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包含脂肪酶的洗涤剂组合物
    发明领域 本发明涉及具有改善的洗涤剂内稳定性的脂解酶变体以及它们的制备方法。 它尤 其涉及疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus) 脂肪酶的脂解酶变体。
     发明背景
     已知使用真菌脂解酶例如来自疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus) ( 别名 ： 嗜热羊毛状腐质霉 (Humicola lanuginosa)) 的脂肪酶用于多种工业目的， 例如改 善洗涤剂的效率。因此， 将来源于疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanuginosus)( 别名 ： 嗜热羊毛状腐质霉 (Humicola lanuginosa)， EP 258 068 和 EP 305 216) 的脂肪酶以商品 名 Lipolase (Novozymes A/S 的产品 ) 销售用于去污剂。WO 0060063 描述了疏绵状嗜热 丝孢菌 (T.lanuginosus) 脂肪酶的变体， 它在洗涤剂溶液中具有特别好的一次洗净性能。 除了使用脂肪酶作为洗涤剂酶以除去衣服和其他纺织物上的脂质或脂肪污渍外， 它们还可 用作生面团的添加剂来用于面包和其他焙烤产品， 以及用于消除纸浆和纸生产中的树脂问 题。 在一些应用中， 具有改善的热稳定性的脂解酶是所期望的 (EP 374700、 WO 9213130)， 然 而在其他应用中洗涤剂内稳定性是所期望的。WO 92/05249、 WO 92/19726 和 WO 97/07202 公开了疏绵状嗜热丝孢菌 (T.lanuginosus)( 嗜热羊毛状腐质霉 (H.lanuginosa)) 脂肪酶 的变体。
     发明概述
     在第一方面， 本发明涉及包含亲本脂解酶的洗涤剂组合物， 其中所述变体 ： (a) 具 有与亲本脂解酶相比包含氨基酸残基取代的氨基酸序列， 所述氨基酸残基取代对应于 SEQ ID NO ： 2 的任何以下氨基酸 ： 27、 216、 227、 231、 233 和 256 ； 以及 (b) 任选地比亲本脂解酶在 洗涤剂内更稳定。
     在另一方面， 本发明涉及将组合物用于水解羧酸酯或酯的水解、 合成或酯交换。
     在另一方面， 本发明涉及将脂解酶变体用于制造在洗涤剂内稳定的制剂。
     附图简述
     图 1 显示脂肪酶的比对。
     序列表
     SEQ ID NO ： 1 显示编码来自疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus) 的脂 肪酶的 DNA 序列。
     SEQ ID NO ： 2 显示来自疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus) 的脂肪酶 的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 3 显示来自犁头霉属 (Absidia reflexa) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 4 显示来自伞状犁头霉 (Absidia corymbifera) 的脂肪酶的氨基酸序 列。
     SEQ ID NO ： 5 显示来自米黑根毛霉 (Rhizomucor miehei) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 6 显示来自米根霉 (Rhizopus oryzae) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 7 显示来自曲霉菌曲霉 (Aspergillus niger) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 8 显示来自塔宾曲霉 (Aspergillus tubingensis) 的脂肪酶的氨基酸 SEQ ID NO ： 9 显示来自尖孢镰孢菌 (Fusarium oxysporrum) 的脂肪酶的氨基酸序序列。
     列。 SEQ ID NO ： 10 显示来自异孢镰孢菌 (Fusarium heterosporum) 的脂肪酶的氨基 酸序列。
     SEQ ID NO ： 11 显示来自米曲霉 (Aspergillus oryzae) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 12 显示来自沙门柏干酪青霉 (Penicillium camemberti) 的脂肪酶的 氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 13 显示来自臭曲霉 (Aspergillus foetidus) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 14 显示来自曲霉菌曲霉 (Aspergillus niger) 的脂肪酶的氨基酸序 列。
     SEQ ID NO ： 15 显示来自米曲霉 (Aspergillus oryzae) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 16 显示来自 Landerina penisapora 的脂肪酶的氨基酸序列。
     发明详述
     氨基酸修改形式的命名
     根据本发明描述脂肪酶变体时， 使用以下命名法以便于参考 ：
     初始氨基酸 ： 位置 ： 取代氨基酸
     根据该命名法， 例如在位点 195 上将谷氨酸取代成甘氨酸以 G195E 表示。在相同 位点上去除甘氨酸以 G195* 表示， 插入附加氨基酸残基如赖氨酸以 G195GK 表示。其中特异 性脂肪酶与其他脂肪酶相比包含 “缺失” 并且在同样位点插入一个氨基酸用 *36D 表示， 指 在位点 36 插入一个天冬氨酸。
     多个突变用加号分开， 即： R170Y+G195E， 代表在位点 170 和 195 上分别用精氨酸和 甘氨酸取代酪氨酸和谷氨酸的突变。
     当施加所述的比对方法时， X231 指示在亲本脂解酶中对应于位点 231 的氨基酸。 X231R 指示氨基酸被 R 取代。就 SEQ ID NO ： 2 而言， X 是 T， 因此 X231R 指示 R 在位点 231 取代 T。其中在一个位点 ( 例如 231) 的氨基酸可被另一个选自一组氨基酸的氨基酸取代， 例如所述组由 R 和 P 和 Y 组成， 这将用 X231R/P/Y 表示。
     在所有情况下， 使用公认的 IUPAC 单字母或三字母氨基酸缩写。
     同一性 ： 如本文所用， 术语 “同一性” 指两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之 间的相关性， 这种相关性用参数 “同一性” 描述。
     就本发明的目的而言， 两个氨基酸序列的比对通过来自 EMBOSS 软件包 (http:// emboss.org)， 版本 2.8.0 的 Needle 程序进行测定。Needle 程序执行全序列比对算法， 如 Needleman， S.B. 和 Wunsch， C.D.(1970)J.Mol.Biol.48， 443-453 所述。使用的取代矩阵是 BLOSUM62， 空位开放罚分是 10， 空位延伸罚分是 0.5。
     本发明的一个氨基酸序列 ( “发明序列” ； 例如 SEQ ID NO ： 2 的氨基酸 1 至 269) 和 一个不同氨基酸序列 (“外源序列” ) 之间的同一性程度以两个序列的比对中的精确匹配数 除以 “发明序列” 的长度或 “外源序列” 的长度来计算， 无论其中哪一个序列是最短的。结 果表示为同一性百分比。
     当 “发明序列” 和 “外源序列” 在重叠的相同位点具有相同氨基酸残基时发生精确 匹配。序列长度是该序列的氨基酸数目 ( 例如 SEQ ID NO ： 2 的长度是 269)。
     可使用上述方法计算同一性以及同源性并用于比对。 在本发明的上下文中已经如 下所述计算同源性和比对。
     同源性和比对
     就本发明的目的而言， 同源性程度可通过本领域已知的计算机程序进行合适的测 定， 例如 GCG 程序软件包提供的 GAP(Program Manual for the Wisconsin Package， 第8 版， 1994 年 8 月， Genetics Computer Group， 575 Science Drive， Madison， Wisconsin， USA 53711)(Needleman， S.B. 和 Wunsch， C.D.， (1970)， Journal of Molecular Biology， 48， 443-45)， 使用 GAP 以及以下设置进行多肽序列比对 ： GAP 产生罚分为 3.0， 并且 GAP 延伸罚 分为 0.1。
     在 本 发 明 中，在 犁 头 霉 属 (Absidia reflexa)、伞 状 犁 头 霉 (Absidia corymbefera)、 米黑根毛霉 (Rhizmucor miehei)、 德氏根霉 (rhizopus delemar)、 曲霉菌 曲霉 (Aspergillus niger)、 塔宾曲霉 (Aspergillus tubigensis)、 尖孢镰孢菌 (Fusarium oxysporum)、 异孢镰孢菌 (Fusarium heterosporum)、 米曲霉 (Aspergillus oryzea)、 沙门 柏干酪青霉 (Penicilium camembertii)、 臭曲霉 (Aspergillus foetidus)、 曲霉菌曲霉 (Aspergillus niger)、 疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus)( 别名 ： Humicola lanuginose) 和 Landerina penisapora 的脂肪酶序列中的相应 ( 或同源 ) 位点通过图 1 所 示的比对进行限定。
     为了发现比对中不显示的脂肪酶序列中的同源位点， 受关注的序列与图 1 中显 示的序列进行比对。使用对 GAP 程序中存在的大多数同源序列进行的 GAP 比对将新序列 与图 1 中的本比对进行比对。在 GCG 程序软件包中提供了 GAP(Program Manual for the Wisconsin Package， 第 8 版， 1994 年 8 月， Genetics Computer Group， 575 Science Drive， Madison， Wisconsin， USA 53711)(Needleman， S.B. 和 Wunsch， C.D.， (1970)， Journal of Molecular Biology， 48， 443-45)。多肽序列比对使用以下设置 ： GAP 产生罚分为 3.0， 并且 GAP 延伸罚分为 0.1。
     亲本脂肪酶
     可将任何适用的脂解酶用作亲本脂解酶， 也称为亲本脂肪酶。在一些实施方案中 脂解酶可为真菌脂解酶。
     脂解酶可为酵母脂解酶， 它来源于以下菌属 ： 例如假丝酵母属 (Candida)、 克鲁维 酵母属 (Kluyveromyces)、 毕赤酵母属 (Pichia)、 糖酵母属 (Saccharomyces)、 粟酒裂殖酵 母属 (Schizosaccharomyces)、 或耶氏酵母属 (Yarrowia) ； 或者更优选地为丝状真菌脂解 酶， 它来源于以下菌属 ： 如顶孢霉菌属 (Acremonium)、 曲霉属 (Aspergillus)、 出芽短梗霉 属 (Aureobasidium)、 隐球酵母属 (Cryptococcus)、 线黑粉酵母属 (Filobasidium)、 镰孢菌 属 (Fusarium)、 特异腐质霉属 (Humicola)、 稻瘟病菌属 (Magnaporthe)、 毛霉属 (Mucor)、 毁 丝 霉 属 (Myceliophthora)、 瘤 胃 真 菌 属 (Neocallimastix)、 脉 孢 菌 属 (Neurospora)、 拟青霉属 (Paecilomyces)、 青霉属 (Penicillium)、 厌气性瘤胃真菌属 (Piromyces)、 裂 褶 菌 属 (Schizophyllum)、 踝 节 菌 属 (Talaromyces)、 嗜 热 子 囊 菌 属 (Thermoascus)、 草 根霉属 (Thielavia)、 弯颈霉属 (Tolypocladium)、 嗜热真菌属 (Thermomyces) 或木霉属(Trichoderma)。
     此 外 脂 解 酶 可 为 卡 尔 斯 伯 酵 母 (Saccharomyces carlsbergensis)、 啤酒糖酵 母 (Saccharomyces cerevisiae)、糖 化 酵 母 (Saccharomyces diastaticus)、道 氏 酵 母 (Saccharomyces douglasii)、 克 鲁 维 酵 母 (Saccharomyces kluyveri)、 奇异酵母 (Saccharomyces norbensis)、 或卵形酵母 (Saccharomyces oviformis) 脂解酶。
     作 为 另 外 一 种 选 择， 所 述 脂 解 酶 是 棘 孢 曲 霉 (Aspergillus aculeatus)、 泡 盛 曲 霉 (Aspergillus awamori)、烟 曲 霉 (Aspergillus fumigatus)、臭 曲 霉 (Aspergillus foetidus)、 日本曲霉 (Aspergillus japonicus)、 构巢曲霉 (Aspergillus nidulans)、 曲 霉 菌 曲 霉 (Aspergillus niger)、 米 曲 霉 (Aspergillus oryzae)、 塔宾 曲 霉 (Aspergillus turbigensis)、 拟 杆 镰 孢 菌 (Fusarium bactridioides)、 蜀黍专 化 型 镰 孢 菌 (Fusarium cerealis)、 克 地 镰 孢 菌 (Fusarium crookwellense)、 黄色 镰 孢 菌 (Fusarium culmorum)、 禾 谷 镰 孢 菌 (Fusarium graminearum)、 禾谷镰孢菌 (Fusarium graminum)、 异 孢 镰 孢 菌 (Fusarium heterosporum)、 Fusarium negundi、 尖 孢 镰 孢 菌 (Fusarium oxysporum)、 多 枝 镰 孢 菌 (Fusarium reticulatum)、 粉红镰孢菌 (Fusarium roseum)、 接 骨 木 镰 孢 菌 (Fusarium sambucinum)、 Fusarium sarcochroum、 茄 病 镰 孢 菌 (Fusarium sporotrichioides)、 硫 色 镰 孢 菌 (Fusarium sulphureum)、 簇 囊 镰 孢 菌 (Fusarium torulosum)、 类 丝 孢 镰 孢 菌 (Fusarium trichothecioides)、 镰 孢 霉 (Fusarium venenatum)、 特 异 腐 质 霉 (Humicola insolens)、 疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus)( 别名 ： Humicola lanuginose)、 米黑毛霉 (Mucor miehei)、 嗜 热 毁 丝 菌 (Myceliophthora thermophila)、 粗 糙 脉 孢 菌 (Neurospora crassa)、 产 紫 青 霉 (Penicillium purpurogenum)、 哈 茨 木 霉 (Trichoderma harzianum)、 康宁木 霉 (Trichoderma koningii)、 长 枝 木 霉 (Trichoderma longibrachiatum)、 里氏木霉 (Trichoderma reesei)、 绿色木霉 (Trichoderma viride) 脂解酶。
     在一些实施方案中本发明涉及脂解酶变体， 它是嗜热真菌属 (Thermomyces) 脂肪 酶或疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus) 脂肪酶。
     在一些实施方案中本发明涉及脂解酶变体， 其中所述变体与 SEQ ID NO ： 2 具有至 少 50％， 至少 60％， 至少 70％， 至少 80％， 至少 85％， 至少 90％， 至少 91％， 至少 92％， 至少 93％， 至少 94％， 至少 95％， 至少 96％， 至少 97％， 至少 98％， 至少 99％或 100％的同一性。
     脂解酶变体中的改变具有改善的洗涤剂内稳定性。
     下文涉及的位点是 SEQ ID NO ： 2。使段落 “同源性和比对” 中描述了如何寻找在不 同脂肪酶中的氨基酸残基的对应或同源位点的方法。
     根据本发明， 已经令人惊讶地发现， 脂解酶变体、 脂解变体、 或短的变体比亲本脂 解酶在洗涤剂内更稳定。将洗涤剂内的稳定性定义为在存在的洗涤剂内保留脂解酶 / 脂肪 酶活性的质量。可全部或部分保留脂肪酶活性。因此， 本发明的变体与它们从其中衍生出 的亲本脂肪酶相比， 显示在存在的洗涤剂中改善的全部或部分保留它们的脂肪酶活性的能 力。
     如本文所用， 术语 “脂肪酶活性” 指羧酸酯水解酶活性， 该酶催化三酰基甘油的水 解， 形成二酰基甘油和羧酸酯。就本发明目的而言， 脂肪酶活性按照以下方法测定 ： 使用阿 拉伯树胶作为乳化剂， 通过乳化甘油三丁酸酯 (glycerin tributyrate) 制备脂肪酶的底物。在 30℃， pH 7 或 9 条件下水解甘油三丁酸酯， 随后在 pH 自动恒定器中进行滴定实验。 将一单位脂肪酶活性 (1LU) 定义为在 30℃， pH7 条件下能够每分钟释放 1 微摩尔丁酸的酶 量。
     在一些实施方案中如本发明所述的变体已经与基准酶进行了比较。如本文所用， 术语 “基准酶” 或 “基准脂肪酶” 指具有取代的 SEQ ID NO ： 2， 除非另外指明， 所述取代为 T231R+N233R。
     在一些实施方案中本发明涉及亲本脂解酶变体， 其中所述变体 ： (a) 具有与亲本 脂解酶相比包含氨基酸残基取代的氨基酸序列， 所述氨基酸残基取代对应于 SEQ ID NO ： 2 的任何以下氨基酸 ： 27、 216、 227、 231、 233 和 256 ； 以及 (b) 比亲本脂解酶在洗涤剂内更稳 定。
     在一些实施方案中本发明涉及亲本脂解酶变体， 其中所述变体 ： (a) 包含氨基酸 残基 231 和 233， 并且具有与亲本脂解酶相比包含有至少一个氨基酸残基取代的氨基酸序 列， 所述氨基酸残基取代对应于 SEQ ID NO ： 2 的任何以下氨基酸 ： 27、 216、 227 和 256 ； 以及 (b) 比亲本脂解酶在洗涤剂内更稳定。
     在一些实施方案中本发明涉及亲本脂解酶的变体， 其中所述变体在位点 231+233 以及其中一个以下位点具有氨基酸改变 ： (a)27 ； (b)216 ； 或者 (c)256 ； 任选地所述变体还 包含 227 ； 该位点对应于 SEQ ID NO ： 2。
     在一些实施方案中本发明涉及变体， 其中所述氨基酸残基的取代是 SEQ ID NO ： 2 的 27R、 216P、 227G、 231R、 233R 或 256K 中的一个。
     在一些实施方案中本发明涉及变体， 其中所述氨基酸残基的取代是 SEQ ID NO ： 2 的 D27R、 S216P、 L227G、 T231R、 N233R 或 P256K 的一个。
     在一些实施方案中本发明涉及变体， 其中变体包含的取代选自由下列组成的 组： (a)T231R+N233R+P256K ； (b)L227G+T231R+N233R ； (c)L227G+T231R+N233R+P256K ； (d) D27R+T231R+N233R ； (e)D27R+L227G+T231R+N233R ； 和 (f)S216P+T231R+N233R。
     在一些实施方案中本发明涉及脂解酶变体， 其中所述亲本脂解酶与 SEQ ID NO ： 2 至少 50％， 至少 60 ％， 至少 70 ％， 至少 75 ％， 至少 80 ％， 至少 85 ％， 至少 90 ％， 至少 91％， 至少 92％， 至少 93％， 至少 94％， 至少 95％， 至少 96％， 至少 97％， 至少 98％， 至少 99％或 100％的同一性。
     在一些实施方案中本发明涉及变体， 其中所述亲本脂解酶是由疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus)DSM 4109 制备的脂肪酶， 并且具有 SEQ ID.NO ： 2 的氨基酸序 列。
     在一些实施方案中本发明涉及变体， 其中所述洗涤剂是液体洗涤剂。
     表1： 可在脂解酶变体中包含的改变
     在一些实施方案中本发明涉及包含脂解酶变体的制剂。
     在一些实施方案中本发明涉及制剂， 其中所述制剂可为液体制剂。
     多核苷酸、 表达载体、 宿主细胞、 脂解酶变体的制备。
     在一些实施方案中， 本发明涉及编码脂解酶变体的分离的多核苷酸。多核苷酸可 在非常低的严格条件下， 优选低严格条件下， 更优选中严格条件下， 更优选中 - 高严格条 件下， 甚至更优选高严格条件下， 最优选非常高的严格条件下与以下序列杂交 ： (i)SEQ ID NO ： 1 的核苷酸 178 至 660， (ii)SEQ ID NO ： 1 的核苷酸 178 至 660 包含的 cDNA 序列， (iii) (i) 或 (ii) 的亚序列， 或者 (iv)(i)、 (ii)、 或 (iii) 的互补链 (J.Sambrook、 E.F.Fritsch、 和 T.Maniatis， 1989， Molecular Cloning， A Laboratory Manual， 第 2 版， Cold Spring Harbor， New York)。SEQ ID NO ： 1 的亚序列包含至少 100 个邻接核苷酸或者优选地至少 200 个邻接核苷酸。此外该亚序列可编码具有脂肪酶活性的多肽片段。
     就长度为至少 100 个核苷酸的长探针而言， 将非常低至非常高的严格条件规定为 在标准 Southern 印迹程序后最优 12 至 24 小时， 在 42℃下， 在 5X SSPE， 0.3％ SDS， 200ug/ mL 剪切的和变性的鲑精 DNA， 以及 25％的甲酰胺 ( 用于非常低和低严格条件 )、 35％的甲酰
     胺 ( 用于中和中 - 高严格条件 )、 或者 50％的甲酰胺 ( 用于高和非常高的严格条件 ) 中预 杂交和杂交。
     就长度为至少 100 个核苷酸的长探针而言， 载体材料最终洗涤三次， 每次 15 分钟， 使用 2X SSC， 0.2％ SDS， 优选至少在 45℃ ( 非常低的严格条件 )， 更优选至少在 50℃ ( 低严 格条件 )， 更优选至少在 55℃ ( 中严格条件 )， 更优选至少在 60℃ ( 中 - 高严格条件 )， 甚至 更优选至少在 65℃ ( 高严格条件 )， 最优选至少在 70℃ ( 非常高的严格条件 )。
     可通过本领域已知的方法获取编码脂解酶变体的分离的多核苷酸、 包含所述多核 苷酸的核酸构建体、 包含所述核酸构建体的重组表达载体、 和包含所述核酸构建体或所述 重组表达载体的转化宿主细胞。
     获取洗涤剂内稳定脂解酶变体的程序
     脂解酶变体可用本领域已知的方法获取， 例如定点诱变、 随机诱变或局部诱变， 例 如如 WO 9522615 或 WO 0032758 所述的方法。给定亲本脂解酶在洗涤剂内稳定的变体可用 下述标准程序获取 ：
     诱变 ( 易错的、 掺入的 oligo， 加标的 oligo)
     初级筛选 鉴定在洗涤剂内较稳定的突变体
     保存 ( 甘油培养， LB-Amp 平板， 小量制备 )
     划线接种到另一个分析平板上 - 次级筛选 ( 比初级筛选高 1 度 )
     DNA 测序
     转化到宿主细胞中， 例如曲霉属
     以 100mL 的规模培养， 纯化， DSC
     在一些实施方案中， 本发明涉及制备脂解酶变体的方法， 所述方法包括以下步骤 ： (a) 在诱导产生脂解酶变体的条件下培养包含所述核酸构建体或包含所述核酸构建体的重 组表达载体的转化宿主细胞 ； 以及 (b) 回收脂解酶变体。该方法可根据本领域已知的原则 实施。
     在一些实施方案中本发明涉及生产所述变体的方法， 所述方法包括以下步骤 ： (a) 选择亲本脂解酶 ； (b) 在亲本脂解酶中取代至少一个氨基酸残基， 所述氨基酸残基对应于 SEQ ID NO ： 2 的任何以下氨基酸 ： 27、 216、 227、 231、 233 和 256 ； (c) 任选地改变除 (b) 中提 到的氨基酸之外的一个或多个氨基酸 ； (d) 制备由步骤 (a)-(c) 产生的变体 ； (e) 测试所述 变体在洗涤剂内的稳定性 ； (f) 选择具有提高的洗涤剂内稳定性的变体 ； 以及 (g) 生产所述 选择变体。
     使用
     如本发明所述的变体可类似于亲本脂解酶使用， 并且就一些目的而言该变体可由 于它们改善的洗涤剂内稳定性而是优选的。因此在一些实施方案中， 本发明涉及将所述变 体用于水解羧酸酯或酯的水解、 合成或酯交换。
     在一些实施方案中， 本发明涉及使用所述变体制造洗涤剂内的稳定制剂。
     组合物
     所述组合物优选地富含本发明权利要求中定义的多肽。术语 “富含” 指示组合物 的脂肪酶活性已经被提高了， 例如浓缩因子为 1.1。
     所述组合物可包含本发明的多肽作为主要酶组分， 例如单组分组合物。作为另 外一种选择， 所述组合物可包含多种酶活性， 例如氨基肽酶、 淀粉酶、 糖酶、 羧肽酶、 过氧化 氢酶、 纤维素酶、 壳多糖酶、 角质酶、 环糊精葡萄糖基转移酶、 脱氧核糖核酸酶、 酯酶、 α- 半 乳醣苷酶、 β- 半乳糖苷酶、 葡萄糖淀粉酶、 α- 葡萄糖苷酶、 β- 葡萄糖苷酶、 卤素过氧 化物酶、 转化酶、 漆酶、 脂肪酶、 甘露糖苷酶、 氧化酶、 果胶酶、 肽谷氨酰胺酶、 过氧化物酶、 肌醇六磷酸酶、 多酚氧化酶、 蛋白水解酶、 核糖核酸酶、 转谷氨酰胺酶、 或木聚糖酶。可生 产附加的酶， 例如通过属于以下属的微生物生产酶 ： 曲霉属， 优选棘孢曲霉 (Aspergillus aculeatus)、 泡盛曲霉 (Aspergillus awamori)、 烟曲霉 (Aspergillus fumigatus)、 臭曲霉 (Aspergillus foetidus)、 日本曲霉 (Aspergillus japonicus)、 构巢曲霉 (Aspergillus nidulans)、 曲 霉 菌 曲 霉 (Aspergillus niger)、 或 米 曲 霉 (Aspergillus oryzae) ； 镰 孢 菌 属， 优 选 拟 杆 镰 孢 菌 (Fusarium bactridioides)、 蜀 黍 专 化 型 镰 孢 菌 (Fusarium cerealis)、 克地镰孢菌 (Fusarium crookwellense)、 黄色镰孢菌 (Fusarium culmorum)、 禾谷镰孢菌 (Fusarium graminearum)、 禾谷镰孢菌 (Fusarium graminum)、 异孢镰孢菌 (Fusarium heterosporum)、 Fusarium negundi、尖 孢 镰 孢 菌 (Fusarium oxysporum)、 多枝镰孢菌 (Fusarium reticulatum)、 粉红镰孢菌 (Fusarium roseum)、 接骨木镰孢菌 (Fusarium sambucinum)、 Fusarium sarcochroum、 硫色镰孢菌 (Fusarium sulphureum)、 簇 囊镰孢菌 (Fusarium toruloseum)、 类丝孢镰孢菌 (Fusarium trichothecioides)、 或镰孢 霉 (Fusarium venenatum) ； 腐质霉属， 优选特异腐质霉 (Humicola insolens) 或嗜热羊毛 状腐质霉 (Humicola lanuginosa) ； 或者木霉属， 优选哈茨木霉 (Trichoderma harzianum)、 康宁木霉 (Trichoderma koningii)、 长枝木霉 (Trichoderma longibrachiatum)、 里氏木霉 (Trichoderma reesei)、 或绿色木霉 (Trichoderma viride)。
     所述组合物可根据本领域已知的方法制备， 并且可为液体形式或干燥组合物形 式。例如多肽组合物可为粒状或微粒状形式。所述组合物中将包括的多肽可根据本领域已 知的方法稳定。
     洗涤剂成分
     组合物通常包含一种或多种洗涤剂成分。 本文所用洗涤剂组合物包括制品和清洁 和处理组合物。除非另外指明， 如本文所用， 术语 “清洁和 / 或处理组合物” 包括片剂、 颗粒 或粉末形式的多用途或 “重垢型” 洗涤剂， 尤其是衣物洗涤剂 ； 液体、 凝胶或糊剂状的多功能 洗涤剂， 尤其是所谓的重垢型液体类型 ； 液体精细织物洗涤剂 ； 手洗餐具洗涤剂或轻垢型 餐具洗涤剂， 尤其是高起泡类型的那些 ； 机洗餐具洗涤剂， 包括各种用于家庭和公共机构用 途的片剂、 颗粒、 液体和辅助漂洗型。组合物也可为单位剂量的包装， 包括本领域已知的那 些包装和水溶性的、 水不溶性的和 / 或水可渗透的那些包装。
     本发明的洗涤剂组合物可包含一种或多种本发明的脂肪酶变体。 除了脂肪酶变体 外， 所述洗涤剂组合物还将进一步包含一种洗涤剂成分。下文所举例说明的洗涤剂成分的 非限制性列表适用于即用的组合物， 并且可期望将其结合到本发明的某些实施方案中， 以 例如有助于或提高处理待清洁基底的清洁性能， 或在含香料、 着色剂、 染料等的情况下调节 清洁组合物的美观性。 这些附加组分的明确性质及它们的掺入量将取决于组合物的物理形 式以及其应用的清洁操作的性质。合适的洗涤剂成分包括但不限于 ： 表面活性剂、 助洗剂、 螯合剂、 染料转移抑制剂、 分散剂、 酶和酶稳定剂、 漂白活化剂、 过氧化氢、 过氧化氢源、 预成形过酸、 聚合分散剂、 增白剂、 抑泡剂、 染料、 抗腐蚀剂、 晦暗抑制剂、 香料、 香料微胶囊、 软化 剂、 载体、 水溶助长剂、 加工助剂、 溶剂和 / 或颜料。
     一般的洗涤剂将按重量计包含以下成分的任何组合 ： 5-30％的表面活性剂， 优选 阴离子表面活性剂如直链烷基苯磺酸盐和脂肪醇乙氧基硫酸盐 ； 0.005-0.1％的蛋白酶活 TM 性蛋白， 其中蛋白酶优选地选自 Coronase 、 FNA、 FN4 或 SavinaseTM， 0.001-0.1％的淀粉酶 TM TM 活性蛋白， 其中淀粉酶优选地选自 Termamyl Natalase 、 StainzymeTM 和 PurastarTM 以及 0.1-3％的螯合剂， 优选二亚乙基三胺五醋酸。就颗粒状和片剂产品而言， 此类一般的洗涤 剂还将按重量计包含 ： 5-20％的漂白剂， 优选过碳酸钠 ； 1-4％的漂白活化剂， 优选 TAED 和 / 或 0-30％， 优选 5-30％， 更优选小于 10％的助洗剂， 如硅铝酸盐沸石 A 和 / 或三聚磷酸盐。
     漂白剂 - 本发明洗涤剂组合物可包括一种或多种漂白剂。
     通常， 当使用漂白剂时， 本发明的组合物可包括按本主题清洁组合物的重量计约 0.1％至约 50％或甚至约 0.1％至约 25％的漂白剂。合适漂白剂的示例包括 ：
     (1) 过氧化氢源， 例如无机过氢化合物盐， 包括以下碱金属盐如钠盐 ： 过硼酸盐 ( 通常为一水合物或四水合物 )、 过碳酸盐、 过硫酸盐、 过磷酸盐、 过硅酸盐以及它们的混合 物。在本发明的一个方面， 无机过氧化氢合物盐选自由下列物质组成的组 ： 过硼酸钠盐、 过 碳酸钠盐以及它们的混合物。
     (2) 具有 R-(C ＝ O)-L 的漂白活化剂， 其中 R 为烷基， 任选支链烷基 ； 当漂白活化剂 是疏水的时， 其具有 6 至 14 个碳原子或者 8 至 12 个碳原子， 而当漂白活化剂是亲水的时， 其 具有小于 6 个碳原子或甚至小于 4 个碳原子 ； 并且 L 为离去基团。合适的离去基团的实例 为苯甲酸及其衍生物， 尤其是苯磺酸盐。 合适的漂白活化剂包括十二烷酰基羟基苯磺酸盐、 癸酰基羟基苯磺酸盐、 癸酰基羟苯甲酸及其盐、 3， 5， 5- 三甲基己酰基羟基苯磺酸盐、 四乙酰 基乙二胺 (TAED) 和壬酰氧基苯磺酸盐 (NOBS)。合适的漂白活化剂还公开于 WO 98/17767 中。 尽管可采用任何合适的漂白活化剂， 但在本发明的一个方面， 本主题清洁组合物可包含 NOBS、 TAED 或它们的混合物。
     (3) 预成形的过酸。
     如果存在的话， 过酸和 / 或漂白活化剂通常以按所述组合物计约 0.1％至约 60 重 量％， 约 0.5％至约 40 重量％， 或甚至约 0.6％至约 10 重量％的含量存在于所述组合物中。 一种或多种疏水前体可与一种或多种亲水过酸或其前体联合使用。
     可选择过氧化氢源与过酸或漂白活化剂的量， 使得可用氧 ( 来自过氧化物源 ) 与 过酸的摩尔比为 1 ∶ 1 至 35 ∶ 1， 或甚至 2 ∶ 1 至 10 ∶ 1。
     表面活性剂 - 如本发明所述的洗涤剂组合物可包括表面活性剂或表面活性剂体 系， 其中所述表面活性剂可选自非离子表面活性剂、 阴离子表面活性剂、 阳离子表面活性 剂、 两性表面活性剂、 两性离子表面活性剂、 半极性非离子表面活性剂以及它们的混合物。 如果存在的话， 表面活性剂的通常含量按所述受试组合物的重量计为约 0.1％至约 60％， 约 0.1％至约 40％， 约 0.1％至约 12％， 约 1％至约 50％或甚至约 5％至约 40％。
     当被包括在洗涤剂中时， 所述洗涤剂将通常包含约 1％至约 40％的阴离子表面活 性剂如直链烷基苯磺酸盐、 α- 烯烃磺酸盐、 烷基硫酸盐 ( 脂肪醇硫酸盐 )、 脂肪醇乙氧基硫 酸酯、 仲烷基磺酸盐、 α- 磺基脂肪酸甲酯、 烷基或烯基丁二酸或皂。
     洗涤剂可任选地包含约 0.2％至约 40％的非离子表面活性剂如醇乙氧基化物、 壬基苯酚乙氧基化物、 烷基多苷、 烷基二甲基胺氧化物、 乙氧基化脂肪酸一乙醇酰胺、 脂肪酸 一乙醇酰胺、 多羟基烷基脂肪酸酰胺、 或葡糖胺的正酰基正烷基衍生物 ( “烷基葡糖酰胺” )。
     助洗剂 - 本发明的洗涤剂组合物可包含一种或多种洗涤剂助剂或助洗剂体系。当 使用助洗剂时， 本主题组合物将通常包含按本主题组合物的重量计至少约 1％， 约 5％至约 60％或甚至约 10％至约 40％的助洗剂。
     所述洗涤剂组合物可包含 ： (a)0 重量％至 10 重量％， 优选 0 重量％至 5 重量％的 沸石助洗剂 ； (b)0 重量％至 10 重量％， 优选 0 重量％至 5 重量％的磷酸盐助洗剂 ； 和 (c) 任选地 0 重量％至 5 重量％的硅酸盐。
     助洗剂包括但不限于碱金属、 多磷酸的铵盐和链烷醇铵盐、 碱金属硅酸盐或层状 硅酸盐、 碱土和碱金属碳酸盐、 硅铝酸盐助洗剂和多种碱金属、 多元乙酸 ( 如乙二胺四乙酸 和氨三乙酸 ) 的铵盐和取代铵盐， 以及聚羧酸酯 ( 如苯六甲酸、 琥珀酸、 柠檬酸、 氧联二琥珀 酸、 多元马来酸、 苯 -1， 3， 5- 三羧酸、 羧甲基氧代琥珀酸 ) 和它们的可溶性盐。
     螯合剂 - 本文的洗涤剂组合物可包含螯合剂。合适的螯合剂包括铜、 铁和 / 或锰 螯合剂以及它们的混合物。当使用螯合剂时， 本主题组合物可包含按本主题组合物的重量 计约 0.005％至约 15％或甚至约 3.0％至约 10％的螯合剂。
     胺化合物 - 该组合物优选地包含具有以下通式结构的化合物 ： 二 ((C2H5O)(C2H4O) + + n)(CH3)-N -CxH2x-N -(CH3)- 二 ((C2H5O)(C2H4O)n)， 其中 n ＝ 20 至 30， 并且 x ＝ 3 至 8， 或其 硫酸化或磺化的变体。
     增白剂 - 本发明的洗涤剂组合物也可包含可改变要清洁的制品的外观的附加组 分， 如荧光增白剂。这些增白剂吸收紫外光并发射可见光。合适的荧光增白剂含量包括从 约 0.01 重量％， 从约 0.05 重量％， 从约 0.1 重量％， 或甚至从约 0.2 重量％的较低含量至 0.5 重量％或甚至 0.75 重量％的较高含量。
     分散剂 - 本发明的组合物还可包含分散剂。合适的水溶性有机物包括均聚或共聚 酸或它们的盐， 其中多元羧酸包含至少两个相隔不超过两个碳原子的羧基。
     酶 - 除了本发明的脂肪酶变体外， 所述洗涤剂组合物还可包含一种或多种酶， 所 述酶提供清洁性能和 / 或织物护理有益效果， 例如蛋白酶、 另一种脂肪酶、 角质酶、 淀粉酶、 糖酶、 纤维素酶、 果胶酶、 甘露聚糖酶、 阿拉伯聚糖酶、 半乳聚糖酶、 木聚糖酶、 氧化酶如漆 酶、 和 / 或过氧化物酶。
     所选择酶的特性通常将与所选择的洗涤剂相容， ( 即最适合的 pH， 与其他酶或非 酶成分相容等 )， 并且所述酶将是有效量的。
     适用的蛋白酶包括动物、 植物或微生物起源的那些蛋白酶。 优选微生物起源。 包括 化学改性的或蛋白工程化的突变体。蛋白酶可为丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶， 优选碱性微 生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白酶。碱性蛋白酶的实例是枯草杆菌蛋白酶， 尤其是那些来源 于芽孢杆菌属的蛋白酶， 例如枯草杆菌蛋白酶 Novo、 枯草菌溶素 (subtilisin Carlsberg)、 枯草杆菌蛋白酶 309、 枯草杆菌蛋白酶 147 和枯草杆菌蛋白酶 168( 描述于 WO 89/06279)、 WO 05/103244 中的 SEQ ID no 4 和 SEQ ID no 7。其他合适的丝氨酸蛋白酶包括那些来自 微球菌亚目某些种 (Micrococcineae) 尤其是纤维单胞菌属某些种 (Cellulonas spp) 及其 变异体的蛋白酶， 它们公开在 WO2005052146 中。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶 ( 例 如猪或牛起源的胰蛋白酶 ) 和镰孢菌属蛋白酶， 它们描述于 WO 89/06270 和 WO 94/25583中。 有 用 的 蛋 白 酶 的 实 例 是 在 WO 92/19729、 WO 98/20115、 WO 98/20116、 和 WO 98/34946 中描述的变体， 尤其是在一个或多个以下位点上具有取代的变体 ： 27、 36、 57、 68、 76、 87、 97、 101、 104、 106、 120、 123、 167、 170、 194、 206、 218、 222、 224、 235、 245、 252 和 274， 以 及在具有以下突变的其他变体中 ： (K27R、 V104Y、 N123S、 T124A)、 (N76D、 S103A、 V104I)、 或 (S101G、 S103A、 V104I、 G159D、 A232V、 Q236H、 Q245R、 N248D、 N252K)。其他有用的蛋白酶的 实例是在 WO 05/052146 中描述的变体， 尤其是在一个或多个以下位点上具有取代的变体 ： 14、 16、 35、 65、 75、 76、 79、 123、 127、 159 和 179。
     优选的可商购获得的蛋白酶包括 AlcalaseTM、 SavinaseTM、 PrimaseTM、 DuralaseTM、 EsperaseTM、 CoronaseTM、 PolarzymeTM 和 KannaseTM(Novozymes A/S)、 MaxataseTM、 MaxacalTM、 MaxapemTM、 ProperaseTM、 PurafectTM、 Purafect PrimeTM、 Purafect OxPTM、 FNA、 FN2、 FN3 和 FN4(Genencor International Inc.)。
     脂 肪 酶 包 括 那 些 细 菌 或 真 菌 起 源 的 脂 肪 酶。 包 括 化 学 改 性 的 或 蛋 白 工 程 化 的 突 变 体。 有 用 的 脂 肪 酶 的 实 例 包 括 来 自 腐 质 霉 菌 (Humicola)( 别 名 嗜 热 真 菌， Thermomyces) 的脂肪酶， 例如来自嗜热羊毛状腐质霉 (H.lanuginosa)( 别名疏绵状嗜 热丝孢菌 (T.lanuginosus))， 如 EP 258 068 和 EP 305 216 所述， 或者来自特异腐质霉
     (H.insolens) 的脂肪酶， 描述于 WO 96/13580 中， 假单胞菌属脂肪酶例如来自产碱假单胞 菌 (P.alcaligenes) 或类产碱假单胞菌 (P.pseudoalcaligenes)(EP 218 272)、 洋葱假单 胞菌 (P.cepacia)(EP 331 376)、 施氏假单胞菌 (P.stutzeri)(GB 1,372,034)、 荧光假单 胞菌 (P.fluorescens)、 假单胞菌属菌株 SD 705(WO 95/06720 和 WO 96/27002)、 威斯康星 假单胞菌 (P.wisconsinensis)(WO 96/12012) 的脂肪酶、 芽孢杆菌属脂肪酶例如来自枯草 芽孢杆菌 (Dartois 等人 (1993)， Biochemica et Biophysica Acta， 1131， 253-360)、 嗜热 脂肪芽孢杆菌 (B.stearothermophilus)(JP 64/744992) 或短小芽孢杆菌 (B.pumilus)(WO 91/16422) 的脂肪酶。
     其他实例是诸如那些在 WO 92/05249、 WO 94/01541、 EP 407 225、 EP 260 105、 WO 95/35381、 WO 96/00292、 WO 95/30744、 WO 94/25578、 WO 95/14783、 WO 95/22615、 WO 97/04079 和 WO 97/07202 中描述的脂肪酶变体。
     其 他 可 商 购 获 得 的 脂 肪 酶 包 括 LipolaseTM、 Lipolase UltraTM 和 LipexTM(Novozymes A/S)。
     适用的淀粉酶 (α 和 / 或 β) 包括那些细菌或真菌起源的淀粉酶。包括化学改性 的或蛋白工程化的突变体。淀粉酶包括例如获取自芽孢杆菌属的 α- 淀粉酶， 例如详述于 GB 1,296,839 中的地衣芽孢杆菌 (B.licheniformis) 的特殊菌株。
     有 用 的 淀 粉 酶 的 实 例 是 在 WO 94/02597、 WO 94/18314、 WO 96/23873、 和 WO 97/43424 中描述的变体， 尤其是在一个或多个以下位点上具有取代的变体 ： 15、 23、 105、 106、 124、 128、 133、 154、 156、 181、 188、 190、 197、 202、 208、 209、 243、 264、 304、 305、 391、 408、 和 444。
     可商购获得的淀粉酶是 DuramylTM、 TermamylTM、 StainzymeTM、 Stainzyme UltraTM、 Stainzyme PlusTM、 FungamylTM 和 BANTM(Novozymes A/S)、 RapidaseTM 和 PurastarTM( 购 自 Genencor International Inc.)。适用的纤维素酶包括那些细菌或真菌起源的淀粉酶。包括化学改性的或蛋白工 程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、 假单胞菌属、 腐质霉菌属、 镰孢菌 属、 草根霉属、 支顶孢属的纤维素酶， 例如由特异腐质霉 (Humicola insolens)、 嗜热毁丝 菌 (Myceliophthora thermophila) 和尖孢镰孢菌 (Fusarium oxysporum) 产生的真菌纤 维素酶， 它们公开在 US 4,435,307、 US 5,648,263、 US 5,691,178、 US 5,776,757 和 WO 89/09259 中。
     尤其适用的纤维素酶是具有颜色护理有益效果的碱性或中性纤维素酶。此类 纤维素酶的实例是描述于 EP 0 495 257、 EP 0 531 372、 WO 96/11262、 WO 96/29397、 WO 98/08940 的纤维素酶。其他实例是纤维素酶变体如那些描述于 WO 94/07998、 EP 0 531 315、 US 5,457,046、 US 5,686,593、 US 5,763,254、 WO 95/24471、 WO 98/12307 和 PCT/ DK98/00299 的纤维素酶。
     可商购获得的纤维素酶包括 RenozymeTM、 CellucleanTM、 EndolaseTM、 CelluzymeTM、 和 CarezymeTM(Novozymes A/S)、 ClazinaseTM、 和 PuradaxHATM(Genencor International Inc.)、 以及 KAC-500(B)TM(Kao Corporation)。
     过氧化物酶 / 氧化酶 ： 适用的过氧化物酶 / 氧化酶包括那些植物、 细菌或真菌起源的酶。包括化学改 性的或蛋白工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞 (Coprinus) 的过 氧化物酶， 例如来自灰盖鬼伞 (C.cinereus) 的过氧化物酶， 及其变体如那些描述于 WO 93/24618、 WO 95/10602、 和 WO 98/15257 的过氧化物酶。
     可商购获得的过氧化物酶包括 GuardzymeTM(Novozymes A/S)。
     当存在于清洁组合物中时， 上述酶可以按所述组合物的重量计约 0.00001％至约 2％， 约 0.0001％至约 1％， 或甚至约 0.001％至约 0.5％酶蛋白的含量存在。
     酶稳定剂 - 可使用多种技术来稳定用于洗涤剂的酶。本发明使用的酶可由最终 组合物中存在的钙和 / 或镁离子水溶性源来稳定， 最终组合物将这种离子提供给酶。此外 也可使用常规的稳定剂例如多元醇 ( 如丙二醇或甘油 )、 糖或糖醇、 乳酸、 硼酸、 或硼酸衍 生物如芳族硼酸酯、 或苯基硼酸衍生物如 4- 甲酰基苯基硼酸， 并且所述组合物可如例如 WO 92/19709 和 WO 92/19708 所述进行配制。
     溶剂 - 合适的溶剂包括水与其它溶剂如亲脂性流体。合适的亲脂性流体的实例包 括硅氧烷、 其它硅酮、 烃、 二元醇醚、 甘油衍生物如甘油醚、 全氟胺、 全氟化和氢氟醚溶剂、 低 挥发性无氟有机溶剂、 二醇溶剂、 其它对环境友好的溶剂以及它们的混合物。
     光漂白剂 - 所述组合物可包含光漂白剂。光漂白剂优选地选自氧杂蒽染料光漂白 剂、 光引发剂以及它们的混合物。
     适用的光漂白剂包括催化光漂白剂和光引发剂。 适用的催化光漂白剂选自由具有 下列式的水溶性酞菁组成的组 ：
     其中 ： PC 是酞菁环系 ；Me 是 Zn ； Fe(II) ； Ca ； Mg ； Na ； K； Al-Z1 ； Si(IV) ； P(V) ； Ti(IV) ； Ge(IV) ； Cr(VI) ； Ga(III) ； Zr(IV) ； In(III) ； Sn(IV) 或 Hf(VI) ；
     Z1 是卤化物 ； 硫酸盐 ； 硝酸盐 ； 羧化物 ； 链烷醇 ； 或氢氧离子 ；
     q为0； 1或2；
     r是1至4；
     Q1 是磺基或羧基 ； 或者式的基团 +
     -SO2X2-R1-X3 ； -O-R1-X3+ ； 或者 -(CH2)， -Y1+ ；
     其中
     R1 是支化的或非支化的 C1-C8 亚烷基 ； 或 1， 3- 或 1， 4- 亚苯基 ；
     X2 是 -NH- ； 或 -N-C1-C5 烷基 ； +
     X3 是下式的基团
     或， 在 R1 ＝ C1-C8 亚烷基的情况下， 也是下式的基团
     Y1+ 是下式的基团t为0或1
     其中在以上式中
     R2 和 R3 彼此独立地为 C1-C6 烷基
     R4 为 C1-C5 烷基 ； C5-C7 环烷基或 NR7R8 ；
     R5 和 R6 彼此独立地为 C1-C5 烷基 ；
     R7 和 R8 彼此独立地为氢或 C1-C5 烷基 ；
     R9 和 R10 彼此独立地为未取代 C1-C6 烷基或被羟基、 氰基、 羧基、 C1-C6 烷氧基、 C1-C6 烷氧基、 苯基、 萘基或吡啶基取代的 C1-C6 烷基 ；
     u为1至6；
     A1 是构成芳族 5- 至 7- 元氮杂环的单位， 在合适的情况下也可以再包含一个或两 个氮原子作为环成员， 和
     B1 是构成饱和 5- 至 7- 元氮杂环的单位， 在合适的情况下位也可以包含 1 至 2 个 氮、 氧和 / 或硫原子作为环成员 ；
