作为凝血酶受体拮抗剂的喜巴辛类似物 【发明背景】
已知凝血酶在不同细胞类型中有多种活性，并且已知凝血酶受体存在于细胞类型如人血小板、血管平滑肌细胞、内皮细胞和成纤维细胞。因此预期凝血酶受体拮抗剂将在治疗血栓形成、炎症、动脉粥样硬化和纤维增生紊乱，以及凝血酶及其受体起病理作用的其它紊乱中有用。
基于凝血酶受体上包括氨基酸取代的结构活性研究已经鉴定了凝血酶受体拮抗剂肽。在Bernatowicz等，J.Med.Chem.，39(1996)，p.4879-4887中公开了四肽和五肽作为有效的凝血酶受体拮抗剂，例如N-反-肉桂酰-p-氟Phe-p-胍基Phe-Leu-Arg-Arg-NH2。WO 94/03479(1994年2月17日公开)中也公开了凝血酶受体拮抗剂肽。
大麻酯受体属于G蛋白偶联受体总科。它们分为以神经元为主的CB1受体和以外周为主的CB2受体。这些受体通过调节腺苷酸环化酶和Ca+2和K+流来发挥它们的生物学作用。虽然CB1受体的作用主要与中枢神经系统有关，但认为CB2受体具有与支气管狭窄，免疫调节和发炎相关的外周作用。据此，预期选择性CB2受体结合剂对与类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化、糖尿病、骨质疏松症、肾缺血、脑中风、脑缺血、肾炎、肺部和胃肠道炎性紊乱和呼吸道紊乱如反向气道梗阻、慢性哮喘和支气管炎相关疾病的控制具有治疗功用。(R.G.Pertwee，Curr.Med.Chem.6(8)，(1999)，635)
下式的哌啶生物碱-喜巴辛
已经鉴定为蕈毒碱受体拮抗剂。Chackalamannil等在J.Am.ChemSoc.，118(1996)，p 9812-9813中公开了(+)-喜巴辛的总合成。
发明概述
本发明涉及通式I表示的凝血酶受体拮抗剂
或其药物可接受盐，其中：
R是分别选自H，C1-C6烷基，卤素，羟基，氨基，(C1-C6)烷基-氨基，(C1-C6)-二烷基氨基，(C1-C6)烷氧基，-COR16，-COOR17，-SOR16，-SO2R16，-SO2NR17R18，-NR17SO2R18，-NR16COR16a，-NR16COOR16a，-NR16CONR4R5，氟-(C1-C6)烷基，二氟(C1-C6)烷基，三氟(C1-C6)烷基，C3-C6环烷基，芳香基(C1-C6)烷基，羟基(C1-C6)烷基，氨基-(C1-C6)-烷基，芳香基和(C1-C6)烷硫基的1至3个取代基；
R1和R2分别选自H，C1-C6烷基，氟-(C1-C6)烷基，二氟(C1-C6)烷基，三氟(C1-C6)烷基，C3-C6环烷基，C2-C6烯基，芳香基(C1-C6)烷基，羟基-(C1-C6)烷基，氨基-(C1-C6)-烷基，芳香基和硫代(C1-C6)烷基；或R1和R2共同形成一个＝O基；
R3是H，羟基，(C1-C6)烷氧基，芳氧基，芳香基(C1-C6)烷氧基，杂芳氧基，杂芳香基(C1-C6)烷氧基，(C3-C6)环烷氧基，-SOR16，-SO2R17，-SO2NR18R19，-SR18，-SO3H，-C(O)OR17，-C(O)NR18R19，-OC(O)R32，-OC(O)NR33R34，-(CR33R34)nOR32，-NR4R5，-NR33COOR32，-NR33COR32，-NR33S(O)2R32，-NR33CONR33R34，-NR33S(O)2NR33R34，-(CR33R34)nNR4R5，-(CR33R34)nNR33COOR32，-(CR33R34)nNR33COR32，-(CR33R34)nNR33S(O)2R32，-(CR33R34)nNR33CONR33R34，-(CR33R34)nNR33S(O)2NR33R34，(C1-C6)烷基，卤素，C3-C6环烷基，C2-C6烯基，-CN，芳香基，杂芳香基，杂环烷基，-P(O)(OR7)2或被选自卤素，-OH，-NH2，芳香基，-COOH，-SO3H，硫代和(C1-C6)烷硫基的1-3个取代基取代的(C1-C6)烷基；
n是1，2，3或4；
n1和n2分别是0-3，条件是二者不都是0；
Het是包括1至13个碳原子和1至4个分别选自N，O和S的杂原子的5-14个原子的单、双或三环杂芳族基团，其中环氮可形成N-氧化物或与C1-C4烷基形成四元基团，其中Het通过碳原子环成员与B连接，其中Het基团被1至4个取代基W取代，W分别选自C1-C6烷基，-NR4R5，-NHCOR26，-NHSO2R16；R21-芳香基；芳香基，其中相邻碳原子与亚甲基二氧基基团形成环；和R21-杂芳香基；
R4和R5分别选自H，C1-C6烷基，苯基，苄基和C3-C6环烷基，或R4和R5一起是-(CH2)3-，-(CH2)4-，-(CH2)5-或-(CH2)2NR7-(CH2)2-并与它们连接地氮形成环；
R7是H或(C1-C6)烷基；
R8，R10和R11分别选自R1和-OR1；
R9是H，OH，-NR4R5，C1-C6烷氧基，卤素或卤代(C1-C6)烷基；
B是-(CH2)n3-或顺或反-(CH2)n4CR12＝CR12a(CH2)n5，其中n3是0-5，n4和n5分别是0-2，和R12和R12a分别选自H，C1-C6烷基和卤素；
R16和R16a分别选自C1-C6烷基，苯基和苄基；
R17，R18和R19分别选自H，C1-C6烷基，苯基和苄基；
R21是分别选自H，-CF3，-OCF3，卤素，-NO2，-CN，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，-NH2，(C1-C6)-烷基-氨基，二-((C1-C6)烷基)氨基，氨基(C1-C6)烷基，(C1-C6)-烷基氨基(C1-C6)烷基，二-((C1-C6)烷基)-氨基(C1-C6)烷基，羟基-(C1-C6)烷基，-COOR17，-COR17，-CONR24R25，-NHCOR16，-NHSO2R16，-NHSO2CH2CF3，-SO2NR24R25，-NR29C(O)NR24R25，-SO2R30，-P(O)(OR29)2，芳香基，芳香基(C1-C6)烷基，杂芳香基，杂环烷基和-CR29(＝NOR28)的1至3个取代基；
R22是-COR23，-S(O)R31，-S(O)2R31，-SO2NR24R25或-COOR27；
R23是卤代(C1-C6)烷基；C2-C6烯基；卤代(C2-C6)烯基；C2-C6炔基；C3-C7-环烷基；(C3-C7)环烷基(C1-C6)烷基；被选自卤素，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，羟基和C1-C6烷氧基的1至3个取代基取代的(C3-C7)环烷基；芳香基；芳香基(C2-C6)烷基；杂芳香基；杂环烷基；被分别选自-COOH和-SO3H的1-3个取代基取代的(C1-C6)烷基；或
其中R35和R36分别选自H，烷基或R37取代的C1-C6烷基，其中R37选自HO-，HS-，CH2S-，-NH2，苯基，p-羟基苯基和吲哚基；
R24和R25分别选自H，C1-C6烷基，卤代(C1-C6)烷基，C2-C6烯基，卤代(C2-C6)烷基，C2-C6炔基，芳香基，芳香基-(C1-C6)烷基，C3-C7-环烷基，卤代(C3-C7)环烷基，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)-烷基，羟基和C1-C6烷氧基；
