吡啶衍生物及其用法.pdf

吡啶衍生物及其用法
    相关申请

    本申请要求2007年8月10日提交的美国临时申请60/955,193号的优先权，其全部公开被并入本文作为参考。

    【发明领域】

    本发明属于药物化学领域，具体属于影响缺氧诱导因子α(HIF-α)稳定性和HIF-调节的基因的表达的化合物领域，及其用于治疗疾病的用法。

    【发明背景】

    转录因子的缺氧诱导因子(HIF)家族在整个身体内控制对缺氧的细胞内响应方面起到核心的调节作用。HIF本身主要由脯氨酰羟化酶(PHD)以及天冬酰胺酰羟化酶来调节。在正常含氧量的条件下，这些PHD位点特异性地使HIF的α亚单位羟基化，最终导致其降解。因此，在适当的氧化水平下，身体不断地表达和降解HIFα蛋白。

    通过本文中公开的化合物调节PHD会改变对细胞的氧内稳态的调节。这在其中有缺血、缺氧、和/或贫血发挥作用的任何疾病状态中具有效用。

    【发明内容】

    本文中公开的是选自式I、式II、式III、式IV、和式V的化合物，或其药学可接受的盐、酯、酰胺、或前体药物，

    

    其中

    n为0或1；

    R₁为-OR₈或卤素；

    R₂选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、和氰基；

    R₃选自任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、-CR₉R₁₀R₁₁、和-CR₉R₁₀-C(＝O)OR₁₂；

    R₄为氢或-OR₈；

    X₁选自氧、硫、和碳；

    R₅选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基，

    条件是，在X₁为氧或硫时，R₅不存在；

    X₂和X₃各自独立地为氮或碳，

    条件是，X₁、X₂、和X₃中的至少一个为碳；

    R₆选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、和-OR₈；

    R₇选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、和-SO₂-Ar，其中Ar为任选地被取代的芳基；或

    X₂和X₃都是碳，并且R₆和R₇与它们所连接的碳原子合起来形成下式的环

    

    其中

    R₁₃和R₁₄各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、-OR₈、和氰基；和

    R₁₅和R₁₆各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、全卤代烷基、-OR₈、-NO₂、-N(R₈)₂、-NHC(＝O)R₈、-NH(SO₂)Ar、-(CR₉R₁₀)_m-S(＝O)-(CR₉R₁₀)_p-R₈、-(CR₉R₁₀)_m-S(＝O)₂-(CR₉R₁₀)_p-R₈、和氰基，其中Ar为任选地被取代的芳基，且m和p各自独立地为0-10，包含端值(即，m或p选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)；

    R₈选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、和任选地被取代的芳基；

    R₉和R₁₀各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、和任选地被取代的芳基；

    R₁₁选自任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基；

    R₁₂选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基；和

    键a和键b为单键或双键，使得X₁、X₂、和X₃与R₅-R₇一起具有完整的八隅体。

    还公开了药物组合物，其包含治疗有效量的至少一种式I、式II、式III、式IV、或式V的化合物，或其药学可接受的盐、酯、酰胺、或前体药物，以及生理学可接受的载体、稀释剂、或赋形剂。

    另外，公开了如下的各方法：控制对象的HIF水平，抑制对象的HIFα羟基化，抑制对象的脯氨酰羟化酶，调节对象的HIF控制的基因的表达，治疗对象的HIF相关病症，治疗与缺血、缺氧和/或贫血有关的疾病，治疗对象的与血管生成和/或促红细胞生成素水平有关的病况，或治疗对象的病症，所述方法包括鉴定有此需要的对象和对对象施用或使对象接触至少一种式I、式II、式III、式IV、和式V的化合物，或其药学可接受的盐、酯、酰胺、或前体药物。

    发明详述

    术语“药学可接受的盐”是指用于对象安全有效并具有期望的生物活性的本发明化合物的那些盐。药学可接受的盐包括存在于本发明化合物中的酸性或碱性基团的盐。药学可接受的酸加成盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐(即，1，1’-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐)。本发明的某些化合物可以与各种氨基酸形成药学可接受的盐。适合的碱盐包括但不限于铝、钙、锂、镁、钾、钠、锌、和二乙醇胺盐。关于药学可接受的盐的综述，参见BERGE等人，66J.PHARM.SCI.1-19(1977)，所述文献被并入本文作为参考。

    术语“酯”是指式-(R)_n-COOR’的化学部分，其中R和R’独立地选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基(通过环碳键合)和脂肪族杂环(通过环碳键合)，并且其中n为0或1。

    “酰胺”为式-(R)_n-C(O)NHR’或-(R)_n-NHC(O)R’的化学部分，其中R和R’独立地选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基(通过环碳键合)和脂族杂环(通过环碳键合)，并且其中n为0或1。酰胺可以是连接于本发明的分子的氨基酸或肽分子，从而形成前体药物。

    本发明化合物上的任何胺、羟基、或羧基侧链都可以被酯化或酰胺化。用于实现这种目的的方法和具体的基团是本领域技术人员已知的，并且可以在诸如Greene和Wuts，Protective Groups in OrganicSynthesis，3.sup.rd Ed.，John Wiley&Sons，New York，N.Y.，1999的参考文献中找到，所述文献被全文并入本文作为参考。

    “前体药物”是指在体内转化为母体药物那些药物。前体药物经常是有用的，因为在一些情况中，它们可以比母体药物更容易给药。它们可以例如通过口服给药而生物可利用，而母体药物则不能。前体药物在药物组合物中还可以具有优于母体药物的改善的溶解度。前体药物的实例，非限制性的，是作为酯(“前体药物”)给药的本发明的化合物，以便在水溶性不利于流动性的情况中有助于转运过细胞膜，但是其一旦处于其中水溶性有利的细胞内部，则代谢水解为羧酸，活性的实体。前体药物的另一个例子可能是键合于酸基团的短肽(聚氨基酸)，其中所述肽被代谢而露出活性部分。

    只要本发明的基团被描述为“任选地被取代的”时，该基团可以是未被取代的或被一个或多个对于该基团所述的取代基取代。同样，当基团被描述为“未被取代的或被取代的”时，如果被取代，则取代基可以选自相同的取代基组。除非另有说明，当取代基被认为是“任选地被取代的”或“被取代的”，则意味着该取代基是可以被一个或多个基团取代的基团，所述一个或多个基团个别且独立地选自烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、脂肪族杂环基、芳烷基、杂芳烷基、(脂肪族杂环基)烷基、羟基、被保护的羟基、烷氧基、芳氧基、酰基、酯、巯基、烷硫基、芳硫基、氰基、卤素、羰基、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰胺基、N-酰胺基、S-磺酰胺基、N-磺酰胺基、C-羧基、被保护的C-羧基、O-羧基、异氰酸根合、硫氰酸根合、异硫氰酸根合、硝基、甲硅烷基、亚磺酰基、亚硫酰基、磺酰基、卤代烷基、卤代烷氧基、三卤代甲烷磺酰基、三卤代甲烷磺酰胺基、和氨基包括单取代和二取代的氨基基团，及其被保护的衍生物。可以形成上述取代基的保护衍生物的保护基是本领域技术人员已知的，并且可以在参考文献Greene和Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3rdEd.，John Wiley&Sons，New York，NY，1999中找到，所述参考文献被全文并入本文作为参考。

    在本文中使用时，其中“m”和“n”为整数的“C_m-C_n”是指烷基、烯基或炔基基团中的碳原子数或环烷基、环烯基、或芳基基团的环中的碳原子数。也就是说，烷基、烯基、炔基，以及环烷基的环、环烯基的环、或芳基环可以包含从“m”到“n”个碳原子，包含端值。因此，例如，“C₁-C₄烷基”基团是指具有1到4个碳的所有烷基基团，也就是，CH₃-、CH₃CH₂-、CH₃CH₂CH₂-、CH₃CH(CH₃)-、CH₃CH₂CH₂CH₂-、CH₃CH₂CH(CH₃)-、和(CH₃)₃CH-。如果没有为烷基、烯基、炔基、环烷基或环烯基基团指定“m”和“n”，则采取这些定义所描述的最广泛的范围。

    在本文中使用时，“烷基”是指直链或支链的完全饱和(不含双键或三键)的烃(全碳)基团。本发明的烷基基团可以包括1-20个碳原子，即“m”＝1和“n”＝20，表示为“C₁-C₂₀烷基”。目前优选“m”＝1和“n”：＝12(C₁-C₁₂烷基)。目前更优选“m”＝1和“n”＝6(C₁-C₆烷基)。烷基基团的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异-丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、叔戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、和十二烷基。

    本发明的烷基基团可以是被取代的或未被取代的。在被取代时，取代基团可以是独立地选自环烷基、芳基、杂芳基、脂肪族杂环基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳硫基、氰基、卤代、氧代、羰基、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰胺基、N-酰胺基、S-磺酰胺基、N-磺酰胺基、C-羧基、O-羧基、异氰酸根合、硫氰酸根合、异硫氰酸根合、硝基、甲硅烷基、三卤代甲烷磺酰基、-NR^aR^b、被保护的羟基、被保护的氨基、被保护的羧基和被保护的酰胺基基团的一个或多个基团。

    被取代的烷基基团的实例包括但不限于2-氧代-丙-1-基、3-氧代-丁-1-基、氰基甲基、硝基甲基、氯甲基、羟基甲基、四氢吡喃基氧基甲基、间-三苯甲基氧基甲基、丙酰基氧基甲基、氨基甲基、羧基甲基、烯丙基氧基羰基甲基、烯丙基氧基羰基氨基甲基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、叔丁氧基甲基、乙酰氧基甲基、氯甲基、溴甲基、碘甲基、三氟甲基、6-羟基己基、2，4-二氯丁基、2-氨基丙基、1-氯乙基、2-氯乙基、1-溴乙基、2-氯乙基、1-氟乙基、2-氟乙基、1-碘乙基、2-碘乙基、1-氯丙基、2-氯丙基、3-氯丙基、1-溴丙基、2-溴丙基、3-溴丙基、1-氟丙基、2-氟丙基、3-氟丙基、1-碘丙基、2-碘丙基、3-碘丙基、2-氨基乙基、1-氨基乙基、N-苯甲酰基-2-氨基乙基、N-乙酰基-2-氨基乙基、N-苯甲酰基-1-氨基乙基和N-乙酰基-1-氨基乙基。

    在本文中使用时，“烯基”是指在直链或支链烃链中包含一个或多个双键的烷基基团。烯基基团的实例包括但不限于乙烯基(CH₂＝CH-)、烯丙基(CH₃CH＝CH₂-)、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基；1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基，和己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基、十一碳烯基和十二碳烯基的各种异构体。

    本发明的烯基基团可以是未被取代的或被取代的。在被取代时，取代基可以选自于上面关于烷基基团取代所公开的相同基团。被取代的烯基基团的实例包括但不限于苯乙烯基、3-氯-丙烯-1-基、3-氯-丁烯-1-基、3-甲氧基-丙烯-2-基、3-苯基-丁烯-2-基和1-氰基-丁烯-3-基。

    在本文中使用时，“炔基”是指在直链或支链烃链中包含一个或多个三键的烷基基团。。

    本发明的炔基基团可以是未被取代的或被取代的。在被取代时，取代基可以选自于上面关于烷基基团取代所公开的相同基团。

    在本文中使用时，“环烷基”是指完全饱和(不含双键)的烃环。本发明的环烷基基团可为C₃-C₈。环烷基基团可以是未被取代的或被取代的。如果被取代，则取代基可以选自于上面关于烷基基团取代所指出的那些。“环烷基”可以由两个或更多个稠环(共享两个相邻碳原子的环)构成。在环烷基为稠环系统时，则与分子的其余部分连接的环为上述定义的环烷基。稠环系统中的其它环可以是环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、或脂肪族杂环基。

    在本文中使用时，“环烯基”是指在环中包含一个或多个双键的环烷基基团，但是，如果存在有不止一个双键，它们不能在环中形成完全离域的π电子系统(否则，该基团将是本文中定义的“芳基”)。本发明的环烯基基团可以是未被取代的或被取代的。在被取代时，取代基可以选自于上面关于烷基基团取代所公开的相同基团。“环烯基”可以由两个或更多个稠环(共享两个相邻碳原子的环)构成。在环烯基为稠环系统时，则与分子的其余部分连接的环为上述定义的环烯基。稠环系统中的其它环可以是环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、或脂肪族杂环基。

    术语“亚烷基”是指本文定义的烷基基团是双游离基并且连接于两个其它部分。由此，亚甲基(-CH₂-)、亚乙基(-CH₂CH₂-)、亚丙基(-CH₂CH₂CH₂-)、亚异丙基(-CH₂-CH(CH₃)-)、和亚异丁基(-CH₂-CH(CH₃)-CH₂-)是亚烷基的非限制性实例。类似地，术语“亚环烷基”是指本文中定义的环烷基基团以类似方式结合于两个其它部分。如果烷基和环烷基基团包含不饱和的碳，则使用术语“亚烯基”和“亚环烯基”。

    在本文中使用时，“酰基”是指“RC(＝O)O-”。酰基基团的实例包括但不限于甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、特戊酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基、壬酰基、癸酰基、十一烷酰基、十二烷酰基和苯甲酰基。目前优选的酰基基团是乙酰基和苯甲酰基。

    本发明的酰基基团可以是未被取代的或被取代的。在被取代时，取代基可以选自于上面关于烷基基团取代所公开的相同基团。被取代的酰基基团的实例包括但不限于4-苯基丁酰基、3-苯基丁酰基、3-苯基丙酰基、2-环己烷基乙酰基、环己烷羰基、2-呋喃甲酰基和3-二甲基氨基苯甲酰基。

    在本文中使用时，“芳基”是指具有完全离域的π电子系统的碳环(全碳环)。“芳基”可以由两个或更多个稠环(共享两个相邻碳原子的环)构成。在芳基为稠环系统时，则与分子的其余部分连接的环具有完全离域的π电子系统。稠环系统中的其它环可以具有或者没有完全离域的π电子系统。芳基基团的实例包括但不限于苯、萘和薁。

    在本文中使用时，“杂芳基”是指在环中包含一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子并且具有完全离域的π电子系统的环。“杂芳基”基团可以由两个或更多个稠环(共享两个相邻碳原子的环)构成。在杂芳基为稠环系统时，则与分子的其余部分连接的环具有完全离域的π电子系统。稠环系统中的其它环可以具有或者没有完全离域的π电子系统。杂芳基环的实例包括但不限于呋喃、噻吩、酞嗪酮(phthalazinone)、吡咯、恶唑、噻唑、咪唑、吡唑、异恶唑、异噻唑、三唑、噻二唑、吡喃、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、和三嗪。

    在本文中使用时，“杂环烷基”、“脂族杂环”、或“脂肪族杂环基”是指在环系统中具有一个或多个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的环。所述环还可以包含一个或多个双键，条件是，它们不在环中形成完全离域的π电子系统。本发明的脂肪族杂环基基团可以是未被取代的或被取代的。在被取代时，取代基可以是一个或多个独立地选自卤素、羟基、被保护的羟基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、酰基、酰基氧基、羧基、被保护的羧基、氨基、被保护的氨基、羧酰胺、被保护的羧酰胺、烷基磺酰胺基和三氟甲烷磺酰胺基的基团。“杂环烷基”基团可以由两个或更多个稠环(共享两个相邻碳原子的环)构成。在杂环烷基为稠环系统时，则与分子的其余部分连接的环为上述定义的杂环烷基。稠环系统中的其它环可以是环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、或脂族杂环。