     Q2 是羟基 ； C1-C22 烷基 ； 支链 C3-C22 烷基 ； C2-C22 烯基 ； 支链 C3-C22 烯基以及它们的 混合物 ； C1-C22 烷氧基 ； 磺基或羧基 ； 式基团
     下式的支链烷氧基团下式的烷基乙烯氧基单元
     -(T1)d-(CH2)b(OCH2CH2)a-B3
     或下式的酯基团
     COOR18
     其中
     B2 是氢 ； 羟基 ； C1-C30 烷基 ； C1-C30 烷氧基 ； -CO2H ； -CH2COOH ； -SO3-M1 ； -OSO3-M1 ； -PO32M1 ； -OPO32-M1 ； 以及它们的混合物 ；
     B3 是氢 ； 羟基 ； -COOH ； -SO3-M1 ； -OSO3M1 或 C1-C6 烷氧基 ；
     M1 是水溶性阳离子 ；
     T1 是 -O- ； 或 -NH- ；
     X1 和 X4 彼此独立地为 -O- ； -NH- 或 -N-C1-C5 烷基 ；
     R11 和 R12 彼此独立地为氢 ； 磺基及其盐 ； 羧基及其盐或羟基 ； R11 和 R12 基中的至少 一个是磺基或羧基或它们的盐，
     Y2 是 -O- ； -S- ； -NH- 或 -N-C1-C5 烷基 ；
     R13 和 R14 彼 此 独 立 地 为 氢 ； C1-C6 烷 基 ； 羟 基 -C1-C6 烷 基 ； 氰 基 -C1-C6 烷 基 ； 磺 基 -C1-C6 烷基 ； 羧基或卤素 -C1-C6 烷基 ； 未取代的苯基或卤素取代的苯基， C1-C4 烷基或 C1-C4 烷氧基 ； 磺基或羧基或 R13 和 R14 以及和它们结合的氮原子一起形成饱和的 5- 或 6- 元 杂环， 所述杂环也可另外包含氮原子或氧原子以作为环成员 ；
     R15 和 R16 彼此独立地为 C1-C6 烷基或芳基 -C1-C6 烷基 ；
     R17 是氢 ； 未取代的 C1-C6 烷基或被卤素、 羟基、 氰基、 苯基、 羧基、 C1-C6 烷氧基或 C1-C6 烷氧基取代的 C1-C6 烷基 ；
     R18 是 C1-C22 烷基 ； 支链 C3-C22 烷基 ； C1-C22 烯基或支链 C3-C22 烯基 ； C3-C22 乙二醇 ； C1-C22 烷氧基 ； 支链 C3-C22 烷氧基 ； 以及它们的混合物 ；
     M 是氢 ； 或碱金属离子或铵离子，
     Z2 是氯 ； 溴； 烷基硫酸根或芳基硫酸根离子 ；
     a为0或1；
     b为0至6；
     c 为 0 至 100 ；
     d为0； 或1；
     e 为 0 至 22 ；
     v 为 2 至 12 的整数 ；
     w为0或1； 和
     A 是有机的或无机的离子， 和
     s 在单价阴离子 A 的情况下等于 r， 在多价阴离子的情况下小于或等于 r， As- 对于 补偿正电荷来说是必需的 ； 其中如果 r 不等于 1， Q1 基可以是相同的或不同的， 并且其中酞 菁环系也可另外包含增溶基团 ；
     其它合适的催化光漂白剂包括氧杂蒽染料以及它们的混合物。在另一方面， 合适 的催化光漂白剂选自由下列组成的组 ： 磺化酞菁锌、 磺化酞菁铝、 Eosin Y、 Phoxine B、 Rose Bengal、 C.I.Food Red 14 以及它们的混合物。在另一方面适用的光漂白剂可为磺化酞菁 锌和磺化酞菁铝的混合物， 所述混合物的磺化酞菁锌对磺化酞菁铝的重量比大于 1， 大于 1 但是小于约 100， 或甚至约 1 至约 4。
     合适的光引发剂包括选自由下列组成的组的光引发剂 ： 芳族 1， 4- 醌例如蒽醌和 萘醌 ； α- 氨基酮， 尤其是那些包含苯甲酰部分的氨基酮， 另外称为 α- 氨基苯乙酮 ； α羟 基酮， 尤其是 α- 羟基苯乙酮 ； 含磷的光引发剂， 包括单酰基、 双酰基和三酰基氧化膦和硫 化物 ； 二烷氧基苯乙酮 ； α- 卤代苯乙酮 ； 三酰基氧化膦 ； 苯偶姻和苯偶姻基光引发剂、 以及 它们的混合物。在另一方面， 合适的光引发剂包括选自由下列组成的组的光引发剂 ： 2- 乙基蒽醌 ； 维生素 K3 ； 2- 硫酸蒽醌 ； 2- 甲基 1-[4- 苯基 ]-2- 吗啉基丙基 -1- 酮 (Irgacure 907) ； (2- 苄 基 -2- 二 甲 基 氨 基 -1-(4- 吗 啉 基 苯 基 )- 丁 基 -1- 酮 (Irgacure 369) ； (1-[4-(2- 羟乙氧基 )- 苯基 ]-2 羟基 -2- 甲基 -1- 丙基 -1- 酮 )(Irgacure 2959) ； 1- 羟 基环己基苯基酮 (Irgacure 184) ； 低聚 [2- 羟基 2- 甲基 -1-[4(1- 甲基 )- 苯基 ] 丙酮 (Esacure KIP150) ； 2-4-6-( 三甲基苯甲酰 ) 二苯基 - 氧化膦， 双 (2， 4， 6- 三甲基苯甲 酰 )- 苯基 - 氧化膦 (Irgacure TPO-L) ； 以及它们的混合物。 可以组合使用上述光漂白剂 ( 可以使用任何光漂白剂的混合物 )。合适的光漂白 剂可得自 Aldrich， Milwaukee， Wisconsin， USA ； Frontier Scientific， Logan， Utah， USA ； Ciba Specialty Chemicals， Basel， Switzerland ； BASF， Ludwigshafen， Germany ； Lamberti S.p.A， Gallarate， Italy ； Dayglo Color Corporation， Mumbai， India ； Organic Dyestuffs Corp.， East Providence， Rhode Island， USA ； 和 / 或根据本文包含的实例制造的光漂白剂。
     织物调色剂 - 所述组合物包含织物调色剂。织物调色剂能改变表面颜色是因为它 们吸收至少一部分可见光谱。适用的织物调色剂包括染料、 染料 - 粘土缀合物、 和颜料， 它 们满足详述于 WO2007/087257 的第 15 和 16 页的测试方法 1 的需要， 并且以引用方式并入本 文。适用的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自由下列组成的 组： 属于颜色索引 (C.I.) 分类的直接蓝、 直接红、 直接紫、 酸性蓝、 酸性红、 酸性紫、 碱性蓝、 碱性紫和碱性红、 或它们的混合物， 例如 ：
     (1) 三 - 偶氮直接蓝染料的式
     819) ； (2， 4， 6 三甲基苯甲酰 ) 苯基磷酸乙基酯 (Lucirin其中 A、 B 和 C 萘基环中的至少两个被磺酸根基团取代， C 环可在位点 5 被 NH2 或 NHPh 基团取代， X 是由最多 2 个磺酸根基团取代的苄基或萘基环， 可在位点 2 被 OH 基团取 代， 也可被 NH2 或 NHPh 基团取代。
     (2) 双 - 偶氮直接紫染料的式 ：
     其中 Z 是 H 或苯基， A 环优选地被甲基和甲氧基基团在箭头所示位点取代， A 环也 可以是萘基环， Y 基团是苯基或萘基环， 它被硫酸根基团取代， 也可被甲基基团一取代或二
     取代。
     (3) 蓝色或红色酸性染料的式其中 X 和 Y 中的至少一个必须是芳族基团。在一个方面， 两个芳族基团都可以是 取代的苄基或萘基， 它可以被非水增溶的基团取代， 例如烷基或烷氧基或芳氧基， X和Y不 能被水增溶的基团取代， 例如磺酸盐或羧酸盐。在另一方面， X 是硝基取代的苄基基团， Y是 苄基基团
     (4) 红色酸性染料的结构
     其中 B 是萘基或苄基基团， 它可以被非水增溶的基团取代， 例如烷基或烷氧基或 芳氧基， B 不能被水增溶的基团取代， 例如磺酸盐或羧酸盐。
     (5) 重氮基染料的结构
     其中彼此独立的 X 和 Y 是氢、 C1 至 C4 烷基或 C1 至 C4 烷氧基， Rα 是氢或芳基， Z是 C1 至 C4 烷基 ； C1 至 C4 烷氧基 ； 卤素 ； 羟基或羧基， n 是 1 或 2 而 m 是 0、 1 或 2、 以及它们的相 应的盐、 以及它们的混合物
     (6) 下列结构的三苯甲烷染料
     以及它们的混合物。 在另一方面， 合适的小分子染料选自由下列组成的组 ： 颜色索 引 (Society of Dyers and Colourists， Bradford， UK) 号直接紫 9、 直接紫 35、 直接紫 48、 直接紫 51、 直接紫 66、 直接蓝 1、 直接蓝 71、 直接蓝 80、 直接蓝 279、 酸性红 17、 酸性红 73、 酸 性红 88、 酸性红 150、 酸性紫 15、 酸性紫 17、 酸性紫 24、 酸性紫 43、 酸性红 52、 酸性紫 49、 酸性 蓝 15、 酸性蓝 17、 酸性蓝 25、 酸性蓝 29、 酸性蓝 40、 酸性蓝 45、 酸性蓝 75、 酸性蓝 80、 酸性蓝 83、 酸性蓝 90 和酸性蓝 113、 酸性黑 1、 碱性紫 1、 碱性紫 3、 碱性紫 4、 碱性紫 10、 碱性紫 35、 碱性蓝 3、 碱性蓝 16、 碱性蓝 22、 碱性蓝 47、 碱性蓝 66、 碱性蓝 75、 碱性蓝 159 以及它们的混 合物。在另一方面， 合适的小分子染料选自由下列组成的组 ： 颜色索引 (Society of Dyers and Colourists， Bradford， UK) 号酸性紫 17、 酸性紫 43、 酸性红 52、 酸性红 73、 酸性红 88、 酸性红 150、 酸性蓝 25、 酸性蓝 29、 酸性蓝 45、 酸性蓝 113、 酸性黑 1、 直接蓝 1、 直接蓝 71、 直 接紫 51 以及它们的混合物。在另一方面， 合适的小分子染料包括选自由下列组成的组的小 分子染料 ： 颜色索引 (Society of Dyers and Colourists， Bradford， UK) 号酸性紫 17、 直 接蓝 71、 直接紫 51、 直接蓝 1、 酸性红 88、 酸性红 150、 酸性蓝 29、 酸性蓝 113 或它们的混合 物。
     合适的聚合物染料选自由下列组成的组 ： 包含共轭色原体 ( 染料 - 聚合物共轭 物 ) 的聚合物、 色原体共聚合进入聚合物主链的聚合物、 以及它们的混合物。
     在另一方面， 合适的聚合物染料选自由下列组成的组 ： 以商品名 Liquitint (Milliken， Spartanburg， South Carolina， USA) 销售的织物 - 实体着色剂、 由至少一种 活性染料形成的染料 - 聚合物共轭物、 以及选自由包含以下部分的聚合物形成的组的聚合
     物： 羟基部分、 伯胺部分、 仲胺部分、 硫醇部分、 以及它们的混合物。在另一方面， 合适的聚 合物染料包括选自由下列组成的组的聚合物染料 ： Liquitint (Milliken， Spartanburg， South Carolina， USA)Violet CT、 与 活 性 蓝 共 轭 的 羟 甲 基 纤 维 素 (CMC)、 活性紫或活 性 红 染 料 如 与 C.I. 活 性 蓝 19 共 轭 的 CMC， 由 Megazyme， Wicklow， Ireland 以 产 品 名 AZO-CM-CELLULOSE， 产品代码 S-ACMC 出售、 烷氧基化的三苯甲烷聚合着色剂、 烷氧基化的 噻吩聚合着色剂以及它们的混合物。
     合适的染料粘土共轭物选自由下列组成的组 ： 包含至少一种阳离子 / 碱性染料和 绿土粘土、 以及它们的混合物。在另一方面， 合适的染料粘土共轭物选自由下列组成的组 ： 阳离子 / 碱性染料， 它选自由 C.I. 碱性黄 1 至 108、 C.I. 碱性橙 1 至 69、 C.I. 碱性红 1 至 118、 C.I. 碱性紫 1 至 51、 C.I. 碱性蓝 1 至 164、 C.I. 碱性绿 1 至 14、 C.I. 碱性褐 1 至 23、 CI 碱性黑 1 至 11 组成的组， 以及一种粘土， 它选自由下列蒙脱石粘土、 锂蒙脱石粘土、 滑石粉 粘土、 以及它们的混合物组成的组。 在另一方面， 合适的染料粘土共轭物选自由下列组成的 组： 蒙脱石碱性蓝 B7 C.I.42595 共轭物、 蒙脱石碱性蓝 B9 C.I.52015 共轭物、 蒙脱石碱性 紫 V3 C.I.42555 共轭物、 蒙脱石碱性绿 G1 C.I.42040 共轭物、 蒙脱石碱性红 R1 C.I.45160 共轭物、 蒙脱石碱性蓝 C.I. 碱性黑 2 共轭物、 锂蒙脱石碱性蓝 B7 C.I.42595 共轭物、 锂蒙脱 石碱性蓝 B9 C.I.52015 共轭物、 锂蒙脱石碱性紫 V3 C.I.42555 共轭物、 锂蒙脱石碱性绿 G1 C.I.42040 共轭物、 锂蒙脱石碱性红 R1 C.I.45160 共轭物、 锂蒙脱石 C.I. 碱性黑 2 共轭物、 皂碱性蓝 B7 C.I.42595 共轭物、 皂碱性蓝 B9 C.I.52015 共轭物、 皂碱性紫 V3 C.I.42555 共轭物、 皂碱性绿 G1 C.I.42040 共轭物、 皂碱性红 R1 C.I.45160 共轭物、 皂 C.I. 碱性黑 2 共轭物、 以及它们的混合物。
     合适的颜料选自由下列组成的组 ： 黄烷士酮、 靛蒽醌、 包含 1 至 4 个氯原子的氯化 靛蒽醌、 皮蒽酮、 二氯皮蒽酮、 单溴二氯皮蒽酮、 二溴二氯皮蒽酮、 四溴皮蒽酮、 二萘嵌苯 -3， 4， 9， 10- 四羧酸二酰亚胺酯， 其中所述酰亚胺基团可被也可不被 C1-C3 的烷基或苯基或杂 环基取代， 并且其中苯基和杂环基可另外带有不提供水中溶解度的取代基、 吡唑嘧啶羧酸 酰胺、 蒽酮紫、 异蒽酮紫、 二嗪颜料、 每个分子可包含最多 2 个氯原子的铜酞菁、 多氯铜酞菁 或每个分子包含最多 14 个溴原子的多溴铜酞菁、 以及它们的混合物。
     在另一方面， 合适的颜料包括选自下列组的颜料 ： 群青蓝 (C.I. 颜料蓝 29)、 群青 紫 (C.I. 颜料紫 15)、 以及它们的混合物。
     可以组合使用上述织物调色剂 ( 可使用织物调色剂的任何混合物 )。合适的织物 调色剂可得自 Aldrich， Milwaukee， Wisconsin， USA ； Ciba Specialty Chemicals， Basel， Switzerland ； BASF， Ludwigshafen， Germany ； Dayglo Color Corporation， Mumbai， India ； Organic Dyestuffs Corp.， East Providence， Rhode Island， USA ； Dystar， Frankfurt， Germany ； Lanxess ， Leverkusen ， Germany ； Megazyme ， Wicklow ， Ireland ； Clariant ， Muttenz， Switzerland ； Avecia， Manchester， UK 和 / 或根据本文包含的实例制成。
     适宜的调色剂更详细地描述于 US 7,208,459 B2 中。
     优选的织物调色剂选自直接紫 9、 直接紫 99、 酸性红 52、 酸性蓝 80 以及它们的混合 物。
     漂白催化剂 - 漂白催化剂通常能够从过氧酸和 / 或其盐接受氧原子并将所述氧原 子转移到氧化底物。适用的漂白催化剂包括但不限于 ： 亚胺阳离子和聚离子、 亚胺两性离子、 改性的胺、 改性的氧化胺、 N- 磺酰亚胺、 N- 膦酰亚胺、 N- 酰基亚胺、 噻二唑二氧化物、 全 氟亚胺 ； 环状糖酮 ； 以及它们的混合物。
     适宜的亚胺阳离子和聚离子包括但不限于 N- 甲基 -3， 4- 二氢异喹啉四氟硼酸盐， 按描述于 Tetrahedron(1992)， 49(2)， 423-38 中的方法制备 ( 参见例如， 化合物 4， p.433) ； N- 甲基 -3， 4- 二氢异喹啉 对甲苯磺酸盐， 按描述于美国专利 5,360,569 中的方 对甲苯磺酸盐， 按描 内盐， 法制备 ( 参见例如第 11 列， 实施例 1) ； 和 N- 辛基 -3， 4- 二氢异喹啉
     述于美国专利 5,360,568 中的方法制备 ( 参见例如， 第 10 列， 实施例 3)。 适用的亚胺两性离子的包括但不限于 N-(3- 磺基丙基 )-3， 4- 二氢异喹啉 按描述于美国专利 5,576,282 中的方法制备 ( 参见例如， 第 31 列， 实施例 II) ； N-[2-( 磺氧 基 ) 十二烷基 ]-3， 4- 二氢异喹啉 内盐， 按描述于美国专利 5,817,614 中的方法制备 ( 参 见例如， 列 32， 实施例 V) ； 2-[3-[(2- 乙基己基 ) 氧代 ]-2-( 磺氧基 )]-3， 4- 二氢异喹啉 内盐， 按描述于 WO05/047264 中的方法制备 ( 参见例如， 第 18 页， 实施例 8) 和 2-[3-[(2- 丁 基辛基 ) 氧代 ]-2-( 磺氧基 ) 丙基 ( 酯 )]-3， 4- 二氢异喹啉
     内盐。适宜的改性的胺氧转移催化剂包括但不限于 1， 2， 3， 4- 四氢 -2- 甲基 -1- 羟基异 喹啉， 其可依照描述于 Tetrahedron Letters(1987 年 )， 28(48)， 6061-6064 中的方法制备。 适宜的改性的氧化胺氧转移催化剂包括但不限于 1- 羟基 -N- 氧代 -N-[2-( 磺氧基 ) 癸 基 ]-1， 2， 3， 4- 四氢异喹啉钠。 适宜的 N- 磺酰基亚胺氧气转移催化剂包括但不限于 3- 甲基 -1， 2- 苯并异噻 唑 -1， 1- 二氧化物， 依照描述于 Journal of Organic Chemistry(1990)， 55(4)， 1254-61 中 的方法制备。
     适宜的 N- 膦酰基亚胺氧转移催化剂包括但不限于 [R-(E)]-N-[(2- 氯 -5- 硝基苯 基 ) 亚甲基 ]- 对苯基 - 对 -(2， 4， 6- 三甲基苯基 ) 次膦酸酰胺， 其可依照描述于 Journal of the Chemical Society， Chemical Communications(1994)， (22)， 2569-70 中的方法制 备。
     适宜的 N- 酰基亚胺氧转移催化剂包括但不限于 [N(E)]-N-( 苯基亚甲基 ) 乙酰 胺， 其可依照描述于 Polish Journal of Chemistry(2003 年 )， 77(5)， 577-590 中的方法制 备。
     适宜的噻二唑二氧化物氧转移催化剂包括但不限于 3- 甲基 -4- 苯基 -1， 2， 5- 噻 二唑 1， 1- 二氧化物， 其可依照描述于美国专利 5,753,599( 第 9 列， 实施例 2) 中的方法制 备。
     适宜的全氟亚胺氧转移催化剂包括但不限于 (Z)-2， 2， 3， 3， 4， 4， 4- 七氟 -N-( 壬氟 丁基 ) 丁酰亚胺氟化物， 其可根据 Tetrahedron Letters(1994)， 35(34)， 6329-30 中所述的 方法制备。
     适宜的环状糖酮氧转移催化剂包括但不限于如按美国专利 6,649,085( 第 12 列， 实施例 1) 中的方法制备的 1， 2： 4， 5- 二 -O- 异亚丙基 -D- 赤型 -2， 3-hexodiuro-2， 6- 吡喃 糖。
     所述漂白催化剂优选包含亚胺和 / 或羰基官能团， 并且所述漂白活性剂通常能够 在接受氧原子之后形成过氧亚胺正离子和 / 或双环氧乙烷官能团， 尤其是从过氧酸和 / 或
     其盐接受氧原子。所述漂白催化剂优选包含过氧亚胺正离子官能团和 / 或所述漂白催化 剂能够在接受氧原子之后形成过氧亚胺正离子官能团， 尤其是从过氧酸和 / 或其盐接受氧 原子。所述漂白催化剂优选包含环状亚胺官能团， 优选其中环状部分具有五个至八个原子 ( 包括氮原子 )， 优选六个原子。漂白催化剂优选包含芳香亚胺 胺 官能团， 优选二环芳香亚 官能团， 优选 3， 4- 二氢异喹啉官能团。所述亚胺官能团通常是季亚胺官能团， 并且通常能够形成接受氧原子的季过氧亚胺正离子官能团， 尤其是从过氧酸和 / 或其盐接受氧原 子。
     所述漂白催化剂优选具有与以下式相符的化学结构 ：
     其中 ： n 和 m 独立地为 0 至 4， 优选 n 和 m 均为 0 ； 每个 R1 独立地选自取代或未取代 的基团， 所述基团选自由下列组成的组 ： 氢、 烷基、 环烷基、 芳基、 稠合的芳基、 杂环、 稠合的 杂环、 硝基、 卤素、 氰基、 磺酸根、 烷氧基、 酮基、 羧基， 和烷氧羰基 ； 并且任何两个邻近的 R1 取 代基可结合形成稠合的芳基、 稠合的碳环或稠合的杂环 ； 每个 R2 独立地选自取代或未取代 的基团， 所述基团独立地选自由下列组成的组 ： 氢、 羟基、 烷基、 环烷基、 烷芳基、 芳基、 芳烷 2 2 基、 亚烃基、 杂环、 烷氧基、 芳羰基、 羧甲基和氨基 ； 任何 R 可以与任何其它 R 相连接以形成 公共环部分 ； 任何偕 R2 可结合以形成羰基 ； 并且其中任何两种 R2 可结合以形成取代或未取 代的稠合不饱和部分 ； R3 为 C1 至 C20 取代或未取代的烷基 ； R4 为氢或所述 Qt-A 部分， 其中 ： Q 为支化或未支化的亚烷基， t ＝ 0 或 1， 并且 A 为阴离子基团， 所述阴离子基团选自由下列组 5 2成的组 ： OSO3 、 SO3 、 CO2 、 OCO2 、 OPO3 、 OPO3H 和 OPO2 ； R 为氢或 -CR11R12-Y-Gb-Yc-[(CR9R10) 8 其中 ： 每个 Y 独立地选自由下列组成的组 ： O、 S、 N-H 或 N-R8 ； 并且每个 R8 独立 y-O]k-R 部分， 地选自由下列组成的组 ： 烷基、 芳基和杂芳基， 所述部分是取代或未取代的， 并且无论取代 或未取代， 所述部分具有的碳原子均小于 21 ； 每个 G 独立地选自由下列组成的组 ： CO、 SO2、 9 10 11 12 SO、 PO 和 PO2 ； R 和 R 独立地选自由下列组成的组 ： H 和 C1-C4 烷基 ； R 和 R 独立地选自由 下列组成的组 ： H 和烷基， 或者当结合在一起时， 它们可形成羰基 ； b＝0或1； c 可以＝ 0 或 6 芳 1， 但是如果 b ＝ 0， 则 c 必须＝ 0 ； y 为 1 至 6 的整数 ； k 为 0 至 20 的整数 ； R 为 H 或烷基、 基或杂芳基部分 ； 所述部分是取代或未取代的 ； 并且如果 X 存在的话， 它是一种合适的电荷 4 平衡抗衡离子， 当 R 为氢时 X 优选存在， 合适的 X， 包括但不限于 ： 氯离子、 溴离子、 硫酸根、 甲酯硫酸根、 磺酸根、 对甲苯磺酸根、 四氟化硼和磷酸根。
     在本发明的一个实施例中， 所述漂白催化剂具有符合下文通式的结构 ：
     其中 R13 是包含 3 个至 24 个碳原子 ( 包括所述支链碳原子 ) 的支链烷基或包含 一个至 24 个碳原子的直链烷基 ； R13 优选是包含 8 个至 18 个碳原子的支链烷基或包含 8 个至 18 个碳原子的直链烷基 ； R13 优选地选自由下列组成的组 ： 2- 丙基庚基、 2- 丁基辛基、 2- 戊基壬基、 2- 己基癸基、 正十二烷基、 正十四烷基、 正己基癸基、 正十八烷基、 异壬基、 异 13 癸基、 异十三烷基和异十五烷基 ； R 优选地选自由下列组成的组 ： 2- 丁基辛基、 2- 戊基壬 基、 2- 己基癸基、 异十三烷基和异十五烷基。
     糖基水解酶 - 糖基水解酶通常具有对木葡聚糖和无定形纤维素底物的酶活性。糖 基水解酶优选地选自 GH 家族 5、 12、 44 或 74。
     对木葡聚糖底物的酶活性更详细地描述于下文中。 对非晶形纤维素底物的酶活性 更详细地描述于下文中。
     所述糖基水解酶优选属于糖基水解酶第 44 家族。糖基水解酶 (GH) 家族的定义更 详细地描述于 1991 年 “Biochem J.” 第 280 卷第 309-316 页中。
     所述糖基水解酶优选具有与序列标识号 1 至少 70％， 或至少 75％， 或至少 80％， 或 至少 85％， 或至少 90％， 或至少 95％同一性的序列。
     就本发明目的而言， 在两个氨基酸序列之间同一性程度使用 Needleman-Wunsch 算法 (Needleman 和 Wunsch， 1970 年 J.Mol.Biol.48 ： 443-453) 如 EMBOSS 软件包在 Needle 程序中执行的 (EMBOSS ： The European Molecular Biology Open Software Suite， Rice 等 人， 2000， Trends in Genetics 16 ： 276-277)， 优选 3.0.0 或更高的版本。所用的任选参数 是， 10 的空位罚分， 0.5 的空位延伸罚分， 和 EBLOSUM62(EMBOSS 版的 BLOSUM62) 取代矩阵。 使用标记为 “最长同一性” 的 Needle 输出 ( 使用 -nobrief 选项获得 ) 作为百分比同一性， 并且如下计算 ： ( 相同残基 ×100)/( 序列长度 - 序列中的总空位数 )。
     适宜的糖基水解酶选自由下列组成的组 ： 得自类芽胞杆菌 polyxyma( 野生型 ) 的 GH 第 44 家族糖基水解酶如 XYG1006， 描述于 WO 01/062903 或为其变体 ； 得自地衣芽孢杆菌 ( 野生型 ) 的 GH 第 12 家族糖基水解酶， 如序列 No.ID ： 1， 描述于 WO 99/02663 或为其变体 ； 得自芽孢杆菌属 agaradhaerens( 野生型 ) 的 GH 第 5 家族糖基水解酶或其变体 ； 得自类芽胞 杆菌 ( 野生型 ) 的 GH 第 5 家族糖基水解酶， 如 XYG1034 和 XYG 1022， 描述于 WO 01/064853 或其变体 ； 得自 Jonesia sp.( 野生型 ) 的 GH 第 74 家族糖基水解酶， 如 XYG1020， 描述于 WO 2002/077242 或其变体 ； 和得自里氏木霉 ( 野生型 ) 的 GH 第 74 家族糖基水解酶， 如在 WO03/089598 的序列 ID no.2 中更详细描述的酶， 或其变体。
     优选的糖基水解酶选自由下列组成的组 ： 得自类芽孢杆菌 ( 野生型 ) 的 GH 第 44 家族糖基水解酶， 如 XYG1006 或其变体。
     糖基水解酶对木葡聚糖底物的活性
     如果根据下列检测分析法， 纯酶在 pH 7.5 下具有大于 50000XyloU/g 的比活度， 则 认为酶对木葡聚糖具有活性。
     使用得自 Megazyme(Ireland) 的 AZCL- 木葡聚糖作为底物 ( 蓝色底物 )， 测定木葡 聚糖酶活性。
     在 20℃和搅拌下， 在 1.5mL Eppendorf 管中， 将 0.2％蓝色底物的溶液悬浮于 pH 为 7.5 的 0.1M 磷酸盐缓冲液中 ( 各 0.75mL)， 加入 50 微升酶溶液， 并且在 1200rpm 速率搅 拌下， 使它们在 40℃的 Eppendorf 混匀仪中培养 20 分钟。培养后， 通过在 14,000rpm 速率下离心 4 分钟， 使有色溶液与固体分离， 并且使用分光光度计， 在 1cm 比色皿中测定上清液 在 600nm 处的吸光度。将一个 XyloU 单位定义为 1cm 比色皿中在 600nm 处获得 0.24 吸光 度的酶量。
     仅使用介于 0.1 至 0.8 的吸光度值来计算 XyloU 活性。如果测得的吸光度值在此 范围之外， 则应相应地进行初始酶浓度的最优化。
     糖基水解酶对无定形纤维素底物的活性
     如果根据下列检测分析法， 纯酶在 pH7.5 下具有大于 20000EBG/g 的比活度， 则认 为酶对非晶形纤维素具有活性。用作缓冲液和底物的化学物质是至少试剂级的商业产品。
     内葡聚糖酶活性检测分析材料 ：
     pH 为 7.5 的 0.1M 磷酸盐缓冲液
     Cellazyme C 片剂， 由 Megazyme International(Ireland) 提供。
     玻璃微纤维过滤器， GF/C， 9cm 直径， 由 Whatman 提供。
     方法 ：
     在测试管中， 使 1mL pH 7.5 的缓冲液与 5mL 去离子水混合。
     加入 100 微升酶样本 ( 或具有已知重量 ： 重量稀释因子的酶样本稀释液 )。将 1 片 Cellazyme C 片剂加入到每个管中， 将管封盖， 并且在涡旋搅拌器上混合 10 秒。将管放 置于温度为 40℃的恒温水浴中。15 分钟、 30 分钟和 45 分钟后， 通过将管倒转来混合管中 内容物， 然后将管再放置于水浴中。60 分钟后， 通过倒转来混合管中内容物， 然后通过 GF/C 过滤器过滤。将滤液收集于干净的管中。
     用分光光度计测定 590nm 处的吸光度 (A 酶 )。通过加入 100μL 水而不是 100 微 升酶稀释液， 测定空白值 A 水。
     计算的 δA ＝ A 酶 -A 水。
     δA 必须＜ 0.5。如果获得更高的结果， 则用不同的酶稀释因子进行重复。
     确定 DF0.1， 其中 DF0.1 为需要达到 δA ＝ 0.1 的稀释因子。
     单位定义 ： 1 个内型 -β- 葡聚糖酶活度单位 (1EBG) 是在上文指定的检测分析条 件下达到 δA ＝ 0.10 的酶量。因此， 如果例如在用为 100 的稀释因子稀释后， 指定的酶样 本达到 δA ＝ 0.10， 则所述酶样本具有 100EBG/g 的活度。
     两亲烷氧基化油脂清洁聚合物 - 本发明的两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物是指 任何具有平衡的亲水性和疏水性的烷氧基化的聚合物， 使得它们从织物和表面移除油脂颗 粒。 本发明两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物具体的实施方案包括核结构和多个连接到那个 核结构的烷氧基化物基团。
     所述核结构可包括聚亚烷基亚胺结构， 其以密集的形式包含式 (I)、 (II)、 (III) 和 (IV) 的重复单元 ：
     其中在每个实例中， # 代表在氮原子和式 (I)、 (II)、 (III) 或 (IV) 的两个邻近重 1 复单元的基团 A 游离的结合位之间的键的二分之一 ； 在每个实例中， * 代表连接到烷氧基 化物基团中的一个键的二分之一 ； 并且 A1 独立地选自直链或支链的 C2-C6- 亚烷基 ； 其中所 述聚亚烷基亚胺结构由式 (I)1 重复单元、 式 (II)x 重复单元、 式 (III)y 重复单元和式 (IV) y+1 重复单元组成， 其中在每个实例中， x 和 y 具有 0 至约 150 范围内的值， 其中聚亚烷基亚 胺核结构的平均重均分子量 Mw， 为约 60 至约 10,000g/mol 范围内的值。
     所述核结构可或者包含至少一种选自式 (I.a) 和 / 或 (I.b)N-( 羟烷基 ) 胺的缩 合产物的化合物的聚链烷醇胺结构，
     其中 A 独立地选自 C1-C6- 亚烷基 ； R1、 R1*、 R2、 R2*、 R3、 R3*、 R4、 R4*、 R5 并且 R5* 独立 地选自氢、 烷基、 环烷基或芳基， 其中至少三种提及的基团可以为任选地取代的 ； 并且 R6 选 自氢、 烷基、 环烷基或芳基。其中至少三种提及的基团可以为任选地取代的。
     连接到所述核结构多个烯氧基基团独立地选自式 (V) 的烯氧基单元
     其中在每个实例中， * 代表连接到式 (I)、 (II)、 (III) 或 (IV) 的氮原子键的二分 2 之一 ； 在每个实例中 A 独立地选自 1， 2- 丙烯、 1， 2- 丁烯和 1， 2- 异丁烯 ； A3 为 1， 2- 丙烯 ； 在每个实例中， R 独立地选自氢和 C1-C4- 烷基 ； m 具有 0 至约 2 范围内的平均值 ； n 具有 20 至约 50 范围内的平均值 ； 且 p 具有 10 至约 50 范围内的平均值 ；
     两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物具体的实施方案可选自具有内聚环氧乙烷嵌段 和外聚丙烯氧基嵌段烷氧基化的聚亚烷基亚胺， 乙氧基化度和丙氧基化度不会超过低于具 体的限定值。根据本发明的烷氧基化聚亚烷基亚胺的具体实施方案具有约 0.6 的最小聚乙 烯嵌段对聚丙烯嵌段 (n/p) 的比率和约 1.5(x+2y+1)1/2 的最大比率。 已发现， 具有约 0.8 至 1/2 约 1.2(x+2y+1) 的 n/p 比率的烷氧基化聚亚烷基亚胺具有特别有益的特性。
     根据本发明的烷氧基化聚亚烷基亚胺具有一条主链， 所述主链由伯胺、 仲胺和叔 胺氮原子组成， 其通过亚烷基 A 互相连接并且是无规排列的。伯氨基部分， 其是聚亚烷基亚 胺主链的主要链和侧链的起始点或终结点并且其剩余的氢原子随后被亚烷氧基单元取代， 分别被称为分子式 (I) 或 (IV) 的重复单元。仲氨基部分， 其剩余的氢原子随后被亚烷氧基 单元取代， 被称为分子式 (II) 的重复单元。叔氨基部分， 其使主要链和侧链分叉， 被称为分 子式 (III) 的重复单元。
     由于在聚亚烷基亚胺主链的形成中会发生环化， 在主链中还可能存在少量的环状 氨基部分。当然， 包含环状氨基部分的此类聚亚烷基亚胺以与由非环状伯氨基和仲氨基部 分组成的那些相同的方式烷氧基化。
     由氮原子和基团 A1 组成的聚亚烷基亚胺主链具有约 60 至约 10,000g/mol， 优选约 100 至约 8,000g/mol， 并且更优选约 500 至约 6,000g/mol 的平均分子量 Mw。
     (x+2y+1) 的和对应于存在于一条单独的聚亚烷基亚胺主链中的亚烷基亚胺单元 的总数， 并因此直接与所述聚亚烷基亚胺主链的分子量相关。 然而， 在本说明书中给出的值 涉及所述混合物中存在的所有聚亚烷基亚胺的平均数。 (x+2y+2) 的和对应于存在于一条单 独的聚亚烷基亚胺主链中的氨基的总数。
     连接氨基氮原子的基团 A1 可以是相同或不同的、 直链或支链的 C2-C6- 亚烷基， 如 1， 2- 乙烯、 1， 2- 丙烯、 1， 2- 丁烯、 1， 2- 异丁烯、 1， 2- 亚戊基、 1， 2- 亚己基或六亚甲基。优选 的支链亚烷基是 1， 2- 丙烯。优选的直链亚烷基是乙烯和六亚甲基。更优选的亚烷基是 1， 2- 乙烯。
     聚亚烷基亚胺主链中伯胺基和仲胺基的氢原子可被分子式 (V) 的亚烷氧基单元 取代。
     在该分子式中， 所述变量优选具有以下所给出的一种含义 ：
     在各种情况下， A2 选自 1， 2- 亚丙基、 1， 2- 亚丁基和 1， 2- 异亚丁基 ； A2 优选为 1， 2- 亚丙基。 A3 为 1， 2- 亚丙基 ； 在各种情况下， R 选自氢和 C1-C4 烷基， 如甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基和叔丁基 ； R 优选为氢。在各种情况下， 系数 m 具有 0 至约 2 的值 ； m 优选为 0 或大约 1 ； 更优选 m 为 0。系数 n 具有在约 20 至约 50 范围内， 优选在约 22 至约 40 范围内， 并且更优选在约 24 至约 30 范围内的平均值。系数 p 具有在约 10 至约 50 范围 内， 优选在约 11 至约 40 范围内， 并且更优选在约 12 至约 30 范围内的平均值。
     分子式 (V) 的亚烷氧基单元优选是非随机序列的烷氧基化物嵌段。通过非随机 序列是指首先添加 [-A2-O-]m( 即最接近分子式 (I)、 (II) 或 (III) 的重复单元的氮原子的 3 键 )， 其次添加 [-CH2-CH2-O-]n， 而第三个添加 [-A -O-]p。该目标提供具有内层聚环氧乙烷 嵌段和外层聚环氧丙烷嵌段的烷氧基化聚亚烷基亚胺。
     这些分子式 (V) 的亚烷氧基单元的基本部分由亚乙氧基单元 -[CH2-CH2-O)]n- 和 亚丙氧基单元 -[CH2-CH2(CH3)-O]p- 形成。所述亚烷氧基单元还可具有小部分的亚丙氧基 或亚丁氧基单元 -[A2-O]m-， 即用氢原子饱和的聚亚烷基亚胺主链， 可最初使每摩尔存在的
     NH- 部分与少量的至多约 2mol， 尤其是约 0.5 至约 1.5mol， 特别是约 0.8 至约 1.2mol 的环 氧丙烷或环氧丁烷反应， 即初期烷氧基化。
     如果需要的话， 所述聚亚烷基亚胺主链的这种初始改性可使烷氧基化过程中反应 混合物的粘度降低。 然而， 所述改性通常不会影响烷氧基化聚亚烷基亚胺的性能特性， 因此 不构成优选的标准。
     所述两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物按所述组合物的重量计以约 0.05％至 10％ 范围内的含量存在于本发明的去污和清洁组合物中。 所述组合物的实施方案按重量计可包 含约 0.1％至约 5％。 更具体地讲， 所述实施方案可包含约 0.25 至约 2.5％的油脂清洁聚合 物。
     无规接枝共聚物 - 无规接枝共聚物包含 ： (i) 包含选自由下列组成的组的单体的 亲水性主链 ： 不饱和的 C1-C6 羧酸、 醚、 醇、 醛、 酮、 酯、 糖单元、 烷氧基单元、 马来酸酐、 诸如甘 油的饱和的多元醇、 以及它们的混合物 ； 和 (ii) 选自由下列组成的组的疏水性侧链 ： C4-C25 烷基、 聚丙烯、 聚丁烯、 饱和的 C1-C6 一元羧酸的乙烯基酯、 丙烯酸或甲基丙烯酸的 C1-C6 烷基 酯、 以及它们的混合物 ；
     所述聚合物优选具有通式 ：
     其中 X、 Y 和 Z 为封端单元， 独立地选自 H 或 C1-6 烷基 ； 每个 R1 独立地选自甲基和 乙基 ； 每个 R2 独立地选自 H 和甲基 ； 每个 R3 独立地为 C1-4 烷基 ； 且每个 R4 独立地选自吡咯 烷酮和苯基基团。所述聚环氧乙烷主链的重均分子量通常为约 1,000g/mol 至约 18,000g/ mol， 或约 3,000g/mol 至约 13,500g/mol， 或约 4,000g/mol 至约 9,000g/mol。选择 m、 n、 o、 p 和 q 的值， 以使得侧基的含量按所述聚合物的重量计为至少 50％， 或约 50％至约 98％， 或约 55 ％至约 95 ％， 或约 60 ％至约 90 ％。可用于本文的聚合物通常具有约 1,000 至约 100,000g/mol， 或优选约 2,500g/mol 至约 45,000g/mol， 或约 7,500g/mol 至约 33,800g/ mol， 或约 10,000g/mol 至约 22,500g/mol 的重均分子量。
     适宜的接枝共聚物更详细地描述于 WO07/138054、 WO06/108856 和 WO06/113314 中。
     储备碱度 - 所述组合物可具有大于 4.0， 优选地大于 7.5 的储备碱度。 本文所用术 语 “储备碱度” 是洗涤剂组合物缓冲能力的量度 (g/NaOH/100g 洗涤剂组合物 )， 其通过用盐
     酸将 1％ (w/v) 的洗涤剂组合物溶液滴定至 pH7.5 来测定， 即为了计算如本文所定义的储备 碱度 ：
     储 备 碱 度 ( 至 pH7.5) 以 碱 g NaOH/100g 产 品 百 分 比 ＝ (T×M×40×Vol)/ (10×Wt× 等分试样 )
     T ＝至 pH 7.5 时的滴度 (mL)
     M ＝ HCl 摩尔浓度， 为 0.2
     40 ＝ NaOH 的分子量
     Vol ＝总体积 ( 即 1000mL)
     W ＝产品重量 (10g)
     等分试样＝ (100mL)
     获得 10g 精确称量至小数点后两位的全配方洗涤剂组合物样本。应在除尘橱中， 使用 Pascall 采样器取得样本。向塑料烧杯中加入 10g 样本， 并加入 200mL 不含二氧化碳 的去离子水。 在搅拌台上， 使用磁子以 150rpm 的速度搅拌， 直至完全溶解， 并且搅拌至少 15 分钟。将烧杯中的内容物转移至 1 升容量瓶中， 并用去离子水补足至 1 升。混合均匀， 并且 立即使用 100mL 吸液管， 取 100mL±1mL 的等分试样。 使用能够读至 ±0.01pH 单位的 pH 计， 测定并记录样本的 pH 和温度， 并且搅拌， 以确保温度为 21℃ ±2℃。用 0.2M 的盐酸， 在搅 拌的同时滴定， 直至 pH 准确测定为 7.5。记录所用的盐酸毫升数。取三次相同重复试验的 平均滴度。进行所述计算， 算得至 pH7.5 时的 RA。 本发明的洗涤剂组合物的 RA 将大于 7.5 并且优选地大于 8。RA 可为大于 9 或甚 至大于 9.5 或 10 或更高。所述 RA 可最多为 20 或更高。
     可由例如一种或多种碱金属硅酸盐 ( 结晶层状硅酸盐除外 )、 碱金属碳酸盐来提 供适当的储备碱度， 所述碱金属硅酸盐典型为非晶形硅酸盐， 通常为 1.2 至 2.2 比率的钠 盐， 所述碱金属碳酸盐典型为碳酸钠、 碳酸氢钠和 / 或倍半碳酸钠。 STPP 和过酸盐如过硼酸 盐和过碳酸盐也对碱度有贡献。 需要缓冲作用， 以在洗涤过程期间维持碱性 pH， 中和污垢的 酸性， 尤其是由脂肪酶所释放的脂肪酸。
     香料 - 所述组合物可包含香料。香料可进行胶囊包封， 例如通过淀粉包封。香料 可通过尿素 - 甲醛或三聚氰胺 - 甲醛材料进行胶囊包封。此类香料胶囊包封物可为香料微 胶囊的形式。
     组合物可包含胶囊包封的香料和非胶囊包封的香料， 其中香料原料的重量比具有 1 2 3 4 1 2 3 其中 R R R 各自独立地选自 H、 烷基、 芳基、 烷基芳基、 环状 以下通式结构 ： R R R CC(O)OR ， 1 2 3 烷基， 并且其中至少一个， 优选地至少两个 R R R 是 H， 以胶囊包封的香料形式存在的香料 原料与那些以非胶囊包封的香料形式存在的香料原料 ( 也具有上述通式结构 ) 的重量比大 于 3 ∶ 1， 优选地大于 4 ∶ 1， 或甚至大于 5 ∶ 1， 或者 10 ∶ 1， 或者 15 ∶ 1 或甚至 20 ∶ 1。
     具有上述通式结构的一般香料原料包括 ： 乙酸苄酯、 己基乙酸酯、 烯丙基己酸酯、 香叶基丁酸酯、 香叶基乙酸酯、 乙基丁酸酯、 丁酸橙花酯、 香茅醇乙酸酯、 乙基 -2- 甲基戊酸 酯、 异丙基 2- 丁酸甲酯和烯丙基戊基乙醇酸酯。具有上述通式结构的其他香料原料包括 ： manzanateTM supplied by Quest(Ashford， Kent， UK) ； and vertenexTM， verdoxTM， violiffTM supplied by International Flavors and Fragrances(New Jersey， USA)。
     所述组合物可包含香料， 其中所述香料包含至少 10 重量％的一种或多种香料原
     料， 它们具有大于 0 但是小于或等于 350 道尔顿的分子量， 至少 80 重量％的所述一种或多 种香料原料具有至少 2.4 的 cLogP， 所述香料组合物包含至少 5 重量％的具有至少 2.4 的 cLogP 的一种或多种香料组分。
     本文所公开的香料组合物对遮蔽气味是尤其有用的， 尤其是脂肪酸气味， 更具体 地讲短链脂肪酸气味如丁酸的气味， 此类香料组合物在洗涤剂粉末中是尤其有用的。
     在本发明的一个方面所述香料包含至少 10％、 20％、 30％、 40％、 50％、 60％、 70％、 80％、 或甚至 90％的一种或多种香料原料， 该香料原料具有大于 0 但小于或等于 350 道尔 顿， 约 100 道尔顿至约 350 道尔顿， 约 130 道尔顿至约 270 道尔顿， 或甚至约 140 道尔顿至 约 230 道尔顿的分子量 ； 至少 80 重量％、 85 重量％、 90 重量％或甚至 95 重量％的所述一种 或多种香料原料具有至少 2.4， 约 2.75 至约 8.0 或甚至越 2.9 至约 6.0 的 cLogP， 所述香料 包含至少 5 重量％， 15 重量％， 25 重量％， 35 重量％， 45 重量％， 55 重量％， 65 重量％， 75 重 量％， 85 重量％， 或甚至 95 重量％的所述一种或多种香料组分， 该香料组分具有的 cLogP 在 至少 2.4， 约 2.75 至约 8.0 或甚至约 2.9 至约 6.0 的范围内。在本发明的所述方面， 所述一 种或多种香料组分可选自席夫碱、 醚、 酚、 酮、 醇、 酯、 内酯、 醛、 腈、 天然油， 或它们的混合物。
     洗涤方法 本发明包括一种清洁和 / 或处理某个区域、 特别是表面或织物的方法。上述方法 包括以下步骤 ： 将申请人的清洁组合物实施例 ( 以纯物质形式或稀释在洗涤液体中 ) 与至 少部分表面或织物接触， 然后任选地漂洗上述表面或织物。可在上述漂洗步骤之前对所述 表面或织物进行洗涤步骤。对本发明而言， 洗涤包括但不限于擦洗和机械搅拌。正如本领 域的技术人员所认可的那样， 本发明的清洁组合物理想地适用于洗衣用途。因此， 本发明 包括一种用于洗涤织物的方法， 所述方法包括以下步骤 ： 将待洗涤的织物与所述清洁洗涤 溶液接触， 所述清洁洗涤溶液包含申请人的清洁组合物、 清洁助剂或它们的混合物的至少 一个实施方案。织物可包括任何能够在正常消费者使用条件下洗涤的大部分任何织物。所 述溶液优选具有约 8 至约 10.5 的 pH。可使用组合物在溶液中的浓度为约 100ppm， 优选为 500ppm 至约 15,000ppm。水温通常为约 5℃至约 90℃。本发明在低的水温如低于 30℃或低 于 25℃或 20℃时会尤其有益。水与织物的比率通常为约 1 ∶ 1 至约 30 ∶ 1。
     实施例 以下实施例进一步描述了本发明， 所述实施例不应理解为限制本发明的范围。
     用作缓冲液和底物的化学物质是至少试剂级的商业产品。
     实施例 1- 脂肪酶变体的表达
     构建包含编码脂肪酶变体的基因的质粒并使用本领域的标准方法将其转化到合 适的宿主细胞中。
     实施例 2- 生产脂肪酶变体
     以分批补料发酵方式进行发酵， 培养基恒定温度为 34℃， 并且起始体积为 1.2 升。 将培养基的初始 pH 设为 6.5。一旦 pH 提高到 7.0， 通过加入 10％ H3PO4 维持该值。通过改 变搅拌速率控制培养基中溶解氧的含量， 并且使用 1.0 升空气每升培养基每分钟的固定透 气速率。在整个分批补料阶段期间， 将给料速率维持在恒定水平。
     批培养基包含麦芽糖糖浆作为碳源， 尿素和酵母提取物作为氮源， 并且包含痕量金属和盐的混合物。在分批补料阶段期间连续加入的补料包含麦芽糖糖浆作为碳源， 而加 入酵母提取物和尿素是为了确保氮的足够供应。
     脂解酶变体的纯化可使用本领域已知的标准方法进行， 例如通过过滤发酵上清液 并随后进行疏水性层析和离子交换层析， 例如 EP 0 851 913 EP， 实施例 3 所述。
     实施例 3- 脂解酶变体的洗涤剂内稳定性
     测试以下脂解酶变体在洗涤剂内的稳定性并且与基准脂解酶 SEQ ID NO ： 2 比较。
     表2： 测试的脂解酶变体。
     脂解酶变体和基准取剂量为 0.065mg 酶蛋白 /g 商业洗涤剂的浓度。 表3： 洗涤剂组合物。 成分 起源重量％ 烷基醚硫酸钠 Steol 25-2S.70， Stepan Deutschland 12.0
     LAS Surfac SDBS80， Surfachem 7.0
     牛油皂 / 椰子 80/20 Linds Fabrikker 3.2
     23-9 醇乙氧基化物 Neodol 23-9， Shell Chemical 2.4
     烷基二甲基胺氧化物 Empigen OB， Huntsman 2.0
     柠檬酸 ( 钠 ) Merck 2.8
     氢氧化钠 10N Bie & Berntsen 1.6
     甘油 Optim Glycerine 99.7％ USP/EP， Dow Chemical 2.3
     单乙醇胺 Huntsman 2.7
     MPG Proylene Glycol Industrial， Dow Chemical 4.7
     水 59.3
     将包含洗涤剂和脂解酶变体或基准酶的样本溶解在 pH ＝ 7.7 的 tris( 羟甲基 ) 氨基甲烷 (TRIS) 缓冲液中并分别贮存在 -18℃ 2 周和 35℃ 4 周。如下计算残余的酶活性 ： 在 35℃孵育后的脂肪酶活性除以贮存在 -18℃的样本的脂肪酶活性。稳定性数据如下表 4
     所示。与基准脂肪酶相比， 所有六个脂解酶变体显示改善的洗涤剂内稳定性。
     通过监控底物 p- 硝基苯基 - 戊酸盐 (pNp-Val) 水解生成戊酸盐和 pNp 产物来测 量脂肪酶活性。检测波长＝ 405nm ； pH ＝ 7.7 ； 温度＝ 37℃。在该 pH 具有酯酶活性的所有 脂肪酶能用该方法进行分析。
     表4： 贮藏后的残余脂肪分解活性。显示的数据为三个数据的平均值。
     洗涤剂实施例 用于实施例的缩写组分的识别如下所示 ：
     实施例 A 由下列制剂举例说明具有颗粒状衣物洗涤剂形式的漂白洗涤剂组合物。A LAS QAS C25E3S C25E7 STPP 沸石 A 硅酸盐 12 0.7 0.9 0.0 5 0.0 2 B 15 1 0.0 0.5 3 0.0 3 C 13 1 0.9 0.0 1 0.0 3 D 15 0.6 0.0 1 10 0.0 7 E 10 0.0 0.0 3 0 10 0 F 14 0.7 0.9 1 8 0.0 4实施例 A 中的任何组合物以水中 600ppm 至 10000ppm 的浓度、 典型中间条件为 2500ppm 以及 25℃和 25 ∶ 1 的水与织物比率下用来洗涤织物。