R26是C3-C7-环烷基，芳香基，芳香基-(C1-C6)烷基，杂芳香基，杂芳香基-(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷基氨基；
R27是C1-C6烷基，苯基，苄基，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)-烷基，(C3-C7)-环烷基，羧基(C1-C6)烷基，磺基(C1-C6)烷基，或被NR18R19和羧基取代的(C1-C6)烷基；
R28是H，C1-C6烷基，苯基，苄基或(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基；
R29和R30分别选自H和C1-C6烷基；
R31是(C1-C6)烷基；卤代(C1-C6)烷基；C2-C6链烯基；卤代(C2-C6)烷基；C2-C6炔基；C3-C7-环烷基；被选自卤素，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，羟基和C1-C6烷氧基的1至3个取代基取代的(C3-C7)环烷基；芳香基；芳香基(C1-C6)烷基；杂芳香基；杂环烷基；被分别选自-COOH和-SO3H的1-3个取代基取代的(C1-C6)烷基；或(C1-C6)烷氧基；
R32是R35-(C1-C6)烷基，R35-(C3-C7)环烷基，R35-(C2-C6)烯基，R35-(C2-C6)炔基或R35-芳香基，其中R35是分别选自H，-COOH，-NH2，-SO3H，＝O和＝NOR28的1或2个取代基；和
R33和R34分别选自H，(C1-C6)烷基和C3-C7-环烷基。
本发明也涉及使用通式I的化合物治疗血栓形成、动脉粥样硬化、再狭窄、血小板聚集、凝血、癌症、炎症性疾病或呼吸道疾病的方法，包括给需要这种治疗的哺乳动物施与通式I的化合物。尤其是，本发明涉及使用通式I的化合物治疗血栓形成、动脉粥样硬化、再狭窄、高血压、心绞痛、心律失常、心衰、心肌梗塞、肾小球性肾炎、血栓形成性中风、血栓栓塞性中风、外周血管疾病、脑缺血、癌症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化、糖尿病、骨质疏松症、肾缺血、脑中风、肾炎、肺部和胃肠道炎性紊乱、反向气道梗阻、慢性哮喘或支气管炎的方法。预期本发明的化合物可以有效地同时治疗一种以上所列疾病。
在另一个方面，本发明涉及包含至少一种通式I的化合物和药物可接受载体的药物组合物。
在另一个方面，本发明涉及以下结构通式表示的新化合物
其中W和Z如下表中的定义：
详细说明：
本发明涉及具有一种或多种抗血栓形成、抗血小板聚集、抗动脉粥样硬化、抗再狭窄和抗凝血活性的取代的三环喜巴辛衍生物。
本发明化合物治疗的血栓形成相关疾病包括血栓形成、动脉粥样硬化、再狭窄、高血压、心绞痛、心律失常、心衰、心肌梗塞、肾小球性肾炎、血栓形成性和血栓栓塞性中风、外周血管疾病、其它心血管疾病、脑缺血、炎症性紊乱、神经变性性疾病和癌症，以及凝血酶及其受体起病理作用的其它紊乱。凝血酶受体拮抗剂也被称为蛋白酶活化受体(PAR)拮抗剂。
本发明的化合物也结合大麻酯(CB2)受体并在炎症性疾病或呼吸道疾病的治疗中有用，如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化、糖尿病、骨质疏松症、肾缺血、脑中风、脑缺血、肾炎、肺部和胃肠道炎症性紊乱和呼吸道紊乱如反向气道梗阻、慢性哮喘和支气管炎中的一种或多种。
通式I结构中的变量所优选的定义如下：
n1和n2总和优选是2-3，更优选3。特别优选的是n1是1和n2是1或n1是0和n2是3的通式I的化合物。
R优选是选自H，C1-C6烷基，卤素，羟基，氨基和(C1-C6)烷氧基组成的组的1个取代基。
R1和R2优选分别选自H和C1-C6烷基；更优选，R1是C1-C6烷基和R2是H。
R3优选是H，羟基，C1-C6烷氧基，卤素，C3-C6环烷基，-CN，C1-C6烷基，-COOR17或-NR4R5，更优选H，羟基或C1-C6烷基。
Het优选是通过碳原子环成员与B连接的吡啶基或喹啉基，和被选自W的1至4个取代基取代。
W优选选自-NR4R5，-NHCOR26，-NHSO2R16，R21-芳香基和杂芳香基。
R4和R5优选分别选自H，C1-C6烷基和C3-C6环烷基，或R4和R5共同是-(CH2)3-，-(CH2)4-或-(CH2)5-和与它们连接的氮形成环。
R8，R10和R11优选是H或(C1-C6)烷基。
R9优选是H，OH或C1-C6烷氧基。
B优选是反-CH＝CH-。
R16优选是C1-C6烷基。
R21优选是分别选自H，-CF3，-OCF3，卤素，-CN，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，-NH2和-CR29(＝NOR28)组成的组的1至3个取代基。
R22优选是-COR23，-S(O)2R31或-COOR27。
R23优选是C3-C7-环烷基；被选自卤素，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，羟基和C1-C6烷氧基组成的组的1至3个取代基取代的(C3-C7)-环烷基；(C3-C7)-环烷基(C1-C6)烷基；芳香基和芳香基-(C2-C6)烷基。更优选，R23是C3-C7-环烷基；(C3-C7)环烷基(C1-C6)烷基或芳香基-(C2-C6)烷基，特别是环丙基，环丙基甲基和苄基。
R27优选是C1-C6烷基，苯基，苄基，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)-烷基或(C3-C7)-环烷基。
R28优选是H或C1-C6烷基。
R31优选是C1-C6烷基，C3-C7-环烷基，芳香基或芳香基(C1-C6)烷基，更优选(C1-C6)烷基或芳香基(C1-C6)烷基，特别是(C1-C6)烷基或苄基。
除非特别限定，术语“烷基”或“低级烷基”是指1至6个碳原子的直链或支链烷基，“烷氧基”类似地是指具有1至6个碳原子的烷氧基。
氟烷基，二氟烷基和三氟烷基是指末端碳被1，2或3个氟原子取代的烷基链，如-CF3，-CH2CF3，-CH2CHF2或-CH2CH2F。卤代烷基是指被1至3个卤原子取代的烷基链。
“烯基”是指1至6个碳原子的直链或支链碳链，链中具有一个或多个双键，双键可以是共轭或非共轭的。
类似地，“炔基”是指1至6个碳原子的直链或支链碳链，链中具有一个或多个三键。当烷基、烯基、炔基链连接两个其它基团并因此成为二价时，使用术语亚烷基或亚烯基和亚炔基。卤代烯基是指被1至3个卤原子取代的烯链。
“环烷基”是指3至6个碳原子的饱和碳环，而“亚环烷基”是指相应的二价环，其中与其它基团连接点包括所有位置异构体和立体异构体。卤代环烷基是指被1至3个卤原子取代的环烷基环。
“杂环烷基”作为Het上的取代基是指4至7个原子的饱和环，包括3至4个碳原子和1至3个选自-O-，-S-和-NR7-的通过碳原子与分子的其余部分连接的杂原子。杂环烷基的实例是2-氮杂环丁烷基(2-azetidinyl)，2-吡咯烷基，四氢噻吩-2-yl，四氢-2-呋喃基，4-哌啶基，2-哌嗪基，四氢-4-吡喃基，2-吗啉基和2-硫代吗啉基。
“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
当R4和R5连接与它们所连接的氮原子形成环时，形成的环是1-吡咯烷基，1-哌啶基和1-哌嗪基，其中哌嗪环也可以在4-位氮被基团R7取代。