    在本文中使用时，“苯基烷基”是指共价键合于本文中定义的烷基基团的苯基环。苯基烷基基团的非限制性实例包括但不限于苄基、2-苯基乙基、1-苯基丙基、4-苯基己基、3-苯基戊基和3-苯基-2-甲基丙基。目前优选的苯基烷基基团是其中苯基基团共价键合于一个目前优选的烷基基团的那些。本发明的苯基烷基基团可以是未被取代的或被取代的。被取代的苯基烷基基团的实例包括但不限于2-苯基-1-氯乙基、2-(4-甲氧基苯基)乙基、4-(2，6-二羟基苯基)己基、2-(5-氰基-3-甲氧基苯基)戊基、3-(2，6-二甲基苯基)丙基、4-氯-3-氨基苄基、6-(4-甲氧基苯基)-3-羧基(正己基)、5-(4-氨基甲基苯基)-3-(氨基甲基)戊基和5-苯基-3氧代-戊-1-基。

    在本文中使用时，“杂芳基烷基”和“脂肪族杂环基烷基”是指共价键合于本文中定义的烷基基团的杂芳基或脂肪族杂环基基团。这种基团的实例包括但不限于2-吡啶基乙基、3-吡啶基丙基、4-呋喃基己基、3-哌嗪基戊基和3-吗啉基丁基。目前优选的杂芳基烷基和脂肪族杂环基烷基基团是其中本文中公开的目前优选的杂芳基或脂肪族杂环基基团共价键合于目前优选的烷基基团的那些。

    在本文中使用时，“苯基”是指6元的芳基基团。苯基基团可以是未被取代的或被取代的。在被取代时，取代基是一个或多个、优选一个或两个独立地选自卤素、羟基、被保护的羟基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、酰基、酰基氧基、羧基、被保护的羧基、羧基甲基、被保护的羧基甲基、羟基甲基、被保护的羟基甲基、-NR^aR^b(其中R^a和R^b是如上定义的，但是另外R^a可以是本文中定义的氨基保护基)、羧酰胺、被保护的羧酰胺、N-烷基羧酰胺、被保护的N-烷基羧酰胺、N，N-二烷基羧酰胺、三氟甲基、N-烷基磺酰基氨基、N-(苯基磺酰基)氨基和苯基(导致形成联苯基基团)的基团。

    被取代的苯基基团的实例包括但不限于2、3或4-氯苯基、2，6-二氯苯基、2，5-二氯苯基、3，4-二氯苯基、2、3或4-溴苯基、3，4-二溴苯基、3-氯-4-氟苯基、2、3和4-氟苯基、2、3或4-羟基苯基、2，4-二羟基苯基、其被保护的-羟基衍生物、2、3或4-硝基苯基；2、3或4-氰基苯基；2、3或4-甲基苯基、2，4-二甲基苯基、2、3或4-(异-丙基)苯基、2、3或4-乙基苯基、2、3或4-(正丙基)苯基、2，6-二甲氧基苯基、2、3或4-甲氧基苯基、2、3或4-乙氧基苯基、2、3或4-(异丙氧基)苯基、2、3或4-(叔丁氧基)苯基、3-乙氧基-4-甲氧基苯基；2、3或4-三氟甲基苯基；2、3或4-羧基苯基或2，4-二(被保护的羧基)苯基；2、3、或4-(被保护的羟基甲基)苯基或3，4-二(羟基甲基)苯基；2、3或4-(氨基甲基)苯基或2，4-(被保护的氨基甲基)苯基；和2、3或4-(N-(甲基磺酰基氨基))苯基。

    在本文中使用时，“苯基烷氧基”是指“苯基烷基-O-”基团，其中“苯基”和“烷基”如本文中定义。本发明的苯基烷氧基基团在苯基环上、在烷基基团中、或在其二者中可以为被取代的或未被取代的。苯基烷氧基基团的实例包括但不限于2-(4-羟基苯基)乙氧基、4-(4-甲氧基苯基)丁氧基、(2R)-3-苯基-2-氨基-丙氧基、(2S)-3-苯基-2-氨基-丙氧基、2-茚满氧基、6-苯基-1-己氧基、肉桂基氧基、2-苯基-1-丙氧基和2，2-二甲基-3-苯基-1-丙氧基。

    在本文中使用时，“卤代”和“卤素”是指氟、氯、溴或碘原子。优选的卤素为氯和氟。

    在本文中使用时，“氨基保护基”是指通常用于在试剂与分子的意向目标官能团反应时保持(即，″阻断″或″保护″)氨基基团免于与试剂反应的基团。

    在本文中使用时，“被保护的羧酰胺”是指其中氮被氨基保护基取代的羧酰胺。

    氨基保护基的实例包括但不限于甲酰基(“For”)、三苯甲基、苯二酰亚氨基、三氯乙酰基、氯乙酰基、溴乙酰基、碘乙酰基基团、叔丁氧基羰基(“Boc”)、2-(4-联苯基)丙基-2-氧基羰基(“Bpoc”)、2-苯基丙基-2-氧基羰基(“Poc”)、2-(4-联苯基)异丙氧基羰基、1，1-二苯基乙基-1-氧基羰基、1，1-二苯基丙基-1-氧基羰基、2-(3，5-二甲氧基苯基)丙基-2-氧基羰基(“Ddz”)、2-(对-甲苯基)丙基-2-氧基羰基、环戊烷基氧基羰基、1-甲基环戊烷基氧基羰基、环己烷基氧基-羰基、1-甲基环己烷基氧基羰基、2-甲基环己烷基氧基羰基、2-(4-甲苯基磺酰基)-乙氧基羰基、2-(甲基磺酰基)乙氧基羰基、2-(三苯膦基)-乙氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基(“Fmoc”)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙基氧基羰基、1-(三甲基甲硅烷基甲基)丙-1-烯基氧基羰基、5-苯并异恶唑基甲氧基羰基、4-乙酰氧基苄基-氧基羰基、2，2，2-三氯乙氧基羰基、2-乙炔基-2-丙氧基羰基、环丙基-甲氧基羰基、异冰片基氧基羰基、1-哌啶基氧基羰基、苄基氧基羰基(“Cbz”)、4-苯基苄基氧基羰基、2-甲基苄基氧基-羰基、-2，4，5，-四甲基苄基氧基羰基(“Tmz”)、4-甲氧基苄基氧基-羰基、4-氟苄基氧基羰基、4-氯苄基氧基羰基、3-氯苄基氧基羰基、2-氯苄基氧基羰基、2，4-二氯苄基-氧基羰基、4-溴苄基氧基羰基、3-溴苄基氧基羰基、4-硝基苄基氧基-羰基、4-氰基苄基氧基羰基、4-(癸基氧基)苄基氧基羰基、苯甲酰基甲基磺酰基、二硫杂琥珀酰基(dithiasuccinoyl)(“Dts”)、2-(硝基)苯基亚磺酰基(“Nps”)、和二苯基-膦氧化物。所用的氨基保护基的种类不是关键，只要经过衍生化的氨基基团对随后的反应条件是稳定的并且可以在合适的点除去而不破坏分子的其余部分即可。目前优选的氨基保护基是Boc、Cbz和Fmoc。这些和其它氨基保护基的描述可以在T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“Protective Groups in Organic Synthesis，”第二版，John Wiley and Sons，New York，N.Y.，1991，Chapter 7；M.Bodanzsky，“Principles of Peptide Synthesis，”第一和第二修订版，Springer-Verlag，New York，N.Y.，1984和1993；和Stewart和Young，“Solid Phase Peptide Synthesis，”第二版，Pierce Chemical Co.，Rockford，Ill.，1984中找到。

    在本文中使用时，术语“羧基保护基”是指通常用于在化合物上的其它官能团上进行反应时阻断或保护羧酸的不稳定的酯。羧基保护基的实例包括但不限于叔丁基、4-硝基苄基、4-甲氧基苄基、3，4-二甲氧基苄基、2，4-二甲氧基苄基、2，4，6-三甲氧基苄基、2，4，6-三甲基苄基、五甲基苄基、3，4-亚甲二氧基苄基、二苯甲基、4，4’-二甲氧基三苯甲基、4，4’，4”-三甲氧基三苯甲基、2-苯基丙基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苯甲酰甲基、2，2，2-三氯乙基、-(三甲基甲硅烷基)乙基、-(二(正丁基)甲基甲硅烷基)乙基、对甲苯磺酰基乙基、4-硝基苄基磺酰基乙基、烯丙基、肉桂基、和1-(三甲基甲硅烷基甲基)-丙烯基。所用的酯不是关键，只要其对随后的反应条件是稳定的并且可以在合适的点除去而不破坏分子的其余部分即可。羧基保护基的另外的实例在E.Haslam，“Protective Groups in Organic Chemistry，”J.G.W.McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，N.Y.，1973，Chapter 5；和T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“Protective Groups in Organic Synthesis，”2nd ed.，John Wileyand Sons，New York，N.Y.，1991，Chapter 5中找到。

    在本文中使用时，“羟基保护基”是指代替羟基基团的氢的容易裂解掉的基团，诸如但不限于四氢吡喃基、2-甲氧基丙基、1-乙氧基乙基、甲氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基、甲硫基甲基、叔丁基、叔戊基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、4，4’-二甲氧基三苯甲基、4，4’，4”-三甲氧基三苯甲基、苄基、烯丙基、三甲基甲硅烷基、(叔丁基)二甲基甲硅烷基、和2，2，2-三氯乙氧基羰基。羟基保护基的种类不是关键，只要经过衍生化的羟基基团对随后的反应条件是稳定的并且可以在合适的点除去而不破坏分子的其余部分即可。羟基保护基的另外的实例由C.B.Reese和E.Haslam，“Protective Groups in Organic Chemistry，”J.G.W.McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，N.Y.，1973，Chapters 3和4；和T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“Protective Groups in Organic Synthesis，”2nd ed.，John Wiley and Sons，New York，N.Y.，1991，Chapters 2和3描述。

    在本文中使用时，“烷硫基”是指“烷基-S-”基团，其中烷基如上述定义。烷硫基基团的实例包括但不限于甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基、和叔丁硫基。

    在本文中使用时，“烷基亚硫酰基”是指“烷基-SO-”基团，其中烷基如上述定义的。烷基亚硫酰基基团的实例包括但不限于甲基亚硫酰基、乙基亚硫酰基、正丙基亚硫酰基、异丙基亚硫酰基、正丁基亚硫酰基和仲丁基亚硫酰基。

    在本文中使用时，“烷基磺酰基”是指“烷基-SO₂-”基团。烷基磺酰基基团的实例包括但不限于甲基磺酰基、乙基磺酰基、正丙基磺酰基、异丙基磺酰基、正丁基磺酰基、和叔丁基磺酰基。

    在本文中使用时，“苯硫基”、“苯基亚硫酰基”、和“苯基磺酰基”是指“苯基-S-”、“苯基-SO-”、和“苯基-SO₂-”基团，其中苯基如本文中定义。

    在本文中使用时，“烷基氨基羰基”是指“烷基NHC(＝O)-”基团，其中烷基如本文中定义。烷基氨基羰基基团的实例包括但不限于甲基氨基羰基、乙基氨基羰基、丙基氨基羰基和丁基氨基羰基。被取代的烷基氨基羰基的实例包括但不限于甲氧基甲基-氨基羰基、2-氯乙基氨基羰基、2氧代丙基氨基羰基和4-苯基丁基氨基羰基。

    在本文中使用时，“烷氧基羰基”是指“烷基-OC(＝O)-”基团，其中烷基如上述定义。

    在本文中使用时，“苯基氨基羰基”是指“苯基-NHC(＝O)-”基团，其中苯基如上述定义。被取代的苯基氨基羰基基团的实例包括但不限于2-氯苯基-氨基羰基、3-氯苯基氨基羰基、2-硝基苯基氨基羰基、4-联苯基氨基羰基、和4-甲氧基苯基氨基羰基。

    在本文中使用时，“烷基氨基硫代羰基”是指“烷基-NHC(＝O)-”基团，其中烷基如上述定义。烷基氨基硫代羰基基团的实例包括但不限于甲基氨基硫代羰基、乙基氨基硫代羰基、丙基氨基硫代羰基和丁基氨基硫代羰基。

    烷基取代的烷基氨基硫代羰基基团的实例包括但不限于甲氧基甲基氨基硫代羰基、2-氯乙基氨基硫代羰基、2氧代丙基氨基硫代羰基和4-苯基丁基氨基硫代羰基。

    在本文中使用时，“苯基氨基硫代羰基”是指“苯基-NHC(＝S)-”基团，其中苯基如上述定义的。苯基氨基硫代羰基基团的实例包括但不限于2-氯苯基氨基硫代羰基、3-氯苯基-氨基硫代羰基、2-硝基苯基氨基硫代羰基、4-联苯基氨基硫代羰基和4-甲氧基苯基氨基硫代羰基。

    在本文中使用时，“氨甲酰基”是指“-NCO-”基团。

    在本文中使用时，“羟基”是指“-OH”基团。

    在本文中使用时，“氰基”是指“-C≡N”基团。

    在本文中使用时，“硝基”是指“-NO₂”基团。

    “O-羧基”基团是指“RC(＝O)O-”基团，其中R如上述定义。

    “C-羧基”基团是指“-C(＝O)OR”基团，其中R如上述定义。

    “乙酰基”基团是指CH₃C(＝O)-基团。

    “三卤代甲烷磺酰基”基团是指“X₃CSO₂-”基团，其中X为卤素。

    “异氰酸根合”基团是指“-NCO”基团。

    “硫氰酸根合”基团是指“-CNS”基团。

    “异硫氰酸根合”基团是指“-NCS”基团。

    “亚硫酰基”基团是指“-S(＝O)-R”基团，其中R如上述定义。

    “S-磺酰胺基”基团是指“-SO₂NR”基团，其中R如上述定义。

    “N-磺酰胺基”基团是指“RSO₂NH-”基团，其中R如上述定义。

    “三卤代甲烷磺酰胺基”基团是指“X₃CSO₂NR-”基团，其中X为卤素，和R如上述定义。

    “O-氨基甲酰基”基团是指“-OC(＝O)-NR”基团，其中R如上述定义。

    “N-氨基甲酰基”基团是指“ROC(＝O)NH-”基团，其中R如上述定义。

    “O-硫代氨基甲酰基”基团是指“-OC(＝S)-NR”基团，其中R如上述定义。

    “N-硫代氨基甲酰基”基团是指“ROC(＝S)NH-”基团，其中R如上述定义。

    “C-酰胺基”基团是指“-C(＝O)-NR^aR^b基团，其中R^a和R^b如上述定义。

    “N-酰胺基”基团是指RC(＝O)NH-基团，其中R如上述定义。

    术语“全卤代烷基”是指烷基基团，其中所有的氢原子都被卤素原子代替。

    在本文中使用时，“酯”是指“-C(O)OR^a”基团，其中R^a如本文中定义。

    在本文中使用时，“酰胺”是指“-C(O)NR^aR^b”基团，其中R^a和R^b如本文中定义。

    通过使用本领域技术人员公知的技术，本文中化合物上的任何未被取代的或被单取代的胺基团可以转化为酰胺，任何羟基基团可以被转化为酯，而任何羧基基团可以被转化为酰胺或酯(参见例如，Greene和Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3rd Ed.，John Wiley&Sons，New York，NY，1999)。包含任何这种经过转化的羟基、氨基和/或羧酸基团的化合物在本发明范围内。

    在本文中使用时，“醚”是指“-C-O-C-”基团，其中任一个或两个碳可以独立地为烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或脂肪族杂环基基团的一部分。

