应，膜仍具有相对的完整性。
实验结果说明本发明钙离子传感针可以达到在体测量动物体内钙离子浓度的变化，可以反映动物体内钙离子浓度的变化。由于成本低廉、操作简便，因其为一次性使用器件，故能避免重复使用所造成的消毒和膜活性改变问题。
本发明提供的钙离子传感针可用于动态观测大白鼠肌肉组织内钙离子浓度的变化，并可将其用途扩展到其它生物甚至人体内，观测生物体内钙离子变化与生理活动的关系，作为探究针灸机理的工具是可行的。
【附图说明】
图1是钙针(既钙离子选择电极)结构图；
图2为标准曲线；
图3为本发明实验装置示意图。
【具体实施方式】
实施例1
腧穴识别的方法包括以下步骤：
1、参考中医经络图谱和指压反应法，定出被识别腧穴的位置。
2、将Ca2+传感针插入被测部位，连接好P Ca2+测试仪连线。记录该测量仪的测量值。
3、使用超声刺激器在被测部位附近缓慢扫描，给予一定量刺激，观察P Ca2+的读数变化。
4、当P Ca2+测试仪读数有一个较大的变化时，超声刺激器所在位置即为被测腧穴位置至此，完成腧穴识别的过程。
实施例2
经络识别的方法是：
用腧穴识别方法，连续确定同经上数个腧穴的位置，这些腧穴位置之间的连线即为所识别的经络线。因经脉内外对刺激的响应值不同，借助传感针可直接扫描出经脉线。
记录Ca2+传感针进入人体组织的深度，即为所识别的经络线的深度。
实施例3
钙离子传感针的制备方法：
(1)取针灸针用无水乙醇浸泡24小时后，将针放入洁净的玻璃皿中，在红外灯下烤干；
(2)在PVC粉中加入增塑剂和四氢呋喃制成绝缘膜溶液，用微量进样器吸取绝缘膜溶液，沿针近柄端滴注，使整个针壁均匀的涂上一层绝缘膜，然后将针放入离心机中以500转/min离心5分钟，再将针放入恒温箱中130℃ 15分钟后取出，再重做一遍，如此针外表面均匀涂布一层透明的薄层绝缘膜；
(3)用微量进样器滴0.1-0.2ul的敏感膜溶液于水面，待溶液在水面上均匀展开，再将针灸针迅速垂直地插入水面下1.5-2.0cm，再迅速提起，敏感膜便在针尖面上形成单层薄膜，恒温箱中130℃烘烤。30分钟后取出，再重复上述操作。便在针斜面上形成拟BLM的敏感膜。
4.根据权利要求3所述的钙离子传感针的制备方法，其特征在于所说的敏感膜溶液的配制方法是：取四苯硼钠1.0mg、ETH129 2.75mg、PVC 17.5mg和邻苯二甲酸二异辛酯32.5mg用四氢呋喃溶解至0.5ml即成。