     实施例 B
     由下列制剂举例说明具有颗粒状衣物洗涤剂形式的漂白洗涤剂组合物。
     A LAS C25E3S C68S C25E7 QAS (Na-)SKS-6 沸石 A 柠檬酸 8 0 1 2.2 0.75 4.1 20 3 B 7.1 4.8 0 0 0.94 0 0 5 C 7 0 1 3.2 0.98 4.8 17 3 D 6.5 5.2 0 0 0.98 0 0 438102112602 A CN 102112606 碳酸盐 硅酸盐 洗涤剂说15 0.08 0.75明书20 0 0.72 14 0.11 0.71 20 035/37 页0.72
     实施例 B 中的在 20-90℃下， 以 10,000ppm 的水溶液浓度， 以及 5 ∶ 1 的水与织物 的比率， 使用任何上述组合物来洗涤织物。
     实施例 C
     乙醇 TEPAE1 乙氧基化的六亚甲基二胺 2 1， 2- 丙二醇 蛋白酶 * 甘露聚糖酶 * 淀粉酶 * 脂肪酶 * 两亲烷氧基化油脂清洁聚合物 无规接枝共聚物 调色剂 未胶囊包封的香料 香料微胶囊 三羟基硬脂酸甘油酯 水、 染料和其他
     1.54 0.3 0.8 0.0 36.4 1.1 7.3 10 0.3 0.5 0.001 0.5 0.2 0.2 余量1.77 0.33 0.81 6.6 36.4 1.1 7.3 3.2 0.5 0.3 0.003 0.5 0.1 0.1 余量1.15 0.23 0.6 0.0 27.3 0.8 5.5 0.5 0.7 0.5 0.005 0.5 0.3 0.3 余量0.89 0.17 0.4 3.3 18.2 0.6 3.7 3.2 0.5 0.7 0.01 0.5 0.2 0.2 余量1.54 0.0 0.0 0.0 36.4 1.1 7.3 2.4 0.3 0.5 0 0.5 0.1 0.1 余量1.15 0.0 0.0 0.0 27.3 0.8 5.5 3.2 0 0 0 0.5 0 0 余量* 以 mg 酶 /100g 计的数值 1
     如 US 4,597,898 中所述。 2
     以商品名 LUTENSIT 得自 BASF， 以及如 WO 01/05874 中所述的那些
     发明背景
     已知使用真菌脂解酶例如来自疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus) ( 别名 ： 嗜热羊毛状腐质霉 (Humicola lanuginosa)) 的脂肪酶用于多种工业目的， 例如改 善洗涤剂的效率。因此， 将来源于疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanuginosus)( 别名 ： 嗜热羊毛状腐质霉 (Humicola lanuginosa)， EP 258 068 和 EP 305 216) 的脂肪酶以商品 名 Lipolase (Novozymes A/S 的产品 ) 销售用于去污剂。WO 0060063 描述了疏绵状嗜热 丝孢菌 (T.lanuginosus) 脂肪酶的变体， 它在洗涤剂溶液中具有特别好的一次洗净性能。 除了使用脂肪酶作为洗涤剂酶以除去衣服和其他纺织物上的脂质或脂肪污渍外， 它们还可 用作生面团的添加剂来用于面包和其他焙烤产品， 以及用于消除纸浆和纸生产中的树脂问 题。 在一些应用中， 具有改善的热稳定性的脂解酶是所期望的 (EP 374700、 WO 9213130)， 然 而在其他应用中洗涤剂内稳定性是所期望的。WO 92/05249、 WO 92/19726 和 WO 97/07202 公开了疏绵状嗜热丝孢菌 (T.lanuginosus)( 嗜热羊毛状腐质霉 (H.lanuginosa)) 脂肪酶 的变体。
     发明概述
     在第一方面， 本发明涉及包含亲本脂解酶的洗涤剂组合物， 其中所述变体 ： (a) 具 有与亲本脂解酶相比包含氨基酸残基取代的氨基酸序列， 所述氨基酸残基取代对应于 SEQ ID NO ： 2 的任何以下氨基酸 ： 27、 216、 227、 231、 233 和 256 ； 以及 (b) 任选地比亲本脂解酶在 洗涤剂内更稳定。
     在另一方面， 本发明涉及将组合物用于水解羧酸酯或酯的水解、 合成或酯交换。
     在另一方面， 本发明涉及将脂解酶变体用于制造在洗涤剂内稳定的制剂。
     附图简述
     图 1 显示脂肪酶的比对。
     序列表
     SEQ ID NO ： 1 显示编码来自疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus) 的脂 肪酶的 DNA 序列。
     SEQ ID NO ： 2 显示来自疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus) 的脂肪酶 的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 3 显示来自犁头霉属 (Absidia reflexa) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 4 显示来自伞状犁头霉 (Absidia corymbifera) 的脂肪酶的氨基酸序 列。
     SEQ ID NO ： 5 显示来自米黑根毛霉 (Rhizomucor miehei) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 6 显示来自米根霉 (Rhizopus oryzae) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 7 显示来自曲霉菌曲霉 (Aspergillus niger) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 8 显示来自塔宾曲霉 (Aspergillus tubingensis) 的脂肪酶的氨基酸 SEQ ID NO ： 9 显示来自尖孢镰孢菌 (Fusarium oxysporrum) 的脂肪酶的氨基酸序序列。
    列。 SEQ ID NO ： 10 显示来自异孢镰孢菌 (Fusarium heterosporum) 的脂肪酶的氨基 酸序列。
     SEQ ID NO ： 11 显示来自米曲霉 (Aspergillus oryzae) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 12 显示来自沙门柏干酪青霉 (Penicillium camemberti) 的脂肪酶的 氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 13 显示来自臭曲霉 (Aspergillus foetidus) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 14 显示来自曲霉菌曲霉 (Aspergillus niger) 的脂肪酶的氨基酸序 列。
     SEQ ID NO ： 15 显示来自米曲霉 (Aspergillus oryzae) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 16 显示来自 Landerina penisapora 的脂肪酶的氨基酸序列。
     发明详述
    氨基酸修改形式的命名
     根据本发明描述脂肪酶变体时， 使用以下命名法以便于参考 ：
     初始氨基酸 ： 位置 ： 取代氨基酸
     根据该命名法， 例如在位点 195 上将谷氨酸取代成甘氨酸以 G195E 表示。在相同 位点上去除甘氨酸以 G195* 表示， 插入附加氨基酸残基如赖氨酸以 G195GK 表示。其中特异 性脂肪酶与其他脂肪酶相比包含 “缺失” 并且在同样位点插入一个氨基酸用 *36D 表示， 指 在位点 36 插入一个天冬氨酸。
     多个突变用加号分开， 即： R170Y+G195E， 代表在位点 170 和 195 上分别用精氨酸和 甘氨酸取代酪氨酸和谷氨酸的突变。
     当施加所述的比对方法时， X231 指示在亲本脂解酶中对应于位点 231 的氨基酸。 X231R 指示氨基酸被 R 取代。就 SEQ ID NO ： 2 而言， X 是 T， 因此 X231R 指示 R 在位点 231 取代 T。其中在一个位点 ( 例如 231) 的氨基酸可被另一个选自一组氨基酸的氨基酸取代， 例如所述组由 R 和 P 和 Y 组成， 这将用 X231R/P/Y 表示。
     在所有情况下， 使用公认的 IUPAC 单字母或三字母氨基酸缩写。
     同一性 ： 如本文所用， 术语 “同一性” 指两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之 间的相关性， 这种相关性用参数 “同一性” 描述。
     就本发明的目的而言， 两个氨基酸序列的比对通过来自 EMBOSS 软件包 (http:// emboss.org)， 版本 2.8.0 的 Needle 程序进行测定。Needle 程序执行全序列比对算法， 如 Needleman， S.B. 和 Wunsch， C.D.(1970)J.Mol.Biol.48， 443-453 所述。使用的取代矩阵是 BLOSUM62， 空位开放罚分是 10， 空位延伸罚分是 0.5。
     本发明的一个氨基酸序列 ( “发明序列” ； 例如 SEQ ID NO ： 2 的氨基酸 1 至 269) 和 一个不同氨基酸序列 (“外源序列” ) 之间的同一性程度以两个序列的比对中的精确匹配数 除以 “发明序列” 的长度或 “外源序列” 的长度来计算， 无论其中哪一个序列是最短的。结 果表示为同一性百分比。
     当 “发明序列” 和 “外源序列” 在重叠的相同位点具有相同氨基酸残基时发生精确 匹配。序列长度是该序列的氨基酸数目 ( 例如 SEQ ID NO ： 2 的长度是 269)。
     可使用上述方法计算同一性以及同源性并用于比对。 在本发明的上下文中已经如 下所述计算同源性和比对。
     同源性和比对
     就本发明的目的而言， 同源性程度可通过本领域已知的计算机程序进行合适的测 定， 例如 GCG 程序软件包提供的 GAP(Program Manual for the Wisconsin Package， 第8 版， 1994 年 8 月， Genetics Computer Group， 575 Science Drive， Madison， Wisconsin， USA 53711)(Needleman， S.B. 和 Wunsch， C.D.， (1970)， Journal of Molecular Biology， 48， 443-45)， 使用 GAP 以及以下设置进行多肽序列比对 ： GAP 产生罚分为 3.0， 并且 GAP 延伸罚 分为 0.1。
     在 本 发 明 中，在 犁 头 霉 属 (Absidia reflexa)、伞 状 犁 头 霉 (Absidia corymbefera)、 米黑根毛霉 (Rhizmucor miehei)、 德氏根霉 (rhizopus delemar)、 曲霉菌 曲霉 (Aspergillus niger)、 塔宾曲霉 (Aspergillus tubigensis)、 尖孢镰孢菌 (Fusarium oxysporum)、 异孢镰孢菌 (Fusarium heterosporum)、 米曲霉 (Aspergillus oryzea)、 沙门 柏干酪青霉 (Penicilium camembertii)、 臭曲霉 (Aspergillus foetidus)、 曲霉菌曲霉 (Aspergillus niger)、 疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus)( 别名 ： Humicola lanuginose) 和 Landerina penisapora 的脂肪酶序列中的相应 ( 或同源 ) 位点通过图 1 所 示的比对进行限定。
     为了发现比对中不显示的脂肪酶序列中的同源位点， 受关注的序列与图 1 中显 示的序列进行比对。使用对 GAP 程序中存在的大多数同源序列进行的 GAP 比对将新序列 与图 1 中的本比对进行比对。在 GCG 程序软件包中提供了 GAP(Program Manual for the Wisconsin Package， 第 8 版， 1994 年 8 月， Genetics Computer Group， 575 Science Drive， Madison， Wisconsin， USA 53711)(Needleman， S.B. 和 Wunsch， C.D.， (1970)， Journal of Molecular Biology， 48， 443-45)。多肽序列比对使用以下设置 ： GAP 产生罚分为 3.0， 并且 GAP 延伸罚分为 0.1。
     亲本脂肪酶
     可将任何适用的脂解酶用作亲本脂解酶， 也称为亲本脂肪酶。在一些实施方案中 脂解酶可为真菌脂解酶。
     脂解酶可为酵母脂解酶， 它来源于以下菌属 ： 例如假丝酵母属 (Candida)、 克鲁维 酵母属 (Kluyveromyces)、 毕赤酵母属 (Pichia)、 糖酵母属 (Saccharomyces)、 粟酒裂殖酵 母属 (Schizosaccharomyces)、 或耶氏酵母属 (Yarrowia) ； 或者更优选地为丝状真菌脂解 酶， 它来源于以下菌属 ： 如顶孢霉菌属 (Acremonium)、 曲霉属 (Aspergillus)、 出芽短梗霉 属 (Aureobasidium)、 隐球酵母属 (Cryptococcus)、 线黑粉酵母属 (Filobasidium)、 镰孢菌 属 (Fusarium)、 特异腐质霉属 (Humicola)、 稻瘟病菌属 (Magnaporthe)、 毛霉属 (Mucor)、 毁 丝 霉 属 (Myceliophthora)、 瘤 胃 真 菌 属 (Neocallimastix)、 脉 孢 菌 属 (Neurospora)、 拟青霉属 (Paecilomyces)、 青霉属 (Penicillium)、 厌气性瘤胃真菌属 (Piromyces)、 裂 褶 菌 属 (Schizophyllum)、 踝 节 菌 属 (Talaromyces)、 嗜 热 子 囊 菌 属 (Thermoascus)、 草 根霉属 (Thielavia)、 弯颈霉属 (Tolypocladium)、 嗜热真菌属 (Thermomyces) 或木霉属(Trichoderma)。
     此 外 脂 解 酶 可 为 卡 尔 斯 伯 酵 母 (Saccharomyces carlsbergensis)、 啤酒糖酵 母 (Saccharomyces cerevisiae)、糖 化 酵 母 (Saccharomyces diastaticus)、道 氏 酵 母 (Saccharomyces douglasii)、 克 鲁 维 酵 母 (Saccharomyces kluyveri)、 奇异酵母 (Saccharomyces norbensis)、 或卵形酵母 (Saccharomyces oviformis) 脂解酶。
     作 为 另 外 一 种 选 择， 所 述 脂 解 酶 是 棘 孢 曲 霉 (Aspergillus aculeatus)、 泡 盛 曲 霉 (Aspergillus awamori)、烟 曲 霉 (Aspergillus fumigatus)、臭 曲 霉 (Aspergillus foetidus)、 日本曲霉 (Aspergillus japonicus)、 构巢曲霉 (Aspergillus nidulans)、 曲 霉 菌 曲 霉 (Aspergillus niger)、 米 曲 霉 (Aspergillus oryzae)、 塔宾 曲 霉 (Aspergillus turbigensis)、 拟 杆 镰 孢 菌 (Fusarium bactridioides)、 蜀黍专 化 型 镰 孢 菌 (Fusarium cerealis)、 克 地 镰 孢 菌 (Fusarium crookwellense)、 黄色 镰 孢 菌 (Fusarium culmorum)、 禾 谷 镰 孢 菌 (Fusarium graminearum)、 禾谷镰孢菌 (Fusarium graminum)、 异 孢 镰 孢 菌 (Fusarium heterosporum)、 Fusarium negundi、 尖 孢 镰 孢 菌 (Fusarium oxysporum)、 多 枝 镰 孢 菌 (Fusarium reticulatum)、 粉红镰孢菌 (Fusarium roseum)、 接 骨 木 镰 孢 菌 (Fusarium sambucinum)、 Fusarium sarcochroum、 茄 病 镰 孢 菌 (Fusarium sporotrichioides)、 硫 色 镰 孢 菌 (Fusarium sulphureum)、 簇 囊 镰 孢 菌 (Fusarium torulosum)、 类 丝 孢 镰 孢 菌 (Fusarium trichothecioides)、 镰 孢 霉 (Fusarium venenatum)、 特 异 腐 质 霉 (Humicola insolens)、 疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus)( 别名 ： Humicola lanuginose)、 米黑毛霉 (Mucor miehei)、 嗜 热 毁 丝 菌 (Myceliophthora thermophila)、 粗 糙 脉 孢 菌 (Neurospora crassa)、 产 紫 青 霉 (Penicillium purpurogenum)、 哈 茨 木 霉 (Trichoderma harzianum)、 康宁木 霉 (Trichoderma koningii)、 长 枝 木 霉 (Trichoderma longibrachiatum)、 里氏木霉 (Trichoderma reesei)、 绿色木霉 (Trichoderma viride) 脂解酶。
     在一些实施方案中本发明涉及脂解酶变体， 它是嗜热真菌属 (Thermomyces) 脂肪 酶或疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus) 脂肪酶。
     在一些实施方案中本发明涉及脂解酶变体， 其中所述变体与 SEQ ID NO ： 2 具有至 少 50％， 至少 60％， 至少 70％， 至少 80％， 至少 85％， 至少 90％， 至少 91％， 至少 92％， 至少 93％， 至少 94％， 至少 95％， 至少 96％， 至少 97％， 至少 98％， 至少 99％或 100％的同一性。
     脂解酶变体中的改变具有改善的洗涤剂内稳定性。
     下文涉及的位点是 SEQ ID NO ： 2。使段落 “同源性和比对” 中描述了如何寻找在不 同脂肪酶中的氨基酸残基的对应或同源位点的方法。
     根据本发明， 已经令人惊讶地发现， 脂解酶变体、 脂解变体、 或短的变体比亲本脂 解酶在洗涤剂内更稳定。将洗涤剂内的稳定性定义为在存在的洗涤剂内保留脂解酶 / 脂肪 酶活性的质量。可全部或部分保留脂肪酶活性。因此， 本发明的变体与它们从其中衍生出 的亲本脂肪酶相比， 显示在存在的洗涤剂中改善的全部或部分保留它们的脂肪酶活性的能 力。
     如本文所用， 术语 “脂肪酶活性” 指羧酸酯水解酶活性， 该酶催化三酰基甘油的水 解， 形成二酰基甘油和羧酸酯。就本发明目的而言， 脂肪酶活性按照以下方法测定 ： 使用阿 拉伯树胶作为乳化剂， 通过乳化甘油三丁酸酯 (glycerin tributyrate) 制备脂肪酶的底物。在 30℃， pH 7 或 9 条件下水解甘油三丁酸酯， 随后在 pH 自动恒定器中进行滴定实验。 将一单位脂肪酶活性 (1LU) 定义为在 30℃， pH7 条件下能够每分钟释放 1 微摩尔丁酸的酶 量。
     在一些实施方案中如本发明所述的变体已经与基准酶进行了比较。如本文所用， 术语 “基准酶” 或 “基准脂肪酶” 指具有取代的 SEQ ID NO ： 2， 除非另外指明， 所述取代为 T231R+N233R。
     在一些实施方案中本发明涉及亲本脂解酶变体， 其中所述变体 ： (a) 具有与亲本 脂解酶相比包含氨基酸残基取代的氨基酸序列， 所述氨基酸残基取代对应于 SEQ ID NO ： 2 的任何以下氨基酸 ： 27、 216、 227、 231、 233 和 256 ； 以及 (b) 比亲本脂解酶在洗涤剂内更稳 定。
     在一些实施方案中本发明涉及亲本脂解酶变体， 其中所述变体 ： (a) 包含氨基酸 残基 231 和 233， 并且具有与亲本脂解酶相比包含有至少一个氨基酸残基取代的氨基酸序 列， 所述氨基酸残基取代对应于 SEQ ID NO ： 2 的任何以下氨基酸 ： 27、 216、 227 和 256 ； 以及 (b) 比亲本脂解酶在洗涤剂内更稳定。
     在一些实施方案中本发明涉及亲本脂解酶的变体， 其中所述变体在位点 231+233 以及其中一个以下位点具有氨基酸改变 ： (a)27 ； (b)216 ； 或者 (c)256 ； 任选地所述变体还 包含 227 ； 该位点对应于 SEQ ID NO ： 2。
     在一些实施方案中本发明涉及变体， 其中所述氨基酸残基的取代是 SEQ ID NO ： 2 的 27R、 216P、 227G、 231R、 233R 或 256K 中的一个。
     在一些实施方案中本发明涉及变体， 其中所述氨基酸残基的取代是 SEQ ID NO ： 2 的 D27R、 S216P、 L227G、 T231R、 N233R 或 P256K 的一个。
     在一些实施方案中本发明涉及变体， 其中变体包含的取代选自由下列组成的 组： (a)T231R+N233R+P256K ； (b)L227G+T231R+N233R ； (c)L227G+T231R+N233R+P256K ； (d) D27R+T231R+N233R ； (e)D27R+L227G+T231R+N233R ； 和 (f)S216P+T231R+N233R。
     在一些实施方案中本发明涉及脂解酶变体， 其中所述亲本脂解酶与 SEQ ID NO ： 2 至少 50％， 至少 60 ％， 至少 70 ％， 至少 75 ％， 至少 80 ％， 至少 85 ％， 至少 90 ％， 至少 91％， 至少 92％， 至少 93％， 至少 94％， 至少 95％， 至少 96％， 至少 97％， 至少 98％， 至少 99％或 100％的同一性。
     在一些实施方案中本发明涉及变体， 其中所述亲本脂解酶是由疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus)DSM 4109 制备的脂肪酶， 并且具有 SEQ ID.NO ： 2 的氨基酸序 列。
     在一些实施方案中本发明涉及变体， 其中所述洗涤剂是液体洗涤剂。
     表1： 可在脂解酶变体中包含的改变
    在一些实施方案中本发明涉及包含脂解酶变体的制剂。
     在一些实施方案中本发明涉及制剂， 其中所述制剂可为液体制剂。
     多核苷酸、 表达载体、 宿主细胞、 脂解酶变体的制备。
     在一些实施方案中， 本发明涉及编码脂解酶变体的分离的多核苷酸。多核苷酸可 在非常低的严格条件下， 优选低严格条件下， 更优选中严格条件下， 更优选中 - 高严格条 件下， 甚至更优选高严格条件下， 最优选非常高的严格条件下与以下序列杂交 ： (i)SEQ ID NO ： 1 的核苷酸 178 至 660， (ii)SEQ ID NO ： 1 的核苷酸 178 至 660 包含的 cDNA 序列， (iii) (i) 或 (ii) 的亚序列， 或者 (iv)(i)、 (ii)、 或 (iii) 的互补链 (J.Sambrook、 E.F.Fritsch、 和 T.Maniatis， 1989， Molecular Cloning， A Laboratory Manual， 第 2 版， Cold Spring Harbor， New York)。SEQ ID NO ： 1 的亚序列包含至少 100 个邻接核苷酸或者优选地至少 200 个邻接核苷酸。此外该亚序列可编码具有脂肪酶活性的多肽片段。
     就长度为至少 100 个核苷酸的长探针而言， 将非常低至非常高的严格条件规定为 在标准 Southern 印迹程序后最优 12 至 24 小时， 在 42℃下， 在 5X SSPE， 0.3％ SDS， 200ug/ mL 剪切的和变性的鲑精 DNA， 以及 25％的甲酰胺 ( 用于非常低和低严格条件 )、 35％的甲酰
     胺 ( 用于中和中 - 高严格条件 )、 或者 50％的甲酰胺 ( 用于高和非常高的严格条件 ) 中预 杂交和杂交。
     就长度为至少 100 个核苷酸的长探针而言， 载体材料最终洗涤三次， 每次 15 分钟， 使用 2X SSC， 0.2％ SDS， 优选至少在 45℃ ( 非常低的严格条件 )， 更优选至少在 50℃ ( 低严 格条件 )， 更优选至少在 55℃ ( 中严格条件 )， 更优选至少在 60℃ ( 中 - 高严格条件 )， 甚至 更优选至少在 65℃ ( 高严格条件 )， 最优选至少在 70℃ ( 非常高的严格条件 )。
     可通过本领域已知的方法获取编码脂解酶变体的分离的多核苷酸、 包含所述多核 苷酸的核酸构建体、 包含所述核酸构建体的重组表达载体、 和包含所述核酸构建体或所述 重组表达载体的转化宿主细胞。
     获取洗涤剂内稳定脂解酶变体的程序
     脂解酶变体可用本领域已知的方法获取， 例如定点诱变、 随机诱变或局部诱变， 例 如如 WO 9522615 或 WO 0032758 所述的方法。给定亲本脂解酶在洗涤剂内稳定的变体可用 下述标准程序获取 ：
     诱变 ( 易错的、 掺入的 oligo， 加标的 oligo)
     初级筛选 鉴定在洗涤剂内较稳定的突变体
     保存 ( 甘油培养， LB-Amp 平板， 小量制备 )
     划线接种到另一个分析平板上 - 次级筛选 ( 比初级筛选高 1 度 )
     DNA 测序
     转化到宿主细胞中， 例如曲霉属
     以 100mL 的规模培养， 纯化， DSC
     在一些实施方案中， 本发明涉及制备脂解酶变体的方法， 所述方法包括以下步骤 ： (a) 在诱导产生脂解酶变体的条件下培养包含所述核酸构建体或包含所述核酸构建体的重 组表达载体的转化宿主细胞 ； 以及 (b) 回收脂解酶变体。该方法可根据本领域已知的原则 实施。
     在一些实施方案中本发明涉及生产所述变体的方法， 所述方法包括以下步骤 ： (a) 选择亲本脂解酶 ； (b) 在亲本脂解酶中取代至少一个氨基酸残基， 所述氨基酸残基对应于 SEQ ID NO ： 2 的任何以下氨基酸 ： 27、 216、 227、 231、 233 和 256 ； (c) 任选地改变除 (b) 中提 到的氨基酸之外的一个或多个氨基酸 ； (d) 制备由步骤 (a)-(c) 产生的变体 ； (e) 测试所述 变体在洗涤剂内的稳定性 ； (f) 选择具有提高的洗涤剂内稳定性的变体 ； 以及 (g) 生产所述 选择变体。
     使用
     如本发明所述的变体可类似于亲本脂解酶使用， 并且就一些目的而言该变体可由 于它们改善的洗涤剂内稳定性而是优选的。因此在一些实施方案中， 本发明涉及将所述变 体用于水解羧酸酯或酯的水解、 合成或酯交换。
     在一些实施方案中， 本发明涉及使用所述变体制造洗涤剂内的稳定制剂。
     组合物
     所述组合物优选地富含本发明权利要求中定义的多肽。术语 “富含” 指示组合物 的脂肪酶活性已经被提高了， 例如浓缩因子为 1.1。
     所述组合物可包含本发明的多肽作为主要酶组分， 例如单组分组合物。作为另 外一种选择， 所述组合物可包含多种酶活性， 例如氨基肽酶、 淀粉酶、 糖酶、 羧肽酶、 过氧化 氢酶、 纤维素酶、 壳多糖酶、 角质酶、 环糊精葡萄糖基转移酶、 脱氧核糖核酸酶、 酯酶、 α- 半 乳醣苷酶、 β- 半乳糖苷酶、 葡萄糖淀粉酶、 α- 葡萄糖苷酶、 β- 葡萄糖苷酶、 卤素过氧 化物酶、 转化酶、 漆酶、 脂肪酶、 甘露糖苷酶、 氧化酶、 果胶酶、 肽谷氨酰胺酶、 过氧化物酶、 肌醇六磷酸酶、 多酚氧化酶、 蛋白水解酶、 核糖核酸酶、 转谷氨酰胺酶、 或木聚糖酶。可生 产附加的酶， 例如通过属于以下属的微生物生产酶 ： 曲霉属， 优选棘孢曲霉 (Aspergillus aculeatus)、 泡盛曲霉 (Aspergillus awamori)、 烟曲霉 (Aspergillus fumigatus)、 臭曲霉 (Aspergillus foetidus)、 日本曲霉 (Aspergillus japonicus)、 构巢曲霉 (Aspergillus nidulans)、 曲 霉 菌 曲 霉 (Aspergillus niger)、 或 米 曲 霉 (Aspergillus oryzae) ； 镰 孢 菌 属， 优 选 拟 杆 镰 孢 菌 (Fusarium bactridioides)、 蜀 黍 专 化 型 镰 孢 菌 (Fusarium cerealis)、 克地镰孢菌 (Fusarium crookwellense)、 黄色镰孢菌 (Fusarium culmorum)、 禾谷镰孢菌 (Fusarium graminearum)、 禾谷镰孢菌 (Fusarium graminum)、 异孢镰孢菌 (Fusarium heterosporum)、 Fusarium negundi、尖 孢 镰 孢 菌 (Fusarium oxysporum)、 多枝镰孢菌 (Fusarium reticulatum)、 粉红镰孢菌 (Fusarium roseum)、 接骨木镰孢菌 (Fusarium sambucinum)、 Fusarium sarcochroum、 硫色镰孢菌 (Fusarium sulphureum)、 簇 囊镰孢菌 (Fusarium toruloseum)、 类丝孢镰孢菌 (Fusarium trichothecioides)、 或镰孢 霉 (Fusarium venenatum) ； 腐质霉属， 优选特异腐质霉 (Humicola insolens) 或嗜热羊毛 状腐质霉 (Humicola lanuginosa) ； 或者木霉属， 优选哈茨木霉 (Trichoderma harzianum)、 康宁木霉 (Trichoderma koningii)、 长枝木霉 (Trichoderma longibrachiatum)、 里氏木霉 (Trichoderma reesei)、 或绿色木霉 (Trichoderma viride)。
     所述组合物可根据本领域已知的方法制备， 并且可为液体形式或干燥组合物形 式。例如多肽组合物可为粒状或微粒状形式。所述组合物中将包括的多肽可根据本领域已 知的方法稳定。
     洗涤剂成分
     组合物通常包含一种或多种洗涤剂成分。 本文所用洗涤剂组合物包括制品和清洁 和处理组合物。除非另外指明， 如本文所用， 术语 “清洁和 / 或处理组合物” 包括片剂、 颗粒 或粉末形式的多用途或 “重垢型” 洗涤剂， 尤其是衣物洗涤剂 ； 液体、 凝胶或糊剂状的多功能 洗涤剂， 尤其是所谓的重垢型液体类型 ； 液体精细织物洗涤剂 ； 手洗餐具洗涤剂或轻垢型 餐具洗涤剂， 尤其是高起泡类型的那些 ； 机洗餐具洗涤剂， 包括各种用于家庭和公共机构用 途的片剂、 颗粒、 液体和辅助漂洗型。组合物也可为单位剂量的包装， 包括本领域已知的那 些包装和水溶性的、 水不溶性的和 / 或水可渗透的那些包装。
     本发明的洗涤剂组合物可包含一种或多种本发明的脂肪酶变体。 除了脂肪酶变体 外， 所述洗涤剂组合物还将进一步包含一种洗涤剂成分。下文所举例说明的洗涤剂成分的 非限制性列表适用于即用的组合物， 并且可期望将其结合到本发明的某些实施方案中， 以 例如有助于或提高处理待清洁基底的清洁性能， 或在含香料、 着色剂、 染料等的情况下调节 清洁组合物的美观性。 这些附加组分的明确性质及它们的掺入量将取决于组合物的物理形 式以及其应用的清洁操作的性质。合适的洗涤剂成分包括但不限于 ： 表面活性剂、 助洗剂、 螯合剂、 染料转移抑制剂、 分散剂、 酶和酶稳定剂、 漂白活化剂、 过氧化氢、 过氧化氢源、 预成形过酸、 聚合分散剂、 增白剂、 抑泡剂、 染料、 抗腐蚀剂、 晦暗抑制剂、 香料、 香料微胶囊、 软化 剂、 载体、 水溶助长剂、 加工助剂、 溶剂和 / 或颜料。
     一般的洗涤剂将按重量计包含以下成分的任何组合 ： 5-30％的表面活性剂， 优选 阴离子表面活性剂如直链烷基苯磺酸盐和脂肪醇乙氧基硫酸盐 ； 0.005-0.1％的蛋白酶活 TM 性蛋白， 其中蛋白酶优选地选自 Coronase 、 FNA、 FN4 或 SavinaseTM， 0.001-0.1％的淀粉酶 TM TM 活性蛋白， 其中淀粉酶优选地选自 Termamyl Natalase 、 StainzymeTM 和 PurastarTM 以及 0.1-3％的螯合剂， 优选二亚乙基三胺五醋酸。就颗粒状和片剂产品而言， 此类一般的洗涤 剂还将按重量计包含 ： 5-20％的漂白剂， 优选过碳酸钠 ； 1-4％的漂白活化剂， 优选 TAED 和 / 或 0-30％， 优选 5-30％， 更优选小于 10％的助洗剂， 如硅铝酸盐沸石 A 和 / 或三聚磷酸盐。
     漂白剂 - 本发明洗涤剂组合物可包括一种或多种漂白剂。
     通常， 当使用漂白剂时， 本发明的组合物可包括按本主题清洁组合物的重量计约 0.1％至约 50％或甚至约 0.1％至约 25％的漂白剂。合适漂白剂的示例包括 ：
     (1) 过氧化氢源， 例如无机过氢化合物盐， 包括以下碱金属盐如钠盐 ： 过硼酸盐 ( 通常为一水合物或四水合物 )、 过碳酸盐、 过硫酸盐、 过磷酸盐、 过硅酸盐以及它们的混合 物。在本发明的一个方面， 无机过氧化氢合物盐选自由下列物质组成的组 ： 过硼酸钠盐、 过 碳酸钠盐以及它们的混合物。
     (2) 具有 R-(C ＝ O)-L 的漂白活化剂， 其中 R 为烷基， 任选支链烷基 ； 当漂白活化剂 是疏水的时， 其具有 6 至 14 个碳原子或者 8 至 12 个碳原子， 而当漂白活化剂是亲水的时， 其 具有小于 6 个碳原子或甚至小于 4 个碳原子 ； 并且 L 为离去基团。合适的离去基团的实例 为苯甲酸及其衍生物， 尤其是苯磺酸盐。 合适的漂白活化剂包括十二烷酰基羟基苯磺酸盐、 癸酰基羟基苯磺酸盐、 癸酰基羟苯甲酸及其盐、 3， 5， 5- 三甲基己酰基羟基苯磺酸盐、 四乙酰 基乙二胺 (TAED) 和壬酰氧基苯磺酸盐 (NOBS)。合适的漂白活化剂还公开于 WO 98/17767 中。 尽管可采用任何合适的漂白活化剂， 但在本发明的一个方面， 本主题清洁组合物可包含 NOBS、 TAED 或它们的混合物。
     (3) 预成形的过酸。
     如果存在的话， 过酸和 / 或漂白活化剂通常以按所述组合物计约 0.1％至约 60 重 量％， 约 0.5％至约 40 重量％， 或甚至约 0.6％至约 10 重量％的含量存在于所述组合物中。 一种或多种疏水前体可与一种或多种亲水过酸或其前体联合使用。
     可选择过氧化氢源与过酸或漂白活化剂的量， 使得可用氧 ( 来自过氧化物源 ) 与 过酸的摩尔比为 1 ∶ 1 至 35 ∶ 1， 或甚至 2 ∶ 1 至 10 ∶ 1。
     表面活性剂 - 如本发明所述的洗涤剂组合物可包括表面活性剂或表面活性剂体 系， 其中所述表面活性剂可选自非离子表面活性剂、 阴离子表面活性剂、 阳离子表面活性 剂、 两性表面活性剂、 两性离子表面活性剂、 半极性非离子表面活性剂以及它们的混合物。 如果存在的话， 表面活性剂的通常含量按所述受试组合物的重量计为约 0.1％至约 60％， 约 0.1％至约 40％， 约 0.1％至约 12％， 约 1％至约 50％或甚至约 5％至约 40％。
     当被包括在洗涤剂中时， 所述洗涤剂将通常包含约 1％至约 40％的阴离子表面活 性剂如直链烷基苯磺酸盐、 α- 烯烃磺酸盐、 烷基硫酸盐 ( 脂肪醇硫酸盐 )、 脂肪醇乙氧基硫 酸酯、 仲烷基磺酸盐、 α- 磺基脂肪酸甲酯、 烷基或烯基丁二酸或皂。
     洗涤剂可任选地包含约 0.2％至约 40％的非离子表面活性剂如醇乙氧基化物、 壬基苯酚乙氧基化物、 烷基多苷、 烷基二甲基胺氧化物、 乙氧基化脂肪酸一乙醇酰胺、 脂肪酸 一乙醇酰胺、 多羟基烷基脂肪酸酰胺、 或葡糖胺的正酰基正烷基衍生物 ( “烷基葡糖酰胺” )。
     助洗剂 - 本发明的洗涤剂组合物可包含一种或多种洗涤剂助剂或助洗剂体系。当 使用助洗剂时， 本主题组合物将通常包含按本主题组合物的重量计至少约 1％， 约 5％至约 60％或甚至约 10％至约 40％的助洗剂。
     所述洗涤剂组合物可包含 ： (a)0 重量％至 10 重量％， 优选 0 重量％至 5 重量％的 沸石助洗剂 ； (b)0 重量％至 10 重量％， 优选 0 重量％至 5 重量％的磷酸盐助洗剂 ； 和 (c) 任选地 0 重量％至 5 重量％的硅酸盐。
     助洗剂包括但不限于碱金属、 多磷酸的铵盐和链烷醇铵盐、 碱金属硅酸盐或层状 硅酸盐、 碱土和碱金属碳酸盐、 硅铝酸盐助洗剂和多种碱金属、 多元乙酸 ( 如乙二胺四乙酸 和氨三乙酸 ) 的铵盐和取代铵盐， 以及聚羧酸酯 ( 如苯六甲酸、 琥珀酸、 柠檬酸、 氧联二琥珀 酸、 多元马来酸、 苯 -1， 3， 5- 三羧酸、 羧甲基氧代琥珀酸 ) 和它们的可溶性盐。
     螯合剂 - 本文的洗涤剂组合物可包含螯合剂。合适的螯合剂包括铜、 铁和 / 或锰 螯合剂以及它们的混合物。当使用螯合剂时， 本主题组合物可包含按本主题组合物的重量 计约 0.005％至约 15％或甚至约 3.0％至约 10％的螯合剂。
     胺化合物 - 该组合物优选地包含具有以下通式结构的化合物 ： 二 ((C2H5O)(C2H4O) + + n)(CH3)-N -CxH2x-N -(CH3)- 二 ((C2H5O)(C2H4O)n)， 其中 n ＝ 20 至 30， 并且 x ＝ 3 至 8， 或其 硫酸化或磺化的变体。
     增白剂 - 本发明的洗涤剂组合物也可包含可改变要清洁的制品的外观的附加组 分， 如荧光增白剂。这些增白剂吸收紫外光并发射可见光。合适的荧光增白剂含量包括从 约 0.01 重量％， 从约 0.05 重量％， 从约 0.1 重量％， 或甚至从约 0.2 重量％的较低含量至 0.5 重量％或甚至 0.75 重量％的较高含量。
     分散剂 - 本发明的组合物还可包含分散剂。合适的水溶性有机物包括均聚或共聚 酸或它们的盐， 其中多元羧酸包含至少两个相隔不超过两个碳原子的羧基。
     酶 - 除了本发明的脂肪酶变体外， 所述洗涤剂组合物还可包含一种或多种酶， 所 述酶提供清洁性能和 / 或织物护理有益效果， 例如蛋白酶、 另一种脂肪酶、 角质酶、 淀粉酶、 糖酶、 纤维素酶、 果胶酶、 甘露聚糖酶、 阿拉伯聚糖酶、 半乳聚糖酶、 木聚糖酶、 氧化酶如漆 酶、 和 / 或过氧化物酶。
     所选择酶的特性通常将与所选择的洗涤剂相容， ( 即最适合的 pH， 与其他酶或非 酶成分相容等 )， 并且所述酶将是有效量的。
     适用的蛋白酶包括动物、 植物或微生物起源的那些蛋白酶。 优选微生物起源。 包括 化学改性的或蛋白工程化的突变体。蛋白酶可为丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶， 优选碱性微 生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白酶。碱性蛋白酶的实例是枯草杆菌蛋白酶， 尤其是那些来源 于芽孢杆菌属的蛋白酶， 例如枯草杆菌蛋白酶 Novo、 枯草菌溶素 (subtilisin Carlsberg)、 枯草杆菌蛋白酶 309、 枯草杆菌蛋白酶 147 和枯草杆菌蛋白酶 168( 描述于 WO 89/06279)、 WO 05/103244 中的 SEQ ID no 4 和 SEQ ID no 7。其他合适的丝氨酸蛋白酶包括那些来自 微球菌亚目某些种 (Micrococcineae) 尤其是纤维单胞菌属某些种 (Cellulonas spp) 及其 变异体的蛋白酶， 它们公开在 WO2005052146 中。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶 ( 例 如猪或牛起源的胰蛋白酶 ) 和镰孢菌属蛋白酶， 它们描述于 WO 89/06270 和 WO 94/25583中。 有 用 的 蛋 白 酶 的 实 例 是 在 WO 92/19729、 WO 98/20115、 WO 98/20116、 和 WO 98/34946 中描述的变体， 尤其是在一个或多个以下位点上具有取代的变体 ： 27、 36、 57、 68、 76、 87、 97、 101、 104、 106、 120、 123、 167、 170、 194、 206、 218、 222、 224、 235、 245、 252 和 274， 以 及在具有以下突变的其他变体中 ： (K27R、 V104Y、 N123S、 T124A)、 (N76D、 S103A、 V104I)、 或 (S101G、 S103A、 V104I、 G159D、 A232V、 Q236H、 Q245R、 N248D、 N252K)。其他有用的蛋白酶的 实例是在 WO 05/052146 中描述的变体， 尤其是在一个或多个以下位点上具有取代的变体 ： 14、 16、 35、 65、 75、 76、 79、 123、 127、 159 和 179。
     优选的可商购获得的蛋白酶包括 AlcalaseTM、 SavinaseTM、 PrimaseTM、 DuralaseTM、 EsperaseTM、 CoronaseTM、 PolarzymeTM 和 KannaseTM(Novozymes A/S)、 MaxataseTM、 MaxacalTM、 MaxapemTM、 ProperaseTM、 PurafectTM、 Purafect PrimeTM、 Purafect OxPTM、 FNA、 FN2、 FN3 和 FN4(Genencor International Inc.)。
     脂 肪 酶 包 括 那 些 细 菌 或 真 菌 起 源 的 脂 肪 酶。 包 括 化 学 改 性 的 或 蛋 白 工 程 化 的 突 变 体。 有 用 的 脂 肪 酶 的 实 例 包 括 来 自 腐 质 霉 菌 (Humicola)( 别 名 嗜 热 真 菌， Thermomyces) 的脂肪酶， 例如来自嗜热羊毛状腐质霉 (H.lanuginosa)( 别名疏绵状嗜 热丝孢菌 (T.lanuginosus))， 如 EP 258 068 和 EP 305 216 所述， 或者来自特异腐质霉
    (H.insolens) 的脂肪酶， 描述于 WO 96/13580 中， 假单胞菌属脂肪酶例如来自产碱假单胞 菌 (P.alcaligenes) 或类产碱假单胞菌 (P.pseudoalcaligenes)(EP 218 272)、 洋葱假单 胞菌 (P.cepacia)(EP 331 376)、 施氏假单胞菌 (P.stutzeri)(GB 1,372,034)、 荧光假单 胞菌 (P.fluorescens)、 假单胞菌属菌株 SD 705(WO 95/06720 和 WO 96/27002)、 威斯康星 假单胞菌 (P.wisconsinensis)(WO 96/12012) 的脂肪酶、 芽孢杆菌属脂肪酶例如来自枯草 芽孢杆菌 (Dartois 等人 (1993)， Biochemica et Biophysica Acta， 1131， 253-360)、 嗜热 脂肪芽孢杆菌 (B.stearothermophilus)(JP 64/744992) 或短小芽孢杆菌 (B.pumilus)(WO 91/16422) 的脂肪酶。
     其他实例是诸如那些在 WO 92/05249、 WO 94/01541、 EP 407 225、 EP 260 105、 WO 95/35381、 WO 96/00292、 WO 95/30744、 WO 94/25578、 WO 95/14783、 WO 95/22615、 WO 97/04079 和 WO 97/07202 中描述的脂肪酶变体。
     其 他 可 商 购 获 得 的 脂 肪 酶 包 括 LipolaseTM、 Lipolase UltraTM 和 LipexTM(Novozymes A/S)。
     适用的淀粉酶 (α 和 / 或 β) 包括那些细菌或真菌起源的淀粉酶。包括化学改性 的或蛋白工程化的突变体。淀粉酶包括例如获取自芽孢杆菌属的 α- 淀粉酶， 例如详述于 GB 1,296,839 中的地衣芽孢杆菌 (B.licheniformis) 的特殊菌株。
     有 用 的 淀 粉 酶 的 实 例 是 在 WO 94/02597、 WO 94/18314、 WO 96/23873、 和 WO 97/43424 中描述的变体， 尤其是在一个或多个以下位点上具有取代的变体 ： 15、 23、 105、 106、 124、 128、 133、 154、 156、 181、 188、 190、 197、 202、 208、 209、 243、 264、 304、 305、 391、 408、 和 444。
     可商购获得的淀粉酶是 DuramylTM、 TermamylTM、 StainzymeTM、 Stainzyme UltraTM、 Stainzyme PlusTM、 FungamylTM 和 BANTM(Novozymes A/S)、 RapidaseTM 和 PurastarTM( 购 自 Genencor International Inc.)。适用的纤维素酶包括那些细菌或真菌起源的淀粉酶。包括化学改性的或蛋白工 程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、 假单胞菌属、 腐质霉菌属、 镰孢菌 属、 草根霉属、 支顶孢属的纤维素酶， 例如由特异腐质霉 (Humicola insolens)、 嗜热毁丝 菌 (Myceliophthora thermophila) 和尖孢镰孢菌 (Fusarium oxysporum) 产生的真菌纤 维素酶， 它们公开在 US 4,435,307、 US 5,648,263、 US 5,691,178、 US 5,776,757 和 WO 89/09259 中。
     尤其适用的纤维素酶是具有颜色护理有益效果的碱性或中性纤维素酶。此类 纤维素酶的实例是描述于 EP 0 495 257、 EP 0 531 372、 WO 96/11262、 WO 96/29397、 WO 98/08940 的纤维素酶。其他实例是纤维素酶变体如那些描述于 WO 94/07998、 EP 0 531 315、 US 5,457,046、 US 5,686,593、 US 5,763,254、 WO 95/24471、 WO 98/12307 和 PCT/ DK98/00299 的纤维素酶。
     可商购获得的纤维素酶包括 RenozymeTM、 CellucleanTM、 EndolaseTM、 CelluzymeTM、 和 CarezymeTM(Novozymes A/S)、 ClazinaseTM、 和 PuradaxHATM(Genencor International Inc.)、 以及 KAC-500(B)TM(Kao Corporation)。
     过氧化物酶 / 氧化酶 ： 适用的过氧化物酶 / 氧化酶包括那些植物、 细菌或真菌起源的酶。包括化学改 性的或蛋白工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞 (Coprinus) 的过 氧化物酶， 例如来自灰盖鬼伞 (C.cinereus) 的过氧化物酶， 及其变体如那些描述于 WO 93/24618、 WO 95/10602、 和 WO 98/15257 的过氧化物酶。
     可商购获得的过氧化物酶包括 GuardzymeTM(Novozymes A/S)。
     当存在于清洁组合物中时， 上述酶可以按所述组合物的重量计约 0.00001％至约 2％， 约 0.0001％至约 1％， 或甚至约 0.001％至约 0.5％酶蛋白的含量存在。
     酶稳定剂 - 可使用多种技术来稳定用于洗涤剂的酶。本发明使用的酶可由最终 组合物中存在的钙和 / 或镁离子水溶性源来稳定， 最终组合物将这种离子提供给酶。此外 也可使用常规的稳定剂例如多元醇 ( 如丙二醇或甘油 )、 糖或糖醇、 乳酸、 硼酸、 或硼酸衍 生物如芳族硼酸酯、 或苯基硼酸衍生物如 4- 甲酰基苯基硼酸， 并且所述组合物可如例如 WO 92/19709 和 WO 92/19708 所述进行配制。
     溶剂 - 合适的溶剂包括水与其它溶剂如亲脂性流体。合适的亲脂性流体的实例包 括硅氧烷、 其它硅酮、 烃、 二元醇醚、 甘油衍生物如甘油醚、 全氟胺、 全氟化和氢氟醚溶剂、 低 挥发性无氟有机溶剂、 二醇溶剂、 其它对环境友好的溶剂以及它们的混合物。
     光漂白剂 - 所述组合物可包含光漂白剂。光漂白剂优选地选自氧杂蒽染料光漂白 剂、 光引发剂以及它们的混合物。
     适用的光漂白剂包括催化光漂白剂和光引发剂。 适用的催化光漂白剂选自由具有 下列式的水溶性酞菁组成的组 ：
    