    在本文中使用时，“卤代醚”是指其中氧的任一侧的基团都是被卤素取代的烷基的醚。

    在本文中使用时，“氨基酸”是指二十种天然存在的L-氨基酸中的任一种、它们的非天然的D-对映异构体、非天然存在的氨基酸诸如但不限于正亮氨酸(“Nle”)、正缬氨酸(“Nva”)、L-或D-萘丙氨酸、鸟氨酸(“Orn”)、高精氨酸(homoArg)，以及肽领域中公知的其它氨基酸，诸如在M.Bodanzsky，“Principles of Peptide Synthesis，”1st和2ndrevised ed.，Springer-Verlag，New York，N.Y.，1984和1993；和Stewart和Young，“Solid Phase Peptide Synthesis，”2nd ed.，Pierce Chemical Co.，Rockford，Ill中描述的那些。

    氨基酸在本文中以其完整化学名称、它们的三字母代码、或它们的单字母代码来表示，都是本领域技术人员公知的。除非明确地指定氨基酸的手性或明确地表明氨基酸是天然存在的(即，L-)氨基酸，否则氨基酸可以是D或L或二者的外消旋混合物。

    在本文中使用时，“官能化的树脂”是指已经附加有官能团的任何树脂。这种官能化的树脂是本领域技术人员公知的，包括但不限于用氨基、烷基卤素、甲酰基或羟基基团官能化的树脂。可用作用于固定化固相合成的固相支持体的官能化树脂的实例是本领域中公知的，并且包括但不限于4-甲基二苯甲基胺-共聚(苯乙烯-1％二乙烯基苯)(MBHA)、4-羟基甲基苯氧基甲基-共聚(苯乙烯-1％二乙烯基苯)、4-氧基甲基-苯基-乙酰胺基-共聚(苯乙烯-1％二乙烯基苯)(Wang)、4-(氧基甲基)-苯基乙酰胺基甲基(Pam)、和得自Rapp Polymere Gmbh的Tentagel^TM、三烷氧基-二苯基-甲基酯-共聚(苯乙烯-1％二乙烯基苯)(RINK)，全部都是可商业购得的。基于本文的公开内容，可用于合成本发明化合物的其它官能化树脂对于本领域技术人员来说变得显而易见。所有这样的树脂都在本发明范围内。

    当两个取代基与它们所连接的碳原子合起来形成五元或六元的任选地被取代的碳环或任选地被取代的杂环，或者形成六元的任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基时，则意味着以下结构：

    

    可以代表例如以下结构：

    

    其中X为杂原子。

    在本公开中，当特定的化合物包括手性中心时，本公开的范围还包括包含两种对映异构体的外消旋混合物的组合物、以及分别地包含每种对映异构体并基本上不含另一种对映异构体的组合物。因此，例如，本文中考虑了包含S对映异构体并基本上不含R对映异构体的组合物、或包含R对映异构体并基本上不含S对映异构体的组合物。“基本上不含”意思是该组合物包含低于10％、或低于8％、或低于5％、或低于3％、或低于1％的次要对映异构体。如果特定的化合物包括不止一个手性中心，本公开的范围还包括包含各种非对映体的混合物的组合物、以及包含每种非对映体并基本上不含其它非对映体的组合物。对于化合物不涉及其任何特定非对映体的列举包括包含所有四种非对映体的组合物、包含R，R和S，S异构体的外消旋混合物的组合物、包含R，S和S，R异构体的外消旋混合物的组合物、包含R，R对映异构体并基本上不含其它非对映体的组合物、包含S，S对映异构体并基本上不含其它非对映体的组合物、包含R，S对映异构体并基本上不含其它非对映体的组合物、以及包含S，R对映异构体并基本上不含其它非对映体的组合物。

    在式I的化合物存在互变异构体时，本发明包括任何可能的互变异构体及其药学可接受的盐、及其混合物，除非明确地绘出或陈述不是这样。本发明的公开内容和权利要求以已知的化学结合的一般原理为基础。应该理解，权利要求不包括基于文献已知是不稳定的或不能够存在的结构。

     化合物

    在一个方面中，本文中公开了式I的化合物，或其药学可接受的盐、酯、酰胺、或前体药物，

    

    其中

    n为0或1；

    R₁为-OR₈或卤素；

    R₂选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、和氰基；

    R₃选自任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、-CR₉R₁₀R₁₁、和-CR₉R₁₀-C(＝O)OR₁₂；

    R₄为氢或-OR₈；

    R₈选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、和任选地被取代的芳基；

    R₉和R₁₀各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、和任选地被取代的芳基；

    R₁₁选自任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基；

    R₁₂选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基；和

    i)X₁为硫；

    R₅不存在；

    X₂和X₃都是碳；

    R₆和R₇与它们所连接的碳原子合起来形成下式的环

    

    R₁₃和R₁₄各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、-OR₈、和氰基；

    R₁₅和R₁₆各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、全卤代烷基、-OR₈、-NO₂、-N(R₈)₂、-NHC(＝O)R₈、-NH(SO₂)Ar、-(CR₉R₁₀)_m-S(＝O)-(CR₉R₁₀)_p-R₈、-(CR₉R₁₀)_m-S(＝O)₂-(CR₉R₁₀)_p-R₈、和氰基，其中Ar为任选地被取代的芳基，和m和p各自独立地为0-10，包含端值；和

    键a为单键和键b

    为双键；或

    ii)X₁为氧；

    R₅不存在；

    X₂和X₃都是碳；

    R₆选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、和-OR₈；

    R₇选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、和-SO₂-Ar，其中Ar为任选地被取代的芳基；或

    R₆和R₇与它们所连接的碳原子合起来形成任选地被取代的苯基；和

    键a为单键和键b为双键；或

    iii)X₁为碳和X₂与X₃都是氮；

    R₅选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基；

    R₆不存在；

    R₇选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、和-SO₂-Ar，其中Ar为任选地被取代的芳基；和

    键a为单键和键b为双键。

    在另一个方面中，本文中公开了式I的化合物，或其药学可接受的盐、酯、酰胺、或前体药物，

    

    其中

    n为0或1；

    R₁为-OR₈或卤素；

    R₂选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、和氰基；

    R₃选自任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、-CR₉R₁₀R₁₁、和-CR₉R₁₀-C(＝O)OR₁₂；

    R₄为氢或-OR₈；

    X₁选自氧、硫、和碳；

    R₅选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基、

    条件是，X₁为氧或硫时R₅不存在；

    X₂和X₃各自独立地为氮或碳，

    条件是，X₁、X₂、和X₃中的至少一个为碳；

    R₆选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、和-OR₈；

    R₇选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、和-SO₂-Ar，其中Ar为任选地被取代的芳基；或

    X₂和X₃都是碳，并且R₆和R₇与它们所连接的碳原子合起来形成下式的环

    

    其中

    R₁₃和R₁₄各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、-OR₈、和氰基；和

    R₁₅和R₁₆各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、全卤代烷基、-OR₈、-NO₂、-N(R₈)₂、-NHC(＝O)R₈、-NH(SO₂)Ar、-(CR₉R₁₀)_m-S(＝O)-(CR₉R₁₀)_p-R₈、-(CR₉R₁₀)_m-S(＝O)₂-(CR₉R₁₀)_p-R₈、和氰基，其中Ar为任选地被取代的芳基，和m和p各自独立地为0-10，包含端值；

    R₈选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、和任选地被取代的芳基；

    R₉和R₁₀各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、和任选地被取代的芳基；

    R₁₁选自任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基；

    R₁₂选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基；和

    键a和键b都是单键或双键，使得X₁、X₂、和X₃与R₅-R₇一起具有完整的八隅体。

    在一些实施方案中，R₁选自氟、氯、溴、和碘。在这些实施方案的一些中，R₁为氯。

    在某些实施方案中，R₁为-OR₈和R₈选自氢、和任选地被取代的烷基。在这些实施方案的一些中，R₈选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、和叔丁基。

    在一些实施方案中，R₂选自氢、任选地被取代的烷基、氟、氯、溴、碘、和氰基。在这些实施方案的一些中的烷基基团选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、和叔丁基。在一些实施方案中，R₂选自氢、甲基、氯、溴、和氰基。

    在一些实施方案中，R₃为任选地被取代的芳基，其可以是任选地被取代的苯基。在一些实施方案中，R₃为苯基。在其它实施方案中，R₃为任选地被取代的杂芳基，其可以是任选地被取代的吡啶基。在一些实施方案中，R₃为吡啶基。

    在其它实施方案中，R₃为-CR₉R₁₀R₁₁。在这些实施方案的一些中，R₉选自氢、任选地被取代的烷基、和任选地被取代的芳基。在一些实施方案中，R₉为氢。在一些实施方案中，R₁₀选自氢、任选地被取代的烷基、和任选地被取代的芳基。在一些实施方案中，R₁₀为氢或甲基。上述实施方案的烷基基团可以选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、和叔丁基。

    在一些实施方案中，R₁₁为任选地被取代的芳基，其可以是任选地被取代的苯基。在一些实施方案中，R₁₁为苯基。在其它实施方案中，R₁₁为任选地被取代的杂芳基，其可以是任选地被取代的吡啶基或任选地被取代的四唑基。在一些实施方案中，R₁₁为吡啶基，而在其它实施方案中，R₁₁为1H-四唑-5-基。在这些实施方案的某一些中，R₁₁为[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基。

    在其它实施方案中，R₃为-CR₉R₁₀-C(＝O)OR₁₂。在一些实施方案中，R₉和R₁₀如上述定义。在一些实施方案中，R₁₂为氢或任选地被取代的烷基，其中所述烷基可以选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、和叔丁基。在一些实施方案中，R₁₂为氢或甲基。

    在一些实施方案中，R₄为-OR₈且R₈可以选自氢、和任选地被取代的烷基。在这些实施方案的某一些中，R₈选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、和叔丁基。在一些实施方案中，R₄为氢或羟基。

    在一些实施方案中，X₁为氧和R₅不存在，而在其它实施方案中，X₁为碳和R₅选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、和任选地被取代的芳基。在这些实施方案中的烷基可以选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、和叔丁基。

    在其它实施方案中，X₁为碳，和R₅为氢。

    在一些实施方案中，X₂为氮和R₆选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、和任选地被取代的芳基，其中所述烷基可以选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、和叔丁基。在这些实施方案的一些中，X₂为氮和R₆为氢。

    在其它实施方案中，X₂为碳和R₆选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、和任选地被取代的芳基，其中所述烷基可以选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、和叔丁基。在这些实施方案的一些中，X₂为碳和R₆为氢或苯基。

    在一些实施方案中，X₃为氮和R₇选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、和-SO₂-Ar，其中所述烷基可以选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、和叔丁基。在这些实施方案的一些中，芳基为苯基。在其它实施方案中，杂芳基为吡啶基。在另外的实施方案中，Ar为苯基。在一些实施方案中，R₇选自氢、苯基、吡啶基、和-SO₂-C₆H₅。在其它实施方案中，X₃为碳和R₇如上述定义。在这些实施方案的一些中，X₃为碳和R₇为氢或苯基。

    一些实施方案涉及上述的式I的化合物，其中

    

    选自

    

    

    在式I的化合物的一些实施方案中，X₁为氧；R₅不存在；X₂和X₃都是碳；和R₆和R₇与它们所连接的碳原子合起来形成任选地被取代的苯基。

    在式I的化合物的其它实施方案中，X₁为硫；R₅不存在；X₂和X₃都是碳；和R₆和R₇与它们所连接的碳原子合起来形成下式的环

    

    其中R₁₃-R₁₆如本文中定义。

    在一些实施方案中，R₁₃选自氢、卤素、任选地被取代的烷基、和任选地被取代的芳基。在这些实施方案的一些中，R₁₃为氢。在其它实施方案中，R₁₃选自氟、氯、溴、和碘。在一些实施方案中，R₁₄选自氢、卤素、任选地被取代的烷基、和任选地被取代的芳基。在这些实施方案的一些中，R₁₄为氢。在其它实施方案中，R₁₄选自氟、氯、溴、和碘。

    在一些实施方案中，R₁₆选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的芳基、和-(CR₉R₁₀)_m-S(＝O)₂-(CR₉R₁₀)_p-R₈。在这些实施方案的一些中，m为0。在其它实施方案中，m为1。在一些实施方案中，p为0，而在其它实施方案中，p为1。在这些实施方案的一些中，每个R₉独立地选自氢、任选地被取代的烷基、和任选地被取代的芳基。在一些实施方案中，每个R₉独立地为氢。在一些实施方案中，每个R₁₀独立地选自氢、任选地被取代的烷基、和任选地被取代的芳基。在一些实施方案中，每个R₁₀独立地为氢。在其它实施方案中，R₈为任选地被取代的烷基，其中所述烷基可以选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、和叔丁基。在一些实施方案中，R₁₆为氢。在其它实施方案中，R₁₆为-S(＝O)₂-CH₂CH₃。

    在一些实施方案中，R₁₅选自氢、卤素、全卤代烷基、-OR₈、-NO₂、-N(R₈)₂、-NHC(＝O)R₈、和-NH(SO₂)Ar。

    在这些实施方案的一些中，卤素选自氟、氯、溴、和碘。在某些实施方案中，R₁₅为氟。在一些实施方案中，所述全卤代烷基选自全氟烷基、全氯烷基、全溴烷基、和全碘烷基。“全卤代烷基”意思是指其中通常存在于所述烷基上的所有氢原子都被卤素代替的烷基部分。因此，例如，全氯烷基为其中未与分子的其余部分连接的所有碳原子都连接于氯原子的烷基部分。在这些实施方案的一些中，全卤代烷基取代基的烷基部分选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、和叔丁基。在某些实施方案中，R₁₅为三氟甲基。

    在其它实施方案中，R₁₅为-OR₈。在这些实施方案的一些中，R₈选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、和叔丁基。在某些实施方案中，R₁₅为-OH。

    在一些实施方案中，R₁₅为-N(R₈)₂，其中每个R₈独立地选自氢、任选地被取代的甲基、任选地被取代的乙基、任选地被取代的正丙基、任选地被取代的异丙基、任选地被取代的正丁基、任选地被取代的仲丁基、和任选地被取代的叔丁基。在这些实施方案的一些中，R₁₅选自-NH₂、-NH(CH₃)、-NH(CH₂CH₃)、-NH(CH₂-C₆H₅)、-N(CH₃)₂、-N(CH₂CH₃)₂、和-NⁱPr₂(-N(CH(CH₃)₂)₂)。

    在一些实施方案中，R₁₅为-NH(SO₂)Ar，其中Ar为任选地被取代的苯基。在这些实施方案的一些中，R₁₅为-NH(SO₂)-C₆H₅。

    在一些实施方案中，R₁₅为-NHC(＝O)R₈。在这些实施方案的一些中，R₈为任选地被取代的烷基，其中所述烷基可以选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、和叔丁基。在一些实施方案中，R₁₅为-NHC(＝O)CH₃。

    在一些实施方案中，R₁₅为-(CR₉R₁₀)_m-S(＝O)-(CR₉R₁₀)_p-R₈。在这些实施方案的一些中，m为0。在其它实施方案中，m为1。在一些实施方案中，p为0，而在其它实施方案中，p为1。在这些实施方案的一些中，每个R₉独立地选自氢、任选地被取代的烷基、和任选地被取代的芳基。在一些实施方案中，每个R₉独立地为氢。在一些实施方案中，每个R₁₀独立地选自氢、任选地被取代的烷基、和任选地被取代的芳基。在一些实施方案中，每个R₁₀独立地为氢。在一些实施方案中，R₈为任选地被取代的芳基。在这些实施方案的一些中，芳基为苯基。在一些实施方案中，R₁₅为-S(＝O)-Ph。