“二羟基(C1-C6)烷基”是指在两个不同碳原子上被两个羟基取代的烷基链。
“芳香基”是指苯基、萘基、茚基、四氢萘基或2，3-二氢化茚基。
“杂芳香基”是指5至10个原子的单环、双环或苯并稠合的杂芳香基，包括2至9个碳原子和分别选自N，O和S的1至4个杂原子，只要该环不包括相邻的氧和/或硫原子。也包括环氮的N-氧化物，以及其中环氮被C1-C4烷基取代而形成季铵的化合物。单环杂芳香基的实例是吡啶基，噁唑基，异噁唑基，噁二唑基，呋喃基，吡咯基，噻吩基，咪唑基，吡唑基，四唑基，噻唑基，异噻唑基，噻二唑基，吡嗪基，嘧啶基，哒嗪基和三唑基。双环杂芳香基的实例是萘啶基(如1，5或1，7)，咪唑并吡啶基，吡啶并[2，3]咪唑基，吡啶并嘧啶基和7-吖吲哚基。苯并稠合的杂芳香基是吲哚基，喹啉基，异喹啉基，2，3-二氮杂萘基，苯并噻吩基(即硫茚基)，苯并咪唑基，苯并呋喃基，苯并噁唑基和苯并呋咱基。包括所有位置异构体，如1-吡啶基，2-吡啶基，3-吡啶基和4-吡啶基。W取代的杂芳香基是指其中可取代环碳原子具有如上限定的取代基的这种基团，或其中相邻碳原子与亚烷基或亚甲基二氧基形成环。
术语“Het”例如是单环、双环和苯并稠合的杂芳香基，如以上刚刚限定的以及三环基如苯并喹啉基(如1，4或7，8)或菲咯啉基(如1，7；1，10；或4，7)。Het基团通过碳环成员与基团B连接，如Het是2-吡啶基，3-吡啶基或2-喹啉基。
相邻碳原子与亚烷基形成环的杂芳香基的实例是2，3-环戊烯吡啶，2，3-环己烯吡啶和2，3-环庚烯吡啶。
当R22是-COR23和R23是时，这个基团是氨基酸的酰根。是选自丙氨酸，甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，苯丙氨酸，色氨酸，甲硫氨酸，丝氨酸，苏氨酸，半胱氨酸，胱氨酸或酪氨酸的天然存在的氨基酸。
上面的陈述，其中例如R4和R5分别选自一组取代基，是指R4和R5分别选择，但也指分子中R4或R5变量出现一次以上的情况，那些出现的变量分别选择。本领域技术人员会认识到取代基的大小和性质将影响取代基可存在的数量。
本发明的化合物具有至少一个不对称碳原子，因此所有异构体，包括非对映异构体和转动异构体预期是本发明的一部分。发明包括纯化形式和混合形式(+)-和(-)-异构体，包括外消旋混合物。可以使用常规技术制备异构体，通过光学上纯的或光学上富含的起始材料进行反应或通过分离通式I化合物的异构体。
本发明典型的优选化合物具有下列立体化学：
首选具有该绝对立体化学的化合物。
本领域技术人员将领会到对于通式I的一些化合物，一种异构体将比其它异构体显示更大的药理活性。
含碱基的本发明化合物可与有机和无机酸形成药物可接受盐。可形成盐的合适酸的实例是盐酸，硫酸，磷酸，醋酸，柠檬酸，草酸，丙二酸，水杨酸，苹果酸，延胡索酸，琥珀酸，抗坏血酸，马来酸，甲磺酸和本领域熟知的其它无机酸和羧酸。将游离碱形式与足量所需要酸接触产生盐而制备该盐。用合适的稀释含水碱溶液如稀释含水碳酸氢钠处理该盐可以重新生成游离碱形式。游离碱形式在某些物理性质上与其盐形式多少有些不同，如在极性溶剂中的溶解度，但是对于本发明的目的，该盐却与其游离碱形式等同。
本发明的某些化合物是酸性的(如具有羧基的那些化合物)。这些化合物与无机和有机碱形成药物可接受盐。这些盐的实例是钠、钾、钙、铝、锂、金和银盐。也包括的是与药物可接受胺如氨、烷胺、羟烷胺、N-甲葡糖胺等等形成的盐。
本发明的化合物通常由本领域已知的方法制备，例如下述的方法。在下面提供的一般步骤和实施例中，使用下列缩写：Et是乙基，Me是甲基，Bn是苄基，Ac是乙酰基，AcOH是醋酸，THF是四氢呋喃，DMF是N，N-二甲基甲酰胺，rt是室温，Davis试剂是(1S)-(+)-(10-樟脑磺酰基)-oxaziridine，LHMDS是双(三甲硅基)锂胺，4-二甲胺吡啶是DMAP，1，8-二吖二环[5.4.0]十一-7-烯是DBU，1，3-二环己基碳二亚胺是DCC，和碘化三甲基硅是TMSI。
通式I-A的化合物，其中B是-CH＝CH-，Het是W取代的吡啶基，R，R1，R3，R8，R9，R10和R11每一个是氢，R2是甲基，和R22是-CO2Et，可如方案1所示制备：
方案1：
乙醛1通过两步转化转变成二烯酸2。使用草酰氯使该酸转变成其酰氯，接着它与醇3结合提供酯4。炔选择性还原为顺-烯烃5，它进行热环化得到产物6。脱苄基，后是双键还原，得到三环酸7。该酸通过其酰氯转变成醛IIB，它与磷酸酯III结合得到I-A。
在通式I-A的化合物中，乙基氨基甲酸酯基可被断裂得到胺IA-1，它可用广泛的亲电子试剂如酰氯、磺酰氯、异氰酸酯，氯甲酸酯等处理得到酰胺、磺酰胺、脲和氨基甲酸酯等，如方案2所示。
方案2：
通式IIB的醛也可以与磷酸酯8结合提供I-A3，它可转变为氨基甲酸酯I-A4，如方案3所示。I-A3和I-A4都可转变成多种类似物，使用方法如Suzuki偶联，Stille偶联，Buchwald胺化等(方案4)。
方案3：
方案4：
芳香基溴I-A3也可转变成苯胺I-A5，它可用很多容易使用的亲电子试剂如酰氯、磺酰胺，异氰酸酯等处理得到相应衍生物I-A6，如方案5所示。
方案5：
内酯部分的α位置可以官能化，例如R3是氢的通式I-A的化合物用Davis试剂((1S)-(+)-(10-樟脑磺酰基)-oxaziridine)和LHMDS处理后可以转变成R3是OH的相应化合物。
本领域技术人员已知的类似方法可用于制备包括其它任选取代的Het基团和其它“R”变量的化合物。本领域技术人员也将认识到这些方法等同适用于制备光学上活性或外消旋化合物。
R9是氢的通式I的化合物经与氧化剂如SeO2加热可转变成R9是羟基的相应化合物。
W是芳香基或R21-芳香基的通式III的磷酸酯可通过类似于下面马上要描述的制备三氟甲基-苯基取代化合物-IIIa的方法制备。
使用triflic酸酐，商业可获得的羟基吡啶衍生物可转变成相应的triflate，它接着在Pd(0)存在下在Suzuki条件下与商业可获得的硼酸结合。用n-丁基锂处理，随后用二乙基磷酰氯淬火，将所得产物转变成磷酸酯。
上述方法的起始材料是商业上可获得的，本领域已知的，或可由本领域熟知的步骤制备。
不参与上述方法的反应性基团可以用常规保护性基团在反应过程中进行保护，在反应后可用标准程序去除保护性基团。下表A显示了一些典型的保护性基团。
表A
下面是制备起始材料和通式I的化合物的实施例。
制备1
步骤1：
在-78℃，向含5，6-二氢-2H-吡啶-1，3-二羧酸1-乙酯3-甲酯(35.4g，166mmol)的CH2Cl2(600ml)溶液中缓慢加入含1M DIBAL(365ml，365mmol，2.2eq.)的CH2Cl2溶液，混合物搅拌1.5小时。添加1升饱和水淬灭反应。分离Rochelle盐和有机层。用2×250mlCH2Cl2萃取水层，用500ml盐水洗涤合并的有机层，在MgSO4上干燥，过滤，浓缩，用40％EtOAc-hex层析所得粗产品得到17g(55％)油状醇。
在室温，向上述醇(17.0g，92mmol)的150ml CH2Cl2溶液中添加NaHCO3(15.4g，183mmol，2eq.)和Dess-Martin试剂(46.7g，110mmol，1.2eq.)，将悬浮液搅拌45分钟。向其中添加300mlEt2O和Na2S2O3.5H2O(70g，282mmol，2eq.)溶液和NaHCO3(15.4g，183mmol，2eq.)在600ml H2O中的溶液。剧烈搅拌混合物直到两层变得清晰。分离有机层并用2×150ml Et2O萃取水层。用Na2S2O3/NaHCO3水溶液和盐水每种各300ml洗涤合并的有机层，在MgSO4上干燥，过滤，并蒸发得到15.3g(91％)油。HRMS：184.0966(MH+)。