    
    其中 ： PC 是酞菁环系 ；Me 是 Zn ； Fe(II) ； Ca ； Mg ； Na ； K； Al-Z1 ； Si(IV) ； P(V) ； Ti(IV) ； Ge(IV) ； Cr(VI) ； Ga(III) ； Zr(IV) ； In(III) ； Sn(IV) 或 Hf(VI) ；
     Z1 是卤化物 ； 硫酸盐 ； 硝酸盐 ； 羧化物 ； 链烷醇 ； 或氢氧离子 ；
     q为0； 1或2；
     r是1至4；
     Q1 是磺基或羧基 ； 或者式的基团 +
     -SO2X2-R1-X3 ； -O-R1-X3+ ； 或者 -(CH2)， -Y1+ ；
     其中
     R1 是支化的或非支化的 C1-C8 亚烷基 ； 或 1， 3- 或 1， 4- 亚苯基 ；
     X2 是 -NH- ； 或 -N-C1-C5 烷基 ； +
     X3 是下式的基团
    
    或， 在 R1 ＝ C1-C8 亚烷基的情况下， 也是下式的基团
    
    Y1+ 是下式的基团t为0或1
     其中在以上式中
     R2 和 R3 彼此独立地为 C1-C6 烷基
     R4 为 C1-C5 烷基 ； C5-C7 环烷基或 NR7R8 ；
     R5 和 R6 彼此独立地为 C1-C5 烷基 ；
     R7 和 R8 彼此独立地为氢或 C1-C5 烷基 ；
     R9 和 R10 彼此独立地为未取代 C1-C6 烷基或被羟基、 氰基、 羧基、 C1-C6 烷氧基、 C1-C6 烷氧基、 苯基、 萘基或吡啶基取代的 C1-C6 烷基 ；
     u为1至6；
     A1 是构成芳族 5- 至 7- 元氮杂环的单位， 在合适的情况下也可以再包含一个或两 个氮原子作为环成员， 和
     B1 是构成饱和 5- 至 7- 元氮杂环的单位， 在合适的情况下位也可以包含 1 至 2 个 氮、 氧和 / 或硫原子作为环成员 ；
     Q2 是羟基 ； C1-C22 烷基 ； 支链 C3-C22 烷基 ； C2-C22 烯基 ； 支链 C3-C22 烯基以及它们的 混合物 ； C1-C22 烷氧基 ； 磺基或羧基 ； 式基团
    