    在一些实施方案中，R₁₅为-(CR₉R₁₀)_m-S(＝O)₂-(CR₉R₁₀)_p-R₈。在这些实施方案的一些中，m为0。在其它实施方案中，m为1。在一些实施方案中，p为0，而在其它实施方案中，p为1。在这些实施方案的一些中，每个R₉独立地选自氢、任选地被取代的烷基、和任选地被取代的芳基。在一些实施方案中，每个R₉独立地为氢。在一些实施方案中，每个R₁₀独立地选自氢、任选地被取代的烷基、和任选地被取代的芳基。在一些实施方案中，每个R₁₀独立地为氢。在一些实施方案中，R₈为任选地被取代的芳基。在这些实施方案的一些中，所述芳基为苯基。在一些实施方案中，R₈为任选地被取代的烷基，其中所述烷基可以选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、和叔丁基。在一些实施方案中，R₁₅选自-S(＝O)₂-CH₂CH₃、-S(＝O)₂-Ph、和-S(＝O)₂-CH₂Ph。

    在式I的化合物的一些实施方案中，R₁₅选自氢、氟、三氟甲基、-OH、-NH₂、-NH(CH₂CH₃)、-NH(CH₂-C₆H₅)、-N(CH₃)₂、-N(CH₂CH₃)₂、-NH(SO₂)-C₆H₅、和-NHC(＝O)CH₃、-S(＝O)-Ph、-S(＝O)₂-CH₂CH₃、-S(＝O)₂-Ph、和-S(＝O)₂-CH₂Ph.。

    在式I的化合物的一些实施方案中，下式的环

    

    选自

    

    

    在另一个方面中，本文中公开了式II的化合物，或其药学可接受的盐、酯、酰胺、或前体药物，

    

    其中

    n为0或1；

    R₁为-OR₈或卤素；

    R₂选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、和氰基；

    R₄为氢或-OR₈；

    X₁选自氧、硫、和碳；

    R₅选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基、

    条件是，X₁为氧或硫时R₅不存在；

    R₉和R₁₀各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、和任选地被取代的芳基；

    R₁₂选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基；

    R₁₃和R₁₄各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、-OR₈、和氰基；和

    R₁₅和R₁₆各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、全卤代烷基、-OR₈、-NO₂、-N(R₈)₂、-NHC(＝O)R₈、-NH(SO₂)Ar、-(CR₉R₁₀)_m-S(＝O)-(CR₉R₁₀)_p-R₈、-(CR₉R₁₀)_m-S(＝O)₂-(CR₉R₁₀)_p-R₈、和氰基，其中Ar为任选地被取代的芳基，和m和p各自独立地为0-10，包含端值。

    在另一个方面中，本文中公开了式III的化合物，或其药学可接受的盐、酯、酰胺、或前体药物，

    

    其中

    n为0或1；

    R₁为-OR₈或卤素；

    R₂选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、和氰基；

    R₄为氢或-OR₈；

    X₁选自氧、硫、和碳；

    R₅选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基、

    条件是，X₁为氧或硫时R₅不存在；

    R₆选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、和-OR₈；

    R₇选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、和-SO₂-Ar，其中Ar为任选地被取代的芳基；

    R₉和R₁₀各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、和任选地被取代的芳基；和

    R₁₂选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基。

    在另一个方面中，本文中公开了式IV的化合物，或其药学可接受的盐、酯、酰胺、或前体药物，

    

    其中

    n为0或1；

    R₁为-OR₈或卤素；

    R₂选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、和氰基；

    R₄为氢或-OR₈；

    X₁选自氧、硫、和碳；

    R₅选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基、

    条件是，X₁为氧或硫时R₅不存在；

    X₂和X₃各自独立地为氮或碳，

    条件是，X₁、X₂、和X₃中的至少一个为碳；

    R₆选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、和-OR₈；

    R₇选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、和-SO₂-Ar，其中Ar为任选地被取代的芳基；

    R₉和R₁₀各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、和任选地被取代的芳基；

    R₁₂选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基；和

    键a和键b是单键或双键，使得X₁、X₂、和X₃与R₅-R₇一起具有完整的八隅体。

    在另一个方面中，本文中公开了式V的化合物，或其药学可接受的盐、酯、酰胺、或前体药物，

    

    其中

    n为0或1；

    R₁为-OR₈或卤素；

    R₂选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、和氰基；

    R₃选自任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、和-CR₉R₁₀R₁₁；

    R₄为氢或-OR₈；

    X₁选自氧、硫、和碳；

    R₅选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、和任选地被取代的杂芳基、

    条件是，X₁为氧或硫时R₅不存在；

    R₁₃和R₁₄各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、-OR₈、和氰基；和

    R₁₅和R₁₆各自独立地选自氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、卤素、全卤代烷基、-OR₈、-NO₂、-N(R₈)₂、-NHC(＝O)R₈、-NH(SO₂)Ar、-(CR₉R₁₀)_m-S(＝O)-(CR₉R₁₀)_p-R₈、-(CR₉R₁₀)_m-S(＝O)₂-(CR₉R₁₀)_p-R₈、和氰基，其中Ar为任选地被取代的芳基，和m和p各自独立地为0-10，包含端值。

    在另一个方面中，本文中公开了选自以下的化合物：

    [(4-羟基-苯并[4，5]呋喃并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(7-羟基-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(7-羟基-2-苯基-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸，

    (S)-2-[(7-羟基-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-丙酸，

    [(4-羟基-1-苯基-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(7-氯-4-羟基-1-苯基-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-4-羟基-8-硝基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    3-(羧基甲基-氨甲酰基)-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-8-基-铵，

    [(1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    (S)-2-[(1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-丙酸，

    (S)-2-[(1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-丙酸，

    [(1-氯-8-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氰基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-苯磺酰基-7-氯-4-羟基-1H-吡咯并[2，3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-苯磺酰基-7-氯-4-羟基-1H-吡咯并[2，3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸甲基酯，

    [(7-氯-4-羟基-1H-吡咯并[2，3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(4-氨基-1-溴-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸(吡啶-3-基甲基)-酰胺，

    [(1-溴-4-氟-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基甲基]-酰胺，

    1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸[1-(4-甲氧基-苄基)-1H-四唑-5-基甲基]-酰胺，

    1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸(吡啶-2-基甲基)-酰胺，

    1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸(1H-四唑-5-基甲基)-酰胺，

    1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸吡啶-2-基酰胺，

    1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸吡啶-3-基酰胺，

    1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸苯基酰胺，

    1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸苄基酰胺，

    [(1-氯-8-二甲基氨基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-8-二乙基氨基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(8-乙酰基氨基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(4-氯-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-羟基-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-6-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-7-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-9-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(4-羟基-1-吡啶-2-基-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(4-羟基-1-甲基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [羟基-(4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-4，8-二羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-4-羟基-7-甲氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-8-羟基-4-甲氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-8-羟基-4-异丙氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-4，7-二羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(7-氟-4-羟基-1-甲基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-8-乙基氨基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(8-苯磺酰基氨基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(8-苄基氨基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-4-羟基-8-三氟甲基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-7-氟-4-羟基-2-氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-4-羟基-8-苯基甲烷磺酰基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(1-氯-8-乙烷磺酰基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(8-苯磺酰基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，

    [(8-苯亚硫酰基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸，和

    或其药学可接受的盐、酯、酰胺、或前体药物。

    在另一个方面中，与其它HIF脯氨酰羟化酶调节剂相比，本文中公开的化合物具有增加或减小的HIF脯氨酰羟化酶效力，结合HIF脯氨酰羟化酶的开放或闭合结构，具有更理想的药代动力学，改善剂量给药时间表，毒性更小，具有更高的HIF PH2选择性(较少的离靶活性)，使HIF调节的基因表达增加或减少到更大或更小的程度，或前述的组合。

     合成

    在另一个方面中，本文公开了合成式I的化合物的方法。本文中公开的一些化合物可以通过普遍接受的有机合成方法来合成，包括以下反应路线1中示出的方法。本领域普通技术人员知道，可以在进行某些反应之前使用各种保护基将一些官能团保护/脱保护。这些保护基的使用是本领域中公知的，如在例如Greene和Wuts，Protective Groupsin Organic Synthesis，3rd Ed.，John Wiley&Sons，New York，N.Y.，1999中所述的，所述文献被全文并入本文作为参考。

    包括芳基羧酸衍生物在内的各种起始原料可以根据各种已知的合成方法来制备。这些化合物中的一些也可以购自试剂的生产商和供应商，诸如Aldrich，Sigma，TCI，Wako，Kanto，Fluorchem，Acros，Abocado，Alfa，Fluka等。

     反应路线1

    式I的化合物的一般合成反应路线

    

    可以根据合成路线1中所示的合成反应路线从邻甲基取代的芳基羧酸来合成式I的化合物。通过常规的酯化方法将羧酸基团转化为酯。将邻甲基基团溴化，然后与具有DMB保护基的甘氨酸酯缩合。进行环化和氧化反应，随后进行与各种胺的偶联反应，导致合成式I的化合物。然后可以在游离基卤化步骤之后通过各种取代反应引入R₁基团。

    可用于合成本文中公开的一些化合物的另一个合成路线显示在以下反应路线2中。本领域技术人员知道如何使用反应路线2中所示的合成方法来合成本文中公开的其它化合物。

     反应路线2

    

    反应路线2中的中间体(I)可以用作起点来合成本文中公开的一些化合物，如反应路线3中所示。

     反应路线3

    式I的化合物的一般合成反应路线

    

    可以通用并用于合成本文中公开的一些化合物的另一个合成反应路线在反应路线4中示出。

     反应路线4

    式I的化合物的一般反应路线

    

    本文中公开的一些化合物可以根据反应路线5中所述的程序合成。

     反应路线5

    

     药物组合物

    在另一个方面中，本文公开了药物组合物，其包含治疗有效量的至少一种式I-V的化合物以及生理学可接受的载体、稀释剂、或赋形剂。

    术语“药物组合物”是指本文中公开的化合物与其它化学组分诸如稀释剂或载体的混合物。药物组合物有助于将化合物施用于对象。本领域中存在多种施用化合物的技术，包括但不限于经口、注射、气雾剂、非肠道、和局部给药。药物组合物还可以通过使化合物与无机酸或有机酸反应而得到，所述无机酸或有机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。

    术语“载体”是指促进所述化合物被结合到细胞或组织中的化合物。例如，二甲基亚砜(DMSO)是通常使用的载体，因为其有助于许多有机化合物被摄取到对象的细胞或组织中。

    术语“稀释剂”是指在水中稀释的化合物，其会溶解目的化合物以及使化合物的生物学活性形式稳定化。溶解于缓冲溶液中的盐在本领域中用作稀释剂。一种通常使用的缓冲溶液为磷酸盐缓冲盐水，因为它模拟人血液中的盐条件。因为缓冲盐可以在低浓度下控制溶液的pH，所以缓冲的稀释剂很少改变化合物的生物活性。

    术语“生理学可接受的”是指不会消除化合物的生物活性和性质和/或对要施用的对象无害的载体或稀释剂。

    本文中所述的药物组合物本身就可以施用于对象，或在它们与其它活性成分(如在联合治疗的情况中)、或适合的载体或赋形剂混合的药物组合物中施用于对象。用于配制和施用本申请的化合物的技术可以在“Remington’s Pharmaceutical Sciences，”Mack Publishing Co.，Easton，PA，18th edition，1990中找到。

    适合的给药途径可以包括例如经口、直肠、经粘膜、或肠内给药；非肠道递送，包括肌肉内、皮下、静脉内髓、内注射，以及鞘内、直接心室内、腹膜内、鼻内或眼球内注射。

    作为选择，化合物可以以局部而不是全身的方式施用，例如通过将化合物直接注射到疼痛区域中，这通常为储剂(depot)或持续释放制剂。此外，可以将药物在靶向药物递送系统中给药，例如在包被有组织特异性抗体的脂质体中给药。所述脂质体会选择性地靶向目标器官并被吸收。

    本文中公开的药物组合物可以通过本身已知的方式来制备，例如，借助于常规的混合、溶解、造粒、制备糖衣丸、粉碎、乳化、包封、包埋、或压片方法。

    因此，依照本公开使用的药物组合物可以使用一种或多种生理学可接受的载体，包括赋形剂和助剂，以常规的方式来配制，所述载体促进将活性化合物制备为可以药学使用的制剂。适当的制剂取决于所选的给药途径。可以使用在本领域中适合的和知晓的任何公知的技术、载体、和赋形剂，例如，在上述Remington’s Pharmaceutical Sciences中的那些。

    对于注射来说，本文中公开的药剂可以在水溶液中配制，优选配制在生理学相容的缓冲液中，例如Hank’s溶液、林格溶液、或生理盐水缓冲液。对于经粘膜给药，在制剂中使用适合于要渗透的屏障的渗透剂。这样的渗透剂是本领域中通常已知的。

    对于口服给药，化合物可以通过将活性化合物与本领域中公知的药学可接受的载体合并来配制。这样的载体使得本文中公开的化合物能够被配制为用于被待治疗的患者口服摄入的片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶剂、糖浆、浆液、悬浮液等。用于口服应用的药物制剂可以如下得到：将一种或多种固体赋形剂与本文中公开的药物组合物混合，任选地研磨所得到的混合物，如果需要的话在加入适合的助剂之后，将混合物加工为颗粒，以获得片剂或糖衣丸的芯。适合的赋形剂具体是填料，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制备物，诸如例如，玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入崩解剂，诸如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、或藻酸或其盐诸如藻酸钠。

    糖衣丸芯提供有适合的包衣。为此，可以使用浓缩的糖溶液，其可以任选地包含阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇、和/或二氧化钛、漆溶液、和适合的有机溶剂或溶剂混合物。可以向片剂或糖衣丸包衣添加染料或颜料，用于鉴定或表征活性化合物剂量的不同组合。

    可以口服使用的药物制剂包括由明胶制成的推入配合式(push-fit)胶囊、以及由明胶和增塑剂例如甘油或山梨醇制成的软的密封胶囊。推入配合式胶囊可以包含与填料例如乳糖、粘结剂例如淀粉、和/或润滑剂例如滑石或硬脂酸镁和任选的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，可以将活性化合物溶解或悬浮在适合的液体中，例如脂肪油、液体石蜡、或液体聚乙二醇。另外，可以加入稳定剂。口服给药的所有制剂应该为适合这样给药的剂量。

    对于经颊给药，组合物可以采取以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。

    对于通过吸入给药，根据本公开使用的化合物方便以气雾剂喷雾的形式从加压的包装或喷雾器递送，所使用的适合的推进剂例如二氯二氟甲烷、三氯氟代甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适合的气体。在加压的气雾剂的情况中，可以通过提供阀来递送计量的量，从而决定单位剂量。用于吸入器或吹入器的例如明胶的胶囊和药筒可以配制为包含化合物和适合的粉末基质例如乳糖或淀粉的粉末混合物。

    化合物可以配制为用于通过注射非肠道给药，例如，通过快速推注或连续输注。注射用制剂可以作为单位剂型存在，例如在安瓿或多剂量容器中，添加有防腐剂。组合物可以采取例如在油性或水性介质中的悬浮液、溶液、或乳液的形式，并且可以包含配制试剂例如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。

    用于非肠道给药的药物制剂包括活性化合物水溶性形式的水溶液。另外，可以将活性化合物的悬浮液制备为适当的油性注射用悬浮液。适合的亲脂性溶剂或介质包括脂肪油例如芝麻油、或合成的脂肪酸酯例如油酸乙酯或甘油三酯、或脂质体。含水的注射悬浮液可以包含增加悬浮液粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨醇、或右旋糖酐。任选地，悬浮液还可以包含适合的稳定剂和/或增加化合物溶解度以允许制备高浓度溶液的试剂。