步骤2：
在0℃，向60％NaH(4.35g，109mmol，1.3eq.)的THF(300ml)悬浮液中滴加三乙基磷酰醋酸酯(20ml，109mmol，1.3eq)，将混合物在0℃搅拌30分钟。向其中加入步骤1的产物溶液(15.3g，83.5mmol)，将混合物在0℃搅拌30分钟。添加600ml NH4Cl水溶液淬灭反应，蒸发THF，用3×200ml Et2O萃取含水浆液。用200ml盐水洗涤合并的有机层，在MgSO4上干燥，过滤，浓缩，用15％EtOAc-hex层析得到19.9g(94％)油。MS：254(MH+)
步骤3：
向含步骤2的产物(19.9g，79mmol)的CH3OH，THF和H2O每种100ml的溶液中添加KOH(13.3g，237mmol，3eq.)，混合物在室温搅拌2小时。用200ml水稀释混合物，用1N HCl酸化至约pH 2，并用3×200ml EtOAc萃取。用各200ml的水和盐水洗涤合并的有机层，在MgSO4上干燥，过滤，蒸发得到17.0g(96％)浅黄色固体。HRMS：226.1083(MH+)
步骤4：
在室温，向含二烯酸(17.0g，76mmol)的400ml CH2Cl2溶液中添加草酰氯(13.2ml，151mmol，2eq.)和DMF(120μl，1.6mmol，2mol％)。混合物搅拌1小时，浓缩，用100ml无水甲苯蒸发得到酰氯。
向含上述酰氯的200ml CH2Cl2溶液中添加DMAP(925mg，7.6mmol，0.1eq.)，步骤3产物(15.4g，75mmol，1.0eq.)的15ml CH2Cl2溶液，，随后是Et3N(12.7ml，91mmol，1.2eq.)。在0℃下搅拌混合物1.5小时，然后用600ml Et2O稀释。用200ml水，2×200ml 1NHCl，200ml NaHCO3水溶液和200ml盐水连续洗涤溶液。在无水MgSO4上干燥，过滤，浓缩并用20％EtOAc-hex层析得到20g(78％)树脂。HRMS：412.1764(MH+)
步骤5：
在1大气压H2下，搅拌含步骤4的产物(10g，29mmol)，喹啉(700μl，5.9mmol，0.2eq.)和Lindlar催化剂(1.0g，10wt％)的150mlTHF悬浮液2.5小时。类似地用Lindlar催化剂还原另一批10g步骤4的产物。将两批混合，通过C盐过滤，蒸发，残余物再次溶于600mlEtOAc中。用3×200ml 1N HCl和200ml盐水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤，蒸发得到20g树脂，其立即用于步骤6的Diels-Alder反应。HRMS：414.1919(MH+)。
步骤6：
将含步骤5产物(20.0g)的500ml甲苯溶液在压力容器中在185℃下加热6小时。冷却至室温，用DBU(1.8ml，12mmol，0.2eq.)处理1小时，浓缩并用25％EtOAc-hex层析得到11.3g(56％)环化的外型(exo)产物。HRMS：414.1923(MH+)。
步骤7：
在1大气压H2下搅拌含步骤6产物(11.2g，27mmol)，10％Pd-C(1.2g，10wt％)的200ml EtOAc悬浮液直到反应完全。通过C盐过滤，浓缩并重新溶于200mlCH3OH。向其中添加900mg PtO2，悬浮液在50大气压H2下在帕尔容器中摇动。混合物通过C盐过滤，浓缩得到8.5g树脂。HRMS：326.100(MH+)。
步骤8：
在室温下，向含步骤7产物(415mg，1.28mmol)的10ml CH2Cl2溶液中添加草酰氯(225μl，2.58mmol，2eq.)，随后是1滴DMF。将溶液在室温下搅拌1小时，此时没有气体放出。用无水甲苯浓缩和共沸得到酰氯。将酰氯溶于6ml无水甲苯，冷却至0℃，加入Pd(PPh3)4(74mg，0.064mmol，5mol％)，随后是Bu3SnH(520μl，1.93mmol，1.5eq.)。混合物在0℃搅拌3小时，浓缩并用50％EtOAc-hex层析得到360mg(91％)树脂状标题化合物。MS：310.1(MH+)。
制备2
使用用于上述相应胺类似物的类似步骤使3-甲酰基-5，6-二氢-2H-吡喃转变成三环醛。
制备3
反应方案：
制备1 制备3
在0℃，向含磷酸酯(3.49g，11.3mmol，2eq.)的THF(50ml)溶液中添加含1M LHMDS(11.3ml，11.3mmol，2eq.)的THF溶液。搅拌10分钟后，加入Ti(OPr)4(3.4ml，11.3mmol，2eq.)，随后是含制备1(1.75g，5.7mmol，1eq.)的THF(10ml)溶液，混合物在N2下搅拌1小时。将反应混合物倒入5％酒石酸水溶液(100ml)并用EtOAc(3×100ml)萃取。用盐水(150ml)洗涤合并的有机层，用MgSO4干燥，过滤和蒸发至干燥。进行硅胶层析纯化，用5％CH3OH-CH2Cl2洗脱得到1.80g(70％)浅黄色泡沫状标题化合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)：8.59(d，J＝4.8Hz，1H)，7.76(dd，J＝3Hz，8.4Hz，1H)，7.06(d，J＝8.4Hz，1H)，6.56(dd，J＝9.6Hz，15.2Hz，1H)，6.45(d，J＝15.2Hz，1H)，4.73(m，1H)，4.35-4.05(m，2H)，4.12(q，J＝6.8Hz，2H)，2.73-2.69(m，2H)，2.47-2.35(m，3H)，1.96(q，6.0Hz，1H)，1.74(d，J＝12.8Hz，1H)，1.41(d，J＝6.0Hz，3H)，1.35-1.18(m，7H)，1.10-0.98(m，1H)。
制备4
向制备3(0.270g，0.58mmol)的CH2Cl2(15ml)溶液中添加TMSI(624μl，4.4mmol，7.5eq.)，将混合物加热至回流。6小时后，将混合物倒入含水NaHCO3(30ml)并用CH2Cl2(3×15ml)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干燥，得到209mg胺(92％)。
在0℃，向含上述产物的CH2Cl2(15ml)中添加Et3N(97μl，0.69mmol，1.3eq.)和氯甲酸2-甲氧基乙酯(68μl，5.9mmol，1.1eq.)；允许混合物缓慢升温至室温，同时在N2下搅拌。1小时后，将混合物倒入水中(30ml)，用CH2Cl2(3×15ml)萃取。合并的有机层用盐水(30ml)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶层析纯化，用3％CH3OH-CH2Cl2洗脱得到183mg白色固体的标题化合物(69％)。1H NMR(400MHz，CDCI3)：8.59(d，J＝2.4Hz，1H)，7.76(dd，J＝2.4，8.2Hz，1H)，7.06(d，J＝8.3Hz，1H)6.56(dd，J＝9.6，15.4Hz，1H)，6.45(d，J＝15.4Hz，1H)，4.72(m，1H)，4.1-4.28(m，4H)，3.59(t，J＝4.49Hz，2H)，3.38(s，3H)，2.75-2.68(m，2H)，2.32-2.51(m，3H)，1.96(dd，J＝6.3，12.8Hz，1H)，1.73(d，J＝12.5Hz，1H)，1.41(d，J＝5.95Hz，3H)，1.37-1.00(m，4H)。