    下式的支链烷氧基团下式的烷基乙烯氧基单元
     -(T1)d-(CH2)b(OCH2CH2)a-B3
     或下式的酯基团
     COOR18
     其中
     B2 是氢 ； 羟基 ； C1-C30 烷基 ； C1-C30 烷氧基 ； -CO2H ； -CH2COOH ； -SO3-M1 ； -OSO3-M1 ； -PO32M1 ； -OPO32-M1 ； 以及它们的混合物 ；
     B3 是氢 ； 羟基 ； -COOH ； -SO3-M1 ； -OSO3M1 或 C1-C6 烷氧基 ；
     M1 是水溶性阳离子 ；
     T1 是 -O- ； 或 -NH- ；
     X1 和 X4 彼此独立地为 -O- ； -NH- 或 -N-C1-C5 烷基 ；
     R11 和 R12 彼此独立地为氢 ； 磺基及其盐 ； 羧基及其盐或羟基 ； R11 和 R12 基中的至少 一个是磺基或羧基或它们的盐，
     Y2 是 -O- ； -S- ； -NH- 或 -N-C1-C5 烷基 ；
     R13 和 R14 彼 此 独 立 地 为 氢 ； C1-C6 烷 基 ； 羟 基 -C1-C6 烷 基 ； 氰 基 -C1-C6 烷 基 ； 磺 基 -C1-C6 烷基 ； 羧基或卤素 -C1-C6 烷基 ； 未取代的苯基或卤素取代的苯基， C1-C4 烷基或 C1-C4 烷氧基 ； 磺基或羧基或 R13 和 R14 以及和它们结合的氮原子一起形成饱和的 5- 或 6- 元 杂环， 所述杂环也可另外包含氮原子或氧原子以作为环成员 ；
     R15 和 R16 彼此独立地为 C1-C6 烷基或芳基 -C1-C6 烷基 ；
     R17 是氢 ； 未取代的 C1-C6 烷基或被卤素、 羟基、 氰基、 苯基、 羧基、 C1-C6 烷氧基或 C1-C6 烷氧基取代的 C1-C6 烷基 ；
     R18 是 C1-C22 烷基 ； 支链 C3-C22 烷基 ； C1-C22 烯基或支链 C3-C22 烯基 ； C3-C22 乙二醇 ； C1-C22 烷氧基 ； 支链 C3-C22 烷氧基 ； 以及它们的混合物 ；
     M 是氢 ； 或碱金属离子或铵离子，
     Z2 是氯 ； 溴； 烷基硫酸根或芳基硫酸根离子 ；
     a为0或1；
     b为0至6；
     c 为 0 至 100 ；
     d为0； 或1；
     e 为 0 至 22 ；
     v 为 2 至 12 的整数 ；
     w为0或1； 和
     A 是有机的或无机的离子， 和
     s 在单价阴离子 A 的情况下等于 r， 在多价阴离子的情况下小于或等于 r， As- 对于 补偿正电荷来说是必需的 ； 其中如果 r 不等于 1， Q1 基可以是相同的或不同的， 并且其中酞 菁环系也可另外包含增溶基团 ；
     其它合适的催化光漂白剂包括氧杂蒽染料以及它们的混合物。在另一方面， 合适 的催化光漂白剂选自由下列组成的组 ： 磺化酞菁锌、 磺化酞菁铝、 Eosin Y、 Phoxine B、 Rose Bengal、 C.I.Food Red 14 以及它们的混合物。在另一方面适用的光漂白剂可为磺化酞菁 锌和磺化酞菁铝的混合物， 所述混合物的磺化酞菁锌对磺化酞菁铝的重量比大于 1， 大于 1 但是小于约 100， 或甚至约 1 至约 4。
     合适的光引发剂包括选自由下列组成的组的光引发剂 ： 芳族 1， 4- 醌例如蒽醌和 萘醌 ； α- 氨基酮， 尤其是那些包含苯甲酰部分的氨基酮， 另外称为 α- 氨基苯乙酮 ； α羟 基酮， 尤其是 α- 羟基苯乙酮 ； 含磷的光引发剂， 包括单酰基、 双酰基和三酰基氧化膦和硫 化物 ； 二烷氧基苯乙酮 ； α- 卤代苯乙酮 ； 三酰基氧化膦 ； 苯偶姻和苯偶姻基光引发剂、 以及 它们的混合物。在另一方面， 合适的光引发剂包括选自由下列组成的组的光引发剂 ： 2- 乙基蒽醌 ； 维生素 K3 ； 2- 硫酸蒽醌 ； 2- 甲基 1-[4- 苯基 ]-2- 吗啉基丙基 -1- 酮 (Irgacure 907) ； (2- 苄 基 -2- 二 甲 基 氨 基 -1-(4- 吗 啉 基 苯 基 )- 丁 基 -1- 酮 (Irgacure 369) ； (1-[4-(2- 羟乙氧基 )- 苯基 ]-2 羟基 -2- 甲基 -1- 丙基 -1- 酮 )(Irgacure 2959) ； 1- 羟 基环己基苯基酮 (Irgacure 184) ； 低聚 [2- 羟基 2- 甲基 -1-[4(1- 甲基 )- 苯基 ] 丙酮 (Esacure KIP150) ； 2-4-6-( 三甲基苯甲酰 ) 二苯基 - 氧化膦， 双 (2， 4， 6- 三甲基苯甲 酰 )- 苯基 - 氧化膦 (Irgacure TPO-L) ； 以及它们的混合物。 可以组合使用上述光漂白剂 ( 可以使用任何光漂白剂的混合物 )。合适的光漂白 剂可得自 Aldrich， Milwaukee， Wisconsin， USA ； Frontier Scientific， Logan， Utah， USA ； Ciba Specialty Chemicals， Basel， Switzerland ； BASF， Ludwigshafen， Germany ； Lamberti S.p.A， Gallarate， Italy ； Dayglo Color Corporation， Mumbai， India ； Organic Dyestuffs Corp.， East Providence， Rhode Island， USA ； 和 / 或根据本文包含的实例制造的光漂白剂。
     织物调色剂 - 所述组合物包含织物调色剂。织物调色剂能改变表面颜色是因为它 们吸收至少一部分可见光谱。适用的织物调色剂包括染料、 染料 - 粘土缀合物、 和颜料， 它 们满足详述于 WO2007/087257 的第 15 和 16 页的测试方法 1 的需要， 并且以引用方式并入本 文。适用的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自由下列组成的 组： 属于颜色索引 (C.I.) 分类的直接蓝、 直接红、 直接紫、 酸性蓝、 酸性红、 酸性紫、 碱性蓝、 碱性紫和碱性红、 或它们的混合物， 例如 ：
     (1) 三 - 偶氮直接蓝染料的式
    
    819) ； (2， 4， 6 三甲基苯甲酰 ) 苯基磷酸乙基酯 (Lucirin其中 A、 B 和 C 萘基环中的至少两个被磺酸根基团取代， C 环可在位点 5 被 NH2 或 NHPh 基团取代， X 是由最多 2 个磺酸根基团取代的苄基或萘基环， 可在位点 2 被 OH 基团取 代， 也可被 NH2 或 NHPh 基团取代。
     (2) 双 - 偶氮直接紫染料的式 ：
    
    其中 Z 是 H 或苯基， A 环优选地被甲基和甲氧基基团在箭头所示位点取代， A 环也 可以是萘基环， Y 基团是苯基或萘基环， 它被硫酸根基团取代， 也可被甲基基团一取代或二
     取代。
    
    (3) 蓝色或红色酸性染料的式其中 X 和 Y 中的至少一个必须是芳族基团。在一个方面， 两个芳族基团都可以是 取代的苄基或萘基， 它可以被非水增溶的基团取代， 例如烷基或烷氧基或芳氧基， X和Y不 能被水增溶的基团取代， 例如磺酸盐或羧酸盐。在另一方面， X 是硝基取代的苄基基团， Y是 苄基基团
     (4) 红色酸性染料的结构
    
    其中 B 是萘基或苄基基团， 它可以被非水增溶的基团取代， 例如烷基或烷氧基或 芳氧基， B 不能被水增溶的基团取代， 例如磺酸盐或羧酸盐。
     (5) 重氮基染料的结构
    
    其中彼此独立的 X 和 Y 是氢、 C1 至 C4 烷基或 C1 至 C4 烷氧基， Rα 是氢或芳基， Z是 C1 至 C4 烷基 ； C1 至 C4 烷氧基 ； 卤素 ； 羟基或羧基， n 是 1 或 2 而 m 是 0、 1 或 2、 以及它们的相 应的盐、 以及它们的混合物
     (6) 下列结构的三苯甲烷染料
    
    
    以及它们的混合物。 在另一方面， 合适的小分子染料选自由下列组成的组 ： 颜色索 引 (Society of Dyers and Colourists， Bradford， UK) 号直接紫 9、 直接紫 35、 直接紫 48、 直接紫 51、 直接紫 66、 直接蓝 1、 直接蓝 71、 直接蓝 80、 直接蓝 279、 酸性红 17、 酸性红 73、 酸 性红 88、 酸性红 150、 酸性紫 15、 酸性紫 17、 酸性紫 24、 酸性紫 43、 酸性红 52、 酸性紫 49、 酸性 蓝 15、 酸性蓝 17、 酸性蓝 25、 酸性蓝 29、 酸性蓝 40、 酸性蓝 45、 酸性蓝 75、 酸性蓝 80、 酸性蓝 83、 酸性蓝 90 和酸性蓝 113、 酸性黑 1、 碱性紫 1、 碱性紫 3、 碱性紫 4、 碱性紫 10、 碱性紫 35、 碱性蓝 3、 碱性蓝 16、 碱性蓝 22、 碱性蓝 47、 碱性蓝 66、 碱性蓝 75、 碱性蓝 159 以及它们的混 合物。在另一方面， 合适的小分子染料选自由下列组成的组 ： 颜色索引 (Society of Dyers and Colourists， Bradford， UK) 号酸性紫 17、 酸性紫 43、 酸性红 52、 酸性红 73、 酸性红 88、 酸性红 150、 酸性蓝 25、 酸性蓝 29、 酸性蓝 45、 酸性蓝 113、 酸性黑 1、 直接蓝 1、 直接蓝 71、 直 接紫 51 以及它们的混合物。在另一方面， 合适的小分子染料包括选自由下列组成的组的小 分子染料 ： 颜色索引 (Society of Dyers and Colourists， Bradford， UK) 号酸性紫 17、 直 接蓝 71、 直接紫 51、 直接蓝 1、 酸性红 88、 酸性红 150、 酸性蓝 29、 酸性蓝 113 或它们的混合 物。
     合适的聚合物染料选自由下列组成的组 ： 包含共轭色原体 ( 染料 - 聚合物共轭 物 ) 的聚合物、 色原体共聚合进入聚合物主链的聚合物、 以及它们的混合物。
     在另一方面， 合适的聚合物染料选自由下列组成的组 ： 以商品名 Liquitint (Milliken， Spartanburg， South Carolina， USA) 销售的织物 - 实体着色剂、 由至少一种 活性染料形成的染料 - 聚合物共轭物、 以及选自由包含以下部分的聚合物形成的组的聚合
     物： 羟基部分、 伯胺部分、 仲胺部分、 硫醇部分、 以及它们的混合物。在另一方面， 合适的聚 合物染料包括选自由下列组成的组的聚合物染料 ： Liquitint (Milliken， Spartanburg， South Carolina， USA)Violet CT、 与 活 性 蓝 共 轭 的 羟 甲 基 纤 维 素 (CMC)、 活性紫或活 性 红 染 料 如 与 C.I. 活 性 蓝 19 共 轭 的 CMC， 由 Megazyme， Wicklow， Ireland 以 产 品 名 AZO-CM-CELLULOSE， 产品代码 S-ACMC 出售、 烷氧基化的三苯甲烷聚合着色剂、 烷氧基化的 噻吩聚合着色剂以及它们的混合物。
     合适的染料粘土共轭物选自由下列组成的组 ： 包含至少一种阳离子 / 碱性染料和 绿土粘土、 以及它们的混合物。在另一方面， 合适的染料粘土共轭物选自由下列组成的组 ： 阳离子 / 碱性染料， 它选自由 C.I. 碱性黄 1 至 108、 C.I. 碱性橙 1 至 69、 C.I. 碱性红 1 至 118、 C.I. 碱性紫 1 至 51、 C.I. 碱性蓝 1 至 164、 C.I. 碱性绿 1 至 14、 C.I. 碱性褐 1 至 23、 CI 碱性黑 1 至 11 组成的组， 以及一种粘土， 它选自由下列蒙脱石粘土、 锂蒙脱石粘土、 滑石粉 粘土、 以及它们的混合物组成的组。 在另一方面， 合适的染料粘土共轭物选自由下列组成的 组： 蒙脱石碱性蓝 B7 C.I.42595 共轭物、 蒙脱石碱性蓝 B9 C.I.52015 共轭物、 蒙脱石碱性 紫 V3 C.I.42555 共轭物、 蒙脱石碱性绿 G1 C.I.42040 共轭物、 蒙脱石碱性红 R1 C.I.45160 共轭物、 蒙脱石碱性蓝 C.I. 碱性黑 2 共轭物、 锂蒙脱石碱性蓝 B7 C.I.42595 共轭物、 锂蒙脱 石碱性蓝 B9 C.I.52015 共轭物、 锂蒙脱石碱性紫 V3 C.I.42555 共轭物、 锂蒙脱石碱性绿 G1 C.I.42040 共轭物、 锂蒙脱石碱性红 R1 C.I.45160 共轭物、 锂蒙脱石 C.I. 碱性黑 2 共轭物、 皂碱性蓝 B7 C.I.42595 共轭物、 皂碱性蓝 B9 C.I.52015 共轭物、 皂碱性紫 V3 C.I.42555 共轭物、 皂碱性绿 G1 C.I.42040 共轭物、 皂碱性红 R1 C.I.45160 共轭物、 皂 C.I. 碱性黑 2 共轭物、 以及它们的混合物。
     合适的颜料选自由下列组成的组 ： 黄烷士酮、 靛蒽醌、 包含 1 至 4 个氯原子的氯化 靛蒽醌、 皮蒽酮、 二氯皮蒽酮、 单溴二氯皮蒽酮、 二溴二氯皮蒽酮、 四溴皮蒽酮、 二萘嵌苯 -3， 4， 9， 10- 四羧酸二酰亚胺酯， 其中所述酰亚胺基团可被也可不被 C1-C3 的烷基或苯基或杂 环基取代， 并且其中苯基和杂环基可另外带有不提供水中溶解度的取代基、 吡唑嘧啶羧酸 酰胺、 蒽酮紫、 异蒽酮紫、 二嗪颜料、 每个分子可包含最多 2 个氯原子的铜酞菁、 多氯铜酞菁 或每个分子包含最多 14 个溴原子的多溴铜酞菁、 以及它们的混合物。
     在另一方面， 合适的颜料包括选自下列组的颜料 ： 群青蓝 (C.I. 颜料蓝 29)、 群青 紫 (C.I. 颜料紫 15)、 以及它们的混合物。
     可以组合使用上述织物调色剂 ( 可使用织物调色剂的任何混合物 )。合适的织物 调色剂可得自 Aldrich， Milwaukee， Wisconsin， USA ； Ciba Specialty Chemicals， Basel， Switzerland ； BASF， Ludwigshafen， Germany ； Dayglo Color Corporation， Mumbai， India ； Organic Dyestuffs Corp.， East Providence， Rhode Island， USA ； Dystar， Frankfurt， Germany ； Lanxess ， Leverkusen ， Germany ； Megazyme ， Wicklow ， Ireland ； Clariant ， Muttenz， Switzerland ； Avecia， Manchester， UK 和 / 或根据本文包含的实例制成。
     适宜的调色剂更详细地描述于 US 7,208,459 B2 中。
     优选的织物调色剂选自直接紫 9、 直接紫 99、 酸性红 52、 酸性蓝 80 以及它们的混合 物。
     漂白催化剂 - 漂白催化剂通常能够从过氧酸和 / 或其盐接受氧原子并将所述氧原 子转移到氧化底物。适用的漂白催化剂包括但不限于 ： 亚胺阳离子和聚离子、 亚胺两性离子、 改性的胺、 改性的氧化胺、 N- 磺酰亚胺、 N- 膦酰亚胺、 N- 酰基亚胺、 噻二唑二氧化物、 全 氟亚胺 ； 环状糖酮 ； 以及它们的混合物。
    适宜的亚胺阳离子和聚离子包括但不限于 N- 甲基 -3， 4- 二氢异喹啉四氟硼酸盐， 按描述于 Tetrahedron(1992)， 49(2)， 423-38 中的方法制备 ( 参见例如， 化合物 4， p.433) ； N- 甲基 -3， 4- 二氢异喹啉 对甲苯磺酸盐， 按描述于美国专利 5,360,569 中的方 对甲苯磺酸盐， 按描 内盐， 法制备 ( 参见例如第 11 列， 实施例 1) ； 和 N- 辛基 -3， 4- 二氢异喹啉
    述于美国专利 5,360,568 中的方法制备 ( 参见例如， 第 10 列， 实施例 3)。 适用的亚胺两性离子的包括但不限于 N-(3- 磺基丙基 )-3， 4- 二氢异喹啉 按描述于美国专利 5,576,282 中的方法制备 ( 参见例如， 第 31 列， 实施例 II) ； N-[2-( 磺氧 基 ) 十二烷基 ]-3， 4- 二氢异喹啉 内盐， 按描述于美国专利 5,817,614 中的方法制备 ( 参 见例如， 列 32， 实施例 V) ； 2-[3-[(2- 乙基己基 ) 氧代 ]-2-( 磺氧基 )]-3， 4- 二氢异喹啉 内盐， 按描述于 WO05/047264 中的方法制备 ( 参见例如， 第 18 页， 实施例 8) 和 2-[3-[(2- 丁 基辛基 ) 氧代 ]-2-( 磺氧基 ) 丙基 ( 酯 )]-3， 4- 二氢异喹啉
    内盐。适宜的改性的胺氧转移催化剂包括但不限于 1， 2， 3， 4- 四氢 -2- 甲基 -1- 羟基异 喹啉， 其可依照描述于 Tetrahedron Letters(1987 年 )， 28(48)， 6061-6064 中的方法制备。 适宜的改性的氧化胺氧转移催化剂包括但不限于 1- 羟基 -N- 氧代 -N-[2-( 磺氧基 ) 癸 基 ]-1， 2， 3， 4- 四氢异喹啉钠。 适宜的 N- 磺酰基亚胺氧气转移催化剂包括但不限于 3- 甲基 -1， 2- 苯并异噻 唑 -1， 1- 二氧化物， 依照描述于 Journal of Organic Chemistry(1990)， 55(4)， 1254-61 中 的方法制备。
     适宜的 N- 膦酰基亚胺氧转移催化剂包括但不限于 [R-(E)]-N-[(2- 氯 -5- 硝基苯 基 ) 亚甲基 ]- 对苯基 - 对 -(2， 4， 6- 三甲基苯基 ) 次膦酸酰胺， 其可依照描述于 Journal of the Chemical Society， Chemical Communications(1994)， (22)， 2569-70 中的方法制 备。
     适宜的 N- 酰基亚胺氧转移催化剂包括但不限于 [N(E)]-N-( 苯基亚甲基 ) 乙酰 胺， 其可依照描述于 Polish Journal of Chemistry(2003 年 )， 77(5)， 577-590 中的方法制 备。
     适宜的噻二唑二氧化物氧转移催化剂包括但不限于 3- 甲基 -4- 苯基 -1， 2， 5- 噻 二唑 1， 1- 二氧化物， 其可依照描述于美国专利 5,753,599( 第 9 列， 实施例 2) 中的方法制 备。
     适宜的全氟亚胺氧转移催化剂包括但不限于 (Z)-2， 2， 3， 3， 4， 4， 4- 七氟 -N-( 壬氟 丁基 ) 丁酰亚胺氟化物， 其可根据 Tetrahedron Letters(1994)， 35(34)， 6329-30 中所述的 方法制备。
     适宜的环状糖酮氧转移催化剂包括但不限于如按美国专利 6,649,085( 第 12 列， 实施例 1) 中的方法制备的 1， 2： 4， 5- 二 -O- 异亚丙基 -D- 赤型 -2， 3-hexodiuro-2， 6- 吡喃 糖。
     所述漂白催化剂优选包含亚胺和 / 或羰基官能团， 并且所述漂白活性剂通常能够 在接受氧原子之后形成过氧亚胺正离子和 / 或双环氧乙烷官能团， 尤其是从过氧酸和 / 或
     其盐接受氧原子。所述漂白催化剂优选包含过氧亚胺正离子官能团和 / 或所述漂白催化 剂能够在接受氧原子之后形成过氧亚胺正离子官能团， 尤其是从过氧酸和 / 或其盐接受氧 原子。所述漂白催化剂优选包含环状亚胺官能团， 优选其中环状部分具有五个至八个原子 ( 包括氮原子 )， 优选六个原子。漂白催化剂优选包含芳香亚胺 胺 官能团， 优选二环芳香亚 官能团， 优选 3， 4- 二氢异喹啉官能团。所述亚胺官能团通常是季亚胺官能团， 并且通常能够形成接受氧原子的季过氧亚胺正离子官能团， 尤其是从过氧酸和 / 或其盐接受氧原 子。
     所述漂白催化剂优选具有与以下式相符的化学结构 ：
    其中 ： n 和 m 独立地为 0 至 4， 优选 n 和 m 均为 0 ； 每个 R1 独立地选自取代或未取代 的基团， 所述基团选自由下列组成的组 ： 氢、 烷基、 环烷基、 芳基、 稠合的芳基、 杂环、 稠合的 杂环、 硝基、 卤素、 氰基、 磺酸根、 烷氧基、 酮基、 羧基， 和烷氧羰基 ； 并且任何两个邻近的 R1 取 代基可结合形成稠合的芳基、 稠合的碳环或稠合的杂环 ； 每个 R2 独立地选自取代或未取代 的基团， 所述基团独立地选自由下列组成的组 ： 氢、 羟基、 烷基、 环烷基、 烷芳基、 芳基、 芳烷 2 2 基、 亚烃基、 杂环、 烷氧基、 芳羰基、 羧甲基和氨基 ； 任何 R 可以与任何其它 R 相连接以形成 公共环部分 ； 任何偕 R2 可结合以形成羰基 ； 并且其中任何两种 R2 可结合以形成取代或未取 代的稠合不饱和部分 ； R3 为 C1 至 C20 取代或未取代的烷基 ； R4 为氢或所述 Qt-A 部分， 其中 ： Q 为支化或未支化的亚烷基， t ＝ 0 或 1， 并且 A 为阴离子基团， 所述阴离子基团选自由下列组 5 2成的组 ： OSO3 、 SO3 、 CO2 、 OCO2 、 OPO3 、 OPO3H 和 OPO2 ； R 为氢或 -CR11R12-Y-Gb-Yc-[(CR9R10) 8 其中 ： 每个 Y 独立地选自由下列组成的组 ： O、 S、 N-H 或 N-R8 ； 并且每个 R8 独立 y-O]k-R 部分， 地选自由下列组成的组 ： 烷基、 芳基和杂芳基， 所述部分是取代或未取代的， 并且无论取代 或未取代， 所述部分具有的碳原子均小于 21 ； 每个 G 独立地选自由下列组成的组 ： CO、 SO2、 9 10 11 12 SO、 PO 和 PO2 ； R 和 R 独立地选自由下列组成的组 ： H 和 C1-C4 烷基 ； R 和 R 独立地选自由 下列组成的组 ： H 和烷基， 或者当结合在一起时， 它们可形成羰基 ； b＝0或1； c 可以＝ 0 或 6 芳 1， 但是如果 b ＝ 0， 则 c 必须＝ 0 ； y 为 1 至 6 的整数 ； k 为 0 至 20 的整数 ； R 为 H 或烷基、 基或杂芳基部分 ； 所述部分是取代或未取代的 ； 并且如果 X 存在的话， 它是一种合适的电荷 4 平衡抗衡离子， 当 R 为氢时 X 优选存在， 合适的 X， 包括但不限于 ： 氯离子、 溴离子、 硫酸根、 甲酯硫酸根、 磺酸根、 对甲苯磺酸根、 四氟化硼和磷酸根。
     在本发明的一个实施例中， 所述漂白催化剂具有符合下文通式的结构 ：
    
    其中 R13 是包含 3 个至 24 个碳原子 ( 包括所述支链碳原子 ) 的支链烷基或包含 一个至 24 个碳原子的直链烷基 ； R13 优选是包含 8 个至 18 个碳原子的支链烷基或包含 8 个至 18 个碳原子的直链烷基 ； R13 优选地选自由下列组成的组 ： 2- 丙基庚基、 2- 丁基辛基、 2- 戊基壬基、 2- 己基癸基、 正十二烷基、 正十四烷基、 正己基癸基、 正十八烷基、 异壬基、 异 13 癸基、 异十三烷基和异十五烷基 ； R 优选地选自由下列组成的组 ： 2- 丁基辛基、 2- 戊基壬 基、 2- 己基癸基、 异十三烷基和异十五烷基。
     糖基水解酶 - 糖基水解酶通常具有对木葡聚糖和无定形纤维素底物的酶活性。糖 基水解酶优选地选自 GH 家族 5、 12、 44 或 74。
     对木葡聚糖底物的酶活性更详细地描述于下文中。 对非晶形纤维素底物的酶活性 更详细地描述于下文中。
     所述糖基水解酶优选属于糖基水解酶第 44 家族。糖基水解酶 (GH) 家族的定义更 详细地描述于 1991 年 “Biochem J.” 第 280 卷第 309-316 页中。
     所述糖基水解酶优选具有与序列标识号 1 至少 70％， 或至少 75％， 或至少 80％， 或 至少 85％， 或至少 90％， 或至少 95％同一性的序列。
     就本发明目的而言， 在两个氨基酸序列之间同一性程度使用 Needleman-Wunsch 算法 (Needleman 和 Wunsch， 1970 年 J.Mol.Biol.48 ： 443-453) 如 EMBOSS 软件包在 Needle 程序中执行的 (EMBOSS ： The European Molecular Biology Open Software Suite， Rice 等 人， 2000， Trends in Genetics 16 ： 276-277)， 优选 3.0.0 或更高的版本。所用的任选参数 是， 10 的空位罚分， 0.5 的空位延伸罚分， 和 EBLOSUM62(EMBOSS 版的 BLOSUM62) 取代矩阵。 使用标记为 “最长同一性” 的 Needle 输出 ( 使用 -nobrief 选项获得 ) 作为百分比同一性， 并且如下计算 ： ( 相同残基 ×100)/( 序列长度 - 序列中的总空位数 )。
     适宜的糖基水解酶选自由下列组成的组 ： 得自类芽胞杆菌 polyxyma( 野生型 ) 的 GH 第 44 家族糖基水解酶如 XYG1006， 描述于 WO 01/062903 或为其变体 ； 得自地衣芽孢杆菌 ( 野生型 ) 的 GH 第 12 家族糖基水解酶， 如序列 No.ID ： 1， 描述于 WO 99/02663 或为其变体 ； 得自芽孢杆菌属 agaradhaerens( 野生型 ) 的 GH 第 5 家族糖基水解酶或其变体 ； 得自类芽胞 杆菌 ( 野生型 ) 的 GH 第 5 家族糖基水解酶， 如 XYG1034 和 XYG 1022， 描述于 WO 01/064853 或其变体 ； 得自 Jonesia sp.( 野生型 ) 的 GH 第 74 家族糖基水解酶， 如 XYG1020， 描述于 WO 2002/077242 或其变体 ； 和得自里氏木霉 ( 野生型 ) 的 GH 第 74 家族糖基水解酶， 如在 WO03/089598 的序列 ID no.2 中更详细描述的酶， 或其变体。
     优选的糖基水解酶选自由下列组成的组 ： 得自类芽孢杆菌 ( 野生型 ) 的 GH 第 44 家族糖基水解酶， 如 XYG1006 或其变体。
     糖基水解酶对木葡聚糖底物的活性
     如果根据下列检测分析法， 纯酶在 pH 7.5 下具有大于 50000XyloU/g 的比活度， 则 认为酶对木葡聚糖具有活性。
     使用得自 Megazyme(Ireland) 的 AZCL- 木葡聚糖作为底物 ( 蓝色底物 )， 测定木葡 聚糖酶活性。
     在 20℃和搅拌下， 在 1.5mL Eppendorf 管中， 将 0.2％蓝色底物的溶液悬浮于 pH 为 7.5 的 0.1M 磷酸盐缓冲液中 ( 各 0.75mL)， 加入 50 微升酶溶液， 并且在 1200rpm 速率搅 拌下， 使它们在 40℃的 Eppendorf 混匀仪中培养 20 分钟。培养后， 通过在 14,000rpm 速率下离心 4 分钟， 使有色溶液与固体分离， 并且使用分光光度计， 在 1cm 比色皿中测定上清液 在 600nm 处的吸光度。将一个 XyloU 单位定义为 1cm 比色皿中在 600nm 处获得 0.24 吸光 度的酶量。
     仅使用介于 0.1 至 0.8 的吸光度值来计算 XyloU 活性。如果测得的吸光度值在此 范围之外， 则应相应地进行初始酶浓度的最优化。
     糖基水解酶对无定形纤维素底物的活性
     如果根据下列检测分析法， 纯酶在 pH7.5 下具有大于 20000EBG/g 的比活度， 则认 为酶对非晶形纤维素具有活性。用作缓冲液和底物的化学物质是至少试剂级的商业产品。
     内葡聚糖酶活性检测分析材料 ：
     pH 为 7.5 的 0.1M 磷酸盐缓冲液
     Cellazyme C 片剂， 由 Megazyme International(Ireland) 提供。
     玻璃微纤维过滤器， GF/C， 9cm 直径， 由 Whatman 提供。
     方法 ：
     在测试管中， 使 1mL pH 7.5 的缓冲液与 5mL 去离子水混合。
     加入 100 微升酶样本 ( 或具有已知重量 ： 重量稀释因子的酶样本稀释液 )。将 1 片 Cellazyme C 片剂加入到每个管中， 将管封盖， 并且在涡旋搅拌器上混合 10 秒。将管放 置于温度为 40℃的恒温水浴中。15 分钟、 30 分钟和 45 分钟后， 通过将管倒转来混合管中 内容物， 然后将管再放置于水浴中。60 分钟后， 通过倒转来混合管中内容物， 然后通过 GF/C 过滤器过滤。将滤液收集于干净的管中。
     用分光光度计测定 590nm 处的吸光度 (A 酶 )。通过加入 100μL 水而不是 100 微 升酶稀释液， 测定空白值 A 水。
     计算的 δA ＝ A 酶 -A 水。
     δA 必须＜ 0.5。如果获得更高的结果， 则用不同的酶稀释因子进行重复。
     确定 DF0.1， 其中 DF0.1 为需要达到 δA ＝ 0.1 的稀释因子。
     单位定义 ： 1 个内型 -β- 葡聚糖酶活度单位 (1EBG) 是在上文指定的检测分析条 件下达到 δA ＝ 0.10 的酶量。因此， 如果例如在用为 100 的稀释因子稀释后， 指定的酶样 本达到 δA ＝ 0.10， 则所述酶样本具有 100EBG/g 的活度。
     两亲烷氧基化油脂清洁聚合物 - 本发明的两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物是指 任何具有平衡的亲水性和疏水性的烷氧基化的聚合物， 使得它们从织物和表面移除油脂颗 粒。 本发明两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物具体的实施方案包括核结构和多个连接到那个 核结构的烷氧基化物基团。
     所述核结构可包括聚亚烷基亚胺结构， 其以密集的形式包含式 (I)、 (II)、 (III) 和 (IV) 的重复单元 ：
    其中在每个实例中， # 代表在氮原子和式 (I)、 (II)、 (III) 或 (IV) 的两个邻近重 1 复单元的基团 A 游离的结合位之间的键的二分之一 ； 在每个实例中， * 代表连接到烷氧基 化物基团中的一个键的二分之一 ； 并且 A1 独立地选自直链或支链的 C2-C6- 亚烷基 ； 其中所 述聚亚烷基亚胺结构由式 (I)1 重复单元、 式 (II)x 重复单元、 式 (III)y 重复单元和式 (IV) y+1 重复单元组成， 其中在每个实例中， x 和 y 具有 0 至约 150 范围内的值， 其中聚亚烷基亚 胺核结构的平均重均分子量 Mw， 为约 60 至约 10,000g/mol 范围内的值。
     所述核结构可或者包含至少一种选自式 (I.a) 和 / 或 (I.b)N-( 羟烷基 ) 胺的缩 合产物的化合物的聚链烷醇胺结构，
    
    其中 A 独立地选自 C1-C6- 亚烷基 ； R1、 R1*、 R2、 R2*、 R3、 R3*、 R4、 R4*、 R5 并且 R5* 独立 地选自氢、 烷基、 环烷基或芳基， 其中至少三种提及的基团可以为任选地取代的 ； 并且 R6 选 自氢、 烷基、 环烷基或芳基。其中至少三种提及的基团可以为任选地取代的。
     连接到所述核结构多个烯氧基基团独立地选自式 (V) 的烯氧基单元
    