    或者，活性成分可以是粉末形式，用于在使用之前用适合的介质例如无菌的无热原的水构建。

    化合物还可以配制为直肠用组合物，例如栓剂或保留灌肠剂，例如包含常规的栓剂基质如可可脂或其它甘油酯。

    除了前述的制剂之外，化合物还可以配制为储剂制剂。这种长效制剂可以通过植入(例如，皮下或肌肉内)、或通过肌肉注射给药。因此，例如，化合物可以用适合的聚合物材料或疏水性材料(例如，作为在可接受的油中的乳液)或离子交换树脂配制，或者配制为微溶的衍生物，例如微溶的盐。

    用于本文中公开的疏水性化合物的药用载体为包含苄醇、非极性表面活性剂、与水可互溶的有机聚合物、和水相的共溶剂系统。所使用的通用的共溶剂系统为VPD共溶剂系统，其是3％w/v苄醇、8％w/v非极性表面活性剂Polysorbate 80^TM、和65％w/v聚乙二醇300在无水乙醇中补足体积的溶液。当然，共溶剂系统的比例可以显著变化而不破坏其溶解度和毒性特征。此外，共溶剂组分的组成可以变化：例如，可以使用其它低毒性的非极性表面活性剂代替POLYSORBATE 80^TM；聚乙二醇的分级大小可以变化；其它生物相容的聚合物可以代替聚乙二醇，例如，聚乙烯基吡咯烷酮；和可以使用其它糖或聚糖。

    或者，可以使用用于疏水性药用化合物的其它递送系统。脂质体和乳液是已知用于疏水性药物的递送介质或载体的实例。还可以使用某些有机溶剂诸如二甲基亚砜，尽管通常是以更大的毒性为代价。另外，化合物可以使用持续释放系统递送，例如包含治疗剂的固体疏水性聚合物的半渗透性基质。已经确定了各种持续释放材料并且是本领域技术人员公知的。根据化学性质，持续释放胶囊可以释放化合物达几周直到超过100天。根据治疗剂的化学性质和生物学稳定性，可以使用其它策略来稳定化。

    在本文中公开的药物组合物中使用的许多化合物作为与药学相容的反离子形成的盐提供。药学相容的盐可以与许多酸形成，包括但不限于盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。盐倾向于比相应的游离酸或碱形式更易溶解于含水溶剂或其它质子性溶剂中。

    适合用于本文中公开的方法的药物组合物包括其中包含有效量活性成分以实现其预定目的的组合物。更具体地，治疗有效量是指有效预防、减轻或改善疾病症状或延长所治疗的对象存活的化合物的量。治疗有效量的确定在本领域技术人员的能力范围内，特别是在借鉴本文中提供的发明详述的情况下。

    本文中公开的药物组合物的确切的制剂、给药途径和剂量可以通过个体医生在考虑患者情况下来选择。(参见例如，Fingl等人，1975，“The Pharmacological Basis of Therapeutics”，Ch.1p.1)。典型地，对患者给药的组合物的剂量可为约0.5-1000mg/kg患者体重，或1-500mg/kg，或10-500mg/kg，或50-100mg/kg患者体重。所述剂量可以是在一天或多天过程中，根据患者的需要，仅给一次或或给连续两次或更多次。指出的是，对于本公开中提及的几乎所有的具体化合物来说，已经确定了用于治疗至少一些病况的人用剂量。由此，在大多数情况下，本文中公开的方法将使用那些相同剂量，或介于所确定的人用剂量的约0.1％-500％、或约25％-250％、或50％-100％之间的剂量。在没有确定人用剂量的情况中，这将是对于新发现的药用化合物的情况，适合的人用剂量可以从ED₅₀或ID₅₀值、或者通过在动物中进行的毒性研究和效力研究所要求的体外或体内研究得到的其它合适的值进行推断。

    尽管确切的剂量将基于不同的药物来确定，但是在大多数情况下，可以制订关于剂量的一些通则。成年人类患者的日剂量方案可以是例如本文中公开的药物组合物或以游离碱计算的其药学可接受的盐每种成分0.1mg-500mg的口服剂量，优选1mg-250mg，例如5-200mg，或每种成分0.01mg-100mg之间的静脉内、皮下、或肌肉内剂量，优选每种成分0.1mg-60mg，例如1-40mg，所述组合物每天1-4次给药。作为选择，本文中公开的组合物可以通过连续的静脉输注给药，优选以每种成分最高每天400mg的剂量。因此，每种成分口服给药的总的日剂量典型地为1-2000mg，而非肠道给药的总的日剂量典型地为0.1-400mg。适宜地，化合物的给药持续连续治疗的一段时间，例如一周或更久，或数月或数年。

    可以按个体调节剂量的量和间隔，以提供足以维持调节作用或使有效浓度(MEC)最小化的活性部分血浆水平。MEC对于每种化合物会是不同的，但是可以从体外数据估计得到。实现MEC所需的剂量取决于个体的特征和给药途径。然而，可以使用HPLC分析或生物分析法来确定血浆浓度。

    还可以使用MEC值测定剂量间隔。应该使用保持血浆水平在10-90％、优选30-90％、最优选50-90％的时间比MEC高的方案来施用组合物。

    在局部给药或选择性摄取的情况中，药物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。

    当然，组合物的给药量取决于所治疗的对象、对象的体重、病患的严重程度、给药的方式、和处方医生的判断。

    如果需要，组合物可以作为包装或分配器装置存在，其可以包含一个或多个包含活性成分的单位剂型。包装可以包括例如金属箔或塑料薄片，例如泡罩包装。包装或分配器装置可以附有给药说明书。包装或分配器还可以附有管理药物的生产、使用或销售的政府机构规定形式的与容器相连的通告，该通告反映所述机构批准该药物形式的人用或兽用给药。这种通告可以是例如由美国食品与药物管理局(U.S.Food and Drug Administration)批准用于处方药的标签，或被批准产品的插页。还可以制备在相容的药用载体中配制的包含本文中公开的化合物的组合物，置于适当的容器中，并标注用于治疗的适应症。

     用法

    在本公开和所附的权利要求中，术语“式I的化合物”，“式II的化合物”，“式III的化合物”，“式IV的化合物”，“式V的化合物”，或“式I-V的化合物”的陈述在其范围内包括本文中所述的那些化合物，包括其任何药学可接受的盐、酯、酰胺、或前体药物。

    在另一个方面中，本文公开了控制细胞中HIF表达水平的方法，所述方法包括对细胞施用至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以调节该细胞中的HIF表达水平。类似地，本文公开了控制细胞中HIF表达水平的方法，所述方法包括使细胞接触至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以调节该细胞中的HIF表达水平。

    在施用化合物的环境中的术语“施用”是指制备如本文中讨论的包含要施用的化合物的制剂，并通过任何已知的方法对对象或对细胞施用该制剂。例如，可以将包含化合物的溶液给对象注射，或者添加到包含细胞的培养基中，或者对象口服摄取包含化合物的制剂。术语“接触”是指使对象或细胞与化合物向接触。由此，可以将前体药物的制剂施用于对象，由此前体药物经历代谢。然后代谢产物处于全身循环中或处于细胞质内。在这种情况中，将前体药物“施用”于对象，但是对象和细胞都“接触”的是代谢产物。

    在另一个方面中，本文中公开了控制对象中HIF表达水平的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和给对象施用至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以调节对象中的HIF表达水平。类似地，本文公开了控制对象中HIF表达水平的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和使对象接触至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以调节对象中的HIF表达水平。

    在另一个方面中，本文公开了调节细胞中HIF的量的方法，所述方法包括对细胞施用、或者使细胞接触至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以调节细胞中的HIF的量。类似地，本文公开了调节细胞中HIF的量的方法，所述方法包括对细胞施用、或者使细胞接触至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以调节细胞中的HIF的量。术语“调节”是指化合物改变HIF的水平或浓度的能力。在一些实施方案中，调节剂提高所述水平，或者提高细胞中的HIF浓度。在其它实施方案中，调节剂降低细胞中的HIF的水平或浓度。优选地，所述调节剂提高细胞中的HIF的水平或浓度。

    在另一个方面中，本文公开了抑制细胞中HIFα羟基化的方法，所述方法包括对细胞施用至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以抑制该细胞中的HIFα羟基化。类似地，本文公开了抑制细胞中HIFα羟基化的方法，所述方法包括使细胞接触至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以抑制该细胞中的HIFα羟基化。

    在另一个方面中，本文公开了抑制对象的HIFα羟基化的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和给对象施用至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以抑制对象中的HIFα羟基化。类似地，本文公开了抑制细胞中的HIFα羟基化的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和使对象接触至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以抑制对象中的HIFα羟基化。

    在另一个方面中，本文公开了调节(增加或降低)细胞中HIF调节的基因的表达的方法，所述方法包括对细胞施用至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以调节细胞中HIF调节的基因的表达。类似地，本文公开了调节细胞中HIF调节的基因的表达的方法，所述方法包括使细胞接触至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以调节细胞中HIF调节的基因的表达。

    在另一个方面中，本文公开了调节对象中HIF调节的基因的表达的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和给对象施用至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以调节对象中HIF调节的基因的表达。类似地，本文公开了调节对象中HIF调节的基因的表达的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和使对象接触至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以调节对象中HIF调节的基因的表达。

    在另一个方面中，本文公开了提高细胞中的HIF水平或HIF活性的方法，所述方法包括对细胞施用至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以提高该细胞中的HIF水平或HIF活性。类似地，本文公开了提高细胞中的HIF水平或HIF活性的方法，所述方法包括使细胞接触至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以提高该细胞中的HIF水平或HIF活性。

    在另一个方面中，本文公开了提高对象中的HIF水平或HIF活性的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和给对象施用至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以提高对象中的HIF水平或HIF活性。类似地，本文公开了提高对象中的HIF水平或HIF活性的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和使对象接触至少一种式I-V的化合物，所述化合物的量足以提高对象中的HIF水平或HIF活性。

    在另一个方面中，本文公开了治疗对象中需要调节HIF水平或活性的病症的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和给对象施用治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。类似地，本文公开了治疗对象的HIF相关病症的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和使对象接触治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。HIF相关的病症是指其中调节HIF水平或活性提供治疗作用的病症。

    在一些实施方案中，HIF相关病症选自缺血性病症、缺氧性病症、贫血性病症(包括但不限于，与下述有关的贫血症：自身免疫疾病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、慢性感染诸如但不限于HCV和HIV、炎性肠病、化疗诱导的病症、慢性心脏病、慢性肾病、慢性阻塞性肺病(COPD)、晚期肾病、早产、甲状腺机能减退、营养不良、包括但不限于镰刀形细胞贫血病和β-地中海贫血的血液病症、恶性肿瘤)、心绞痛、神经病症、卒中、癫痫症、神经变性疾病、心肌梗塞、肝脏缺血、肾缺血、慢性肾病、外周血管病症、溃疡、烧伤、慢性伤口、肺栓塞、缺血性再灌注损伤、与手术和器官移植有关的缺血-再灌注损伤、呼吸窘迫综合征、预防早产儿的气管-肺发育不良、肺动脉高压、自身免疫疾病、糖尿病的副作用、糖尿病性视网膜病、黄斑变性、结节病、梅毒、弹性假黄瘤、佩吉特(Paget′s)病、静脉阻塞、动脉阻塞、颈动脉梗塞病、慢性葡萄膜炎/玻璃体炎、分枝杆菌感染、莱姆(Lyme′s)病、系统性红斑狼疮、早产儿的视网膜病、伊尔斯氏(Eales′)病、贝切特氏(Behcet′s)病、引起视网膜炎或脉络膜炎的感染、眼假组织胞浆菌病、贝斯特(Best′s)病、近视、视窝、斯特格(Stargardt′s)病、睫状体平坦部炎、慢性视网膜脱离、高粘滞综合征、弓形体病、创伤和激光治疗后的并发症、与发红有关的疾病、代谢病例如糖尿病、和增殖性玻璃体视网膜病变。

    术语“治疗”不一定是指完全治愈。疾病的任何不利的病征或症状以任何程度的任何减轻或疾病进展的减慢都可以认为是治疗。此外，治疗可以包括可能损害患者的总体宁适感或状态的作用。治疗还可以包括延长患者的生命，即使症状没有减轻、疾病状态没有改善、或者患者的总体宁适感没有改善。

    在另一个方面中，本文公开了治疗对象的病症的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和给对象施用治疗有效量的至少一种式I-V的化合物，其中所述病症选自缺血性病症、缺氧性病症、贫血性病症(包括但不限于，与下述有关的贫血症：自身免疫疾病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、慢性感染诸如但不限于HCV和HIV、炎性肠病、化疗诱导的病症、慢性心脏病、慢性肾病、慢性阻塞性肺病(COPD)、晚期肾病、早产、甲状腺机能减退、营养不良、包括但不限于镰刀形细胞贫血病和β-地中海贫血的血液病症、恶性肿瘤)、心绞痛、神经病症、卒中、癫痫症、神经变性疾病、心肌梗塞、肝脏缺血、肾缺血、慢性肾病、外周血管病症、溃疡、烧伤、慢性伤口、肺栓塞、缺血-再灌注损伤、与手术和器官移植有关的缺血-再灌注损伤、呼吸窘迫综合征、预防早产儿的气管-肺发育不良、肺动脉高压、自身免疫疾病、糖尿病的副作用、糖尿病性视网膜病、黄斑变性、结节病、梅毒、弹性假黄瘤、佩吉特病、静脉阻塞、动脉阻塞、颈动脉梗塞病、慢性葡萄膜炎/玻璃体炎、分枝杆菌感染、莱姆病、系统性红斑狼疮、早产儿视网膜病、伊尔斯病、贝切特病、引起视网膜炎或脉络膜炎的感染、眼假组织胞浆菌病、贝斯特病、近视、视窝、斯特格病、睫状体平坦部炎、慢性视网膜脱离、高粘滞综合征、弓形体病、创伤和激光治疗后的并发症、与发红有关的疾病、代谢病例如糖尿病、和增殖性玻璃体视网膜病变。类似地，本文中公开了治疗对象的病症的方法，包括鉴定有此需要的对象和使对象接触治疗有效量的至少一种式I-V的化合物，其中所述病症选自贫血性病症、神经病症、卒中、创伤、癫痫症、神经变性疾病、心肌梗塞、肝脏缺血、肾缺血、外周血管病症、溃疡、烧伤、慢性伤口、肺栓塞、和缺血-再灌注损伤。

    在另一个方面中，本文公开了抑制修饰HIF的α亚单位的羟化酶活性的方法，所述方法包括使所述酶接触至少一种式I-V的化合物。

    在另一个方面中，本文公开了通过抑制HIFα的羟基化并由此使HIF稳定化和/或调节HIF调节的基因的表达，来调节HIF和/或EPO表达水平的方法。所述方法可用于预防、矫正和治疗与HIF和/或EPO有关的病况，包括贫血症、缺血和缺氧。

    缺血、贫血症和缺氧是与HIF有关的三种病况，并且包括但不限于缺血性病症、缺氧性病症、贫血性病症(包括但不限于与下述有关的贫血症：自身免疫疾病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、慢性感染诸如但不限于HCV和HIV、炎性肠病、化疗诱导的病症、慢性心脏病、慢性肾病、慢性阻塞性肺病(COPD)、晚期肾病、早产、甲状腺机能减退、营养不良、包括但不限于镰刀形细胞贫血病和β-地中海贫血的血液病症、恶性肿瘤)、心绞痛、神经病症、卒中、癫痫症、神经变性疾病、心肌梗塞、肝脏缺血、肾缺血、慢性肾病、外周血管病症、溃疡、烧伤、慢性伤口、肺栓塞、缺血-再灌注损伤、与手术和器官移植有关的缺血-再灌注损伤、呼吸窘迫综合征、预防早产儿的气管-肺发育不良、肺动脉高压、自身免疫疾病、糖尿病的副作用、糖尿病性视网膜病、黄斑变性、结节病、梅毒、弹性假黄瘤、佩吉特病、静脉阻塞、动脉阻塞、颈动脉梗塞病、慢性葡萄膜炎/玻璃体炎、分枝杆菌感染、莱姆病、系统性红斑狼疮、早产儿视网膜病、伊尔斯病、贝切特病、引起视网膜炎或脉络膜炎的感染、眼假组织胞浆菌病、贝斯特病、近视、视窝、斯特格病、睫状体平坦部炎、慢性视网膜脱离、高粘滞综合征、弓形体病、创伤和激光治疗后的并发症、与发红有关的疾病、代谢病症例如糖尿病、和增殖性玻璃体视网膜病变。在一些实施方案中，本文中公开的方法在缺血或缺氧涉及心肌梗塞、卒中、或肾缺血-再灌注损伤时，在缺血或缺氧出现之前/之后或在缺血或缺氧中提供HIFα的稳定化。

