一种牡荆素鼠李糖苷的制备方法.pdf

本发明涉及一种产量大，易于实现工业化的分离提纯牡荆素鼠李糖苷的方法。工艺步骤包括醇提、大孔树脂吸附、聚酰胺层析、萃取结晶。采用本发明生产牡荆素鼠李糖苷，能源消耗少、纯度极高。

1.  一种牡荆素鼠李糖苷的制备方法，其特征在于包括以下几个步骤：
①醇提：将山楂或山楂叶粉碎后在70～90％的乙醇中回流提取1～1.5小时，滤去不溶物，再加入活性炭，回流搅拌1～1.5小时脱色，滤过，减压浓缩，得到浓缩液；
②大孔树脂吸附：上述浓缩液通过大孔树脂柱进行饱和吸附，用水和不同浓度乙醇溶液分段洗脱，含牡荆素鼠李糖苷的洗脱液减压浓缩，得浸膏；
③聚酰胺层析：浸膏与聚酰胺拌样上柱，用氯仿甲醇混合液分段洗脱，所得牡荆素鼠李糖苷洗脱液减压干燥，得粗品；
④结晶：上述粗品用正己烷饱和溶解，减压浓缩至原体积的1/20～1/10，静置结晶，再重结晶2次，即得淡黄色牡荆素鼠李糖苷结晶。

2.  根据权利要求1所述牡荆素鼠李糖苷的制备方法，其特征在于粉碎粒度为20-40目。

3.  根据权利要求1所述牡荆素鼠李糖苷的制备方法，其特征在于所述醇提步骤乙醇用量为原料质量的10～12倍量。

4.  根据权利要求1所述牡荆素鼠李糖苷的制备方法，其特征在于所述活性炭用量为回流提取液重量的0.5～1％。

5.  根据权利要求1所述牡荆素鼠李糖苷的制备方法，其特征在于所述大孔树脂柱可选用AB-8、D101或HZ-806大孔树脂中的一种。

6.  根据权利要求1所述牡荆素鼠李糖苷的制备方法，其特征在于所述大孔树脂吸附物质的洗脱步骤为：先用4～5倍量柱体积的去离子水洗脱水溶性杂质，再用6～8倍量柱体积30～40％乙醇洗脱有机杂质，最后用4～5倍量柱体积60～80％乙醇洗脱牡荆素鼠李糖苷。

7.  根据权利要求1所述牡荆素鼠李糖苷的制备方法，其特征在于所述聚酰胺用氯仿甲醇系统分段洗脱条件为：先用8～10∶1、用量2～3倍量柱体积的溶剂除杂，后用6～7∶1、用量3～4倍量柱体积溶剂除杂，再用4～5∶1、用量4～5倍量柱体积的溶剂洗脱牡荆素鼠李糖苷。

一种牡荆素鼠李糖苷的制备方法
技术领域：
本发明涉及牡荆素鼠李糖苷的制备纯化工艺，特别是一种从山楂和山楂叶中提取牡荆素鼠李糖苷的方法。
背景技术：
牡荆素鼠李糖苷(Vitexin-2-O-rhamnoside，2-O-Rhamnosylvitexin)为山楂中特有的黄酮苷类物质，分子式C₂₇H₃₀O₁₄，分子量578.52，结构如下：