制备5
步骤1：
根据McGinnis和Robinson，J.Chem.Soc.，404(1941)，407中的步骤制备噻喃enal。
步骤2：
在0℃，向含60％NaH(6.3g，158mmol，1.3eq.)的THF(200ml)悬浮液中添加甲基二乙基磷酰醋酸酯(29ml，158mmol，1.3eq.)，混合物在0℃搅拌30分钟。然后将溶液转移到含步骤1产物(15.6g，122mmol)的THF(100ml)溶液中并在0℃搅拌1小时。添加NH4Cl水溶液(500ml)淬灭反应，蒸发THF。用Et2O(3×200ml)萃取水相，用H2O和盐水(每种200ml)洗涤合并的有机层。溶液在MgSO4上干燥，浓缩，用5％EtOAc-己烷层析所得残液得到13.0g(58％)油。1H NMR(400MHz，CDCl3)7.26(d，J＝15.9Hz，1H)，6.26(t，J＝4.4Hz，1H)，5.78(dd，J＝15.9，0.6Hz，1H)，3.75(s，3H)，3.25-3.23(m，2H)，2.71(t，J＝5.8Hz，2H)，2.57-2.53(m，2H)。
步骤3：
向含步骤2产物(13.0g，70.6mmol)的THF和MeOH(每种50ml)溶液中添加含KOH(11.9g，212mmol，3.0eq.)的H2O(50ml)溶液。混合物在室温搅拌1小时，用H2O(100ml)稀释并用1N HCl酸化。用EtOAc(3×200ml)萃取水相，用H2O和盐水(每种300ml)洗涤合并的有机层。溶液在MgSO4上干燥，过滤并蒸发得到11.66g(97％)浅黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)7.34(d，J＝15.6Hz，1H)，6.32(t，J＝4.4Hz，1H)，5.78(d，J＝15.6Hz，1H)，3.26(d，J＝1.6Hz，2H)，2.72(t，J＝5.8Hz，2H)，2.59-2.55(m，2H)。
步骤4：
向含4(5.2g)的EtOAc(120ml)溶液中添加Lindlar催化剂(520mg)，在1大气压H2下搅拌悬浮液。45分钟后添加另一部分催化剂(500mg)。将混合物再搅拌30分钟。使混合物过滤通过C盐并蒸发得到5.2g(99％)的所要的烯烃。1H NMR(400MHz，CDCl3)7.38-7.26(m，5H)，6.32(dd，J＝11.9，6.6Hz，1H)，5.86(d，J＝12.0Hz，1H)，5.18(s，2H)，5.12-5.07(m，1H)，3.20(br s，1H)，1.34(d，J＝6.6Hz，3H)。
步骤5：
在0℃下，向含步骤3产物(2.45g，14.39mmol)的CH2Cl2(60ml)溶液中添加DCC(3.27g，15.85mmol，1.1eq.)，随后加DMAP(352mg，2.88mmol，0.2eq.)，将混合物在0℃搅拌30分钟。向其中添加含3.27g(15.85mmol，1.1eq.)步骤4的醇的10ml CH2Cl2溶液，将混合物在0℃搅拌5小时，在室温1小时。用350ml Et2O稀释溶液并用2×200ml柠檬酸水溶液，200ml NaHCO3水溶液和200ml盐水洗涤。溶液在MgSO4上干燥，过滤，浓缩，所得残液用6％EtOAc-hex层析得到2.1g(41％)树脂。1H NMR(400MHz，CDCl3)，7.38-7.32(m，5H)，7.45(d，J＝16.0Hz，1H)，6.38-6.34(m，1H)，6.26(t，J＝4.6Hz，1H)，6.21(d，J＝11.6Hz，1H)，6.19(d，J＝11.2Hz，1H)，5.85(dd J＝11.6，1.2Hz，1H)，5.76(d，J＝16.0Hz，1H)，5.18(d，J＝1.2Hz，2H)，3.24(d，J＝2.0Hz，2H)，2.71(t，2H，J＝5.6Hz，2H)，2.56-2.52(m，2H)，1.41(d，J＝6.4Hz，3H)。
步骤6：
将含步骤5产物(2.1g，5.85mmol)的m-二甲苯(50ml)溶液在密闭管中在200℃加热6小时。将溶液冷却至室温并与DBU(1781，1.19mmol，0.2eq.)一起搅拌1小时，浓缩，用15％EtOAc-己烷层析得到1.44g(69％)所要的外型产物。1H NMR(400MHz，CDCl3)7.39-7.35(m，5H)，5.46(br s，1H)，5.16(ABq，J＝21.6，12.0Hz，2H)，4.42(dq，J＝9.2，6.0Hz，1H)，3.36-3.33(m 2H)，3.08(dd，J＝14.4，2.4Hz，1H)，2.85(ddd，J＝13.9，12.4，2.5Hz，1H)，2.72-2.57(m，4H)，2.27-2.21(m，1H)，1.47-1.25(m，1H)，1.12(d，J＝6.4Hz，3H)。
步骤7：
在-78℃，向含步骤6产物(750mg，2.09mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液中添加含BBr3的CH2Cl2(1M溶液4.2ml)。溶液在-78℃搅拌30分钟和在0℃搅拌30分钟，然后倒入K2CO3(100ml)水溶液中。用Et2O(2×50ml)洗涤水相，用K2CO3水溶液(50ml)反萃取有机层。用1NHCl酸化合并的水相并用EtOAc(3×50ml)萃取。用盐水(50ml)洗涤EtOAc层，在MgSO4上干燥，过滤并蒸发得到500mg(89％)酸。1H NMR(400MHz，CDCl3)5.50(br s，1H)，4.47(dq，J＝9.6，6.0Hz，1H)，3.43-3.39(m，1H)，3.36(d，J＝15.6Hz，1H)，3.10(dd，J＝14.0，2.4Hz，1H)，2.91-2.84(m，1H)，2.82-2.77(m，1H)，2.70(dd，J＝10.6，4.2Hz，1H)，2.69-2.63(m，1H)，2.57-2.52(m，1H)，2.34-2.29(m，1H)，1.53-1.42(m，1H)，1.34(d，J＝6.0Hz，3H)。
步骤8：
向含步骤7产物(500mg，1.86mmol)的MeOH(30ml)溶液中添加AcOH(3ml)和PtO2(250mg)，在40psi H2下在帕尔容器中振荡悬浮液1.5天。催化剂用C盐垫过滤，将溶液浓缩，将所得残液溶于AcOH-MeOH-CH2Cl2混合物(0.5∶2∶97.5 v/v/v/)并过滤通过短SiO2柱，得到400mg(79％)静止时固化的树脂状还原产物。1H NMR(400MHz，CDCl3)4.68(dq，J＝9.4，5.9Hz，1H)，2.76-2.69(m，2H)，2.60-2.55(m，3H)，2.49(d，J＝11.6Hz，1H)，2.10(br s，1H)，1.93(ddd，J＝13.5，6.0，2.7Hz，1H)，1.60-1.48(m，2H)，1.45-1.19(m，3H)，1.33(d，J＝5.6Hz，3H)。
步骤9：