    其中在每个实例中， * 代表连接到式 (I)、 (II)、 (III) 或 (IV) 的氮原子键的二分 2 之一 ； 在每个实例中 A 独立地选自 1， 2- 丙烯、 1， 2- 丁烯和 1， 2- 异丁烯 ； A3 为 1， 2- 丙烯 ； 在每个实例中， R 独立地选自氢和 C1-C4- 烷基 ； m 具有 0 至约 2 范围内的平均值 ； n 具有 20 至约 50 范围内的平均值 ； 且 p 具有 10 至约 50 范围内的平均值 ；
     两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物具体的实施方案可选自具有内聚环氧乙烷嵌段 和外聚丙烯氧基嵌段烷氧基化的聚亚烷基亚胺， 乙氧基化度和丙氧基化度不会超过低于具 体的限定值。根据本发明的烷氧基化聚亚烷基亚胺的具体实施方案具有约 0.6 的最小聚乙 烯嵌段对聚丙烯嵌段 (n/p) 的比率和约 1.5(x+2y+1)1/2 的最大比率。 已发现， 具有约 0.8 至 1/2 约 1.2(x+2y+1) 的 n/p 比率的烷氧基化聚亚烷基亚胺具有特别有益的特性。
     根据本发明的烷氧基化聚亚烷基亚胺具有一条主链， 所述主链由伯胺、 仲胺和叔 胺氮原子组成， 其通过亚烷基 A 互相连接并且是无规排列的。伯氨基部分， 其是聚亚烷基亚 胺主链的主要链和侧链的起始点或终结点并且其剩余的氢原子随后被亚烷氧基单元取代， 分别被称为分子式 (I) 或 (IV) 的重复单元。仲氨基部分， 其剩余的氢原子随后被亚烷氧基 单元取代， 被称为分子式 (II) 的重复单元。叔氨基部分， 其使主要链和侧链分叉， 被称为分 子式 (III) 的重复单元。
     由于在聚亚烷基亚胺主链的形成中会发生环化， 在主链中还可能存在少量的环状 氨基部分。当然， 包含环状氨基部分的此类聚亚烷基亚胺以与由非环状伯氨基和仲氨基部 分组成的那些相同的方式烷氧基化。
     由氮原子和基团 A1 组成的聚亚烷基亚胺主链具有约 60 至约 10,000g/mol， 优选约 100 至约 8,000g/mol， 并且更优选约 500 至约 6,000g/mol 的平均分子量 Mw。
     (x+2y+1) 的和对应于存在于一条单独的聚亚烷基亚胺主链中的亚烷基亚胺单元 的总数， 并因此直接与所述聚亚烷基亚胺主链的分子量相关。 然而， 在本说明书中给出的值 涉及所述混合物中存在的所有聚亚烷基亚胺的平均数。 (x+2y+2) 的和对应于存在于一条单 独的聚亚烷基亚胺主链中的氨基的总数。
     连接氨基氮原子的基团 A1 可以是相同或不同的、 直链或支链的 C2-C6- 亚烷基， 如 1， 2- 乙烯、 1， 2- 丙烯、 1， 2- 丁烯、 1， 2- 异丁烯、 1， 2- 亚戊基、 1， 2- 亚己基或六亚甲基。优选 的支链亚烷基是 1， 2- 丙烯。优选的直链亚烷基是乙烯和六亚甲基。更优选的亚烷基是 1， 2- 乙烯。
     聚亚烷基亚胺主链中伯胺基和仲胺基的氢原子可被分子式 (V) 的亚烷氧基单元 取代。
    在该分子式中， 所述变量优选具有以下所给出的一种含义 ：
     在各种情况下， A2 选自 1， 2- 亚丙基、 1， 2- 亚丁基和 1， 2- 异亚丁基 ； A2 优选为 1， 2- 亚丙基。 A3 为 1， 2- 亚丙基 ； 在各种情况下， R 选自氢和 C1-C4 烷基， 如甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基和叔丁基 ； R 优选为氢。在各种情况下， 系数 m 具有 0 至约 2 的值 ； m 优选为 0 或大约 1 ； 更优选 m 为 0。系数 n 具有在约 20 至约 50 范围内， 优选在约 22 至约 40 范围内， 并且更优选在约 24 至约 30 范围内的平均值。系数 p 具有在约 10 至约 50 范围 内， 优选在约 11 至约 40 范围内， 并且更优选在约 12 至约 30 范围内的平均值。
     分子式 (V) 的亚烷氧基单元优选是非随机序列的烷氧基化物嵌段。通过非随机 序列是指首先添加 [-A2-O-]m( 即最接近分子式 (I)、 (II) 或 (III) 的重复单元的氮原子的 3 键 )， 其次添加 [-CH2-CH2-O-]n， 而第三个添加 [-A -O-]p。该目标提供具有内层聚环氧乙烷 嵌段和外层聚环氧丙烷嵌段的烷氧基化聚亚烷基亚胺。
     这些分子式 (V) 的亚烷氧基单元的基本部分由亚乙氧基单元 -[CH2-CH2-O)]n- 和 亚丙氧基单元 -[CH2-CH2(CH3)-O]p- 形成。所述亚烷氧基单元还可具有小部分的亚丙氧基 或亚丁氧基单元 -[A2-O]m-， 即用氢原子饱和的聚亚烷基亚胺主链， 可最初使每摩尔存在的
     NH- 部分与少量的至多约 2mol， 尤其是约 0.5 至约 1.5mol， 特别是约 0.8 至约 1.2mol 的环 氧丙烷或环氧丁烷反应， 即初期烷氧基化。
     如果需要的话， 所述聚亚烷基亚胺主链的这种初始改性可使烷氧基化过程中反应 混合物的粘度降低。 然而， 所述改性通常不会影响烷氧基化聚亚烷基亚胺的性能特性， 因此 不构成优选的标准。
     所述两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物按所述组合物的重量计以约 0.05％至 10％ 范围内的含量存在于本发明的去污和清洁组合物中。 所述组合物的实施方案按重量计可包 含约 0.1％至约 5％。 更具体地讲， 所述实施方案可包含约 0.25 至约 2.5％的油脂清洁聚合 物。
     无规接枝共聚物 - 无规接枝共聚物包含 ： (i) 包含选自由下列组成的组的单体的 亲水性主链 ： 不饱和的 C1-C6 羧酸、 醚、 醇、 醛、 酮、 酯、 糖单元、 烷氧基单元、 马来酸酐、 诸如甘 油的饱和的多元醇、 以及它们的混合物 ； 和 (ii) 选自由下列组成的组的疏水性侧链 ： C4-C25 烷基、 聚丙烯、 聚丁烯、 饱和的 C1-C6 一元羧酸的乙烯基酯、 丙烯酸或甲基丙烯酸的 C1-C6 烷基 酯、 以及它们的混合物 ；
     所述聚合物优选具有通式 ：
    其中 X、 Y 和 Z 为封端单元， 独立地选自 H 或 C1-6 烷基 ； 每个 R1 独立地选自甲基和 乙基 ； 每个 R2 独立地选自 H 和甲基 ； 每个 R3 独立地为 C1-4 烷基 ； 且每个 R4 独立地选自吡咯 烷酮和苯基基团。所述聚环氧乙烷主链的重均分子量通常为约 1,000g/mol 至约 18,000g/ mol， 或约 3,000g/mol 至约 13,500g/mol， 或约 4,000g/mol 至约 9,000g/mol。选择 m、 n、 o、 p 和 q 的值， 以使得侧基的含量按所述聚合物的重量计为至少 50％， 或约 50％至约 98％， 或约 55 ％至约 95 ％， 或约 60 ％至约 90 ％。可用于本文的聚合物通常具有约 1,000 至约 100,000g/mol， 或优选约 2,500g/mol 至约 45,000g/mol， 或约 7,500g/mol 至约 33,800g/ mol， 或约 10,000g/mol 至约 22,500g/mol 的重均分子量。
     适宜的接枝共聚物更详细地描述于 WO07/138054、 WO06/108856 和 WO06/113314 中。
     储备碱度 - 所述组合物可具有大于 4.0， 优选地大于 7.5 的储备碱度。 本文所用术 语 “储备碱度” 是洗涤剂组合物缓冲能力的量度 (g/NaOH/100g 洗涤剂组合物 )， 其通过用盐
     酸将 1％ (w/v) 的洗涤剂组合物溶液滴定至 pH7.5 来测定， 即为了计算如本文所定义的储备 碱度 ：
     储 备 碱 度 ( 至 pH7.5) 以 碱 g NaOH/100g 产 品 百 分 比 ＝ (T×M×40×Vol)/ (10×Wt× 等分试样 )
     T ＝至 pH 7.5 时的滴度 (mL)
     M ＝ HCl 摩尔浓度， 为 0.2
     40 ＝ NaOH 的分子量
     Vol ＝总体积 ( 即 1000mL)
     W ＝产品重量 (10g)
     等分试样＝ (100mL)
     获得 10g 精确称量至小数点后两位的全配方洗涤剂组合物样本。应在除尘橱中， 使用 Pascall 采样器取得样本。向塑料烧杯中加入 10g 样本， 并加入 200mL 不含二氧化碳 的去离子水。 在搅拌台上， 使用磁子以 150rpm 的速度搅拌， 直至完全溶解， 并且搅拌至少 15 分钟。将烧杯中的内容物转移至 1 升容量瓶中， 并用去离子水补足至 1 升。混合均匀， 并且 立即使用 100mL 吸液管， 取 100mL±1mL 的等分试样。 使用能够读至 ±0.01pH 单位的 pH 计， 测定并记录样本的 pH 和温度， 并且搅拌， 以确保温度为 21℃ ±2℃。用 0.2M 的盐酸， 在搅 拌的同时滴定， 直至 pH 准确测定为 7.5。记录所用的盐酸毫升数。取三次相同重复试验的 平均滴度。进行所述计算， 算得至 pH7.5 时的 RA。 本发明的洗涤剂组合物的 RA 将大于 7.5 并且优选地大于 8。RA 可为大于 9 或甚 至大于 9.5 或 10 或更高。所述 RA 可最多为 20 或更高。
     可由例如一种或多种碱金属硅酸盐 ( 结晶层状硅酸盐除外 )、 碱金属碳酸盐来提 供适当的储备碱度， 所述碱金属硅酸盐典型为非晶形硅酸盐， 通常为 1.2 至 2.2 比率的钠 盐， 所述碱金属碳酸盐典型为碳酸钠、 碳酸氢钠和 / 或倍半碳酸钠。 STPP 和过酸盐如过硼酸 盐和过碳酸盐也对碱度有贡献。 需要缓冲作用， 以在洗涤过程期间维持碱性 pH， 中和污垢的 酸性， 尤其是由脂肪酶所释放的脂肪酸。
     香料 - 所述组合物可包含香料。香料可进行胶囊包封， 例如通过淀粉包封。香料 可通过尿素 - 甲醛或三聚氰胺 - 甲醛材料进行胶囊包封。此类香料胶囊包封物可为香料微 胶囊的形式。
     组合物可包含胶囊包封的香料和非胶囊包封的香料， 其中香料原料的重量比具有 1 2 3 4 1 2 3 其中 R R R 各自独立地选自 H、 烷基、 芳基、 烷基芳基、 环状 以下通式结构 ： R R R CC(O)OR ， 1 2 3 烷基， 并且其中至少一个， 优选地至少两个 R R R 是 H， 以胶囊包封的香料形式存在的香料 原料与那些以非胶囊包封的香料形式存在的香料原料 ( 也具有上述通式结构 ) 的重量比大 于 3 ∶ 1， 优选地大于 4 ∶ 1， 或甚至大于 5 ∶ 1， 或者 10 ∶ 1， 或者 15 ∶ 1 或甚至 20 ∶ 1。
     具有上述通式结构的一般香料原料包括 ： 乙酸苄酯、 己基乙酸酯、 烯丙基己酸酯、 香叶基丁酸酯、 香叶基乙酸酯、 乙基丁酸酯、 丁酸橙花酯、 香茅醇乙酸酯、 乙基 -2- 甲基戊酸 酯、 异丙基 2- 丁酸甲酯和烯丙基戊基乙醇酸酯。具有上述通式结构的其他香料原料包括 ： manzanateTM supplied by Quest(Ashford， Kent， UK) ； and vertenexTM， verdoxTM， violiffTM supplied by International Flavors and Fragrances(New Jersey， USA)。
     所述组合物可包含香料， 其中所述香料包含至少 10 重量％的一种或多种香料原
     料， 它们具有大于 0 但是小于或等于 350 道尔顿的分子量， 至少 80 重量％的所述一种或多 种香料原料具有至少 2.4 的 cLogP， 所述香料组合物包含至少 5 重量％的具有至少 2.4 的 cLogP 的一种或多种香料组分。
     本文所公开的香料组合物对遮蔽气味是尤其有用的， 尤其是脂肪酸气味， 更具体 地讲短链脂肪酸气味如丁酸的气味， 此类香料组合物在洗涤剂粉末中是尤其有用的。
     在本发明的一个方面所述香料包含至少 10％、 20％、 30％、 40％、 50％、 60％、 70％、 80％、 或甚至 90％的一种或多种香料原料， 该香料原料具有大于 0 但小于或等于 350 道尔 顿， 约 100 道尔顿至约 350 道尔顿， 约 130 道尔顿至约 270 道尔顿， 或甚至约 140 道尔顿至 约 230 道尔顿的分子量 ； 至少 80 重量％、 85 重量％、 90 重量％或甚至 95 重量％的所述一种 或多种香料原料具有至少 2.4， 约 2.75 至约 8.0 或甚至越 2.9 至约 6.0 的 cLogP， 所述香料 包含至少 5 重量％， 15 重量％， 25 重量％， 35 重量％， 45 重量％， 55 重量％， 65 重量％， 75 重 量％， 85 重量％， 或甚至 95 重量％的所述一种或多种香料组分， 该香料组分具有的 cLogP 在 至少 2.4， 约 2.75 至约 8.0 或甚至约 2.9 至约 6.0 的范围内。在本发明的所述方面， 所述一 种或多种香料组分可选自席夫碱、 醚、 酚、 酮、 醇、 酯、 内酯、 醛、 腈、 天然油， 或它们的混合物。
     洗涤方法 本发明包括一种清洁和 / 或处理某个区域、 特别是表面或织物的方法。上述方法 包括以下步骤 ： 将申请人的清洁组合物实施例 ( 以纯物质形式或稀释在洗涤液体中 ) 与至 少部分表面或织物接触， 然后任选地漂洗上述表面或织物。可在上述漂洗步骤之前对所述 表面或织物进行洗涤步骤。对本发明而言， 洗涤包括但不限于擦洗和机械搅拌。正如本领 域的技术人员所认可的那样， 本发明的清洁组合物理想地适用于洗衣用途。因此， 本发明 包括一种用于洗涤织物的方法， 所述方法包括以下步骤 ： 将待洗涤的织物与所述清洁洗涤 溶液接触， 所述清洁洗涤溶液包含申请人的清洁组合物、 清洁助剂或它们的混合物的至少 一个实施方案。织物可包括任何能够在正常消费者使用条件下洗涤的大部分任何织物。所 述溶液优选具有约 8 至约 10.5 的 pH。可使用组合物在溶液中的浓度为约 100ppm， 优选为 500ppm 至约 15,000ppm。水温通常为约 5℃至约 90℃。本发明在低的水温如低于 30℃或低 于 25℃或 20℃时会尤其有益。水与织物的比率通常为约 1 ∶ 1 至约 30 ∶ 1。
    实施例 以下实施例进一步描述了本发明， 所述实施例不应理解为限制本发明的范围。
     用作缓冲液和底物的化学物质是至少试剂级的商业产品。
     实施例 1- 脂肪酶变体的表达
     构建包含编码脂肪酶变体的基因的质粒并使用本领域的标准方法将其转化到合 适的宿主细胞中。
     实施例 2- 生产脂肪酶变体
     以分批补料发酵方式进行发酵， 培养基恒定温度为 34℃， 并且起始体积为 1.2 升。 将培养基的初始 pH 设为 6.5。一旦 pH 提高到 7.0， 通过加入 10％ H3PO4 维持该值。通过改 变搅拌速率控制培养基中溶解氧的含量， 并且使用 1.0 升空气每升培养基每分钟的固定透 气速率。在整个分批补料阶段期间， 将给料速率维持在恒定水平。
    
    批培养基包含麦芽糖糖浆作为碳源， 尿素和酵母提取物作为氮源， 并且包含痕量金属和盐的混合物。在分批补料阶段期间连续加入的补料包含麦芽糖糖浆作为碳源， 而加 入酵母提取物和尿素是为了确保氮的足够供应。
     脂解酶变体的纯化可使用本领域已知的标准方法进行， 例如通过过滤发酵上清液 并随后进行疏水性层析和离子交换层析， 例如 EP 0 851 913 EP， 实施例 3 所述。
     实施例 3- 脂解酶变体的洗涤剂内稳定性
     测试以下脂解酶变体在洗涤剂内的稳定性并且与基准脂解酶 SEQ ID NO ： 2 比较。
     表2： 测试的脂解酶变体。
    
    
    脂解酶变体和基准取剂量为 0.065mg 酶蛋白 /g 商业洗涤剂的浓度。 表3： 洗涤剂组合物。 成分 起源重量％ 烷基醚硫酸钠 Steol 25-2S.70， Stepan Deutschland 12.0
     LAS Surfac SDBS80， Surfachem 7.0
     牛油皂 / 椰子 80/20 Linds Fabrikker 3.2
     23-9 醇乙氧基化物 Neodol 23-9， Shell Chemical 2.4
     烷基二甲基胺氧化物 Empigen OB， Huntsman 2.0
     柠檬酸 ( 钠 ) Merck 2.8
     氢氧化钠 10N Bie & Berntsen 1.6
     甘油 Optim Glycerine 99.7％ USP/EP， Dow Chemical 2.3
     单乙醇胺 Huntsman 2.7
     MPG Proylene Glycol Industrial， Dow Chemical 4.7
     水 59.3
     将包含洗涤剂和脂解酶变体或基准酶的样本溶解在 pH ＝ 7.7 的 tris( 羟甲基 ) 氨基甲烷 (TRIS) 缓冲液中并分别贮存在 -18℃ 2 周和 35℃ 4 周。如下计算残余的酶活性 ： 在 35℃孵育后的脂肪酶活性除以贮存在 -18℃的样本的脂肪酶活性。稳定性数据如下表 4
     所示。与基准脂肪酶相比， 所有六个脂解酶变体显示改善的洗涤剂内稳定性。
     通过监控底物 p- 硝基苯基 - 戊酸盐 (pNp-Val) 水解生成戊酸盐和 pNp 产物来测 量脂肪酶活性。检测波长＝ 405nm ； pH ＝ 7.7 ； 温度＝ 37℃。在该 pH 具有酯酶活性的所有 脂肪酶能用该方法进行分析。
     表4： 贮藏后的残余脂肪分解活性。显示的数据为三个数据的平均值。
    
    
    洗涤剂实施例 用于实施例的缩写组分的识别如下所示 ：
    
    
    实施例 A 由下列制剂举例说明具有颗粒状衣物洗涤剂形式的漂白洗涤剂组合物。A LAS QAS C25E3S C25E7 STPP 沸石 A 硅酸盐 12 0.7 0.9 0.0 5 0.0 2 B 15 1 0.0 0.5 3 0.0 3 C 13 1 0.9 0.0 1 0.0 3 D 15 0.6 0.0 1 10 0.0 7 E 10 0.0 0.0 3 0 10 0 F 14 0.7 0.9 1 8 0.0 4实施例 A 中的任何组合物以水中 600ppm 至 10000ppm 的浓度、 典型中间条件为 2500ppm 以及 25℃和 25 ∶ 1 的水与织物比率下用来洗涤织物。
     实施例 B
     由下列制剂举例说明具有颗粒状衣物洗涤剂形式的漂白洗涤剂组合物。
    
     A LAS C25E3S C68S C25E7 QAS (Na-)SKS-6 沸石 A 柠檬酸 8 0 1 2.2 0.75 4.1 20 3 B 7.1 4.8 0 0 0.94 0 0 5 C 7 0 1 3.2 0.98 4.8 17 3 D 6.5 5.2 0 0 0.98 0 0 438102112602 A CN 102112606 碳酸盐 硅酸盐 洗涤剂说15 0.08 0.75明书20 0 0.72 14 0.11 0.71 20 035/37 页0.72
    实施例 B 中的在 20-90℃下， 以 10,000ppm 的水溶液浓度， 以及 5 ∶ 1 的水与织物 的比率， 使用任何上述组合物来洗涤织物。
     实施例 C
    
    乙醇 TEPAE1 乙氧基化的六亚甲基二胺 2 1， 2- 丙二醇 蛋白酶 * 甘露聚糖酶 * 淀粉酶 * 脂肪酶 * 两亲烷氧基化油脂清洁聚合物 无规接枝共聚物 调色剂 未胶囊包封的香料 香料微胶囊 三羟基硬脂酸甘油酯 水、 染料和其他
    1.54 0.3 0.8 0.0 36.4 1.1 7.3 10 0.3 0.5 0.001 0.5 0.2 0.2 余量1.77 0.33 0.81 6.6 36.4 1.1 7.3 3.2 0.5 0.3 0.003 0.5 0.1 0.1 余量1.15 0.23 0.6 0.0 27.3 0.8 5.5 0.5 0.7 0.5 0.005 0.5 0.3 0.3 余量0.89 0.17 0.4 3.3 18.2 0.6 3.7 3.2 0.5 0.7 0.01 0.5 0.2 0.2 余量1.54 0.0 0.0 0.0 36.4 1.1 7.3 2.4 0.3 0.5 0 0.5 0.1 0.1 余量1.15 0.0 0.0 0.0 27.3 0.8 5.5 3.2 0 0 0 0.5 0 0 余量* 以 mg 酶 /100g 计的数值 1
     如 US 4,597,898 中所述。 2
     以商品名 LUTENSIT 得自 BASF， 以及如 WO 01/05874 中所述的那些
     不应将本文所公开的量纲和值理解为对所引用精确值的严格限制。相反， 除非另 外指明， 每个这样的量纲旨在表示所引用的值和围绕该值功能上等同的范围。 例如， 公开为 “40mm” 的量纲旨在表示 “约 40mm” 。41102112602 A CN 102112606
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     列。 SEQ ID NO ： 10 显示来自异孢镰孢菌 (Fusarium heterosporum) 的脂肪酶的氨基 酸序列。
     SEQ ID NO ： 11 显示来自米曲霉 (Aspergillus oryzae) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 12 显示来自沙门柏干酪青霉 (Penicillium camemberti) 的脂肪酶的 氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 13 显示来自臭曲霉 (Aspergillus foetidus) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 14 显示来自曲霉菌曲霉 (Aspergillus niger) 的脂肪酶的氨基酸序 列。
     SEQ ID NO ： 15 显示来自米曲霉 (Aspergillus oryzae) 的脂肪酶的氨基酸序列。
     SEQ ID NO ： 16 显示来自 Landerina penisapora 的脂肪酶的氨基酸序列。
     发明详述
    氨基酸修改形式的命名
     根据本发明描述脂肪酶变体时， 使用以下命名法以便于参考 ：
     初始氨基酸 ： 位置 ： 取代氨基酸
     根据该命名法， 例如在位点 195 上将谷氨酸取代成甘氨酸以 G195E 表示。在相同 位点上去除甘氨酸以 G195* 表示， 插入附加氨基酸残基如赖氨酸以 G195GK 表示。其中特异 性脂肪酶与其他脂肪酶相比包含 “缺失” 并且在同样位点插入一个氨基酸用 *36D 表示， 指 在位点 36 插入一个天冬氨酸。
     多个突变用加号分开， 即： R170Y+G195E， 代表在位点 170 和 195 上分别用精氨酸和 甘氨酸取代酪氨酸和谷氨酸的突变。
     当施加所述的比对方法时， X231 指示在亲本脂解酶中对应于位点 231 的氨基酸。 X231R 指示氨基酸被 R 取代。就 SEQ ID NO ： 2 而言， X 是 T， 因此 X231R 指示 R 在位点 231 取代 T。其中在一个位点 ( 例如 231) 的氨基酸可被另一个选自一组氨基酸的氨基酸取代， 例如所述组由 R 和 P 和 Y 组成， 这将用 X231R/P/Y 表示。
     在所有情况下， 使用公认的 IUPAC 单字母或三字母氨基酸缩写。
     同一性 ： 如本文所用， 术语 “同一性” 指两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之 间的相关性， 这种相关性用参数 “同一性” 描述。
     就本发明的目的而言， 两个氨基酸序列的比对通过来自 EMBOSS 软件包 (http:// emboss.org)， 版本 2.8.0 的 Needle 程序进行测定。Needle 程序执行全序列比对算法， 如 Needleman， S.B. 和 Wunsch， C.D.(1970)J.Mol.Biol.48， 443-453 所述。使用的取代矩阵是 BLOSUM62， 空位开放罚分是 10， 空位延伸罚分是 0.5。
     本发明的一个氨基酸序列 ( “发明序列” ； 例如 SEQ ID NO ： 2 的氨基酸 1 至 269) 和 一个不同氨基酸序列 (“外源序列” ) 之间的同一性程度以两个序列的比对中的精确匹配数 除以 “发明序列” 的长度或 “外源序列” 的长度来计算， 无论其中哪一个序列是最短的。结 果表示为同一性百分比。
     当 “发明序列” 和 “外源序列” 在重叠的相同位点具有相同氨基酸残基时发生精确 匹配。序列长度是该序列的氨基酸数目 ( 例如 SEQ ID NO ： 2 的长度是 269)。
     可使用上述方法计算同一性以及同源性并用于比对。 在本发明的上下文中已经如 下所述计算同源性和比对。
     同源性和比对
     就本发明的目的而言， 同源性程度可通过本领域已知的计算机程序进行合适的测 定， 例如 GCG 程序软件包提供的 GAP(Program Manual for the Wisconsin Package， 第8 版， 1994 年 8 月， Genetics Computer Group， 575 Science Drive， Madison， Wisconsin， USA 53711)(Needleman， S.B. 和 Wunsch， C.D.， (1970)， Journal of Molecular Biology， 48， 443-45)， 使用 GAP 以及以下设置进行多肽序列比对 ： GAP 产生罚分为 3.0， 并且 GAP 延伸罚 分为 0.1。
     在 本 发 明 中，在 犁 头 霉 属 (Absidia reflexa)、伞 状 犁 头 霉 (Absidia corymbefera)、 米黑根毛霉 (Rhizmucor miehei)、 德氏根霉 (rhizopus delemar)、 曲霉菌 曲霉 (Aspergillus niger)、 塔宾曲霉 (Aspergillus tubigensis)、 尖孢镰孢菌 (Fusarium oxysporum)、 异孢镰孢菌 (Fusarium heterosporum)、 米曲霉 (Aspergillus oryzea)、 沙门 柏干酪青霉 (Penicilium camembertii)、 臭曲霉 (Aspergillus foetidus)、 曲霉菌曲霉 (Aspergillus niger)、 疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus)( 别名 ： Humicola lanuginose) 和 Landerina penisapora 的脂肪酶序列中的相应 ( 或同源 ) 位点通过图 1 所 示的比对进行限定。
     为了发现比对中不显示的脂肪酶序列中的同源位点， 受关注的序列与图 1 中显 示的序列进行比对。使用对 GAP 程序中存在的大多数同源序列进行的 GAP 比对将新序列 与图 1 中的本比对进行比对。在 GCG 程序软件包中提供了 GAP(Program Manual for the Wisconsin Package， 第 8 版， 1994 年 8 月， Genetics Computer Group， 575 Science Drive， Madison， Wisconsin， USA 53711)(Needleman， S.B. 和 Wunsch， C.D.， (1970)， Journal of Molecular Biology， 48， 443-45)。多肽序列比对使用以下设置 ： GAP 产生罚分为 3.0， 并且 GAP 延伸罚分为 0.1。
     亲本脂肪酶
     可将任何适用的脂解酶用作亲本脂解酶， 也称为亲本脂肪酶。在一些实施方案中 脂解酶可为真菌脂解酶。
     脂解酶可为酵母脂解酶， 它来源于以下菌属 ： 例如假丝酵母属 (Candida)、 克鲁维 酵母属 (Kluyveromyces)、 毕赤酵母属 (Pichia)、 糖酵母属 (Saccharomyces)、 粟酒裂殖酵 母属 (Schizosaccharomyces)、 或耶氏酵母属 (Yarrowia) ； 或者更优选地为丝状真菌脂解 酶， 它来源于以下菌属 ： 如顶孢霉菌属 (Acremonium)、 曲霉属 (Aspergillus)、 出芽短梗霉 属 (Aureobasidium)、 隐球酵母属 (Cryptococcus)、 线黑粉酵母属 (Filobasidium)、 镰孢菌 属 (Fusarium)、 特异腐质霉属 (Humicola)、 稻瘟病菌属 (Magnaporthe)、 毛霉属 (Mucor)、 毁 丝 霉 属 (Myceliophthora)、 瘤 胃 真 菌 属 (Neocallimastix)、 脉 孢 菌 属 (Neurospora)、 拟青霉属 (Paecilomyces)、 青霉属 (Penicillium)、 厌气性瘤胃真菌属 (Piromyces)、 裂 褶 菌 属 (Schizophyllum)、 踝 节 菌 属 (Talaromyces)、 嗜 热 子 囊 菌 属 (Thermoascus)、 草 根霉属 (Thielavia)、 弯颈霉属 (Tolypocladium)、 嗜热真菌属 (Thermomyces) 或木霉属(Trichoderma)。
     此 外 脂 解 酶 可 为 卡 尔 斯 伯 酵 母 (Saccharomyces carlsbergensis)、 啤酒糖酵 母 (Saccharomyces cerevisiae)、糖 化 酵 母 (Saccharomyces diastaticus)、道 氏 酵 母 (Saccharomyces douglasii)、 克 鲁 维 酵 母 (Saccharomyces kluyveri)、 奇异酵母 (Saccharomyces norbensis)、 或卵形酵母 (Saccharomyces oviformis) 脂解酶。
     作 为 另 外 一 种 选 择， 所 述 脂 解 酶 是 棘 孢 曲 霉 (Aspergillus aculeatus)、 泡 盛 曲 霉 (Aspergillus awamori)、烟 曲 霉 (Aspergillus fumigatus)、臭 曲 霉 (Aspergillus foetidus)、 日本曲霉 (Aspergillus japonicus)、 构巢曲霉 (Aspergillus nidulans)、 曲 霉 菌 曲 霉 (Aspergillus niger)、 米 曲 霉 (Aspergillus oryzae)、 塔宾 曲 霉 (Aspergillus turbigensis)、 拟 杆 镰 孢 菌 (Fusarium bactridioides)、 蜀黍专 化 型 镰 孢 菌 (Fusarium cerealis)、 克 地 镰 孢 菌 (Fusarium crookwellense)、 黄色 镰 孢 菌 (Fusarium culmorum)、 禾 谷 镰 孢 菌 (Fusarium graminearum)、 禾谷镰孢菌 (Fusarium graminum)、 异 孢 镰 孢 菌 (Fusarium heterosporum)、 Fusarium negundi、 尖 孢 镰 孢 菌 (Fusarium oxysporum)、 多 枝 镰 孢 菌 (Fusarium reticulatum)、 粉红镰孢菌 (Fusarium roseum)、 接 骨 木 镰 孢 菌 (Fusarium sambucinum)、 Fusarium sarcochroum、 茄 病 镰 孢 菌 (Fusarium sporotrichioides)、 硫 色 镰 孢 菌 (Fusarium sulphureum)、 簇 囊 镰 孢 菌 (Fusarium torulosum)、 类 丝 孢 镰 孢 菌 (Fusarium trichothecioides)、 镰 孢 霉 (Fusarium venenatum)、 特 异 腐 质 霉 (Humicola insolens)、 疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus)( 别名 ： Humicola lanuginose)、 米黑毛霉 (Mucor miehei)、 嗜 热 毁 丝 菌 (Myceliophthora thermophila)、 粗 糙 脉 孢 菌 (Neurospora crassa)、 产 紫 青 霉 (Penicillium purpurogenum)、 哈 茨 木 霉 (Trichoderma harzianum)、 康宁木 霉 (Trichoderma koningii)、 长 枝 木 霉 (Trichoderma longibrachiatum)、 里氏木霉 (Trichoderma reesei)、 绿色木霉 (Trichoderma viride) 脂解酶。
     在一些实施方案中本发明涉及脂解酶变体， 它是嗜热真菌属 (Thermomyces) 脂肪 酶或疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus) 脂肪酶。
     在一些实施方案中本发明涉及脂解酶变体， 其中所述变体与 SEQ ID NO ： 2 具有至 少 50％， 至少 60％， 至少 70％， 至少 80％， 至少 85％， 至少 90％， 至少 91％， 至少 92％， 至少 93％， 至少 94％， 至少 95％， 至少 96％， 至少 97％， 至少 98％， 至少 99％或 100％的同一性。
     脂解酶变体中的改变具有改善的洗涤剂内稳定性。
     下文涉及的位点是 SEQ ID NO ： 2。使段落 “同源性和比对” 中描述了如何寻找在不 同脂肪酶中的氨基酸残基的对应或同源位点的方法。
     根据本发明， 已经令人惊讶地发现， 脂解酶变体、 脂解变体、 或短的变体比亲本脂 解酶在洗涤剂内更稳定。将洗涤剂内的稳定性定义为在存在的洗涤剂内保留脂解酶 / 脂肪 酶活性的质量。可全部或部分保留脂肪酶活性。因此， 本发明的变体与它们从其中衍生出 的亲本脂肪酶相比， 显示在存在的洗涤剂中改善的全部或部分保留它们的脂肪酶活性的能 力。
     如本文所用， 术语 “脂肪酶活性” 指羧酸酯水解酶活性， 该酶催化三酰基甘油的水 解， 形成二酰基甘油和羧酸酯。就本发明目的而言， 脂肪酶活性按照以下方法测定 ： 使用阿 拉伯树胶作为乳化剂， 通过乳化甘油三丁酸酯 (glycerin tributyrate) 制备脂肪酶的底物。在 30℃， pH 7 或 9 条件下水解甘油三丁酸酯， 随后在 pH 自动恒定器中进行滴定实验。 将一单位脂肪酶活性 (1LU) 定义为在 30℃， pH7 条件下能够每分钟释放 1 微摩尔丁酸的酶 量。
     在一些实施方案中如本发明所述的变体已经与基准酶进行了比较。如本文所用， 术语 “基准酶” 或 “基准脂肪酶” 指具有取代的 SEQ ID NO ： 2， 除非另外指明， 所述取代为 T231R+N233R。
     在一些实施方案中本发明涉及亲本脂解酶变体， 其中所述变体 ： (a) 具有与亲本 脂解酶相比包含氨基酸残基取代的氨基酸序列， 所述氨基酸残基取代对应于 SEQ ID NO ： 2 的任何以下氨基酸 ： 27、 216、 227、 231、 233 和 256 ； 以及 (b) 比亲本脂解酶在洗涤剂内更稳 定。
     在一些实施方案中本发明涉及亲本脂解酶变体， 其中所述变体 ： (a) 包含氨基酸 残基 231 和 233， 并且具有与亲本脂解酶相比包含有至少一个氨基酸残基取代的氨基酸序 列， 所述氨基酸残基取代对应于 SEQ ID NO ： 2 的任何以下氨基酸 ： 27、 216、 227 和 256 ； 以及 (b) 比亲本脂解酶在洗涤剂内更稳定。
     在一些实施方案中本发明涉及亲本脂解酶的变体， 其中所述变体在位点 231+233 以及其中一个以下位点具有氨基酸改变 ： (a)27 ； (b)216 ； 或者 (c)256 ； 任选地所述变体还 包含 227 ； 该位点对应于 SEQ ID NO ： 2。
     在一些实施方案中本发明涉及变体， 其中所述氨基酸残基的取代是 SEQ ID NO ： 2 的 27R、 216P、 227G、 231R、 233R 或 256K 中的一个。
     在一些实施方案中本发明涉及变体， 其中所述氨基酸残基的取代是 SEQ ID NO ： 2 的 D27R、 S216P、 L227G、 T231R、 N233R 或 P256K 的一个。
     在一些实施方案中本发明涉及变体， 其中变体包含的取代选自由下列组成的 组： (a)T231R+N233R+P256K ； (b)L227G+T231R+N233R ； (c)L227G+T231R+N233R+P256K ； (d) D27R+T231R+N233R ； (e)D27R+L227G+T231R+N233R ； 和 (f)S216P+T231R+N233R。
     在一些实施方案中本发明涉及脂解酶变体， 其中所述亲本脂解酶与 SEQ ID NO ： 2 至少 50％， 至少 60 ％， 至少 70 ％， 至少 75 ％， 至少 80 ％， 至少 85 ％， 至少 90 ％， 至少 91％， 至少 92％， 至少 93％， 至少 94％， 至少 95％， 至少 96％， 至少 97％， 至少 98％， 至少 99％或 100％的同一性。
     在一些实施方案中本发明涉及变体， 其中所述亲本脂解酶是由疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanoginosus)DSM 4109 制备的脂肪酶， 并且具有 SEQ ID.NO ： 2 的氨基酸序 列。
     在一些实施方案中本发明涉及变体， 其中所述洗涤剂是液体洗涤剂。
     表1： 可在脂解酶变体中包含的改变
    在一些实施方案中本发明涉及包含脂解酶变体的制剂。
     在一些实施方案中本发明涉及制剂， 其中所述制剂可为液体制剂。
     多核苷酸、 表达载体、 宿主细胞、 脂解酶变体的制备。
     在一些实施方案中， 本发明涉及编码脂解酶变体的分离的多核苷酸。多核苷酸可 在非常低的严格条件下， 优选低严格条件下， 更优选中严格条件下， 更优选中 - 高严格条 件下， 甚至更优选高严格条件下， 最优选非常高的严格条件下与以下序列杂交 ： (i)SEQ ID NO ： 1 的核苷酸 178 至 660， (ii)SEQ ID NO ： 1 的核苷酸 178 至 660 包含的 cDNA 序列， (iii) (i) 或 (ii) 的亚序列， 或者 (iv)(i)、 (ii)、 或 (iii) 的互补链 (J.Sambrook、 E.F.Fritsch、 和 T.Maniatis， 1989， Molecular Cloning， A Laboratory Manual， 第 2 版， Cold Spring Harbor， New York)。SEQ ID NO ： 1 的亚序列包含至少 100 个邻接核苷酸或者优选地至少 200 个邻接核苷酸。此外该亚序列可编码具有脂肪酶活性的多肽片段。
     就长度为至少 100 个核苷酸的长探针而言， 将非常低至非常高的严格条件规定为 在标准 Southern 印迹程序后最优 12 至 24 小时， 在 42℃下， 在 5X SSPE， 0.3％ SDS， 200ug/ mL 剪切的和变性的鲑精 DNA， 以及 25％的甲酰胺 ( 用于非常低和低严格条件 )、 35％的甲酰
     胺 ( 用于中和中 - 高严格条件 )、 或者 50％的甲酰胺 ( 用于高和非常高的严格条件 ) 中预 杂交和杂交。
     就长度为至少 100 个核苷酸的长探针而言， 载体材料最终洗涤三次， 每次 15 分钟， 使用 2X SSC， 0.2％ SDS， 优选至少在 45℃ ( 非常低的严格条件 )， 更优选至少在 50℃ ( 低严 格条件 )， 更优选至少在 55℃ ( 中严格条件 )， 更优选至少在 60℃ ( 中 - 高严格条件 )， 甚至 更优选至少在 65℃ ( 高严格条件 )， 最优选至少在 70℃ ( 非常高的严格条件 )。
     可通过本领域已知的方法获取编码脂解酶变体的分离的多核苷酸、 包含所述多核 苷酸的核酸构建体、 包含所述核酸构建体的重组表达载体、 和包含所述核酸构建体或所述 重组表达载体的转化宿主细胞。
     获取洗涤剂内稳定脂解酶变体的程序
     脂解酶变体可用本领域已知的方法获取， 例如定点诱变、 随机诱变或局部诱变， 例 如如 WO 9522615 或 WO 0032758 所述的方法。给定亲本脂解酶在洗涤剂内稳定的变体可用 下述标准程序获取 ：
     诱变 ( 易错的、 掺入的 oligo， 加标的 oligo)
     初级筛选 鉴定在洗涤剂内较稳定的突变体
     保存 ( 甘油培养， LB-Amp 平板， 小量制备 )
     划线接种到另一个分析平板上 - 次级筛选 ( 比初级筛选高 1 度 )
     DNA 测序
     转化到宿主细胞中， 例如曲霉属
     以 100mL 的规模培养， 纯化， DSC
     在一些实施方案中， 本发明涉及制备脂解酶变体的方法， 所述方法包括以下步骤 ： (a) 在诱导产生脂解酶变体的条件下培养包含所述核酸构建体或包含所述核酸构建体的重 组表达载体的转化宿主细胞 ； 以及 (b) 回收脂解酶变体。该方法可根据本领域已知的原则 实施。
     在一些实施方案中本发明涉及生产所述变体的方法， 所述方法包括以下步骤 ： (a) 选择亲本脂解酶 ； (b) 在亲本脂解酶中取代至少一个氨基酸残基， 所述氨基酸残基对应于 SEQ ID NO ： 2 的任何以下氨基酸 ： 27、 216、 227、 231、 233 和 256 ； (c) 任选地改变除 (b) 中提 到的氨基酸之外的一个或多个氨基酸 ； (d) 制备由步骤 (a)-(c) 产生的变体 ； (e) 测试所述 变体在洗涤剂内的稳定性 ； (f) 选择具有提高的洗涤剂内稳定性的变体 ； 以及 (g) 生产所述 选择变体。
     使用
     如本发明所述的变体可类似于亲本脂解酶使用， 并且就一些目的而言该变体可由 于它们改善的洗涤剂内稳定性而是优选的。因此在一些实施方案中， 本发明涉及将所述变 体用于水解羧酸酯或酯的水解、 合成或酯交换。
     在一些实施方案中， 本发明涉及使用所述变体制造洗涤剂内的稳定制剂。
     组合物
     所述组合物优选地富含本发明权利要求中定义的多肽。术语 “富含” 指示组合物 的脂肪酶活性已经被提高了， 例如浓缩因子为 1.1。
     所述组合物可包含本发明的多肽作为主要酶组分， 例如单组分组合物。作为另 外一种选择， 所述组合物可包含多种酶活性， 例如氨基肽酶、 淀粉酶、 糖酶、 羧肽酶、 过氧化 氢酶、 纤维素酶、 壳多糖酶、 角质酶、 环糊精葡萄糖基转移酶、 脱氧核糖核酸酶、 酯酶、 α- 半 乳醣苷酶、 β- 半乳糖苷酶、 葡萄糖淀粉酶、 α- 葡萄糖苷酶、 β- 葡萄糖苷酶、 卤素过氧 化物酶、 转化酶、 漆酶、 脂肪酶、 甘露糖苷酶、 氧化酶、 果胶酶、 肽谷氨酰胺酶、 过氧化物酶、 肌醇六磷酸酶、 多酚氧化酶、 蛋白水解酶、 核糖核酸酶、 转谷氨酰胺酶、 或木聚糖酶。可生 产附加的酶， 例如通过属于以下属的微生物生产酶 ： 曲霉属， 优选棘孢曲霉 (Aspergillus aculeatus)、 泡盛曲霉 (Aspergillus awamori)、 烟曲霉 (Aspergillus fumigatus)、 臭曲霉 (Aspergillus foetidus)、 日本曲霉 (Aspergillus japonicus)、 构巢曲霉 (Aspergillus nidulans)、 曲 霉 菌 曲 霉 (Aspergillus niger)、 或 米 曲 霉 (Aspergillus oryzae) ； 镰 孢 菌 属， 优 选 拟 杆 镰 孢 菌 (Fusarium bactridioides)、 蜀 黍 专 化 型 镰 孢 菌 (Fusarium cerealis)、 克地镰孢菌 (Fusarium crookwellense)、 黄色镰孢菌 (Fusarium culmorum)、 禾谷镰孢菌 (Fusarium graminearum)、 禾谷镰孢菌 (Fusarium graminum)、 异孢镰孢菌 (Fusarium heterosporum)、 Fusarium negundi、尖 孢 镰 孢 菌 (Fusarium oxysporum)、 多枝镰孢菌 (Fusarium reticulatum)、 粉红镰孢菌 (Fusarium roseum)、 接骨木镰孢菌 (Fusarium sambucinum)、 Fusarium sarcochroum、 硫色镰孢菌 (Fusarium sulphureum)、 簇 囊镰孢菌 (Fusarium toruloseum)、 类丝孢镰孢菌 (Fusarium trichothecioides)、 或镰孢 霉 (Fusarium venenatum) ； 腐质霉属， 优选特异腐质霉 (Humicola insolens) 或嗜热羊毛 状腐质霉 (Humicola lanuginosa) ； 或者木霉属， 优选哈茨木霉 (Trichoderma harzianum)、 康宁木霉 (Trichoderma koningii)、 长枝木霉 (Trichoderma longibrachiatum)、 里氏木霉 (Trichoderma reesei)、 或绿色木霉 (Trichoderma viride)。
     所述组合物可根据本领域已知的方法制备， 并且可为液体形式或干燥组合物形 式。例如多肽组合物可为粒状或微粒状形式。所述组合物中将包括的多肽可根据本领域已 知的方法稳定。
     洗涤剂成分
     组合物通常包含一种或多种洗涤剂成分。 本文所用洗涤剂组合物包括制品和清洁 和处理组合物。除非另外指明， 如本文所用， 术语 “清洁和 / 或处理组合物” 包括片剂、 颗粒 或粉末形式的多用途或 “重垢型” 洗涤剂， 尤其是衣物洗涤剂 ； 液体、 凝胶或糊剂状的多功能 洗涤剂， 尤其是所谓的重垢型液体类型 ； 液体精细织物洗涤剂 ； 手洗餐具洗涤剂或轻垢型 餐具洗涤剂， 尤其是高起泡类型的那些 ； 机洗餐具洗涤剂， 包括各种用于家庭和公共机构用 途的片剂、 颗粒、 液体和辅助漂洗型。组合物也可为单位剂量的包装， 包括本领域已知的那 些包装和水溶性的、 水不溶性的和 / 或水可渗透的那些包装。
     本发明的洗涤剂组合物可包含一种或多种本发明的脂肪酶变体。 除了脂肪酶变体 外， 所述洗涤剂组合物还将进一步包含一种洗涤剂成分。下文所举例说明的洗涤剂成分的 非限制性列表适用于即用的组合物， 并且可期望将其结合到本发明的某些实施方案中， 以 例如有助于或提高处理待清洁基底的清洁性能， 或在含香料、 着色剂、 染料等的情况下调节 清洁组合物的美观性。 这些附加组分的明确性质及它们的掺入量将取决于组合物的物理形 式以及其应用的清洁操作的性质。合适的洗涤剂成分包括但不限于 ： 表面活性剂、 助洗剂、 螯合剂、 染料转移抑制剂、 分散剂、 酶和酶稳定剂、 漂白活化剂、 过氧化氢、 过氧化氢源、 预成形过酸、 聚合分散剂、 增白剂、 抑泡剂、 染料、 抗腐蚀剂、 晦暗抑制剂、 香料、 香料微胶囊、 软化 剂、 载体、 水溶助长剂、 加工助剂、 溶剂和 / 或颜料。
     一般的洗涤剂将按重量计包含以下成分的任何组合 ： 5-30％的表面活性剂， 优选 阴离子表面活性剂如直链烷基苯磺酸盐和脂肪醇乙氧基硫酸盐 ； 0.005-0.1％的蛋白酶活 TM 性蛋白， 其中蛋白酶优选地选自 Coronase 、 FNA、 FN4 或 SavinaseTM， 0.001-0.1％的淀粉酶 TM TM 活性蛋白， 其中淀粉酶优选地选自 Termamyl Natalase 、 StainzymeTM 和 PurastarTM 以及 0.1-3％的螯合剂， 优选二亚乙基三胺五醋酸。就颗粒状和片剂产品而言， 此类一般的洗涤 剂还将按重量计包含 ： 5-20％的漂白剂， 优选过碳酸钠 ； 1-4％的漂白活化剂， 优选 TAED 和 / 或 0-30％， 优选 5-30％， 更优选小于 10％的助洗剂， 如硅铝酸盐沸石 A 和 / 或三聚磷酸盐。
     漂白剂 - 本发明洗涤剂组合物可包括一种或多种漂白剂。
     通常， 当使用漂白剂时， 本发明的组合物可包括按本主题清洁组合物的重量计约 0.1％至约 50％或甚至约 0.1％至约 25％的漂白剂。合适漂白剂的示例包括 ：
     (1) 过氧化氢源， 例如无机过氢化合物盐， 包括以下碱金属盐如钠盐 ： 过硼酸盐 ( 通常为一水合物或四水合物 )、 过碳酸盐、 过硫酸盐、 过磷酸盐、 过硅酸盐以及它们的混合 物。在本发明的一个方面， 无机过氧化氢合物盐选自由下列物质组成的组 ： 过硼酸钠盐、 过 碳酸钠盐以及它们的混合物。
     (2) 具有 R-(C ＝ O)-L 的漂白活化剂， 其中 R 为烷基， 任选支链烷基 ； 当漂白活化剂 是疏水的时， 其具有 6 至 14 个碳原子或者 8 至 12 个碳原子， 而当漂白活化剂是亲水的时， 其 具有小于 6 个碳原子或甚至小于 4 个碳原子 ； 并且 L 为离去基团。合适的离去基团的实例 为苯甲酸及其衍生物， 尤其是苯磺酸盐。 合适的漂白活化剂包括十二烷酰基羟基苯磺酸盐、 癸酰基羟基苯磺酸盐、 癸酰基羟苯甲酸及其盐、 3， 5， 5- 三甲基己酰基羟基苯磺酸盐、 四乙酰 基乙二胺 (TAED) 和壬酰氧基苯磺酸盐 (NOBS)。合适的漂白活化剂还公开于 WO 98/17767 中。 尽管可采用任何合适的漂白活化剂， 但在本发明的一个方面， 本主题清洁组合物可包含 NOBS、 TAED 或它们的混合物。
     (3) 预成形的过酸。
     如果存在的话， 过酸和 / 或漂白活化剂通常以按所述组合物计约 0.1％至约 60 重 量％， 约 0.5％至约 40 重量％， 或甚至约 0.6％至约 10 重量％的含量存在于所述组合物中。 一种或多种疏水前体可与一种或多种亲水过酸或其前体联合使用。
     可选择过氧化氢源与过酸或漂白活化剂的量， 使得可用氧 ( 来自过氧化物源 ) 与 过酸的摩尔比为 1 ∶ 1 至 35 ∶ 1， 或甚至 2 ∶ 1 至 10 ∶ 1。
     表面活性剂 - 如本发明所述的洗涤剂组合物可包括表面活性剂或表面活性剂体 系， 其中所述表面活性剂可选自非离子表面活性剂、 阴离子表面活性剂、 阳离子表面活性 剂、 两性表面活性剂、 两性离子表面活性剂、 半极性非离子表面活性剂以及它们的混合物。 如果存在的话， 表面活性剂的通常含量按所述受试组合物的重量计为约 0.1％至约 60％， 约 0.1％至约 40％， 约 0.1％至约 12％， 约 1％至约 50％或甚至约 5％至约 40％。
     当被包括在洗涤剂中时， 所述洗涤剂将通常包含约 1％至约 40％的阴离子表面活 性剂如直链烷基苯磺酸盐、 α- 烯烃磺酸盐、 烷基硫酸盐 ( 脂肪醇硫酸盐 )、 脂肪醇乙氧基硫 酸酯、 仲烷基磺酸盐、 α- 磺基脂肪酸甲酯、 烷基或烯基丁二酸或皂。
     洗涤剂可任选地包含约 0.2％至约 40％的非离子表面活性剂如醇乙氧基化物、 壬基苯酚乙氧基化物、 烷基多苷、 烷基二甲基胺氧化物、 乙氧基化脂肪酸一乙醇酰胺、 脂肪酸 一乙醇酰胺、 多羟基烷基脂肪酸酰胺、 或葡糖胺的正酰基正烷基衍生物 ( “烷基葡糖酰胺” )。
     助洗剂 - 本发明的洗涤剂组合物可包含一种或多种洗涤剂助剂或助洗剂体系。当 使用助洗剂时， 本主题组合物将通常包含按本主题组合物的重量计至少约 1％， 约 5％至约 60％或甚至约 10％至约 40％的助洗剂。
     所述洗涤剂组合物可包含 ： (a)0 重量％至 10 重量％， 优选 0 重量％至 5 重量％的 沸石助洗剂 ； (b)0 重量％至 10 重量％， 优选 0 重量％至 5 重量％的磷酸盐助洗剂 ； 和 (c) 任选地 0 重量％至 5 重量％的硅酸盐。
     助洗剂包括但不限于碱金属、 多磷酸的铵盐和链烷醇铵盐、 碱金属硅酸盐或层状 硅酸盐、 碱土和碱金属碳酸盐、 硅铝酸盐助洗剂和多种碱金属、 多元乙酸 ( 如乙二胺四乙酸 和氨三乙酸 ) 的铵盐和取代铵盐， 以及聚羧酸酯 ( 如苯六甲酸、 琥珀酸、 柠檬酸、 氧联二琥珀 酸、 多元马来酸、 苯 -1， 3， 5- 三羧酸、 羧甲基氧代琥珀酸 ) 和它们的可溶性盐。
     螯合剂 - 本文的洗涤剂组合物可包含螯合剂。合适的螯合剂包括铜、 铁和 / 或锰 螯合剂以及它们的混合物。当使用螯合剂时， 本主题组合物可包含按本主题组合物的重量 计约 0.005％至约 15％或甚至约 3.0％至约 10％的螯合剂。
     胺化合物 - 该组合物优选地包含具有以下通式结构的化合物 ： 二 ((C2H5O)(C2H4O) + + n)(CH3)-N -CxH2x-N -(CH3)- 二 ((C2H5O)(C2H4O)n)， 其中 n ＝ 20 至 30， 并且 x ＝ 3 至 8， 或其 硫酸化或磺化的变体。
     增白剂 - 本发明的洗涤剂组合物也可包含可改变要清洁的制品的外观的附加组 分， 如荧光增白剂。这些增白剂吸收紫外光并发射可见光。合适的荧光增白剂含量包括从 约 0.01 重量％， 从约 0.05 重量％， 从约 0.1 重量％， 或甚至从约 0.2 重量％的较低含量至 0.5 重量％或甚至 0.75 重量％的较高含量。
     分散剂 - 本发明的组合物还可包含分散剂。合适的水溶性有机物包括均聚或共聚 酸或它们的盐， 其中多元羧酸包含至少两个相隔不超过两个碳原子的羧基。
     酶 - 除了本发明的脂肪酶变体外， 所述洗涤剂组合物还可包含一种或多种酶， 所 述酶提供清洁性能和 / 或织物护理有益效果， 例如蛋白酶、 另一种脂肪酶、 角质酶、 淀粉酶、 糖酶、 纤维素酶、 果胶酶、 甘露聚糖酶、 阿拉伯聚糖酶、 半乳聚糖酶、 木聚糖酶、 氧化酶如漆 酶、 和 / 或过氧化物酶。
     所选择酶的特性通常将与所选择的洗涤剂相容， ( 即最适合的 pH， 与其他酶或非 酶成分相容等 )， 并且所述酶将是有效量的。
     适用的蛋白酶包括动物、 植物或微生物起源的那些蛋白酶。 优选微生物起源。 包括 化学改性的或蛋白工程化的突变体。蛋白酶可为丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶， 优选碱性微 生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白酶。碱性蛋白酶的实例是枯草杆菌蛋白酶， 尤其是那些来源 于芽孢杆菌属的蛋白酶， 例如枯草杆菌蛋白酶 Novo、 枯草菌溶素 (subtilisin Carlsberg)、 枯草杆菌蛋白酶 309、 枯草杆菌蛋白酶 147 和枯草杆菌蛋白酶 168( 描述于 WO 89/06279)、 WO 05/103244 中的 SEQ ID no 4 和 SEQ ID no 7。其他合适的丝氨酸蛋白酶包括那些来自 微球菌亚目某些种 (Micrococcineae) 尤其是纤维单胞菌属某些种 (Cellulonas spp) 及其 变异体的蛋白酶， 它们公开在 WO2005052146 中。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶 ( 例 如猪或牛起源的胰蛋白酶 ) 和镰孢菌属蛋白酶， 它们描述于 WO 89/06270 和 WO 94/25583中。 有 用 的 蛋 白 酶 的 实 例 是 在 WO 92/19729、 WO 98/20115、 WO 98/20116、 和 WO 98/34946 中描述的变体， 尤其是在一个或多个以下位点上具有取代的变体 ： 27、 36、 57、 68、 76、 87、 97、 101、 104、 106、 120、 123、 167、 170、 194、 206、 218、 222、 224、 235、 245、 252 和 274， 以 及在具有以下突变的其他变体中 ： (K27R、 V104Y、 N123S、 T124A)、 (N76D、 S103A、 V104I)、 或 (S101G、 S103A、 V104I、 G159D、 A232V、 Q236H、 Q245R、 N248D、 N252K)。其他有用的蛋白酶的 实例是在 WO 05/052146 中描述的变体， 尤其是在一个或多个以下位点上具有取代的变体 ： 14、 16、 35、 65、 75、 76、 79、 123、 127、 159 和 179。
     优选的可商购获得的蛋白酶包括 AlcalaseTM、 SavinaseTM、 PrimaseTM、 DuralaseTM、 EsperaseTM、 CoronaseTM、 PolarzymeTM 和 KannaseTM(Novozymes A/S)、 MaxataseTM、 MaxacalTM、 MaxapemTM、 ProperaseTM、 PurafectTM、 Purafect PrimeTM、 Purafect OxPTM、 FNA、 FN2、 FN3 和 FN4(Genencor International Inc.)。
     脂 肪 酶 包 括 那 些 细 菌 或 真 菌 起 源 的 脂 肪 酶。 包 括 化 学 改 性 的 或 蛋 白 工 程 化 的 突 变 体。 有 用 的 脂 肪 酶 的 实 例 包 括 来 自 腐 质 霉 菌 (Humicola)( 别 名 嗜 热 真 菌， Thermomyces) 的脂肪酶， 例如来自嗜热羊毛状腐质霉 (H.lanuginosa)( 别名疏绵状嗜 热丝孢菌 (T.lanuginosus))， 如 EP 258 068 和 EP 305 216 所述， 或者来自特异腐质霉
    (H.insolens) 的脂肪酶， 描述于 WO 96/13580 中， 假单胞菌属脂肪酶例如来自产碱假单胞 菌 (P.alcaligenes) 或类产碱假单胞菌 (P.pseudoalcaligenes)(EP 218 272)、 洋葱假单 胞菌 (P.cepacia)(EP 331 376)、 施氏假单胞菌 (P.stutzeri)(GB 1,372,034)、 荧光假单 胞菌 (P.fluorescens)、 假单胞菌属菌株 SD 705(WO 95/06720 和 WO 96/27002)、 威斯康星 假单胞菌 (P.wisconsinensis)(WO 96/12012) 的脂肪酶、 芽孢杆菌属脂肪酶例如来自枯草 芽孢杆菌 (Dartois 等人 (1993)， Biochemica et Biophysica Acta， 1131， 253-360)、 嗜热 脂肪芽孢杆菌 (B.stearothermophilus)(JP 64/744992) 或短小芽孢杆菌 (B.pumilus)(WO 91/16422) 的脂肪酶。
     其他实例是诸如那些在 WO 92/05249、 WO 94/01541、 EP 407 225、 EP 260 105、 WO 95/35381、 WO 96/00292、 WO 95/30744、 WO 94/25578、 WO 95/14783、 WO 95/22615、 WO 97/04079 和 WO 97/07202 中描述的脂肪酶变体。
     其 他 可 商 购 获 得 的 脂 肪 酶 包 括 LipolaseTM、 Lipolase UltraTM 和 LipexTM(Novozymes A/S)。
     适用的淀粉酶 (α 和 / 或 β) 包括那些细菌或真菌起源的淀粉酶。包括化学改性 的或蛋白工程化的突变体。淀粉酶包括例如获取自芽孢杆菌属的 α- 淀粉酶， 例如详述于 GB 1,296,839 中的地衣芽孢杆菌 (B.licheniformis) 的特殊菌株。
     有 用 的 淀 粉 酶 的 实 例 是 在 WO 94/02597、 WO 94/18314、 WO 96/23873、 和 WO 97/43424 中描述的变体， 尤其是在一个或多个以下位点上具有取代的变体 ： 15、 23、 105、 106、 124、 128、 133、 154、 156、 181、 188、 190、 197、 202、 208、 209、 243、 264、 304、 305、 391、 408、 和 444。
     可商购获得的淀粉酶是 DuramylTM、 TermamylTM、 StainzymeTM、 Stainzyme UltraTM、 Stainzyme PlusTM、 FungamylTM 和 BANTM(Novozymes A/S)、 RapidaseTM 和 PurastarTM( 购 自 Genencor International Inc.)。适用的纤维素酶包括那些细菌或真菌起源的淀粉酶。包括化学改性的或蛋白工 程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、 假单胞菌属、 腐质霉菌属、 镰孢菌 属、 草根霉属、 支顶孢属的纤维素酶， 例如由特异腐质霉 (Humicola insolens)、 嗜热毁丝 菌 (Myceliophthora thermophila) 和尖孢镰孢菌 (Fusarium oxysporum) 产生的真菌纤 维素酶， 它们公开在 US 4,435,307、 US 5,648,263、 US 5,691,178、 US 5,776,757 和 WO 89/09259 中。
     尤其适用的纤维素酶是具有颜色护理有益效果的碱性或中性纤维素酶。此类 纤维素酶的实例是描述于 EP 0 495 257、 EP 0 531 372、 WO 96/11262、 WO 96/29397、 WO 98/08940 的纤维素酶。其他实例是纤维素酶变体如那些描述于 WO 94/07998、 EP 0 531 315、 US 5,457,046、 US 5,686,593、 US 5,763,254、 WO 95/24471、 WO 98/12307 和 PCT/ DK98/00299 的纤维素酶。
     可商购获得的纤维素酶包括 RenozymeTM、 CellucleanTM、 EndolaseTM、 CelluzymeTM、 和 CarezymeTM(Novozymes A/S)、 ClazinaseTM、 和 PuradaxHATM(Genencor International Inc.)、 以及 KAC-500(B)TM(Kao Corporation)。
     过氧化物酶 / 氧化酶 ： 适用的过氧化物酶 / 氧化酶包括那些植物、 细菌或真菌起源的酶。包括化学改 性的或蛋白工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞 (Coprinus) 的过 氧化物酶， 例如来自灰盖鬼伞 (C.cinereus) 的过氧化物酶， 及其变体如那些描述于 WO 93/24618、 WO 95/10602、 和 WO 98/15257 的过氧化物酶。
     可商购获得的过氧化物酶包括 GuardzymeTM(Novozymes A/S)。
     当存在于清洁组合物中时， 上述酶可以按所述组合物的重量计约 0.00001％至约 2％， 约 0.0001％至约 1％， 或甚至约 0.001％至约 0.5％酶蛋白的含量存在。
     酶稳定剂 - 可使用多种技术来稳定用于洗涤剂的酶。本发明使用的酶可由最终 组合物中存在的钙和 / 或镁离子水溶性源来稳定， 最终组合物将这种离子提供给酶。此外 也可使用常规的稳定剂例如多元醇 ( 如丙二醇或甘油 )、 糖或糖醇、 乳酸、 硼酸、 或硼酸衍 生物如芳族硼酸酯、 或苯基硼酸衍生物如 4- 甲酰基苯基硼酸， 并且所述组合物可如例如 WO 92/19709 和 WO 92/19708 所述进行配制。
     溶剂 - 合适的溶剂包括水与其它溶剂如亲脂性流体。合适的亲脂性流体的实例包 括硅氧烷、 其它硅酮、 烃、 二元醇醚、 甘油衍生物如甘油醚、 全氟胺、 全氟化和氢氟醚溶剂、 低 挥发性无氟有机溶剂、 二醇溶剂、 其它对环境友好的溶剂以及它们的混合物。
     光漂白剂 - 所述组合物可包含光漂白剂。光漂白剂优选地选自氧杂蒽染料光漂白 剂、 光引发剂以及它们的混合物。
     适用的光漂白剂包括催化光漂白剂和光引发剂。 适用的催化光漂白剂选自由具有 下列式的水溶性酞菁组成的组 ：
    