牡荆素鼠李糖苷被证实具有药理活性，能够治疗心血管疾病，并能有很强的抑制人类的乳癌细胞DNA的合成，具有抗氧化作用。据报道牡荆素鼠李糖苷在山楂叶中的含量约0.4～1.3％。
牡荆素鼠李糖苷在植物中的分布不广泛，因此关于其提取方法的报道较少，且不是很深入，存在一些问题。如中国专利CN101050226《一种牡荆素衍生物分离方法》报道的方法，用了硅胶作为层析填料，对黄酮苷类的吸附强度过大，洗脱较难，导致收率偏低。
发明内容：
本发明的目的是为了提供一种能源消耗少，牡荆素鼠李糖苷得率75％以上，纯度达95％以上，产量大，易于实现工业化的牡荆素鼠李糖苷提取工艺。
本发明的目的是这样来实现的：
①醇提：将山楂或山楂叶粉碎后在70～90％的乙醇中回流提取1～1.5小时，滤去不溶物，再加入活性炭，回流搅拌1～1.5小时脱色，过滤，减压浓缩，得到浓缩液；
②大孔树脂吸附：上述浓缩液通过大孔树脂柱进行饱和吸附，用乙醇溶液分段洗脱，含牡荆素鼠李糖苷的洗脱液减压浓缩，得浸膏；
③聚酰胺层析：浸膏与聚酰胺拌样上柱，用氯仿甲醇混合液分段洗脱，所得牡荆素鼠李糖苷层析液减压干燥，得粗品；
④结晶：上述粗品用正己烷饱和溶解，减压浓缩至原体积的1/20～1/10，静置结晶，再重结晶2次，即得淡黄色牡荆素鼠李糖苷结晶。
上述牡荆素鼠李糖苷的制备方法，其特征在于粉碎粒度为20-40目。
上述牡荆素鼠李糖苷的制备方法，其特征在于所述醇提步骤乙醇用量为原料质量的10～12倍量。
上述牡荆素鼠李糖苷的制备方法，其特征在于所述活性炭用量为回流提取液质量的0.5～1％
上述牡荆素鼠李糖苷的制备方法，其特征在于所述大孔树脂柱可选用AB-8、D101或HZ-806大孔树脂中的一种。
上述牡荆素鼠李糖苷的制备方法，其特征在于所述大孔树脂吸附物质的洗脱为分段洗脱过程：先用4～5倍量柱体积的去离子水洗脱水溶性杂质，再用6～8倍量柱体积30～40％乙醇洗脱有机杂质，最后用4～5倍量柱体积60～80％乙醇洗脱牡荆素鼠李糖苷。
上述牡荆素鼠李糖苷的制备方法，其特征在于所述聚酰胺用氯仿甲醇系统分段洗脱条件为：先用8～10∶1、用量2～3倍量柱体积的溶剂除杂，后用6～7∶1、用量3～4倍量柱体积溶剂除杂，再用4～5∶1、用量4～5倍量柱体积的溶剂洗脱牡荆素鼠李糖苷。
综上所述，本发明存在以下优点：
1)除去提取以外的纯化操作都在非加热条件下完成，既防止了原料受热不稳定，也节省了能耗。
2)采用氯仿甲醇混合液能使黄酮苷元类杂质先于黄酮苷类被洗脱，结合分段洗脱过程可以显著减少杂质含量。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式：
实施例1：
取1kg山楂和山楂叶(牡荆素鼠李糖苷含量1.1％)，粉碎至20目，加入10L 70％的乙醇中回流提取1小时，过滤后在滤液中加入50g活性炭，回流搅拌1小时，滤去活性炭，减压浓缩后过柱体积5L的AB-8大孔树脂柱，用20L去离子水和30L 30％乙醇除杂后，用20L 60％乙醇洗脱牡荆素鼠李糖苷，减压干燥，所得浸膏拌样后上聚酰胺层析柱，先用10L 10∶1氯仿甲醇混合液洗脱杂质，后用15L7∶1氯仿甲醇混合液洗脱杂质，再用20L 3.1∶1氯仿甲醇混合液洗脱牡荆素鼠李糖苷，收集牡荆素鼠李糖苷层析液，减压干燥得11.4g粗品，用正己烷饱和溶解，减压浓缩至原体积的1/10，静置结晶，再重结晶2次，最终得到9.1g含量为95.5％的牡荆素鼠李糖苷成品。
实施例2：
取1kg山楂和山楂叶(牡荆素鼠李糖苷含量0.9％)，粉碎至30目，加入11L80％的乙醇中回流提取1.25小时，过滤后在滤液中加入70g活性炭，回流搅拌1.25小时，滤去活性炭，减压浓缩后过柱体积5L的D101大孔树脂柱，用23L去离子水和35L 30％乙醇除杂后，用23L65％乙醇洗脱牡荆素鼠李糖苷，减压干燥，所得浸膏拌样后上聚酰胺层析柱，先用13L 9∶1氯仿甲醇混合液洗脱杂质，后用18L 6.5∶1氯仿甲醇混合液洗脱杂质，再用23L 3.5∶1氯仿甲醇混合液洗脱牡荆素鼠李糖苷，收集牡荆素鼠李糖苷层析液，减压干燥得10.8g粗品，用正己烷饱和溶解，减压浓缩至原体积的1/15，静置结晶，再重结晶2次，最终得到7.7g含量为96.4％的牡荆素鼠李糖苷成品。
实施例3：
取1kg山楂和山楂叶(牡荆素鼠李糖苷含量1.0％)，粉碎至40目，加入12L90％的乙醇中回流提取1.5小时，过滤后在滤液中加入100g活性炭，回流搅拌1.5小时，滤去活性炭，减压浓缩后过柱体积5L的HZ-806大孔树脂柱，用25L去离子水和40L 30％乙醇除杂后，用25L 70％乙醇洗脱牡荆素鼠李糖苷，减压干燥，所得浸膏拌样后上聚酰胺层析柱，先用15L 8∶1氯仿甲醇混合液洗脱杂质，后用20L6∶1氯仿甲醇混合液洗脱杂质，再用25L4∶1氯仿甲醇混合液洗脱牡荆素鼠李糖苷，收集牡荆素鼠李糖苷层析液，减压干燥得14.8g粗品，用正己烷饱和溶解，减压浓缩至原体积的1/20，静置结晶，再重结晶2次，最终得到8.7g含量为98.1％的牡荆素鼠李糖苷成品。