向含步骤8产物(97mg，0.36mmol)的CH2Cl2(4ml)中添加草酰氯(94μl)，随后是1滴DMF。溶液在室温搅拌1小时并浓缩得到粗酰氯，将其溶于甲苯(3ml)并冷却至0℃。添加Pd(PPh3)4(42mg，0.04mmol，0.1eq.)，随后是Bu3SnH(94μl)。混合物在0℃搅拌3小时，浓缩并用25％EtOAc-己烷层析得到73mg(80％)白色固体的醛。1H NMR(400MHz，CDCl3)9.75(d，J＝2.8Hz，1H)，4.62(dq，J＝9.7，6.0Hz，1H)，2.8-2.70(m，2H)，2.65-2.55(m，3H)，2.50(d，J＝7.2Hz)，2.10(ddd，J＝13.2，6.4，3.0Hz，1H)，1.94(ddd，J＝13.6，6.0，3.0，1H)，1.69(dq，J＝10.9Hz，3.00Hz，1H)，1.58-1.48(m，1H)，1.42-1.20(m，3H)，1.33(d，J＝6.4Hz，3H)。
制备6
步骤1：
将δ-戊内酰胺溶于THF(250ml)并冷却至-78℃。滴加n-BuLi(28.44ml，1.1eq，2.5M的己烷溶液)。将混合物搅拌30分钟，然后添加乙基氯甲酸酯(6.49ml，1.05eq)并使混合物加温至室温。添加水，用EtOAc萃取有机层。干燥合并的有机层并浓缩得到11.57g油。1H NMR(400MHz，CDCl3)4.29(2H，q，J＝7.2Hz)，3.71(2H，br t，J＝5.6Hz)，2.50(2H，br t，J＝6.8Hz)，1.83(4H，br s)，1.33(3H，t，J＝7.2Hz)。
步骤2：
步骤1的产物溶于THF(250ml)中，溶液冷却至-78℃。滴加LHMDS(65ml，1eq，1M的THF溶液)，所得混合物搅拌30分钟。滴加含2-[N，N-双(三氟甲磺酰基)-氨基]-5-氯吡啶的THF(73ml)。所得混合物搅拌10分钟并允许加温至室温。添加水并用EtOAc萃取有机层。干燥合并的有机层并浓缩。层析(含5-10％EtOAc的己烷)得到12.0g油。1H NMR(400MHz，CDCl3)5.32(1H，t，J＝3.6Hz)，4.24(2H，q，J＝7.2Hz)，3.66(2H，m)，2.27(2H，m)，1.78(2H，m)，1.30(3H，J＝7.2Hz)。
步骤3：
将甲硼烷二甲基硫化物配合物(5.82ml，1.05eq)溶于THF并冷却至0℃。滴加(1R)-(+)-α-蒎烯(22.56ml，2.32eq)，混合物在0℃搅拌1小时和在室温搅拌2小时。混合物冷却至-35℃，滴加乙基丙炔酸酯(6.2ml，1eq)；混合物在-35℃搅拌45分钟和在室温搅拌3小时。添加乙醛(48ml)，混合物在40-41℃加热过夜。在降低的压力下小心去除挥发性的有机成分得到29g产物和α-蒎烯的混合物(NMR测定是1∶2.3)。产物的1H NMR(400MHz，CDCl3)特征峰包括6.95(1H，d，J＝18.0Hz)，6.48(1H，d，J＝18.0Hz)，4.12(2H，q，J＝7.2Hz)，3.60(4H，q，J＝7.2Hz)。
步骤4：
Pd(OAc)2(592mg，10％)和2-(二-t-丁基膦基)联苯(1.57g，20％)溶于THF(100ml)。混合物在N2下搅拌10分钟，然后添加含步骤2产物(8g)和步骤3产物(20g，1.5eq)的混合物的THF(32ml)。接着添加KF(4.6g)，混合物在55℃加热过夜。允许混合物冷却至室温并用EtOAc稀释。用NaHCO3(饱和)，NH4Cl(饱和)，水洗涤混合物，最后用MgSO4干燥。在降低的压力下去除溶剂，随后柱层析(含10％EtOAc的己烷)得到6g(89％)无色油。1H NMR(400MHz，CDCl3)7.21(1H，d，J＝15.6Hz)，5.88(1H，d，J＝15.6Hz)，5.69(1H，t，J＝4.0Hz)，4.15(4H，m)，3.59(2H，m)，2.26(2H，m)，1.82(2H，m)，1.25(6H，m)。
步骤5：
步骤4产物溶于MeOH和THF的1∶1的混合物(66ml)中。添加1N NaOH(52ml)溶液，混合物搅拌2.5小时直到无起始原料剩余。
用2N HCl使混合物酸化至pH1并用EtOAc萃取。用NH4Cl(饱和)洗涤萃取物，干燥并在降低压力下浓缩得到5g固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)7.30(1H，d，J＝15.2Hz)，5.87(1H，d，J＝15.2Hz)，5.73(1H，m)，4.14(2H，m)，3.60(2H，m)，2.70(2H，m)，1.82(2H，m)，1.23(3H，m)。
实施例1
制备5实施例1
在0℃，向含磷酸酯溶液的(156mg，0.42mmol，2.0eq.)THF(1ml)中添加含2.5M BuLi的己烷溶液(170μl，0.42mmol，2.0eq.)混合物搅拌30分钟。向其中添加含制备5(53m，0.21mmol)的THF(1.5ml)溶液，混合物在0℃搅拌1小时。添加NH4Cl水溶液(20ml)淬灭反应，蒸发THF，用CH2Cl2(3×10ml)萃取水相。用NaHCO3水溶液(15ml)和盐水(15ml)洗涤混合有机层，用MgSO4干燥，过滤，浓缩并用40％EtOAc-hex层析得到90mg(91％)树脂。HRMS：474.1721。
通过下列步骤，实施例1的噻喃化合物可转变成相应亚砜(1A)和砜(1B)：
向含实施例1A(70mg，0.15mmol)的AcOH(2ml)溶液中添加CH3SO3H(50μl，5eq.)和NaBO3.4H2O(30mg，0.19mmol，1.3eq.)，混合物在室温搅拌过夜。蒸发醋酸，所得残液加入NaHCO3-Na2SO3混合物水溶液(25ml)并用CH2Cl2(3×15ml)萃取。用盐水(20ml)洗涤合并的有机层，用MgSO4干燥，过滤，浓缩并用制备型薄层层析纯化得到11mg亚砜异构体1，4mg亚砜异构体2和36mg砜。
亚砜异构体1：HRMS：490.1661(MH+)；
亚砜异构体2：1H NMR(400MHz，CDCl3)：8.80(d，J＝2.4Hz，1H)，7.87(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H)，7.81(s，1H)，7.76(d，J＝7.6Hz，1H)，7.67(d，J＝7.6Hz，1H)，7.61(t，J＝7.8Hz，1H)，7.27(d，J＝9.6Hz，1H)，6.67-6.55(m，2H)，4.78-4.71(m，1H)，3.44-3.40(m，1H)，3.35(dt，J＝12.1，2.8Hz，1H)，2.78-2.71(m，1H)，2.64-2.57(m，1H)，2.52-2.36(m，3H)，2.26-2.21(m，1H)，2.04(ddd，J＝13.5，6.5，2.7Hz，1H)，1.45(d，J＝6.0Hz，3H)，1.60-1.25(m，6H)
亚砜：HRMS：506.1612(MH+)。
实施例2
一般步骤：
在0℃，向含磷酸酯(2eq)的THF溶液中添加含2.5M BuLi的己烷(2.0eq.)。搅拌大约2小时后，添加Ti(OiPr)4(2.0eq)，随后添加含醛的THF(1.0eq.)溶液。混合物在室温搅拌30分钟，用酒石酸钾钠水溶液稀释并用EtOAc萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用MgSO4干燥，过滤，浓缩和用柱层析纯化得到产物。