    在另一个方面中，本文中公开了使用式I-V的化合物用于治疗各种缺血性相关和/或缺氧性相关病症的方法。在某些实施方案中，本文公开的方法在将化合物在缺血或缺氧出现之前或之后给药时有利于治疗。例如，本文中公开的方法可以在出现心肌梗塞之后降低死亡率和改善心脏结构和性能。

    此外，本文公开了用于治疗肝脏病症的方法，包括在暴露于与肝脏疾病有关的状况和/或药剂之前或之后施用式I-V的化合物。例如，缺氧与肝脏疾病有关，特别是与肝脏毒性化合物诸如乙醇有关的慢性肝病。另外，已知由HIFα调节的基因例如氧化氮合酶和葡萄糖转运蛋白-1的表达在酒精性肝脏疾病中增加了。

    因此，本文中公开了治疗与缺血或缺氧有关的病况的方法，其中所述方法包括给对象施用治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。

    在一些实施方案中，式I-V的化合物在病况发作之后对患者给药，所述病况诸如急性缺血，例如心肌梗塞、肺栓塞、肠梗塞、缺血性卒中、和肾缺血-再灌注损伤。在其它实施方案中，式I-V的化合物在患者确诊患有与慢性缺血有关的病况之后对患者给药，所述病况例如但不限于心源性肝病(cardiachepatopathy)、黄斑变性、肺栓塞、急性呼吸功能障碍、新生儿呼吸窘迫综合征、和充血性心力衰竭。在其它实施方案中，式I-V的化合物在创伤或损伤之后对患者给药。

    在另一个方面中，本文中公开了用本文中公开的化合物治疗处于发展为缺血性或缺氧性病况的风险之中的患者的方法。高风险个体例如包括但不限于动脉粥样硬化患者。动脉粥样硬化中的风险因素包括例如但不限于高脂血症、吸烟、高血压、糖尿病、高胰岛素血症、和内脏肥胖症。因此，本文中公开了预防或减轻缺血组织损伤的方法，其中所述方法包括对有此需要的对象施用治疗有效量的式I-V的化合物。在一些实施方案中，可施用本文中公开的化合物来治疗诸如高血压、糖尿病、闭塞性动脉疾病、慢性静脉机能不全、雷诺氏(Raynaud’s)病、慢性皮肤溃疡、肝病、充血性心力衰竭、和全身性硬化症的病况。

    在一些实施方案中，本文中公开的方法用于刺激受伤组织以及溃疡中的血管生成和/或肉芽组织形成。例如，本文中公开的化合物在创伤愈合过程中在刺激肉芽组织形成方面是有效的。从炎性细胞、血小板、和活化内皮分泌生长因子刺激成纤维细胞和内皮细胞移位和肉芽组织生长。本文中公开的方法在刺激肉芽组织形成方面是有效的。因此，本文中公开了治疗例如患有由于梗塞引起的组织损伤的患者、患有由创伤导致的损伤的患者、或患有由诸如糖尿病的病症引起慢性损伤或溃疡的患者的方法。本文中公开的方法包括对有此需要的对象施用治疗有效量的式I-V的化合物。

    在另一个方面中，本文中公开了通过使用本文中公开的化合物预先治疗对象，以减少或预防与缺血或缺氧有关的组织损伤发展的方法。本文中公开的方法在将化合物在缺血或缺氧出现之前给药时有利于治疗。例如，在诱导心肌梗塞之前施用本文中公开的化合物时，则本文中公开的方法降低死亡率并显著地改善心脏结构和性能。另外，在将本文中公开的化合物在缺血再灌注损伤出现之前和/或过程中给药时，本文中公开的方法提供与肾衰竭有关的治疗作用。

    因此，本文中公开了用于预先治疗对象以减少或预防与缺血或缺氧有关的组织损伤的方法，所述方法包括对患有缺血性病症的患者，例如有心肌梗塞病史的那些患者，或患有严重缺血的症状例如心绞痛的患者，施用治疗有效量的本文中公开的化合物。在一些实施方案中，本文中公开的化合物可以对处于与可能的缺血有关的状况例如全身麻醉下、或临时在高海拔处工作的人给药。在其它实施方案中，本文中公开的化合物可用于器官移植过程，在将器官移植到接受者体内之前，用本文中公开的化合物事先处理器官供体以维持已经从供体取出的器官。

    在另一个方面中，本文中公开了用于调节对象的血管生成的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和给对象施用治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。类似地，本文中公开了用于调节对象的血管生成的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和使对象接触治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。

    在另一个方面中，本文中公开了用于使对象的缺血组织血管化的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和给对象施用治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。类似地，本文中公开了使对象中的缺血组织血管化的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和使对象接触治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。

    在另一个方面中，本文中公开了用于促进皮肤移植置换物生长的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和给对象施用治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。类似地，本文中公开了用于促进皮肤移植置换物生长的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和使对象接触治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。

    在另一个方面中，本文中公开了用于在引导组织再生(GTR)术的情况中促进组织修复的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和给对象施用治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。类似地，本文中公开了用于在引导组织再生(GTR)术的情况中促进组织修复的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和使对象接触治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。

    在另一个方面中，本文中公开了用于治疗对象的贫血症的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和给对象施用或使对象接触治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。类似地，本文中公开了用于治疗对象的贫血症的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和给对象施用或使对象接触治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。

    在另一个方面中，本文中公开了用于调节对象的贫血症的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和给对象施用治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。类似地，本文中公开了用于调节对象的贫血症的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和使对象接触治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。

    在另一个方面中，本文中公开了用于预防对象的贫血症的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和对对象施用治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。类似地，本文中公开了用于预防对象的贫血症的方法，所述方法包括鉴定有此需要的对象和使对象接触治疗有效量的至少一种式I-V的化合物。

    本文中公开了用于提高内源性促红细胞生成素(EPO)水平的方法。这些方法可以在体内或体外使用，例如，用于细胞培养-控制培养基(cellculture-controlled medium)。另外，本文中公开了用于提高内源性EPO水平以预防、矫正或治疗诸如卒中患者的与EPO水平不足有关的或其中提高EPO有利的状况、与贫血症和神经病症有关的病况例如帕金森氏病的方法。与EPO水平降低有关的病况包括贫血症、病症诸如急性或慢性肾病、糖尿病、癌症、溃疡、急性或慢性感染例如病毒感染如HIV、细菌感染或寄生虫感染；炎性病症、自身免疫疾病、恶性肿瘤、严重的创伤包括热创伤，等等。这些病况通常是在对象中导致贫血症的那些。此外，本文中公开的方法可用于治疗与治疗方法诸如放射治疗、化疗、透析或手术有关的贫血症。与贫血症有关的病症的其它实例包括在诸如小红细胞性贫血、低色性贫血、再生障碍性贫血等病症中发现的异常的血红蛋白和/或血细胞水平。

    本文中公开的方法可用于在对象经历预防或某些治疗方法中提高内源性EPO水平。实例包括正在用叠氮胸苷(齐多夫定)或其它逆转录酶抑制剂治疗的HIV感染的贫血对象，接受周期性的含顺铂或不含顺铂的化疗的患者，计划进行外科手术的贫血或非贫血患者。提高内源性EPO水平的方法可用于预防、预先治疗或治疗与神经损伤神经组织退化有关的EPO相关病况，包括但不限于卒中、创伤、癫痫症、脊髓损伤、和神经变性病症。

    另外，本文中公开的方法可用于减少计划进行手术诸如关节置换术的贫血或非贫血患者对异源输血的需要，或者有助于通过提高内源性EPO水平在手术之前进行自体血液采集。这些方法会减少与非自体输血有关危险，诸如但不限于传染性疾病的传播。

    本文中公开的方法还可以用于增强体能，改善锻炼能力，和助长或增强需氧调节。这些方法可以例如用于运动员来帮助他们的训练，以及用于军事人员来改善体力和耐力。

    本文中公开的方法可用于提高体内处理的动物血清中和体外培养的细胞的培养基中的内源性促红细胞生成素水平。尽管肾是促红细胞生成素的主要体内源，但是可以刺激包括脑、肝脏和骨髓在内的其它器官以产生促红细胞生成素。本文中公开的方法可用于增加包括脑、肾脏、和肝脏在内的各种器官中的内源性促红细胞生成素的表达。

    本文中公开的方法可用于在用本文中公开的化合物体内处理的动物中提高细胞容积和血红蛋白水平。通过本文中公开的化合物的作用提高血液中的血浆EPO、细胞容积和血红蛋白水平，对所施用的化合物的量是敏感的。因此，有可能建立治疗方案来产生本文中公开的化合物的均匀和受控的作用水平。

    用本文中公开的化合物处理的动物的血液中的细胞容积和血红蛋白的增加引起在血液中循环的未成熟的血细胞(网状细胞)增多。因此，本文公开了本文中公开的化合物用于增加血液中网状细胞水平的应用。

    实施例

     实施例1：[(1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸的合成

     a)3-甲基-苯并[b]噻吩-2-甲酸甲基酯

    将亚硫酰氯(15g，26mmol)加入到甲醇(100ml)中，并将3-甲基-苯并[b]噻吩-2-甲酸(5g，26.0mmol)溶解，回流4小时，然后蒸发，得到目标化合物3-甲基-苯并[b]噻吩-2-甲酸甲基酯(5.10g，24.7mmol)。

     b)3-溴甲基-苯并[b]噻吩-2-甲酸甲基酯

    将3-甲基-苯并[b]噻吩-2-甲酸甲基酯(0.200g，0.969mmol)溶解于苯，并加入NBS(0.173g，0.972mmol)和催化量的过氧化苯甲酰，回流3小时，冷却到室温，减压蒸发以除去溶剂，然后柱色谱法纯化，得到目标化合物3-溴甲基-苯并[b]噻吩-2-甲酸甲基酯(0.248g，0.870mmol)。

     c)3-{[(2，4-二甲氧基-苄基)-乙氧基羰基甲基-氨基]-甲基}-苯并[b]噻吩-2-甲酸甲基酯

    将3-溴甲基-苯并[b]噻吩-2-甲酸甲基酯(1.60g，5.61mmol)溶解于苯，加入(2，4-二甲氧基-苄基氨基)-乙酸甲基酯(1.56g，6.16mmol)和碳酸钾(0.853g，61.6mmol)，搅拌12小时，用乙酸乙酯稀释，用NH₄Cl水溶液洗涤，干燥，然后硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂：n-Hex/EtOAC/DCM)，得到目标化合物(2.30g，5.19mmol)。

     d)2-(2，4-二甲氧基-苄基)-4-氧代-1，2，3，4，4a，9b-六氢-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸乙基酯

    将3-{[(2，4-二甲氧基-苄基)-乙氧基羰基甲基-氨基]-甲基}-苯并[b]噻吩-2-甲酸甲基酯(2.29g，5.16mmol)溶解于无水THF，并在干冰/丙酮浴中冷却，并在氮气的存在下滴加1M叔丁醇钾的THF溶液(10.3ml)30分钟，然后室温搅拌2小时。向得到的反应溶液加入1N HCl，用EtOAc提取，用MgSO₄干燥，然后蒸发，得到目标化合物(1.12g，2.72mmol)。

     e)4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸乙基酯

    2-(2，4-二甲氧基-苄基)-4-氧代-1，2，3，4，4a，9b-六氢-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸乙基酯(0.917g，2.23mmol)溶解于无水二氯甲烷(16ml)中，加入亚硫酰氯(0.25ml)，室温搅拌4小时，用碳酸氢钠水溶液中和，然后用二氯甲烷提取。得到的提取物用硫酸镁干燥，然后硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂：Hex/EtOAc)，得到目标化合物(0.974g，3.56mmol)。

     f)1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸乙基酯

    4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸乙基酯(0.380g，1.47mmol)溶解于苯，加入NCS(0.196g，1.47mmol)和过氧化苯甲酰(35.5mg，0.147mmol)，回流12小时，减压蒸发以除去溶剂，然后硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂：Hex/EtOAc)，得到目标化合物(0.730g，2.49mmol)。

     g)[(1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

    1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸乙基酯(95.0mg，0.324mmol)溶解于0.5M s甲醇钠的甲醇溶液(36.5ml)，在微波反应器中在120℃反应10分钟，用1M HCl酸化，然后硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂：DCM/MeOH)，得到目标化合物(31.4mg，0.104mmol)。

     实施例2：[(7-羟基-3-苯基-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸

     a)4-溴-3-甲基-呋喃-2-甲酸甲基酯

    将3-甲基-呋喃-2-甲酸甲基酯(2.24g，16.0mmol)溶解于乙腈(48ml)，加入NBS(2.84g，16.0mmol)，室温搅拌14小时，然后硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂：Hex/EtOAc)，得到目标化合物和产物混合物(1.53g)。

     b)4-溴-3-溴甲基-呋喃-2-甲酸甲基酯

    将前述制备的4-溴-3-甲基-呋喃-2-甲酸甲基酯(1.53g)溶解于苯(21ml)，加入NBS(1.51g，8.50mmol)和过氧化苯甲酰(0.206g，0.850mmol)，回流15小时，冷却到室温，减压蒸发以除去溶剂，然后柱色谱法纯化，得到4-溴-3-溴甲基-呋喃-2-甲酸甲基酯的混合物(1.96g)。

     c)4-溴-3-{[(2，4-二甲氧基-苄基)-甲氧基羰基甲基-氨基]-甲基}-呋喃-2-甲酸甲基酯

    将4-溴-3-溴甲基-呋喃-2-甲酸甲基酯的混合物(1.96g)溶解于苯(22ml)，并加入(2，4-二甲氧基-苄基氨基)-乙酸甲基酯(2.13g，10.2mmol)和碳酸钾(1.45g，10.2mmol)，搅拌12小时，用乙酸乙酯稀释，用NH₄Cl水溶液洗涤，干燥，然后硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂：n-Hex/EtOAC)，得到目标化合物4-溴-3-{[(2，4-二甲氧基-苄基)-甲氧基羰基甲基-氨基]-甲基}-呋喃-2-甲酸甲基酯(0.238g，0.522mmol)和3-{[(2，4-二甲氧基-苄基)-甲氧基羰基甲基-氨基]-甲基}-呋喃-2-甲酸甲基酯(1.25g，3.32mmol)。

     d)3-{[(2，4-二甲氧基-苄基)-甲氧基羰基甲基-氨基]-甲基}-4-苯基-呋喃-2-甲酸甲基酯

    将4-溴-3-{[(2，4-二甲氧基-苄基)-甲氧基羰基甲基-氨基]-甲基}-呋喃-2-甲酸甲基酯(0.160g，0.350mmol)，苯基硼酸(85.2mg，0.699mmol)，Pd(dppf)Cl2(17.1mg，21.0umol)，DPPF(11.6mg，21.0umol)，和磷酸钾(81.6mg，0.385mmol)溶解于DMF(2ml)，在100℃反应15小时，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，然后硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂：Hex/EtOAc)，得到3-{[(2，4-二甲氧基-苄基)-甲氧基羰基甲基-氨基]-甲基}-4-苯基-呋喃-2-甲酸甲基酯(0.103g，0.226mmol)，为浅黄色油状物。

     e)5-(2，4-二甲氧基-苄基)-7-氧代-3-苯基-4，5，6，7-四氢-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-甲酸甲基酯