    
    其中 ： PC 是酞菁环系 ；Me 是 Zn ； Fe(II) ； Ca ； Mg ； Na ； K； Al-Z1 ； Si(IV) ； P(V) ； Ti(IV) ； Ge(IV) ； Cr(VI) ； Ga(III) ； Zr(IV) ； In(III) ； Sn(IV) 或 Hf(VI) ；
     Z1 是卤化物 ； 硫酸盐 ； 硝酸盐 ； 羧化物 ； 链烷醇 ； 或氢氧离子 ；
     q为0； 1或2；
     r是1至4；
     Q1 是磺基或羧基 ； 或者式的基团 +
     -SO2X2-R1-X3 ； -O-R1-X3+ ； 或者 -(CH2)， -Y1+ ；
     其中
     R1 是支化的或非支化的 C1-C8 亚烷基 ； 或 1， 3- 或 1， 4- 亚苯基 ；
     X2 是 -NH- ； 或 -N-C1-C5 烷基 ； +
     X3 是下式的基团
    
    或， 在 R1 ＝ C1-C8 亚烷基的情况下， 也是下式的基团
    
    Y1+ 是下式的基团t为0或1
     其中在以上式中
     R2 和 R3 彼此独立地为 C1-C6 烷基
     R4 为 C1-C5 烷基 ； C5-C7 环烷基或 NR7R8 ；
     R5 和 R6 彼此独立地为 C1-C5 烷基 ；
     R7 和 R8 彼此独立地为氢或 C1-C5 烷基 ；
     R9 和 R10 彼此独立地为未取代 C1-C6 烷基或被羟基、 氰基、 羧基、 C1-C6 烷氧基、 C1-C6 烷氧基、 苯基、 萘基或吡啶基取代的 C1-C6 烷基 ；
     u为1至6；
     A1 是构成芳族 5- 至 7- 元氮杂环的单位， 在合适的情况下也可以再包含一个或两 个氮原子作为环成员， 和
     B1 是构成饱和 5- 至 7- 元氮杂环的单位， 在合适的情况下位也可以包含 1 至 2 个 氮、 氧和 / 或硫原子作为环成员 ；
     Q2 是羟基 ； C1-C22 烷基 ； 支链 C3-C22 烷基 ； C2-C22 烯基 ； 支链 C3-C22 烯基以及它们的 混合物 ； C1-C22 烷氧基 ； 磺基或羧基 ； 式基团
    
    下式的支链烷氧基团下式的烷基乙烯氧基单元
     -(T1)d-(CH2)b(OCH2CH2)a-B3
     或下式的酯基团
     COOR18
     其中
     B2 是氢 ； 羟基 ； C1-C30 烷基 ； C1-C30 烷氧基 ； -CO2H ； -CH2COOH ； -SO3-M1 ； -OSO3-M1 ； -PO32M1 ； -OPO32-M1 ； 以及它们的混合物 ；
     B3 是氢 ； 羟基 ； -COOH ； -SO3-M1 ； -OSO3M1 或 C1-C6 烷氧基 ；
     M1 是水溶性阳离子 ；
     T1 是 -O- ； 或 -NH- ；
     X1 和 X4 彼此独立地为 -O- ； -NH- 或 -N-C1-C5 烷基 ；
     R11 和 R12 彼此独立地为氢 ； 磺基及其盐 ； 羧基及其盐或羟基 ； R11 和 R12 基中的至少 一个是磺基或羧基或它们的盐，
     Y2 是 -O- ； -S- ； -NH- 或 -N-C1-C5 烷基 ；
     R13 和 R14 彼 此 独 立 地 为 氢 ； C1-C6 烷 基 ； 羟 基 -C1-C6 烷 基 ； 氰 基 -C1-C6 烷 基 ； 磺 基 -C1-C6 烷基 ； 羧基或卤素 -C1-C6 烷基 ； 未取代的苯基或卤素取代的苯基， C1-C4 烷基或 C1-C4 烷氧基 ； 磺基或羧基或 R13 和 R14 以及和它们结合的氮原子一起形成饱和的 5- 或 6- 元 杂环， 所述杂环也可另外包含氮原子或氧原子以作为环成员 ；
     R15 和 R16 彼此独立地为 C1-C6 烷基或芳基 -C1-C6 烷基 ；
     R17 是氢 ； 未取代的 C1-C6 烷基或被卤素、 羟基、 氰基、 苯基、 羧基、 C1-C6 烷氧基或 C1-C6 烷氧基取代的 C1-C6 烷基 ；
     R18 是 C1-C22 烷基 ； 支链 C3-C22 烷基 ； C1-C22 烯基或支链 C3-C22 烯基 ； C3-C22 乙二醇 ； C1-C22 烷氧基 ； 支链 C3-C22 烷氧基 ； 以及它们的混合物 ；
     M 是氢 ； 或碱金属离子或铵离子，
     Z2 是氯 ； 溴； 烷基硫酸根或芳基硫酸根离子 ；
     a为0或1；
     b为0至6；
     c 为 0 至 100 ；
     d为0； 或1；
     e 为 0 至 22 ；
     v 为 2 至 12 的整数 ；
     w为0或1； 和
     A 是有机的或无机的离子， 和
     s 在单价阴离子 A 的情况下等于 r， 在多价阴离子的情况下小于或等于 r， As- 对于 补偿正电荷来说是必需的 ； 其中如果 r 不等于 1， Q1 基可以是相同的或不同的， 并且其中酞 菁环系也可另外包含增溶基团 ；
     其它合适的催化光漂白剂包括氧杂蒽染料以及它们的混合物。在另一方面， 合适 的催化光漂白剂选自由下列组成的组 ： 磺化酞菁锌、 磺化酞菁铝、 Eosin Y、 Phoxine B、 Rose Bengal、 C.I.Food Red 14 以及它们的混合物。在另一方面适用的光漂白剂可为磺化酞菁 锌和磺化酞菁铝的混合物， 所述混合物的磺化酞菁锌对磺化酞菁铝的重量比大于 1， 大于 1 但是小于约 100， 或甚至约 1 至约 4。
     合适的光引发剂包括选自由下列组成的组的光引发剂 ： 芳族 1， 4- 醌例如蒽醌和 萘醌 ； α- 氨基酮， 尤其是那些包含苯甲酰部分的氨基酮， 另外称为 α- 氨基苯乙酮 ； α羟 基酮， 尤其是 α- 羟基苯乙酮 ； 含磷的光引发剂， 包括单酰基、 双酰基和三酰基氧化膦和硫 化物 ； 二烷氧基苯乙酮 ； α- 卤代苯乙酮 ； 三酰基氧化膦 ； 苯偶姻和苯偶姻基光引发剂、 以及 它们的混合物。在另一方面， 合适的光引发剂包括选自由下列组成的组的光引发剂 ： 2- 乙基蒽醌 ； 维生素 K3 ； 2- 硫酸蒽醌 ； 2- 甲基 1-[4- 苯基 ]-2- 吗啉基丙基 -1- 酮 (Irgacure 907) ； (2- 苄 基 -2- 二 甲 基 氨 基 -1-(4- 吗 啉 基 苯 基 )- 丁 基 -1- 酮 (Irgacure 369) ； (1-[4-(2- 羟乙氧基 )- 苯基 ]-2 羟基 -2- 甲基 -1- 丙基 -1- 酮 )(Irgacure 2959) ； 1- 羟 基环己基苯基酮 (Irgacure 184) ； 低聚 [2- 羟基 2- 甲基 -1-[4(1- 甲基 )- 苯基 ] 丙酮 (Esacure KIP150) ； 2-4-6-( 三甲基苯甲酰 ) 二苯基 - 氧化膦， 双 (2， 4， 6- 三甲基苯甲 酰 )- 苯基 - 氧化膦 (Irgacure TPO-L) ； 以及它们的混合物。 可以组合使用上述光漂白剂 ( 可以使用任何光漂白剂的混合物 )。合适的光漂白 剂可得自 Aldrich， Milwaukee， Wisconsin， USA ； Frontier Scientific， Logan， Utah， USA ； Ciba Specialty Chemicals， Basel， Switzerland ； BASF， Ludwigshafen， Germany ； Lamberti S.p.A， Gallarate， Italy ； Dayglo Color Corporation， Mumbai， India ； Organic Dyestuffs Corp.， East Providence， Rhode Island， USA ； 和 / 或根据本文包含的实例制造的光漂白剂。
     织物调色剂 - 所述组合物包含织物调色剂。织物调色剂能改变表面颜色是因为它 们吸收至少一部分可见光谱。适用的织物调色剂包括染料、 染料 - 粘土缀合物、 和颜料， 它 们满足详述于 WO2007/087257 的第 15 和 16 页的测试方法 1 的需要， 并且以引用方式并入本 文。适用的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自由下列组成的 组： 属于颜色索引 (C.I.) 分类的直接蓝、 直接红、 直接紫、 酸性蓝、 酸性红、 酸性紫、 碱性蓝、 碱性紫和碱性红、 或它们的混合物， 例如 ：
     (1) 三 - 偶氮直接蓝染料的式
    
    819) ； (2， 4， 6 三甲基苯甲酰 ) 苯基磷酸乙基酯 (Lucirin其中 A、 B 和 C 萘基环中的至少两个被磺酸根基团取代， C 环可在位点 5 被 NH2 或 NHPh 基团取代， X 是由最多 2 个磺酸根基团取代的苄基或萘基环， 可在位点 2 被 OH 基团取 代， 也可被 NH2 或 NHPh 基团取代。
     (2) 双 - 偶氮直接紫染料的式 ：
    
    其中 Z 是 H 或苯基， A 环优选地被甲基和甲氧基基团在箭头所示位点取代， A 环也 可以是萘基环， Y 基团是苯基或萘基环， 它被硫酸根基团取代， 也可被甲基基团一取代或二
     取代。
    
    (3) 蓝色或红色酸性染料的式其中 X 和 Y 中的至少一个必须是芳族基团。在一个方面， 两个芳族基团都可以是 取代的苄基或萘基， 它可以被非水增溶的基团取代， 例如烷基或烷氧基或芳氧基， X和Y不 能被水增溶的基团取代， 例如磺酸盐或羧酸盐。在另一方面， X 是硝基取代的苄基基团， Y是 苄基基团
     (4) 红色酸性染料的结构
    
    其中 B 是萘基或苄基基团， 它可以被非水增溶的基团取代， 例如烷基或烷氧基或 芳氧基， B 不能被水增溶的基团取代， 例如磺酸盐或羧酸盐。
     (5) 重氮基染料的结构
    
    其中彼此独立的 X 和 Y 是氢、 C1 至 C4 烷基或 C1 至 C4 烷氧基， Rα 是氢或芳基， Z是 C1 至 C4 烷基 ； C1 至 C4 烷氧基 ； 卤素 ； 羟基或羧基， n 是 1 或 2 而 m 是 0、 1 或 2、 以及它们的相 应的盐、 以及它们的混合物
     (6) 下列结构的三苯甲烷染料
    
    
    以及它们的混合物。 在另一方面， 合适的小分子染料选自由下列组成的组 ： 颜色索 引 (Society of Dyers and Colourists， Bradford， UK) 号直接紫 9、 直接紫 35、 直接紫 48、 直接紫 51、 直接紫 66、 直接蓝 1、 直接蓝 71、 直接蓝 80、 直接蓝 279、 酸性红 17、 酸性红 73、 酸 性红 88、 酸性红 150、 酸性紫 15、 酸性紫 17、 酸性紫 24、 酸性紫 43、 酸性红 52、 酸性紫 49、 酸性 蓝 15、 酸性蓝 17、 酸性蓝 25、 酸性蓝 29、 酸性蓝 40、 酸性蓝 45、 酸性蓝 75、 酸性蓝 80、 酸性蓝 83、 酸性蓝 90 和酸性蓝 113、 酸性黑 1、 碱性紫 1、 碱性紫 3、 碱性紫 4、 碱性紫 10、 碱性紫 35、 碱性蓝 3、 碱性蓝 16、 碱性蓝 22、 碱性蓝 47、 碱性蓝 66、 碱性蓝 75、 碱性蓝 159 以及它们的混 合物。在另一方面， 合适的小分子染料选自由下列组成的组 ： 颜色索引 (Society of Dyers and Colourists， Bradford， UK) 号酸性紫 17、 酸性紫 43、 酸性红 52、 酸性红 73、 酸性红 88、 酸性红 150、 酸性蓝 25、 酸性蓝 29、 酸性蓝 45、 酸性蓝 113、 酸性黑 1、 直接蓝 1、 直接蓝 71、 直 接紫 51 以及它们的混合物。在另一方面， 合适的小分子染料包括选自由下列组成的组的小 分子染料 ： 颜色索引 (Society of Dyers and Colourists， Bradford， UK) 号酸性紫 17、 直 接蓝 71、 直接紫 51、 直接蓝 1、 酸性红 88、 酸性红 150、 酸性蓝 29、 酸性蓝 113 或它们的混合 物。
     合适的聚合物染料选自由下列组成的组 ： 包含共轭色原体 ( 染料 - 聚合物共轭 物 ) 的聚合物、 色原体共聚合进入聚合物主链的聚合物、 以及它们的混合物。
     在另一方面， 合适的聚合物染料选自由下列组成的组 ： 以商品名 Liquitint (Milliken， Spartanburg， South Carolina， USA) 销售的织物 - 实体着色剂、 由至少一种 活性染料形成的染料 - 聚合物共轭物、 以及选自由包含以下部分的聚合物形成的组的聚合
     物： 羟基部分、 伯胺部分、 仲胺部分、 硫醇部分、 以及它们的混合物。在另一方面， 合适的聚 合物染料包括选自由下列组成的组的聚合物染料 ： Liquitint (Milliken， Spartanburg， South Carolina， USA)Violet CT、 与 活 性 蓝 共 轭 的 羟 甲 基 纤 维 素 (CMC)、 活性紫或活 性 红 染 料 如 与 C.I. 活 性 蓝 19 共 轭 的 CMC， 由 Megazyme， Wicklow， Ireland 以 产 品 名 AZO-CM-CELLULOSE， 产品代码 S-ACMC 出售、 烷氧基化的三苯甲烷聚合着色剂、 烷氧基化的 噻吩聚合着色剂以及它们的混合物。
     合适的染料粘土共轭物选自由下列组成的组 ： 包含至少一种阳离子 / 碱性染料和 绿土粘土、 以及它们的混合物。在另一方面， 合适的染料粘土共轭物选自由下列组成的组 ： 阳离子 / 碱性染料， 它选自由 C.I. 碱性黄 1 至 108、 C.I. 碱性橙 1 至 69、 C.I. 碱性红 1 至 118、 C.I. 碱性紫 1 至 51、 C.I. 碱性蓝 1 至 164、 C.I. 碱性绿 1 至 14、 C.I. 碱性褐 1 至 23、 CI 碱性黑 1 至 11 组成的组， 以及一种粘土， 它选自由下列蒙脱石粘土、 锂蒙脱石粘土、 滑石粉 粘土、 以及它们的混合物组成的组。 在另一方面， 合适的染料粘土共轭物选自由下列组成的 组： 蒙脱石碱性蓝 B7 C.I.42595 共轭物、 蒙脱石碱性蓝 B9 C.I.52015 共轭物、 蒙脱石碱性 紫 V3 C.I.42555 共轭物、 蒙脱石碱性绿 G1 C.I.42040 共轭物、 蒙脱石碱性红 R1 C.I.45160 共轭物、 蒙脱石碱性蓝 C.I. 碱性黑 2 共轭物、 锂蒙脱石碱性蓝 B7 C.I.42595 共轭物、 锂蒙脱 石碱性蓝 B9 C.I.52015 共轭物、 锂蒙脱石碱性紫 V3 C.I.42555 共轭物、 锂蒙脱石碱性绿 G1 C.I.42040 共轭物、 锂蒙脱石碱性红 R1 C.I.45160 共轭物、 锂蒙脱石 C.I. 碱性黑 2 共轭物、 皂碱性蓝 B7 C.I.42595 共轭物、 皂碱性蓝 B9 C.I.52015 共轭物、 皂碱性紫 V3 C.I.42555 共轭物、 皂碱性绿 G1 C.I.42040 共轭物、 皂碱性红 R1 C.I.45160 共轭物、 皂 C.I. 碱性黑 2 共轭物、 以及它们的混合物。
     合适的颜料选自由下列组成的组 ： 黄烷士酮、 靛蒽醌、 包含 1 至 4 个氯原子的氯化 靛蒽醌、 皮蒽酮、 二氯皮蒽酮、 单溴二氯皮蒽酮、 二溴二氯皮蒽酮、 四溴皮蒽酮、 二萘嵌苯 -3， 4， 9， 10- 四羧酸二酰亚胺酯， 其中所述酰亚胺基团可被也可不被 C1-C3 的烷基或苯基或杂 环基取代， 并且其中苯基和杂环基可另外带有不提供水中溶解度的取代基、 吡唑嘧啶羧酸 酰胺、 蒽酮紫、 异蒽酮紫、 二嗪颜料、 每个分子可包含最多 2 个氯原子的铜酞菁、 多氯铜酞菁 或每个分子包含最多 14 个溴原子的多溴铜酞菁、 以及它们的混合物。
     在另一方面， 合适的颜料包括选自下列组的颜料 ： 群青蓝 (C.I. 颜料蓝 29)、 群青 紫 (C.I. 颜料紫 15)、 以及它们的混合物。
     可以组合使用上述织物调色剂 ( 可使用织物调色剂的任何混合物 )。合适的织物 调色剂可得自 Aldrich， Milwaukee， Wisconsin， USA ； Ciba Specialty Chemicals， Basel， Switzerland ； BASF， Ludwigshafen， Germany ； Dayglo Color Corporation， Mumbai， India ； Organic Dyestuffs Corp.， East Providence， Rhode Island， USA ； Dystar， Frankfurt， Germany ； Lanxess ， Leverkusen ， Germany ； Megazyme ， Wicklow ， Ireland ； Clariant ， Muttenz， Switzerland ； Avecia， Manchester， UK 和 / 或根据本文包含的实例制成。
     适宜的调色剂更详细地描述于 US 7,208,459 B2 中。
     优选的织物调色剂选自直接紫 9、 直接紫 99、 酸性红 52、 酸性蓝 80 以及它们的混合 物。
     漂白催化剂 - 漂白催化剂通常能够从过氧酸和 / 或其盐接受氧原子并将所述氧原 子转移到氧化底物。适用的漂白催化剂包括但不限于 ： 亚胺阳离子和聚离子、 亚胺两性离子、 改性的胺、 改性的氧化胺、 N- 磺酰亚胺、 N- 膦酰亚胺、 N- 酰基亚胺、 噻二唑二氧化物、 全 氟亚胺 ； 环状糖酮 ； 以及它们的混合物。
    适宜的亚胺阳离子和聚离子包括但不限于 N- 甲基 -3， 4- 二氢异喹啉四氟硼酸盐， 按描述于 Tetrahedron(1992)， 49(2)， 423-38 中的方法制备 ( 参见例如， 化合物 4， p.433) ； N- 甲基 -3， 4- 二氢异喹啉 对甲苯磺酸盐， 按描述于美国专利 5,360,569 中的方 对甲苯磺酸盐， 按描 内盐， 法制备 ( 参见例如第 11 列， 实施例 1) ； 和 N- 辛基 -3， 4- 二氢异喹啉
    述于美国专利 5,360,568 中的方法制备 ( 参见例如， 第 10 列， 实施例 3)。 适用的亚胺两性离子的包括但不限于 N-(3- 磺基丙基 )-3， 4- 二氢异喹啉 按描述于美国专利 5,576,282 中的方法制备 ( 参见例如， 第 31 列， 实施例 II) ； N-[2-( 磺氧 基 ) 十二烷基 ]-3， 4- 二氢异喹啉 内盐， 按描述于美国专利 5,817,614 中的方法制备 ( 参 见例如， 列 32， 实施例 V) ； 2-[3-[(2- 乙基己基 ) 氧代 ]-2-( 磺氧基 )]-3， 4- 二氢异喹啉 内盐， 按描述于 WO05/047264 中的方法制备 ( 参见例如， 第 18 页， 实施例 8) 和 2-[3-[(2- 丁 基辛基 ) 氧代 ]-2-( 磺氧基 ) 丙基 ( 酯 )]-3， 4- 二氢异喹啉
    内盐。适宜的改性的胺氧转移催化剂包括但不限于 1， 2， 3， 4- 四氢 -2- 甲基 -1- 羟基异 喹啉， 其可依照描述于 Tetrahedron Letters(1987 年 )， 28(48)， 6061-6064 中的方法制备。 适宜的改性的氧化胺氧转移催化剂包括但不限于 1- 羟基 -N- 氧代 -N-[2-( 磺氧基 ) 癸 基 ]-1， 2， 3， 4- 四氢异喹啉钠。 适宜的 N- 磺酰基亚胺氧气转移催化剂包括但不限于 3- 甲基 -1， 2- 苯并异噻 唑 -1， 1- 二氧化物， 依照描述于 Journal of Organic Chemistry(1990)， 55(4)， 1254-61 中 的方法制备。
     适宜的 N- 膦酰基亚胺氧转移催化剂包括但不限于 [R-(E)]-N-[(2- 氯 -5- 硝基苯 基 ) 亚甲基 ]- 对苯基 - 对 -(2， 4， 6- 三甲基苯基 ) 次膦酸酰胺， 其可依照描述于 Journal of the Chemical Society， Chemical Communications(1994)， (22)， 2569-70 中的方法制 备。
     适宜的 N- 酰基亚胺氧转移催化剂包括但不限于 [N(E)]-N-( 苯基亚甲基 ) 乙酰 胺， 其可依照描述于 Polish Journal of Chemistry(2003 年 )， 77(5)， 577-590 中的方法制 备。
     适宜的噻二唑二氧化物氧转移催化剂包括但不限于 3- 甲基 -4- 苯基 -1， 2， 5- 噻 二唑 1， 1- 二氧化物， 其可依照描述于美国专利 5,753,599( 第 9 列， 实施例 2) 中的方法制 备。
     适宜的全氟亚胺氧转移催化剂包括但不限于 (Z)-2， 2， 3， 3， 4， 4， 4- 七氟 -N-( 壬氟 丁基 ) 丁酰亚胺氟化物， 其可根据 Tetrahedron Letters(1994)， 35(34)， 6329-30 中所述的 方法制备。
     适宜的环状糖酮氧转移催化剂包括但不限于如按美国专利 6,649,085( 第 12 列， 实施例 1) 中的方法制备的 1， 2： 4， 5- 二 -O- 异亚丙基 -D- 赤型 -2， 3-hexodiuro-2， 6- 吡喃 糖。
     所述漂白催化剂优选包含亚胺和 / 或羰基官能团， 并且所述漂白活性剂通常能够 在接受氧原子之后形成过氧亚胺正离子和 / 或双环氧乙烷官能团， 尤其是从过氧酸和 / 或
     其盐接受氧原子。所述漂白催化剂优选包含过氧亚胺正离子官能团和 / 或所述漂白催化 剂能够在接受氧原子之后形成过氧亚胺正离子官能团， 尤其是从过氧酸和 / 或其盐接受氧 原子。所述漂白催化剂优选包含环状亚胺官能团， 优选其中环状部分具有五个至八个原子 ( 包括氮原子 )， 优选六个原子。漂白催化剂优选包含芳香亚胺 胺 官能团， 优选二环芳香亚 官能团， 优选 3， 4- 二氢异喹啉官能团。所述亚胺官能团通常是季亚胺官能团， 并且通常能够形成接受氧原子的季过氧亚胺正离子官能团， 尤其是从过氧酸和 / 或其盐接受氧原 子。
     所述漂白催化剂优选具有与以下式相符的化学结构 ：
    其中 ： n 和 m 独立地为 0 至 4， 优选 n 和 m 均为 0 ； 每个 R1 独立地选自取代或未取代 的基团， 所述基团选自由下列组成的组 ： 氢、 烷基、 环烷基、 芳基、 稠合的芳基、 杂环、 稠合的 杂环、 硝基、 卤素、 氰基、 磺酸根、 烷氧基、 酮基、 羧基， 和烷氧羰基 ； 并且任何两个邻近的 R1 取 代基可结合形成稠合的芳基、 稠合的碳环或稠合的杂环 ； 每个 R2 独立地选自取代或未取代 的基团， 所述基团独立地选自由下列组成的组 ： 氢、 羟基、 烷基、 环烷基、 烷芳基、 芳基、 芳烷 2 2 基、 亚烃基、 杂环、 烷氧基、 芳羰基、 羧甲基和氨基 ； 任何 R 可以与任何其它 R 相连接以形成 公共环部分 ； 任何偕 R2 可结合以形成羰基 ； 并且其中任何两种 R2 可结合以形成取代或未取 代的稠合不饱和部分 ； R3 为 C1 至 C20 取代或未取代的烷基 ； R4 为氢或所述 Qt-A 部分， 其中 ： Q 为支化或未支化的亚烷基， t ＝ 0 或 1， 并且 A 为阴离子基团， 所述阴离子基团选自由下列组 5 2成的组 ： OSO3 、 SO3 、 CO2 、 OCO2 、 OPO3 、 OPO3H 和 OPO2 ； R 为氢或 -CR11R12-Y-Gb-Yc-[(CR9R10) 8 其中 ： 每个 Y 独立地选自由下列组成的组 ： O、 S、 N-H 或 N-R8 ； 并且每个 R8 独立 y-O]k-R 部分， 地选自由下列组成的组 ： 烷基、 芳基和杂芳基， 所述部分是取代或未取代的， 并且无论取代 或未取代， 所述部分具有的碳原子均小于 21 ； 每个 G 独立地选自由下列组成的组 ： CO、 SO2、 9 10 11 12 SO、 PO 和 PO2 ； R 和 R 独立地选自由下列组成的组 ： H 和 C1-C4 烷基 ； R 和 R 独立地选自由 下列组成的组 ： H 和烷基， 或者当结合在一起时， 它们可形成羰基 ； b＝0或1； c 可以＝ 0 或 6 芳 1， 但是如果 b ＝ 0， 则 c 必须＝ 0 ； y 为 1 至 6 的整数 ； k 为 0 至 20 的整数 ； R 为 H 或烷基、 基或杂芳基部分 ； 所述部分是取代或未取代的 ； 并且如果 X 存在的话， 它是一种合适的电荷 4 平衡抗衡离子， 当 R 为氢时 X 优选存在， 合适的 X， 包括但不限于 ： 氯离子、 溴离子、 硫酸根、 甲酯硫酸根、 磺酸根、 对甲苯磺酸根、 四氟化硼和磷酸根。
     在本发明的一个实施例中， 所述漂白催化剂具有符合下文通式的结构 ：
    