用这个一般步骤制备下列通式的化合物：
其中W和Z如下表中的定义：
实施例3
在-78℃，向含实施例2D(380mg，0.79mmol)的THF(7ml)溶液中添加含1M LHMDS的THF(0.95ml，0.95mmol，1.2eq.)；混合物在-78℃搅拌30分钟，在0℃搅拌30分钟，然后冷却回-78℃。向其中添加含(1S)-(+)-(10-樟脑磺酰基)oxaziridine(275mg，1.1mmol，1.5eq.)的THF(2ml)溶液。溶液搅拌过夜，同上允许加温至室温。用NH4Cl水溶液(100ml)稀释，蒸发THF，用EtOAc(3×30ml)萃取水相。用盐水(30ml)洗涤合并的有机层，用MgSO4干燥，过滤，浓缩并用2％CH3OH-CH2Cl2层析，得到94mg树脂。HRMS：495.2291(MH+)
实施例4
一般步骤：
氨基甲酸酯和三甲硅碘(5eq.)溶液回流大约5小时，然后用NaHCO3水溶液稀释。用CH2Cl2萃取水层，盐水洗涤合并的有机层，MgSO4干燥，过滤，浓缩得到胺。
用Et3N(5eq.)和酰氯(3eq)处理含上面的胺的CH2Cl2溶液，反应用薄层层析跟踪。反应完成后，进行标准水处理，用制备型薄层层析或柱层析纯化粗产物得到酰胺。
胺可以用很多亲电子试剂如磺酰氯、异氰酸酯、氯甲酸酯和醛等处理，得到适当的衍生物。用这个路线制备下列通式的化合物：
其中W和R22如下表中的定义：
实施例5
一般步骤：
含制备3或4的产物和W-B(OH)2，其中W任选被苯基或杂芳香基取代，K2CO3(4eq.)和Pd(PPh3)4(5至10mol％)的PhMe-EtOH-H2O(4∶2∶1v/v/v)溶液在100℃加热，直到反应完全。用水稀释反应混合物，用EtOAc萃取，用盐水洗涤有机层，MgSO4干燥，过滤，浓缩并层析纯化得到期望的化合物。该化合物可进一步衍变。
使用这个方法，可制备下列通式的化合物
其中R23和W如下表中的定义：
实施例6
向含制备3(100mg，0.22mmol)的甲苯(5ml)溶液中添加Pd(OAc)2(5mg，0.022mmol，0.1eq.)，(S)-(-)-2，2′-双(二苯膦基)-1，1′-联萘(13mg，0.022mmol，0.1eq.)和2-三丁基甲锡烷基吡啶(119mg，0.32mmol，1.5eq.)。混合物用N2鼓泡5分钟，然后在压力管中加热至100℃。16小时后，混合物倒入含水NH4Cl(15ml)，并用EtOAc(3×15ml)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发干燥。进行硅胶层析纯化，用2％CH3OH-CH2Cl2洗脱，随后进行硅胶层析，用60％EtOAc-hex洗脱，产生30mg(30％)产物。HRMS：462.2401(MH+)
使用类似步骤，制备下列化合物6A：
实施例6A：MS：468(MH+)
实施例7
向含制备3(100mg，0.22mmol)的干甲苯(5ml)溶液中添加吡咯烷(36μl，0.43mmol，2eq.)，磷酸钾(137mg，0.65mmol，5eq.)，Pd(OAc)2(3mg，0.014mmol，0.065eq.)和2-(二环己基-膦基)联苯(10mg，0.028mmol，0.13eq.)。混合物用N2鼓泡5分钟，然后在压力管中加热至100℃。16小时后，混合物倒入水(15ml)中并用EtOAc(3×15ml)萃取。用盐水(15ml)洗涤合并的有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发干燥。用制备型薄层层析纯化，用5％CH3OH-CH2Cl2洗脱，产生10mg固体。HRMS：454.2696(MH+)
使用类似步骤，制备下列化合物：
实施例7A：HRMS：440.2558(MH+)
实施例8
向含制备3(1.0g，2.18mmol)的乙二醇二甲基醚(25ml)的溶液中添加二苯酮亚胺(550μl，3.27mmol，1.5eq.)，磷酸钾(1.51g，6.6mmol，3eq.)，三(二苄基亚基丙酮)二钯(0)(200mg，0.22mmol，0.1eq.)和2-(二环己基膦基)联苯(153mg，0.44mmol，0.2eq.)。混合物用N2鼓泡5分钟，然后在压力管中加热至100℃，4小时。混合物接着通过C盐过滤并蒸发干燥。向含该残液的CH2Cl2(25ml)中添加浓HCl水溶液(545μL，6.6mmol，3eq.)，混合物在室温搅拌。16小时后，用CH2Cl2(25ml)稀释混合物，倒入1N NaOH水溶液(50ml)并用CH2Cl2(3×50ml)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发干燥。用硅胶层析纯化，用2％CH3OH-CH2Cl2洗脱，产生550mg(63％)标题化合物。MS：400(MH+)
用亲电子试剂如酰氯、磺酰氯、异氰酸酯等处理实施例8的化合物，得到下列化合物。
其中-NHC(O)R26如下表中的定义：
实施例9
使用制备6的产物和制备1，制备3和实施例5的一般步骤制备下列结构的化合物。
其中W如下表中的定义：
本发明也涉及药物组合物，包括至少一种本发明通式1的化合物和药物可接受载体。优选，组合物中存在一种或两种通式1的化合物，更优选一种通式1的化合物。通式的化合物可以以任何常规口服剂量形式给予，如胶囊、片剂、粉末、扁囊剂、悬浮液或溶液。可以使用常规药物可接受赋形剂和添加剂和常规技术制备该制剂和药物组合物。这种药物可接受赋形剂和添加剂包括无毒相容充填剂、粘结剂、粉碎剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、调味剂、增稠剂、着色剂、乳化剂等等。
用于疾病或上面引用情况治疗的通式的化合物的每日剂量是每天大约0.001至大约100mg/kg体重，优选大约0.001至大约10mg/kg。对于70kg的一般体重，剂量水平因此是每天大约0.1至大约700mg药物，给予单次剂量或2-4次分开剂量。然而，精确剂量由照料的临床医师确定并依赖于所给予化合物的效力、患者的年龄、体重、情况和反应。
下列制剂示例了本发明的一些剂量形式。每一个中，术语“活性化合物”指通式1的化合物。
实例A-片剂
编号 成分 mg/片 mg/片
1 活性化合物 100 500
2 乳糖USP 122 113
3 米淀粉，食品级，纯净水中含10％糊剂 30 40
4 玉米淀粉，食品级 45 40
5 硬脂酸镁 3 7
总计 300 700
制备方法
在适当的混合器中混合第1和2项10-15分钟。用第3项将混合物变成粒状。如果需要，通过粗筛(如1/4″，0.63cm)研磨潮湿颗粒。干燥潮湿颗粒。如果需要过筛干燥颗粒并与第4项混合10-15分钟。添加第5项并混合1-3分钟。在合适的片剂机器上压缩混合物至适当大小和重量。
实例B-胶囊
编号 成分 mg/片 mg/片
1 活性化合物 100 500
2 乳糖USP 106 123
3 玉米淀粉，食品级 40 70
5 硬脂酸镁NF 4 7
总计 250 700
制备方法
在适当的混合器中混合第1、2和3项10-15分钟。添加第4项并混合1-3分钟。在合适的胶囊化机器上将混合物填入合适的两段硬明胶胶囊中。
通式1化合物的活性可由下列步骤确定。
凝血酶受体拮抗剂的体外测试步骤：
[3H]haTRAP的制备