    将3-{[(2，4-二甲氧基-苄基)-甲氧基羰基甲基-氨基]-甲基}-4-苯基-呋喃-2-甲酸甲基酯(0.103g，0.226mmol)溶解于无水THF(5ml)并在干冰/丙酮浴中冷却，在氮气的存在下滴加1M叔丁醇钾的THF溶液(0.452ml)30分钟，然后室温搅拌2小时。向得到的反应溶液加入1NHCl，并将得到的混合物用EtOAc提取，用MgSO₄干燥，蒸发，得到目标化合物(71.0mg，0.169mmol)。

     f)7-羟基-3-苯基-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-甲酸甲基酯

    将5-(2，4-二甲氧基-苄基)-7氧代-3-苯基-4，5，6，7-四氢-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-甲酸甲基酯(71.0mg，0.169mmol)溶解于无水二氯甲烷，并加入亚硫酰氯，室温搅拌3小时，用碳酸氢钠水溶液中和，然后用二氯甲烷提取。所得到的提取物用硫酸镁干燥，然后硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂：Hex/EtOAc)，得到目标化合物(27.6mg，0.103mmol)。

     g)[(7-羟基-3-苯基-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸

    将7-羟基-3-苯基-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-甲酸甲基酯(10.9mg，40.5umol)和甘氨酸(30.4mg，0.405mmol)溶解于0.5M甲醇钠的甲醇溶液中，在CEM微波反应器中在120℃反应10分钟，用1M HCl氧化(oxidified)，然后硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂：DCM/MeOH)，得到目标化合物(1.27mg，4.07umol)。

     实施例3：分析数据

    使用上述方法合成的最终目标化合物的分析数据列举如下。

     [(4-羟基-苯并[4，5]呋喃并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.41(s，1H)，8.96(s，1H)，8.27(bs，1H)，7.82(bs，1H)，7.62(d，1H，J＝6.9Hz)，7.49(bs，1H)，4.00(s，2H)。m/z＝286.9(M+H)

     [(4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.43(s，1H)，9.22(s，1H)，8.59(bs，1H)，8.192(bs，1H)，7.63(bs，2H)，4.03(s，2H)。m/z＝303.0(M+H)

     [(1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

    1H NMR(300MHz，CD₃OD)δ8.96(m，1H)，8.09(m，1H)，7.65(m，2H)，4.12(s，2H)

     [(7-羟基-3-苯基-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.34(s，1H)，8.97(s，1H)，8.71(bs，1H)，8.46(bs，1H)，7.95(bs，2H)，7.59-7.54(m，3H)，3.77(s，2H)。m/z＝313.1(M+H)

     [(4-羟基-苯并[4，5]呋喃并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.41(s，1H)，8.96(s，1H)，，8.27(bs，1H)，7.82(bs，1H)，7.62(d，1H，J＝6.9Hz)，7.49(bs，1H)，4.00(s，2H)。m/z＝287(M+H)

     [(4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.43(s，1H)，9.22(s，1H)，，8.59(bs，1H)，8.192(bs，1H)，7.63(bs，2H)，4.03(s，2H)。m/z＝303(M+H)

     [(1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.96(m，1H)，8.09(m，1H)，7.65(m，2H)，4.12(s，2H)。m/z＝338(M+H)

     [(7-羟基-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δ8.37(s，1H)，8.02(s，1H)，7.05(s，1H)，4.14(s，1H)。m/z＝237(M+H)

     [(7-羟基-2-苯基-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.34(s，1H)，8.97(s，1H)，，8.71(bs，1H)，8.46(bs，1H)，7.95(bs，2H)，7.59-7.54(m，3H)，3.77(s，2H)。m/z＝313(M+H)

     (S)-2-[(7-羟基-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-丙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.19(宽峰，1H)，8.54(m，1H)，8.25(m，1H)，7.20(m，1H)，4.46(m，1H)，1.45(d，3H)。m/z＝251(M+H)

     [(4-羟基-1-苯基-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δ8.66(s，1H)，8.46(s，1H)，7.79(d，J＝6.9Hz，2H)，7.63(t，J＝6.9Hz，2H)，7.49(t，J＝6.9Hz，1H)，4.16(s，2H)。m/z＝313(M+H)

     [(7-氯-4-羟基-1-苯基-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δ8.50(s，1H)，7.61-7.48(m，5H)，4.14(s，2H)。m/z＝348(M+H)

     [(1-氯-4-羟基-8-硝基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.55(s，1H)，9.40(s，1H)，8.52(m，2H)，4.03(d，2H，J＝6.0)。m/z＝383(M+H)

     3-(羧基甲基-氨甲酰基)-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-8-基-铵

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.41(br s，2H)，8.33(s，1H)，8.00(d，1H，J＝8.7)，7.21(q，1H)，4.11(d，2H，J＝5.7)。m/z＝353(M+H)

     [(1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.36(s，1H)，9.12-9.09(m，1H)，8.30-8.27(m，1H)，7.77-7.69(m，2H)，4.03(d，J＝6.0Hz，2H)。m/z＝382(M+H)

     (S)-2-[(1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-丙酸

     ¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δ8.97(m，1H)，8.10(m，1H)，7.69～7.65(m，2H)，4.66(q，1H)，1.59(d，3H)。m/z＝352(M+H)

     (S)-2-[(1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-丙酸

     ¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δ9.12(d，1H)，8.05(d，1H)，7.67～7.62(m，2H)，4.67(q，1H)，1.60(d，3H)。m/z＝396(M+H)

     [(1-氯-8-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.76(s，1H)，8.53(d，1H，J＝9.3)，8.26(m，1H)，7.60(m，1H)，3.97(d，2H，J＝4.5)。m/z＝356(M+H)

     [(1-氰基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.65(s，1H)，8.80(s，1H)，8.396(s，1H)，7.83(m，2H)，4.07(s，2H)。m/z＝328(M+H)

     [(1-苯磺酰基-7-氯-4-羟基-1H-吡咯并[2，3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.24(宽峰，1H)，8.16(m，1H)，7.92(d，2H，J＝7.5)，7.77(m，1H)，7.64(m，2H)，7.09(d，1H，J＝3.6)，3.83(d，2H，J＝4.8)。m/z＝411(M+H)

     [(1-苯磺酰基-7-氯-4-羟基-1H-吡咯并[2，3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸甲基酯

     ¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ12.22(s，1H)，8.04(d，2H，J＝3.9)，7.83(d，2H，J＝5.7)，7.64(m，1H)，7.52(m，2H)，7.01(d，1H，J＝3.9)，4.21(d，2H，J＝5.7)，3.77(s，3H)。m/z＝425(M+H)

     [(7-氯-4-羟基-1H-吡咯并[2，3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.52(s，1H)，7.59(m，1H)，7.25(m，2H)，2.90(d，2H)。m/z＝271(M+H)

     [(4-氨基-1-溴-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.16(d，J＝7.8Hz，1H)，8.06(d，J＝7.8Hz，1H)，7.65-7.63(m，2H)，4.14(s，2H)。m/z＝381(M+H)

     1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸(吡啶-3-基甲基)-酰胺

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.88(s，1H)，9.10-9.07(m，1H)，8.60(s，1H)，8.46(s，1H)，8.27-8.24(m，1H)，7.79-7.67(m，3H)，7.38-7.34(m，1H)，4.57(d，J＝6.3Hz，2H)。m/z＝415(M+H)

     [(1-溴-4-氟-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.07(d，1H，J＝8.7)，8.88(s，1H)，8.24(d，1H，J＝8.4)，7.72(m，2H)，3.96(d，2H，J＝6.0)。m/z＝384(M+H)

     1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基甲基]-酰胺

     ¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ12.40(s，1H)，8.41(s，1H)，7.95(s，1H)，7.65-7.56(m，2H0，7.36(d，J＝8.7Hz，2H)，6.89(d，J＝8.7Hz，2H)，5.70(s，2H)，4.94(d，J＝6Hz，2H)，3.79(s，3H)。m/z＝526(M+H)

     1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸[1-(4-甲氧基-苄基)-1H-四唑-5-基甲基]-酰胺

     ¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ12.04(s，1H)，9.19-9.15(m，1H)，8.26(s，1H)，8.01-7.98(m，1H)，7.67-7.63(m，2H)，7.15(d，J＝8.7Hz，2H)，6.76(d，J＝8.7Hz，2H)，5.68(s，2H)，4.91(d，J＝6.3Hz，2H)，3.58(s，3H)。m/z＝526(M+H)

     1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸(吡啶-2-基甲基)-酰胺

     ¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ9.20-9.17(m，1H)，8.85(s，1H)，8.66(s，1H)，8.00-7.96(m，1H)，7.90(s，1H)，7.41(s，1H)，4.95(s，2H)。m/z＝415(M+H)

     1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸(1H-四唑-5-基甲基)-酰胺

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.84(s，1H)，9.11(d，J＝7.2Hz，1H)，8.29(d，J＝7.2Hz，1H)，7.77-7.71(m，2H)，4.85(d，J＝5.7Hz，2H)。m/z＝406(M+H)

     1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸吡啶-2-基酰胺

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.12(d，J＝8.7Hz，1H)，8.44(d，J＝4.2Hz，1H)，8.30(d，J＝6.6Hz，1H)，8.18(d，J＝7.8Hz，1H)，7.94(t，J＝7.5Hz，1H)，7.77-7.74(m，2H)，7.28-7.24(m，1H)。m/z＝401(M+H)

     1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸吡啶-3-基酰胺

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.09(m，1H)，8.92(s，1H)，8.32(s，1H)，8.23-8.20(m，2H)，7.69-7.66(m，2H)，7.43-7.38(m，1H)。m/z＝401(M+H)

     1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸苯基酰胺

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ10.85(s，1H)，9.14(d，J＝8.7Hz，1H)，8.30(d，J＝8.7Hz，1H)，7.83(d，J＝7.8Hz，2H)，7.76-7.74(m，2H)，7.42(t，J＝7.5Hz，2H)，7.21(t，J＝7.2Hz，1H)。m/z＝400(M+H)

     1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸苄基酰胺

     ¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ9.18-9.15(m，1H)，8.21(s，1H)，8.00-7.97(m，1H)，7.66-7.61(m，2H)，7.41-7.33(m，5H)，4.70(d，J＝6.3Hz，2H)。m/z＝414(M+H)

     [(1-氯-8-二甲基氨基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

    1H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.31(s，1H)，8.18(s，1H)，8.00(d，1H)，7.28(d，1H)，3.99(s，2H)，3.04(s，6H)。m/z＝381(M+H)

     [(1-氯-8-二乙基氨基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.31(s，1H)，8.15(s，1H)，7.75(d，1H)，7.11(m，1H)，4.08(s，2H)，3.60～3.42(m，4H)，1.26～1.17(m，6H)。m/z＝409(M+H)

     [(8-乙酰基氨基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ12.98(br，1H)，10.33(s，1H)，9.37(s，2H)，8.18(d，1H)，7.90(d，1H)，4.04(d，2H)，2.13(s，3H)。m/z＝395(M+H)

     [(4-氯-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-羟基-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ11.80(s，1H)，9.26(m，1H)，8.98(m，2H)，8.40(m，2H)，8.28(m，1H)，3.80(m，2H)。m/z＝338(M+H)

     [(1-氯-6-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δ8.78(d，1H)，7.64(m，1H)，7.44(t，1H)，4.12(s，2H)。m/z＝356(M+H)

     [(1-氯-7-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ13.09(s，1H)，9.33(t，1H，J＝6.，3Hz)，8.39(dd，1H，J＝2.4Hz，9.0Hz)，8.25(dd，1H，J＝2.1Hz，9.3Hz)，7.59(m，1H)4.01(s，2H)。m/z＝356(M+H)

     [(1-氯-9-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ12.91(s，1H)，9.33(t，J＝6.0Hz，1H)，8.10(d，J＝8.1Hz，1H)，7.78-7.71(m，1H)，7.51-7.44(m，1H)，4.02(d，J＝6Hz，2H)。m/z＝356(M+H)

     [(4-羟基-1-吡啶-2-基-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.55(s，1H)，9.27(s，1H)，8.73(s，1H)，8.64(d，J＝4.8Hz，1H)，8.11-8.04(m，2H)，7.46-7.42(m，1H)，4.01(d，J＝5.7Hz，2H)。m/z＝314(M+H)

     [(4-羟基-1-甲基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.30(s，1H)，8.48(s，1H)，8.23(s，1H)，7.66(s，2H)，4.01(d，J＝4.8Hz，2H)，3.04(s，3H)。m/z＝317(M+H)

     [羟基-(4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ13.42(s，1H)，8.73(s，1H)，8.51(d，J＝6.9Hz，1H)，7.90(d，J＝6.9Hz，1H)，7.56-7.47(m，2H)，4.49(s，2H)。m/z＝319(M+H)

     [(1-氯-4，8-二羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ10.03(s，1H)，9.38(s，1H)，8.28(d，J＝1.8Hz，1H)，8.03(d，J＝8.7Hz，1H)，7.19(dd，J＝8.7Hz和2.4Hz，1H)，4.01(d，J＝6.3Hz，2H)。m/z＝354(M+H)

     [(1-氯-4-羟基-7-甲氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ13.03(s，1H)，12.78(s，1H)，9.24(s，1H)，8.75(d，J＝9Hz，1H)，7.87(d，J＝2.1Hz，1H)，7.28(dd，J＝9.3Hz和2.1Hz，1H)，4.02(d，J＝5.7Hz，2H)3.90(s，3H)。m/z＝368(M+H)

     [(1-氯-8-羟基-4-甲氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δ8.35(d，J＝2.1Hz，1H)，7.86(d，J＝8.7Hz，1H)，7.18(dd，J＝2.1Hz和0.9Hz，1H)，4.17(s，2H)，4.11(s，3H)。m/z＝368(M+H)

     [(1-氯-8-羟基-4-异丙氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δ8.36(d，J＝2.4Hz，1H)，7.85(d，J＝8.7Hz，1H)，7.18(dd，J＝8.4Hz和2.4Hz，1H)，4.12(s，2H)，1.38(s，3H)，1.36(s，3H)。m/z＝396(M+H)

     [(1-氯-4，7-二羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ12.9-12.6(br s，1H)，10.42(s，1H)，9.31(s，1H)，8.68(d，J＝9.0Hz，1H)，7.54(s，1H)，7.14(dd，J＝8.7Hz和2.4Hz，1H)，4.00(d，J＝6.3Hz，1H)。m/z＝354(M+H)

     [(1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ13.2-12.8(br s，2H)，9.40(s，1H)，8.72(d，J＝9Hz，1H)，7.86(s，1H)，7.25(dd，J＝9.3Hz和2.1Hz，1H)，4.82-4.78(m，1H)，4.00(d，J＝6Hz，2H)，1.34(s，3H)，1.32(s，3H)。m/z＝396(M+H)

     [(7-氟-4-羟基-1-甲基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.26(s，1H)，8.49(s，1H)，8.19(d，J＝7.5Hz，1H)，7.53(m，1H)，3.96(s，1H)，3.02(s，3H)。m/z＝335(M+H)

     [(1-氯-8-乙基氨基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ13.01(s，1H)，9.25(t，J＝6.0Hz，1H)，7.99(d，J＝2.1Hz，1H)，7.90(d，J＝9.0Hz，1H)，7.06(m，1H)，4.02(d，J＝6.3Hz，2H)，3.15(q，J＝7.2Hz，2H)，1.23(t，J＝7.2Hz，3H)。m/z＝381(M+H)