    其中 R13 是包含 3 个至 24 个碳原子 ( 包括所述支链碳原子 ) 的支链烷基或包含 一个至 24 个碳原子的直链烷基 ； R13 优选是包含 8 个至 18 个碳原子的支链烷基或包含 8 个至 18 个碳原子的直链烷基 ； R13 优选地选自由下列组成的组 ： 2- 丙基庚基、 2- 丁基辛基、 2- 戊基壬基、 2- 己基癸基、 正十二烷基、 正十四烷基、 正己基癸基、 正十八烷基、 异壬基、 异 13 癸基、 异十三烷基和异十五烷基 ； R 优选地选自由下列组成的组 ： 2- 丁基辛基、 2- 戊基壬 基、 2- 己基癸基、 异十三烷基和异十五烷基。
     糖基水解酶 - 糖基水解酶通常具有对木葡聚糖和无定形纤维素底物的酶活性。糖 基水解酶优选地选自 GH 家族 5、 12、 44 或 74。
     对木葡聚糖底物的酶活性更详细地描述于下文中。 对非晶形纤维素底物的酶活性 更详细地描述于下文中。
     所述糖基水解酶优选属于糖基水解酶第 44 家族。糖基水解酶 (GH) 家族的定义更 详细地描述于 1991 年 “Biochem J.” 第 280 卷第 309-316 页中。
     所述糖基水解酶优选具有与序列标识号 1 至少 70％， 或至少 75％， 或至少 80％， 或 至少 85％， 或至少 90％， 或至少 95％同一性的序列。
     就本发明目的而言， 在两个氨基酸序列之间同一性程度使用 Needleman-Wunsch 算法 (Needleman 和 Wunsch， 1970 年 J.Mol.Biol.48 ： 443-453) 如 EMBOSS 软件包在 Needle 程序中执行的 (EMBOSS ： The European Molecular Biology Open Software Suite， Rice 等 人， 2000， Trends in Genetics 16 ： 276-277)， 优选 3.0.0 或更高的版本。所用的任选参数 是， 10 的空位罚分， 0.5 的空位延伸罚分， 和 EBLOSUM62(EMBOSS 版的 BLOSUM62) 取代矩阵。 使用标记为 “最长同一性” 的 Needle 输出 ( 使用 -nobrief 选项获得 ) 作为百分比同一性， 并且如下计算 ： ( 相同残基 ×100)/( 序列长度 - 序列中的总空位数 )。
     适宜的糖基水解酶选自由下列组成的组 ： 得自类芽胞杆菌 polyxyma( 野生型 ) 的 GH 第 44 家族糖基水解酶如 XYG1006， 描述于 WO 01/062903 或为其变体 ； 得自地衣芽孢杆菌 ( 野生型 ) 的 GH 第 12 家族糖基水解酶， 如序列 No.ID ： 1， 描述于 WO 99/02663 或为其变体 ； 得自芽孢杆菌属 agaradhaerens( 野生型 ) 的 GH 第 5 家族糖基水解酶或其变体 ； 得自类芽胞 杆菌 ( 野生型 ) 的 GH 第 5 家族糖基水解酶， 如 XYG1034 和 XYG 1022， 描述于 WO 01/064853 或其变体 ； 得自 Jonesia sp.( 野生型 ) 的 GH 第 74 家族糖基水解酶， 如 XYG1020， 描述于 WO 2002/077242 或其变体 ； 和得自里氏木霉 ( 野生型 ) 的 GH 第 74 家族糖基水解酶， 如在 WO03/089598 的序列 ID no.2 中更详细描述的酶， 或其变体。
     优选的糖基水解酶选自由下列组成的组 ： 得自类芽孢杆菌 ( 野生型 ) 的 GH 第 44 家族糖基水解酶， 如 XYG1006 或其变体。
     糖基水解酶对木葡聚糖底物的活性
     如果根据下列检测分析法， 纯酶在 pH 7.5 下具有大于 50000XyloU/g 的比活度， 则 认为酶对木葡聚糖具有活性。
     使用得自 Megazyme(Ireland) 的 AZCL- 木葡聚糖作为底物 ( 蓝色底物 )， 测定木葡 聚糖酶活性。
     在 20℃和搅拌下， 在 1.5mL Eppendorf 管中， 将 0.2％蓝色底物的溶液悬浮于 pH 为 7.5 的 0.1M 磷酸盐缓冲液中 ( 各 0.75mL)， 加入 50 微升酶溶液， 并且在 1200rpm 速率搅 拌下， 使它们在 40℃的 Eppendorf 混匀仪中培养 20 分钟。培养后， 通过在 14,000rpm 速率下离心 4 分钟， 使有色溶液与固体分离， 并且使用分光光度计， 在 1cm 比色皿中测定上清液 在 600nm 处的吸光度。将一个 XyloU 单位定义为 1cm 比色皿中在 600nm 处获得 0.24 吸光 度的酶量。
     仅使用介于 0.1 至 0.8 的吸光度值来计算 XyloU 活性。如果测得的吸光度值在此 范围之外， 则应相应地进行初始酶浓度的最优化。
     糖基水解酶对无定形纤维素底物的活性
     如果根据下列检测分析法， 纯酶在 pH7.5 下具有大于 20000EBG/g 的比活度， 则认 为酶对非晶形纤维素具有活性。用作缓冲液和底物的化学物质是至少试剂级的商业产品。
     内葡聚糖酶活性检测分析材料 ：
     pH 为 7.5 的 0.1M 磷酸盐缓冲液
     Cellazyme C 片剂， 由 Megazyme International(Ireland) 提供。
     玻璃微纤维过滤器， GF/C， 9cm 直径， 由 Whatman 提供。
     方法 ：
     在测试管中， 使 1mL pH 7.5 的缓冲液与 5mL 去离子水混合。
     加入 100 微升酶样本 ( 或具有已知重量 ： 重量稀释因子的酶样本稀释液 )。将 1 片 Cellazyme C 片剂加入到每个管中， 将管封盖， 并且在涡旋搅拌器上混合 10 秒。将管放 置于温度为 40℃的恒温水浴中。15 分钟、 30 分钟和 45 分钟后， 通过将管倒转来混合管中 内容物， 然后将管再放置于水浴中。60 分钟后， 通过倒转来混合管中内容物， 然后通过 GF/C 过滤器过滤。将滤液收集于干净的管中。
     用分光光度计测定 590nm 处的吸光度 (A 酶 )。通过加入 100μL 水而不是 100 微 升酶稀释液， 测定空白值 A 水。
     计算的 δA ＝ A 酶 -A 水。
     δA 必须＜ 0.5。如果获得更高的结果， 则用不同的酶稀释因子进行重复。
     确定 DF0.1， 其中 DF0.1 为需要达到 δA ＝ 0.1 的稀释因子。
     单位定义 ： 1 个内型 -β- 葡聚糖酶活度单位 (1EBG) 是在上文指定的检测分析条 件下达到 δA ＝ 0.10 的酶量。因此， 如果例如在用为 100 的稀释因子稀释后， 指定的酶样 本达到 δA ＝ 0.10， 则所述酶样本具有 100EBG/g 的活度。
     两亲烷氧基化油脂清洁聚合物 - 本发明的两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物是指 任何具有平衡的亲水性和疏水性的烷氧基化的聚合物， 使得它们从织物和表面移除油脂颗 粒。 本发明两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物具体的实施方案包括核结构和多个连接到那个 核结构的烷氧基化物基团。
     所述核结构可包括聚亚烷基亚胺结构， 其以密集的形式包含式 (I)、 (II)、 (III) 和 (IV) 的重复单元 ：
    其中在每个实例中， # 代表在氮原子和式 (I)、 (II)、 (III) 或 (IV) 的两个邻近重 1 复单元的基团 A 游离的结合位之间的键的二分之一 ； 在每个实例中， * 代表连接到烷氧基 化物基团中的一个键的二分之一 ； 并且 A1 独立地选自直链或支链的 C2-C6- 亚烷基 ； 其中所 述聚亚烷基亚胺结构由式 (I)1 重复单元、 式 (II)x 重复单元、 式 (III)y 重复单元和式 (IV) y+1 重复单元组成， 其中在每个实例中， x 和 y 具有 0 至约 150 范围内的值， 其中聚亚烷基亚 胺核结构的平均重均分子量 Mw， 为约 60 至约 10,000g/mol 范围内的值。
     所述核结构可或者包含至少一种选自式 (I.a) 和 / 或 (I.b)N-( 羟烷基 ) 胺的缩 合产物的化合物的聚链烷醇胺结构，
    
    其中 A 独立地选自 C1-C6- 亚烷基 ； R1、 R1*、 R2、 R2*、 R3、 R3*、 R4、 R4*、 R5 并且 R5* 独立 地选自氢、 烷基、 环烷基或芳基， 其中至少三种提及的基团可以为任选地取代的 ； 并且 R6 选 自氢、 烷基、 环烷基或芳基。其中至少三种提及的基团可以为任选地取代的。
     连接到所述核结构多个烯氧基基团独立地选自式 (V) 的烯氧基单元
    
    其中在每个实例中， * 代表连接到式 (I)、 (II)、 (III) 或 (IV) 的氮原子键的二分 2 之一 ； 在每个实例中 A 独立地选自 1， 2- 丙烯、 1， 2- 丁烯和 1， 2- 异丁烯 ； A3 为 1， 2- 丙烯 ； 在每个实例中， R 独立地选自氢和 C1-C4- 烷基 ； m 具有 0 至约 2 范围内的平均值 ； n 具有 20 至约 50 范围内的平均值 ； 且 p 具有 10 至约 50 范围内的平均值 ；
     两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物具体的实施方案可选自具有内聚环氧乙烷嵌段 和外聚丙烯氧基嵌段烷氧基化的聚亚烷基亚胺， 乙氧基化度和丙氧基化度不会超过低于具 体的限定值。根据本发明的烷氧基化聚亚烷基亚胺的具体实施方案具有约 0.6 的最小聚乙 烯嵌段对聚丙烯嵌段 (n/p) 的比率和约 1.5(x+2y+1)1/2 的最大比率。 已发现， 具有约 0.8 至 1/2 约 1.2(x+2y+1) 的 n/p 比率的烷氧基化聚亚烷基亚胺具有特别有益的特性。
     根据本发明的烷氧基化聚亚烷基亚胺具有一条主链， 所述主链由伯胺、 仲胺和叔 胺氮原子组成， 其通过亚烷基 A 互相连接并且是无规排列的。伯氨基部分， 其是聚亚烷基亚 胺主链的主要链和侧链的起始点或终结点并且其剩余的氢原子随后被亚烷氧基单元取代， 分别被称为分子式 (I) 或 (IV) 的重复单元。仲氨基部分， 其剩余的氢原子随后被亚烷氧基 单元取代， 被称为分子式 (II) 的重复单元。叔氨基部分， 其使主要链和侧链分叉， 被称为分 子式 (III) 的重复单元。
     由于在聚亚烷基亚胺主链的形成中会发生环化， 在主链中还可能存在少量的环状 氨基部分。当然， 包含环状氨基部分的此类聚亚烷基亚胺以与由非环状伯氨基和仲氨基部 分组成的那些相同的方式烷氧基化。
     由氮原子和基团 A1 组成的聚亚烷基亚胺主链具有约 60 至约 10,000g/mol， 优选约 100 至约 8,000g/mol， 并且更优选约 500 至约 6,000g/mol 的平均分子量 Mw。
     (x+2y+1) 的和对应于存在于一条单独的聚亚烷基亚胺主链中的亚烷基亚胺单元 的总数， 并因此直接与所述聚亚烷基亚胺主链的分子量相关。 然而， 在本说明书中给出的值 涉及所述混合物中存在的所有聚亚烷基亚胺的平均数。 (x+2y+2) 的和对应于存在于一条单 独的聚亚烷基亚胺主链中的氨基的总数。
     连接氨基氮原子的基团 A1 可以是相同或不同的、 直链或支链的 C2-C6- 亚烷基， 如 1， 2- 乙烯、 1， 2- 丙烯、 1， 2- 丁烯、 1， 2- 异丁烯、 1， 2- 亚戊基、 1， 2- 亚己基或六亚甲基。优选 的支链亚烷基是 1， 2- 丙烯。优选的直链亚烷基是乙烯和六亚甲基。更优选的亚烷基是 1， 2- 乙烯。
     聚亚烷基亚胺主链中伯胺基和仲胺基的氢原子可被分子式 (V) 的亚烷氧基单元 取代。
    在该分子式中， 所述变量优选具有以下所给出的一种含义 ：
     在各种情况下， A2 选自 1， 2- 亚丙基、 1， 2- 亚丁基和 1， 2- 异亚丁基 ； A2 优选为 1， 2- 亚丙基。 A3 为 1， 2- 亚丙基 ； 在各种情况下， R 选自氢和 C1-C4 烷基， 如甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基和叔丁基 ； R 优选为氢。在各种情况下， 系数 m 具有 0 至约 2 的值 ； m 优选为 0 或大约 1 ； 更优选 m 为 0。系数 n 具有在约 20 至约 50 范围内， 优选在约 22 至约 40 范围内， 并且更优选在约 24 至约 30 范围内的平均值。系数 p 具有在约 10 至约 50 范围 内， 优选在约 11 至约 40 范围内， 并且更优选在约 12 至约 30 范围内的平均值。
     分子式 (V) 的亚烷氧基单元优选是非随机序列的烷氧基化物嵌段。通过非随机 序列是指首先添加 [-A2-O-]m( 即最接近分子式 (I)、 (II) 或 (III) 的重复单元的氮原子的 3 键 )， 其次添加 [-CH2-CH2-O-]n， 而第三个添加 [-A -O-]p。该目标提供具有内层聚环氧乙烷 嵌段和外层聚环氧丙烷嵌段的烷氧基化聚亚烷基亚胺。
     这些分子式 (V) 的亚烷氧基单元的基本部分由亚乙氧基单元 -[CH2-CH2-O)]n- 和 亚丙氧基单元 -[CH2-CH2(CH3)-O]p- 形成。所述亚烷氧基单元还可具有小部分的亚丙氧基 或亚丁氧基单元 -[A2-O]m-， 即用氢原子饱和的聚亚烷基亚胺主链， 可最初使每摩尔存在的
     NH- 部分与少量的至多约 2mol， 尤其是约 0.5 至约 1.5mol， 特别是约 0.8 至约 1.2mol 的环 氧丙烷或环氧丁烷反应， 即初期烷氧基化。
     如果需要的话， 所述聚亚烷基亚胺主链的这种初始改性可使烷氧基化过程中反应 混合物的粘度降低。 然而， 所述改性通常不会影响烷氧基化聚亚烷基亚胺的性能特性， 因此 不构成优选的标准。
     所述两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物按所述组合物的重量计以约 0.05％至 10％ 范围内的含量存在于本发明的去污和清洁组合物中。 所述组合物的实施方案按重量计可包 含约 0.1％至约 5％。 更具体地讲， 所述实施方案可包含约 0.25 至约 2.5％的油脂清洁聚合 物。
     无规接枝共聚物 - 无规接枝共聚物包含 ： (i) 包含选自由下列组成的组的单体的 亲水性主链 ： 不饱和的 C1-C6 羧酸、 醚、 醇、 醛、 酮、 酯、 糖单元、 烷氧基单元、 马来酸酐、 诸如甘 油的饱和的多元醇、 以及它们的混合物 ； 和 (ii) 选自由下列组成的组的疏水性侧链 ： C4-C25 烷基、 聚丙烯、 聚丁烯、 饱和的 C1-C6 一元羧酸的乙烯基酯、 丙烯酸或甲基丙烯酸的 C1-C6 烷基 酯、 以及它们的混合物 ；
     所述聚合物优选具有通式 ：
    其中 X、 Y 和 Z 为封端单元， 独立地选自 H 或 C1-6 烷基 ； 每个 R1 独立地选自甲基和 乙基 ； 每个 R2 独立地选自 H 和甲基 ； 每个 R3 独立地为 C1-4 烷基 ； 且每个 R4 独立地选自吡咯 烷酮和苯基基团。所述聚环氧乙烷主链的重均分子量通常为约 1,000g/mol 至约 18,000g/ mol， 或约 3,000g/mol 至约 13,500g/mol， 或约 4,000g/mol 至约 9,000g/mol。选择 m、 n、 o、 p 和 q 的值， 以使得侧基的含量按所述聚合物的重量计为至少 50％， 或约 50％至约 98％， 或约 55 ％至约 95 ％， 或约 60 ％至约 90 ％。可用于本文的聚合物通常具有约 1,000 至约 100,000g/mol， 或优选约 2,500g/mol 至约 45,000g/mol， 或约 7,500g/mol 至约 33,800g/ mol， 或约 10,000g/mol 至约 22,500g/mol 的重均分子量。
     适宜的接枝共聚物更详细地描述于 WO07/138054、 WO06/108856 和 WO06/113314 中。
     储备碱度 - 所述组合物可具有大于 4.0， 优选地大于 7.5 的储备碱度。 本文所用术 语 “储备碱度” 是洗涤剂组合物缓冲能力的量度 (g/NaOH/100g 洗涤剂组合物 )， 其通过用盐
     酸将 1％ (w/v) 的洗涤剂组合物溶液滴定至 pH7.5 来测定， 即为了计算如本文所定义的储备 碱度 ：
     储 备 碱 度 ( 至 pH7.5) 以 碱 g NaOH/100g 产 品 百 分 比 ＝ (T×M×40×Vol)/ (10×Wt× 等分试样 )
     T ＝至 pH 7.5 时的滴度 (mL)
     M ＝ HCl 摩尔浓度， 为 0.2
     40 ＝ NaOH 的分子量
     Vol ＝总体积 ( 即 1000mL)
     W ＝产品重量 (10g)
     等分试样＝ (100mL)
     获得 10g 精确称量至小数点后两位的全配方洗涤剂组合物样本。应在除尘橱中， 使用 Pascall 采样器取得样本。向塑料烧杯中加入 10g 样本， 并加入 200mL 不含二氧化碳 的去离子水。 在搅拌台上， 使用磁子以 150rpm 的速度搅拌， 直至完全溶解， 并且搅拌至少 15 分钟。将烧杯中的内容物转移至 1 升容量瓶中， 并用去离子水补足至 1 升。混合均匀， 并且 立即使用 100mL 吸液管， 取 100mL±1mL 的等分试样。 使用能够读至 ±0.01pH 单位的 pH 计， 测定并记录样本的 pH 和温度， 并且搅拌， 以确保温度为 21℃ ±2℃。用 0.2M 的盐酸， 在搅 拌的同时滴定， 直至 pH 准确测定为 7.5。记录所用的盐酸毫升数。取三次相同重复试验的 平均滴度。进行所述计算， 算得至 pH7.5 时的 RA。 本发明的洗涤剂组合物的 RA 将大于 7.5 并且优选地大于 8。RA 可为大于 9 或甚 至大于 9.5 或 10 或更高。所述 RA 可最多为 20 或更高。
     可由例如一种或多种碱金属硅酸盐 ( 结晶层状硅酸盐除外 )、 碱金属碳酸盐来提 供适当的储备碱度， 所述碱金属硅酸盐典型为非晶形硅酸盐， 通常为 1.2 至 2.2 比率的钠 盐， 所述碱金属碳酸盐典型为碳酸钠、 碳酸氢钠和 / 或倍半碳酸钠。 STPP 和过酸盐如过硼酸 盐和过碳酸盐也对碱度有贡献。 需要缓冲作用， 以在洗涤过程期间维持碱性 pH， 中和污垢的 酸性， 尤其是由脂肪酶所释放的脂肪酸。
     香料 - 所述组合物可包含香料。香料可进行胶囊包封， 例如通过淀粉包封。香料 可通过尿素 - 甲醛或三聚氰胺 - 甲醛材料进行胶囊包封。此类香料胶囊包封物可为香料微 胶囊的形式。
     组合物可包含胶囊包封的香料和非胶囊包封的香料， 其中香料原料的重量比具有 1 2 3 4 1 2 3 其中 R R R 各自独立地选自 H、 烷基、 芳基、 烷基芳基、 环状 以下通式结构 ： R R R CC(O)OR ， 1 2 3 烷基， 并且其中至少一个， 优选地至少两个 R R R 是 H， 以胶囊包封的香料形式存在的香料 原料与那些以非胶囊包封的香料形式存在的香料原料 ( 也具有上述通式结构 ) 的重量比大 于 3 ∶ 1， 优选地大于 4 ∶ 1， 或甚至大于 5 ∶ 1， 或者 10 ∶ 1， 或者 15 ∶ 1 或甚至 20 ∶ 1。
     具有上述通式结构的一般香料原料包括 ： 乙酸苄酯、 己基乙酸酯、 烯丙基己酸酯、 香叶基丁酸酯、 香叶基乙酸酯、 乙基丁酸酯、 丁酸橙花酯、 香茅醇乙酸酯、 乙基 -2- 甲基戊酸 酯、 异丙基 2- 丁酸甲酯和烯丙基戊基乙醇酸酯。具有上述通式结构的其他香料原料包括 ： manzanateTM supplied by Quest(Ashford， Kent， UK) ； and vertenexTM， verdoxTM， violiffTM supplied by International Flavors and Fragrances(New Jersey， USA)。
     所述组合物可包含香料， 其中所述香料包含至少 10 重量％的一种或多种香料原
     料， 它们具有大于 0 但是小于或等于 350 道尔顿的分子量， 至少 80 重量％的所述一种或多 种香料原料具有至少 2.4 的 cLogP， 所述香料组合物包含至少 5 重量％的具有至少 2.4 的 cLogP 的一种或多种香料组分。
     本文所公开的香料组合物对遮蔽气味是尤其有用的， 尤其是脂肪酸气味， 更具体 地讲短链脂肪酸气味如丁酸的气味， 此类香料组合物在洗涤剂粉末中是尤其有用的。
     在本发明的一个方面所述香料包含至少 10％、 20％、 30％、 40％、 50％、 60％、 70％、 80％、 或甚至 90％的一种或多种香料原料， 该香料原料具有大于 0 但小于或等于 350 道尔 顿， 约 100 道尔顿至约 350 道尔顿， 约 130 道尔顿至约 270 道尔顿， 或甚至约 140 道尔顿至 约 230 道尔顿的分子量 ； 至少 80 重量％、 85 重量％、 90 重量％或甚至 95 重量％的所述一种 或多种香料原料具有至少 2.4， 约 2.75 至约 8.0 或甚至越 2.9 至约 6.0 的 cLogP， 所述香料 包含至少 5 重量％， 15 重量％， 25 重量％， 35 重量％， 45 重量％， 55 重量％， 65 重量％， 75 重 量％， 85 重量％， 或甚至 95 重量％的所述一种或多种香料组分， 该香料组分具有的 cLogP 在 至少 2.4， 约 2.75 至约 8.0 或甚至约 2.9 至约 6.0 的范围内。在本发明的所述方面， 所述一 种或多种香料组分可选自席夫碱、 醚、 酚、 酮、 醇、 酯、 内酯、 醛、 腈、 天然油， 或它们的混合物。
     洗涤方法 本发明包括一种清洁和 / 或处理某个区域、 特别是表面或织物的方法。上述方法 包括以下步骤 ： 将申请人的清洁组合物实施例 ( 以纯物质形式或稀释在洗涤液体中 ) 与至 少部分表面或织物接触， 然后任选地漂洗上述表面或织物。可在上述漂洗步骤之前对所述 表面或织物进行洗涤步骤。对本发明而言， 洗涤包括但不限于擦洗和机械搅拌。正如本领 域的技术人员所认可的那样， 本发明的清洁组合物理想地适用于洗衣用途。因此， 本发明 包括一种用于洗涤织物的方法， 所述方法包括以下步骤 ： 将待洗涤的织物与所述清洁洗涤 溶液接触， 所述清洁洗涤溶液包含申请人的清洁组合物、 清洁助剂或它们的混合物的至少 一个实施方案。织物可包括任何能够在正常消费者使用条件下洗涤的大部分任何织物。所 述溶液优选具有约 8 至约 10.5 的 pH。可使用组合物在溶液中的浓度为约 100ppm， 优选为 500ppm 至约 15,000ppm。水温通常为约 5℃至约 90℃。本发明在低的水温如低于 30℃或低 于 25℃或 20℃时会尤其有益。水与织物的比率通常为约 1 ∶ 1 至约 30 ∶ 1。
    实施例 以下实施例进一步描述了本发明， 所述实施例不应理解为限制本发明的范围。
     用作缓冲液和底物的化学物质是至少试剂级的商业产品。
     实施例 1- 脂肪酶变体的表达
     构建包含编码脂肪酶变体的基因的质粒并使用本领域的标准方法将其转化到合 适的宿主细胞中。
     实施例 2- 生产脂肪酶变体
     以分批补料发酵方式进行发酵， 培养基恒定温度为 34℃， 并且起始体积为 1.2 升。 将培养基的初始 pH 设为 6.5。一旦 pH 提高到 7.0， 通过加入 10％ H3PO4 维持该值。通过改 变搅拌速率控制培养基中溶解氧的含量， 并且使用 1.0 升空气每升培养基每分钟的固定透 气速率。在整个分批补料阶段期间， 将给料速率维持在恒定水平。
    
    批培养基包含麦芽糖糖浆作为碳源， 尿素和酵母提取物作为氮源， 并且包含痕量金属和盐的混合物。在分批补料阶段期间连续加入的补料包含麦芽糖糖浆作为碳源， 而加 入酵母提取物和尿素是为了确保氮的足够供应。
     脂解酶变体的纯化可使用本领域已知的标准方法进行， 例如通过过滤发酵上清液 并随后进行疏水性层析和离子交换层析， 例如 EP 0 851 913 EP， 实施例 3 所述。
     实施例 3- 脂解酶变体的洗涤剂内稳定性
     测试以下脂解酶变体在洗涤剂内的稳定性并且与基准脂解酶 SEQ ID NO ： 2 比较。
     表2： 测试的脂解酶变体。
    
    
    脂解酶变体和基准取剂量为 0.065mg 酶蛋白 /g 商业洗涤剂的浓度。 表3： 洗涤剂组合物。 成分 起源重量％ 烷基醚硫酸钠 Steol 25-2S.70， Stepan Deutschland 12.0
     LAS Surfac SDBS80， Surfachem 7.0
     牛油皂 / 椰子 80/20 Linds Fabrikker 3.2
     23-9 醇乙氧基化物 Neodol 23-9， Shell Chemical 2.4
     烷基二甲基胺氧化物 Empigen OB， Huntsman 2.0
     柠檬酸 ( 钠 ) Merck 2.8
     氢氧化钠 10N Bie & Berntsen 1.6
     甘油 Optim Glycerine 99.7％ USP/EP， Dow Chemical 2.3
     单乙醇胺 Huntsman 2.7
     MPG Proylene Glycol Industrial， Dow Chemical 4.7
     水 59.3
     将包含洗涤剂和脂解酶变体或基准酶的样本溶解在 pH ＝ 7.7 的 tris( 羟甲基 ) 氨基甲烷 (TRIS) 缓冲液中并分别贮存在 -18℃ 2 周和 35℃ 4 周。如下计算残余的酶活性 ： 在 35℃孵育后的脂肪酶活性除以贮存在 -18℃的样本的脂肪酶活性。稳定性数据如下表 4
     所示。与基准脂肪酶相比， 所有六个脂解酶变体显示改善的洗涤剂内稳定性。
     通过监控底物 p- 硝基苯基 - 戊酸盐 (pNp-Val) 水解生成戊酸盐和 pNp 产物来测 量脂肪酶活性。检测波长＝ 405nm ； pH ＝ 7.7 ； 温度＝ 37℃。在该 pH 具有酯酶活性的所有 脂肪酶能用该方法进行分析。
     表4： 贮藏后的残余脂肪分解活性。显示的数据为三个数据的平均值。
    
    
    洗涤剂实施例 用于实施例的缩写组分的识别如下所示 ：
    
    
    实施例 A 由下列制剂举例说明具有颗粒状衣物洗涤剂形式的漂白洗涤剂组合物。A LAS QAS C25E3S C25E7 STPP 沸石 A 硅酸盐 12 0.7 0.9 0.0 5 0.0 2 B 15 1 0.0 0.5 3 0.0 3 C 13 1 0.9 0.0 1 0.0 3 D 15 0.6 0.0 1 10 0.0 7 E 10 0.0 0.0 3 0 10 0 F 14 0.7 0.9 1 8 0.0 4实施例 A 中的任何组合物以水中 600ppm 至 10000ppm 的浓度、 典型中间条件为 2500ppm 以及 25℃和 25 ∶ 1 的水与织物比率下用来洗涤织物。
     实施例 B
     由下列制剂举例说明具有颗粒状衣物洗涤剂形式的漂白洗涤剂组合物。
    
     A LAS C25E3S C68S C25E7 QAS (Na-)SKS-6 沸石 A 柠檬酸 8 0 1 2.2 0.75 4.1 20 3 B 7.1 4.8 0 0 0.94 0 0 5 C 7 0 1 3.2 0.98 4.8 17 3 D 6.5 5.2 0 0 0.98 0 0 438102112602 A CN 102112606 碳酸盐 硅酸盐 洗涤剂说15 0.08 0.75明书20 0 0.72 14 0.11 0.71 20 035/37 页0.72
    实施例 B 中的在 20-90℃下， 以 10,000ppm 的水溶液浓度， 以及 5 ∶ 1 的水与织物 的比率， 使用任何上述组合物来洗涤织物。
     实施例 C
    
    乙醇 TEPAE1 乙氧基化的六亚甲基二胺 2 1， 2- 丙二醇 蛋白酶 * 甘露聚糖酶 * 淀粉酶 * 脂肪酶 * 两亲烷氧基化油脂清洁聚合物 无规接枝共聚物 调色剂 未胶囊包封的香料 香料微胶囊 三羟基硬脂酸甘油酯 水、 染料和其他
    1.54 0.3 0.8 0.0 36.4 1.1 7.3 10 0.3 0.5 0.001 0.5 0.2 0.2 余量1.77 0.33 0.81 6.6 36.4 1.1 7.3 3.2 0.5 0.3 0.003 0.5 0.1 0.1 余量1.15 0.23 0.6 0.0 27.3 0.8 5.5 0.5 0.7 0.5 0.005 0.5 0.3 0.3 余量0.89 0.17 0.4 3.3 18.2 0.6 3.7 3.2 0.5 0.7 0.01 0.5 0.2 0.2 余量1.54 0.0 0.0 0.0 36.4 1.1 7.3 2.4 0.3 0.5 0 0.5 0.1 0.1 余量1.15 0.0 0.0 0.0 27.3 0.8 5.5 3.2 0 0 0 0.5 0 0 余量* 以 mg 酶 /100g 计的数值 1
     如 US 4,597,898 中所述。 2
     以商品名 LUTENSIT 得自 BASF， 以及如 WO 01/05874 中所述的那些
     不应将本文所公开的量纲和值理解为对所引用精确值的严格限制。相反， 除非另 外指明， 每个这样的量纲旨在表示所引用的值和围绕该值功能上等同的范围。 例如， 公开为 “40mm” 的量纲旨在表示 “约 40mm” 。41102112602 A CN 102112606
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