A(pF-F)R(ChA)(hR)(12-Y)-NH2(1.03mg)和10％Pd/C(5.07mg)悬浮于DMF(250μl)和二异丙乙胺(10μl)中。容器与氚线连接，在液氮中冷冻并抽空。接着向瓶中添加氚气(342mCi)，在室温搅拌2小时。反应完成后，去除多余的氚，用DMF(0.5ml)稀释反应的肽溶液并过滤去除催化剂。用水稀释收集到的粗肽的DMF溶液并冻干去除不稳定的氚。固体肽再次溶于水中并重复冻干过程。含氚肽([3H]haTRAP)溶于0.5ml的0.1％含水TFA并用下列条件通过HPLC纯化：柱，Vydac C18，25cm×9.4mm I.D.；移动相，(A)含0.1％TFA的水溶液，(B)含0.1％TFA的CH3CN；梯度，(A/B)从100/0至40/60进行30分钟；流速，5ml/分；检测，UV在215nm。[3H]haTRAP的放射化学纯度是99％，由HPLC分析。得到一批14.9mCi产品，特异活性是18.4Ci/mmol。
血小板膜的制备
用Natarajan等(Natarajan等，Int.J.Peptide Protein Res.45：145-151(1995))方法的改进方法从新泽西血液中心(East Orange，NJ)得到的48小时内收集的20单位血小板浓缩物制备血小板膜。所有步骤在4℃，许可生物冒险安全条件下实施。血小板在4℃以100×g离心20分钟去除红细胞。倒出上清并以3000×g离心15分钟以沉淀血小板。血小板重新悬浮于10mM Tris-HCl，pH 7.5，150mM NaCl，5mM EDTA，至终体积大约200ml，在4400×g下离心10分钟。再重复该步骤两次。将血小板重新悬浮于5mM Tris-HCl，pH 7.5，5mMEDTA，至终体积大约30ml，在Dounce匀浆器中打击20次成为匀浆。膜在41,000×g下沉淀，重新悬浮于40-50ml 20mM Tris-HCI，pH 7.5，1mM EDTA，0.1mM二硫苏糖醇，10ml的部分冷冻于液氮中并储存在-80℃。为了完成膜的制备，融化这部分，混合，用Dounce匀浆器打击5次成为匀浆。将膜沉淀并在10mM三乙醇胺-HCl，pH 7.4，5mM EDTA中洗涤3次，并重新悬浮于20-25ml 50mM Tris-HCl，pH7.5，10mM MgCl2，1mM EGTA和1％DMSO。膜部分冷冻于液氮中并储存在-80℃。将膜稳定至少3个月。20单位血小板浓缩物典型产生250mg膜蛋白。用Lowry试验(Lowry等，J.Biol.Chem.193：265-275(1951))确定蛋白浓度。
高产量凝血酶受体放射配体结合实验
使用Ahn等(Ahn等，Mol.Pharmacol.，51：350-356(1997))的凝血酶受体放射配体结合实验的改进方法筛选凝血酶受体拮抗剂。实验在96孔Nunc板(类别号269620)上进行，实验终体积200μl。血小板膜和[3H]haTRAP在结合缓冲液(5mM Tris-HCl，pH 7.5，10mMMgCl2，1mM EGTA，0.1％BSA)中分别稀释至0.4mg/ml和22.2nM。测试化合物的原液(含10mM的100％DMSO)进一步稀释于100％DMSO中。除非特别指出，每孔中添加10μl稀释化合物溶液和90μl放射配体(在5％DMSO中终浓度是10nM)，添加100μl膜开始反应(40μg蛋白/孔)。5％DMSO不明显抑制结合。以三个浓度(0.1，1和10μM)检测化合物。覆盖板并在Lab-Line滴定平板摇动器中，在室温下轻柔旋涡混合1小时。Packard UniFilter GF/C过滤平板在0.1％聚乙烯亚胺中浸透至少1小时。用Packard FilterMate通用收获器收获孵化膜，用300μl冰冷50mM Tris-HCI，pH 7.5，10mMMgCl2，1mM EGTA快速洗涤四次。每孔中加入MicroScint 20闪烁混合物(25μl)，Packard TopCount微平板闪烁计数器计数该板。特异性结合定义为总结合量减去过量(50μM)未标记haTRAP存在下观察的非特异性结合的量。从下列关系计算[3H]haTRAP的化合物与凝血酶受体结合的抑制百分比。
材料
由AnaSpec Inc.(San Jose，CA)常规合成A(pF-F)R(ChA)(hR)Y-NH2和A(pF-F)R(ChA)(hR)(I2-Y)-NH2。这些肽的纯度＞95％。氚气(97％)购自EG&G Mound，Miamisburg Ohio。该气体随后填充并保存在IN/US Systems Inc.Trisorber。MicroScint 20闪烁混合物得自Packard Instrument Co.。
在猕猴全血中体外-体内血小板聚集的方案
给药和收集血液：
允许清醒的坐着的猕猴平衡30分钟。针导管插入肱静脉注射测试药物。另一个针导管插入其它肱静脉或隐静脉用于取血液样品。在某些实验中，化合物仅口服给药的情况下使用一个导管。基线血样品(1-2ml)收集在含凝血酶抑制剂CVS 2139(100μg/0.1ml盐水)作为抗凝剂的vacutainer管中。接着药物静脉内注射30分钟以上的一段时间。在药物注射5，10，20，30分钟和药物注射停止后30，60和90分钟收集血液样品(1ml)。在P0实验中，使用管饲套管将药物给予动物。在给药后0，30，60，90，120，180，240，300，360分钟后收集血液样品。0.5ml血液用于全血聚集，另0.5ml用于确定药物或其代谢物的血浆浓度。在收集血液样品之后立即如下所述进行聚集。
全血聚集：
向0.5ml血液样品中添加0.5ml盐水，并在Chronolog全血聚集器中加温至37℃。同时，阻抗电极在盐水中加温至37℃。带有搅拌棒的血液样品置于加热区块孔中，阻抗电极置于血液样品中，启动收集软件。允许软件运行直到基线稳定，接着进行20Ω校准检查。20Ω等于计算机软件产生图中4个区块。用可调节体积吸管(5-25μl)添加激动剂(haTRAP)，记录聚集曲线10分钟。激动剂后6分钟的最大聚集是记录的值。
体外血小板聚集步骤：
根据Bednar等(Bednar，B.，Condra，C.，Gould，R.J.，和Connolly，T.M.，Throm.Res.，77：453-463(1995))的方法实施血小板聚集研究。血液是通过静脉穿刺至少7天未服用阿司匹林的健康人受试者得到的，使用ACD作为抗凝剂。在15℃，100×g离心15分钟制备富含血小板的血浆。血小板在3000×g下沉淀并用含1mM EGTA和20μg/ml腺苷三磷酸双磷酸酶的缓冲盐水洗涤两次以抑制聚集。在室温下，添加0.2mg/ml人纤维蛋白原的缓冲盐水中进行聚集。测试化合物和血小板在96孔平底板中预孵育60分钟。添加0.3μM haTRAP或0.1U/ml凝血酶启动聚集，使用Lab Line滴定平板摇动器(速度7)快速搅拌混合物。以Spectromax平板阅读器在405nm下的透光度增加来监测聚集百分率。
体内抗肿瘤步骤：
根据S.Even-Ram等，Nature Medicine，4，8(1988)，p.909-914报道的步骤进行人乳癌模型在裸鼠中的测试。
使用上述测试步骤，在体外凝血酶受体拮抗剂实验中，发现本发明化合物的IC50(即，观察到凝血酶受体50％抑制时的浓度)值在约1至约2000nM的范围，优选化合物的IC50值在约1至约100nM的范围。
尽管已经结合上面列举的具体实施方案对本发明进行了描述，但是很多选择、修改及其变更对本领域普通技术人员来说显而易见。所有这些选择、修改和变更意欲落在本发明的精神和范围中。