     [(8-苯磺酰基氨基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.43-9.26(m，1H)，8.70(s，1H)，8.14(d，J＝8.7，1H)，7.83(d，J＝8.2，2H)，7.55(d，J＝7.3，3H)，7.43(d，J＝8.7，1H)，4.02(d，J＝6.1，2H)。m/z＝493(M+H)

     [(8-苄基氨基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.42-9.25(m，1H)，8.01-7.80(m，3H)，7.49-7.17(m，5H)，7.09(d，J＝8.7，1H)，4.39(d，J＝5.6，2H)，3.99(d，J＝6.0，2H)。m/z＝443(M+H)

     [(1-氯-4-羟基-8-三氟甲基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.54(brs，1H)，9.11(s，1H)，8.56(d，J＝8.4Hz，1H)，8.07(d，J＝8.4Hz，1H)，4.02(d，J＝6Hz，2H)。m/z＝406(M+H)

     [(1-氯-7-氟-4-羟基-2-氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

    1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：12.96(s，1H)，9.58(s，1H)，8.70(dd，1H，J＝4.2Hz，4.5Hz)，8.26(d，1H，J＝4.8Hz)，7.77(m，1H)，4.99(d，2H，J＝6Hz)。m/z＝371(M+H)

     [(1-氯-4-羟基-8-苯基甲烷磺酰基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d6)13.00(brs，1H)，9.44(s，1H)，8.99(s，1H)，8.54(d，J＝8.4Hz，1H)，8.01(d，J＝8.4Hz，1H)，7.30-7.16(m，5H)，4.79(s，2H)，4.03(d，J＝6.3Hz，2H)

     [(1-氯-8-乙烷磺酰基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d6)13.01(brs，1H)，9.58(s，1H)，9.31(s，1H)，8.59(d，J＝8.4Hz，1H)，8.18(d，J＝8.4Hz，1H)，4.03(d，J＝5.4Hz，2H)，3.42(m，2H)，1.16(t，J＝6.9Hz，3H)

     [(8-苯磺酰基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d6)9.36(s，1H)，8.50(d，J＝9Hz，1H)，8.19(d，J＝9Hz，1H)，8.03(d，J＝7.2Hz，2H)，7.70-7.61(m，3H)，4.01(d，J＝5.7Hz，2H)

     [(8-苯亚硫酰基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸

     ¹H NMR(300MHz，DMSO-d6)9.13(s，1H)，8.32(d，J＝8.4Hz，1H)，7.86(d，J＝8.4Hz，1H)，7.78(d，J＝6.6Hz，2H)，7.57-7.50(m，3H)，3.99(brs，2H)

     实施例4：试验和给药

     生物学试验

    可以使用任何常规的已知方法评价本发明化合物的生物活性。适合的试验是本领域中公知的。描述了以下试验作为例证，而不是意欲以任何方式限制本发明的范围。本发明的化合物在以下试验的至少一个中表现出活性。

     对HIFα稳定化的基于细胞的分析

    将从不同组织诱导的人细胞分别接种到35mm培养皿中，并在标准培养基中在37℃、20％O₂和5％CO₂的条件下生长，标准培养基例如补充有10％FBS的DMEM。它们的细胞层生长为成簇，将培养基更换为OPTI-MEM培养基(Invitrogen Life Technologies，Carlsbad CA)，并将细胞层在20％O₂和5％CO₂条件下在37℃培养24小时。向现有的培养基添加化合物或0.013％DMSO，然后培养过夜。

    在培养之后，除去培养基，离心，并储存用于将来的分析(参见以下VEGF和EPO试验)。将细胞用冷的磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤两次，然后溶解于1ml的10mM tris(pH 7.4)、1mM EDTA、150mM NaCI、0.5％IGEPAL(Sigma-Aldrich，St.Louis MO)和蛋白酶抑制剂混合物(Roche Molecular Biochemicals)的溶液中15分钟，同时在保持在冰中。将细胞裂解液以3,000xg的旋转速度在4℃离心5分钟并收集细胞溶质级分(上清液)。将细胞核(沉淀)再悬浮和溶解于100μl的20mMHEPES(pH 7.2)、400mM NaCl，1mM EDTA、1mM二硫苏糖醇和蛋白酶混合物(Roche Molecular Biochemicals)的溶液中，以13,000xg的旋转速度在4℃离心5分钟，然后收集核内蛋白级分(上清液)。

    根据生产商的说明书使用QUANTIKINE免疫测定法(R&DSystems，Inc.，Minneapolis MN)分析细胞核级分的HIF-1α。

     HIF-PH2(PHD2)分析

     材料

    HIF-PH2(EGLN1)表达自大肠杆菌(E.coli)细胞并使用两种方法纯化：Ni-亲和色谱柱和尺寸排阻色谱柱。

     HIF-PH2(PHD2)分析(荧光偏振法)

    为了评价HIF PH2抑制剂的活性，将首先通过遗传重组过度表达、然后经过纯化的HIF PH2酶用于进行酶反应。首先，使200nM HIF PH2酶与50nM肽底物(FITC-ACA-DLDLEALAPYIPADDDFQLR；SEQ IDNO.：1)在反应缓冲液(20mM Tris-Cl(pH8.0)，100mM NaCl，0.5％Nonidet P40)中反应。这时，与粗酶一起使用2mM抗坏血酸和5mM酮戊二酸盐，包含100μM FeCl₂或不含FeCl₂。对要试验的HIF PH2抑制剂的浓度进行处理并在30℃反应一小时。在反应之后，使得到的反应产物在95℃沸腾一分钟以抑制酶反应。

    为了确定底物中是否发生了脯氨酰羟基化作为副反应，将500nMGST-VBC(GST-VHL-Elongin B-Elongin C)蛋白质加入到反应缓冲液(50mM Tris-Cl(pH8.0)，120mM NaCl，0.5％Nonidet P40)中，并在室温下进行GST-VBC结合反应30分钟。在反应完成之后，使用Fusion-FP(Packard)系统在485nm/535nm(激发/发射)波长处测定荧光偏振。

    未用HIF PH2抑制剂处理的样品的荧光偏振值用作100％对照，并将HIF PH2抑制剂的活性测量为在用要试验的HIF PH2抑制剂浓度处理的样品中剩余的HIF PH2酶活性的百分率。测量在用增加的HIFPH2抑制剂浓度处理之后剩余的HIF PH2酶活性以计算HIF PH2抑制剂的IC₅₀，然后将抑制剂的浓度确定为IC₅₀，与对照相比，HIF PH2酶活性被抑制50％时的浓度。IC₅₀数据在表1中给出。

     表1

    HIF PH2抑制活性

       化合物  IC₅₀  [(4-羟基-苯并[4，5]呋喃并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  B  [(4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(7-羟基-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸  D  [(7-羟基-3-苯基-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸  C  [(4-羟基-苯并[4，5]呋喃并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  B  [(4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(7-羟基-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸  D  化合物  IC₅₀  (S)-2-[(7-羟基-呋喃并[3，2-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-丙酸  D  [(4-羟基-1-苯基-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(7-氯-4-羟基-1-苯基-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸  A

       化合物  IC₅₀  [(1-氯-4-羟基-8-硝基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  3-(羧基甲基-氨甲酰基)-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-8-基-铵  A  [(1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  (S)-2-[(1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-丙酸  B  (S)-2-[(1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-丙酸  B  [(1-氯-8-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(1-氰基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(1-苯磺酰基-7-氯-4-羟基-1H-吡咯并[2，3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(1-苯磺酰基-7-氯-4-羟基-1H-吡咯并[2，3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸甲基酯  A  [(7-氯-4-羟基-1H-吡咯并[2，3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸  D  [(4-氨基-1-溴-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  D  1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸(吡啶-3-基甲基)-酰胺  B  [(1-溴-4-氟-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A

       化合物  IC₅₀  1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基甲基]-酰  胺  A  1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸[1-(4-甲氧基-苄基)-1H-四唑-5-基甲基]-酰  胺  B  1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸(吡啶-2-基甲基)-酰胺  A  1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-甲酸苄基酰胺  B  [(1-氯-8-二甲基氨基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(1-氯-8-二乙基氨基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(8-乙酰基氨基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(4-氯-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-羟基-氨基]-乙酸  D  [(1-氯-6-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(1-氯-7-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  化合物  IC₅₀  [(1-氯-9-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A

       化合物  IC₅₀  [(4-羟基-1-吡啶-2-基-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(4-羟基-1-甲基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [羟基-(4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  C  [(1-氯-4，8-二羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(1-氯-4-羟基-7-甲氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(1-氯-8-羟基-4-甲氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  C  [(1-氯-8-羟基-4-异丙氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  C  [(1-氯-4，7-二羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(7-氟-4-羟基-1-甲基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(1-氯-8-乙基氨基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(8-苯磺酰基氨基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(8-苄基氨基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A

       化合物  IC₅₀  [(1-氯-4-羟基-8-三氟甲基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(1-氯-4-羟基-8-苯基甲烷磺酰基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  B  [(1-氯-8-乙烷磺酰基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  B  [(8-苯磺酰基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A  [(8-苯亚硫酰基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  A

    A＝0-25μM；B＝26-100μM；C＝101-200μM；D＝＞201μM

     人EPO免疫分析

    将衍生自肝癌(Hep3B)组织的人细胞(参见，例如，美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)，Manassas VA)在37℃，20％O₂，5％CO₂条件下在DMEM(GIBCO)+10％FBS，4.5g/L D-葡萄糖；L-谷氨酸盐和110mg/L丙酮酸钠中生长。以4X 10⁴HEP3B细胞/孔接种96孔板。除去培养基并更换为DMEM+10％FBS。向孔中加入浓度为1μM-100μM的化合物，培养24小时。收获细胞培养基并依照生产商的用于台式试验的说明书，使用人促红细胞生成素QuantikineIVD ELISA试剂盒(R&DMinneapolis，MN)测定EPO浓度。结果包括原始数据和与对照(在100μM)的比较，都显示在表2中。

     表2

    EPO诱导

       100μM的化合物相对于对照的诱导倍数EPO(mIU/ml)  [(4-羟基-苯并[4，5]呋喃并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  E  I  [(4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  E  I  [(1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  F  J  [(1-氯-8-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  F  J  [(1-苯磺酰基-7-氯-4-羟基-1H-吡咯并[2，3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸  E  I  [(1-氯-8-二乙基氨基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨  基]-乙酸  F  J  [(1-氯-6-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  E  I  [(1-氯-7-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  G  K  [(1-氯-9-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  H  K  [(4-羟基-1-吡啶-2-基-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸  E  I  [(4-羟基-1-甲基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  H  J  [(1-氯-4，8-二羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  E  I  [(1-氯-4-羟基-7-甲氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-  乙酸  F  I  [(1-氯-4，7-二羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  E  I  [(1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨  基]-乙酸  F  L  [(7-氟-4-羟基-1-甲基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  F  L

       100μM的化合物相对于对照的诱导倍数EPO(mIU/ml)  [(1-氯-8-乙基氨基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨  基]-乙酸  G  K  [(8-苯磺酰基氨基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-  氨基]-乙酸  E  I  100μM的化合物  相对于对照  的诱导倍数 EPO(mIU/ml)  [(1-氯-4-羟基-8-三氟甲基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨  基]-乙酸  F  J

    E＝0-20；F＝21-50；G＝51-70；H＝＞71

    I＝0-20mIU/ml；J＝21-40mIU/ml；K＝41-60mIU/ml；L＝＞61mIU/ml

     对VEGF和EPO报道基因的基于细胞的分析

    荧光素酶分析用于确定细胞中EPO和VEGF基因的转录量的变化。对于荧光素酶试验，首先将人HIF1α基因克隆到动物细胞表达载体pFlag-CMV中，以制备pFlag-HIF1α载体，然后将EPO基因3’-增强子结构域的缺氧反应元件(HRE)序列克隆到荧光素酶和TK启动子基因的上游，以制备pEPO HRE-Luc表达载体。另外，将VEGF基因的启动子和荧光素酶结构域克隆到以pGL3-基础载体中，以制备pVEGF-Luc表达载体。将使用HeLa细胞的前一天，将HeLa细胞在培养皿中接种培养，以生长到约70-80％密度。使用LipofectAMINEPLUSTM(Invitrogen Life Technologies，Carlsbad CA)，用每一个制备的pEPO HRE-Luc和pVEGF-Luc表达载体以及pFlag-HIF1α和Renilla荧光素酶表达载体(Promega，Madison，WI，USA)转染HeLa细胞。在转染3小时之后，将培养基换为DMEM，补充有血清的含1％青霉素-链霉素的10％FBS。这时，将培养的细胞用所示浓度的每种化合物处理。然后，将细胞保持在37℃，20％O₂和5％CO₂的条件下在保温箱中培养24小时。在培养之后，细胞用冷的磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤两次。使用双重荧光素酶分析系统(Promega，Madison，WI，USA)测量细胞的荧光素酶活性。这个分析的结果如表3中所示。

     表3

    VEGF诱导

       化合物，100μM  VEGF 1，相对于对照的诱导倍数  VEGF 2，  相对于对照  的诱导倍数  EPO，相对于对照的  诱导倍数  [(1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡  啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  O  O  O  [(4-羟基-1-苯基-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶  -5-羰基)-氨基]-乙酸  N  O  [(7-氯-4-羟基-1-苯基-1H-吡唑并[3，4-c]  吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸  N  O  [(1-氯-4-羟基-8-硝基-苯并[4，5]噻吩并  [3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  O  N

       化合物，100μM  VEGF 1，相对于对照的诱导倍数  VEGF 2，  相对于对照  的诱导倍数  EPO，相对于对照的  诱导倍数  3-(羧基甲基-氨甲酰基)-1-氯-4-羟基-苯  并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶-8-基-铵  N  N  [(1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡  啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  4  O  (S)-2-[(1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并  [3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-丙酸  O  N  (S)-2-[(1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并  [3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-丙酸  O  N

       化合物，100μM  VEGF 1，相对于对照的诱导倍数  VEGF 2，  相对于对照  的诱导倍数  EPO，相对于对照的  诱导倍数  [(1-氯-8-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并  [3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  N  O  [(1-氰基-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]  吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  N  M  1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶  -3-甲酸[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-  基甲基]-酰胺  N  M  化合物，100μMVEGF 1，相对于对照的诱导倍数VEGF 2，相对于对照的诱导倍数  EPO，相对于对照的诱导倍数

       化合物，100μM  VEGF 1，相对于对照的诱导倍数  VEGF 2，  相对于对照  的诱导倍数  EPO，相对于对照的  诱导倍数  1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶  -3-甲酸[1-(4-甲氧基-苄基)-1H-四唑-5-  基甲基]-酰胺  M  M  1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶  -3-甲酸(吡啶-2-基甲基)-酰胺  N  M  1-溴-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并[3，2-c]吡啶  -3-甲酸苄基酰胺  M  M  [(1-氯-8-二甲基氨基-4-羟基-苯并[4，5]噻  吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  O  O

       化合物，100μM  VEGF 1，相对于对照的诱导倍数  VEGF 2，  相对于对照  的诱导倍数  EPO，相对于对照的  诱导倍数  [(8-乙酰基氨基-1-氯-4-羟基-苯并[4，5]噻  吩并[3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  M  [(1-氯-6-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并  [3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  N  N  [(1-氯-7-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并  [3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  O  O  [(1-氯-9-氟-4-羟基-苯并[4，5]噻吩并  [3，2-c]吡啶-3-羰基)-氨基]-乙酸  N

    M＝0-2.0；N＝2.1-4.0；O＝＞4.1