2-{[N-(2-氨基-3-(杂芳基或芳基)丙酰基)- 氨基酰基]-氨基}-烷基硼酸衍生物 本发明涉及2-{[N-(2-氨基-3-(杂芳基或芳基)丙酰基)-氨基酰基]-氨基}-烷基硼酸衍生物、其制备方法、包含这些化合物的药物制剂，及其在制备用于治疗温血动物、包括人的药物组合物中的应用。
本发明涉及式I化合物或其盐
其中
R1为未取代的或取代的芳基；芳基烷基羰基，其中芳基部分为未取代的或取代的；未取代的或取代的杂环基；或者杂环基烷基羰基，其中杂环基部分为未取代的或取代的；
R2为未取代的或取代的芳基或未取代的或取代的杂芳基；
R3为氢、未取代的或取代的芳基或未取代的或由下列基团取代的烷基，
- 未取代的或取代的环烷基，
- 未取代的或取代地芳基，或者
- 未取代的或取代的包含至少一个氮原子的杂芳基；
R4为式IA的部分，
其中A1和A2为羟基或取代的羟基，或者与结合的硼原子和两个结合的氧原子一起形成式IA*的环，
其中W为亚烷基、取代的亚烷基、未取代的或取代的亚环烷基、未取代的或取代的亚二环烷基或未取代的或取代的亚三环烷基；
并且R5为未取代的或取代的烷基、未取代的或取代的芳基、未取代的或取代的杂环基或者未取代的或取代的环烷基。
在本公开的上下文中，以上和以下所使用的一般术语优选具有下列含义：
“芳基”优选具有不超过20个碳原子，特别是不超过12个碳原子的环系统，优选为单环、二环或三环的，并且为未取代的或取代的，优选为未取代的或取代的苯基或(特别是1-或2-)萘基，一个或多个取代基优选彼此独立地选自脂族基团；游离的、醚化的或酯化的羟基；游离的或酯化的羧基；甲酰基；链烷酰基；未取代的、单-或二-取代的氨基；巯基；磺基；烷硫基；氨基甲酰基；N-烷基-氨基甲酰基；N，N-二-烷基-氨基甲酰基；苯基；萘基；杂环基，特别是吡啶基；氰基和硝基，更优选选自烷基，例如甲基、乙基或丙基；烷氧基，例如甲氧基或乙氧基；二取代的氨基，例如二甲基氨基；卤素，例如氯或溴；卤代烷基，例如三氟甲基；和苯基、(特别是1-或2-)-萘基和杂环基，特别是如下定义的杂环基，特别是吡啶基，例如3-、4-或者特别是2-吡啶基，各基团为未取代的或被一个或多个、特别是最多3个取代基、特别是彼此独立地选自刚刚提到的其它芳基取代基的取代基所取代。芳基R1更优选为联苯基，特别是2-、4-或优选3-联苯基；吡啶基苯基，特别是4-、3-或优选2-吡啶基-(2-、4-或优选3-)苯基；或者低级烷基-苯基，特别是丙基-苯基，如2-、4-或特别是3-异丙基苯基。芳基烷基羰基R1(含有未取代的或优选取代的芳基)优选为含有如上定义的芳基的芳基-低级烷基羰基，更优选苯基-低级烷氧基-苯基-低级烷基羰基、特别是2-、4-或优选3-苄氧基-苯基-乙酰基或-丙酰基；吡啶基-低级烷氧基苯基-低级烷基羰基、特别是2-、4-或优选3-(吡啶-2-、-4-或优选-3-)-乙酰基或-丙酰基；或者苯基-低级烷基羰基、特别是苯基-2-或优选3-苯基-丙酰基或苯乙酰基，其中苯基为未取代的或被最多3个彼此独立地选自低级烷氧基，特别是甲氧基、卤素，特别是氟或氯或者卤素-低级烷基，如三氟甲基的取代基所取代。未取代的或取代的芳基R2或(彼此独立地)R3优选为单取代、二取代或三取代的苯基，特别是被最多4个彼此独立地选自所提到的芳基取代基、特别是羟基、低级烷氧基(最优选的)，优选甲氧基、卤素，优选氟或氯和卤素-低级烷基，优选三氟甲基的取代基所取代，特别是被最多3个低级烷氧基、优选甲氧基取代的苯基，或者R3为未取代的苯基，或者未取代的或取代的萘基，特别是未取代的或被最多4个彼此独立地选自所提到的芳基取代基、特别是羟基、低级烷氧基(最优选的)，优选甲氧基、卤素，优选氟或氯和卤素-低级烷基，优选三氟甲基的取代基所取代的1-或2-萘基。
未取代的杂环基优选为其中结合环是不饱和的、饱和的或部分饱和的杂环基，并且优选为单环或广义地说为二环或三环；其具有3-24个，更优选4-16个环原子；其中至少在与式I分子的基团结合的环中有一个或多个，优选1-4个，特别是1或2个对应芳基的碳原子被选自氮、氧和硫的杂原子所代替，结合环优选具有4-12，特别是5-7个环原子；杂芳基为未取代的或被一个或多个、特别是1-3个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自上文取代的芳基中所定义的取代基；并且特别是选自下列的杂芳基：咪唑基、噻吩基、呋喃基、四氢呋喃基、吡喃基、噻蒽基、异苯并呋喃基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、2H-吡咯基、吡咯基、吡咯啉基、吡咯烷基、咪唑基、咪唑啉基、苯并咪唑基、吡唑基、吡唑烷基、pyranyol、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哌啶基、哌嗪基、哒嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、吲嗪基、异吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、三唑基、四唑基、嘌啉基、4H-喹嗪基、异喹啉基、喹啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、八氢异喹啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、萘嵌间二氮杂苯基、菲咯啉基、呋咱基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、异苯并二氢吡喃基和苯并二氢吡喃基、这些基团均为未取代的或被1-2个选自低级烷基，特别是甲基或叔丁基、低级烷氧基，特别是甲氧基以及卤素，特别是溴或氯的基团所取代；特别优选吡啶基、特别是2-或3-吡啶基或者吲哚基，广义地说为低级烷基-吡啶基、嘧啶基或低级烷基嘧啶基、卤代-低级烷基吡啶基、低级烷氧基-吡啶基、二-低级烷基-吡啶基或者卤代-吡啶基。杂环基为未取代的或被一个或多个、优选最多3个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自上文中提到的那些芳基取代基(其中作为杂环基取代基的杂环基不再携带除吡啶基或吲哚基之外的杂环基)以及上文所定义的芳基、特别是苯基，特别是那些所提到的优选的基团。优选未取代的杂环基。
在杂环基烷基羰基R1中，杂环基部分优选为上文所提到的取代的或者特别是未取代的杂环基；优选的是取代的或优选未取代的杂环基-低级烷基、特别是具有末端取代的或优选未取代的杂环基，其中的杂环基如上文所描述；优选的是吡啶基-低级烷基羰基，如-乙酰基或-丙酰基。
作为R1，相对于其他含义，优选未取代的或取代的芳基或取代的芳基-低级烷基羰基。
杂芳基R2优选为上文所述的未取代的或取代的杂芳基，特别是未取代的或被一个或多个、特别是最多3个取代基取代的吲哚基，所述取代基彼此独立地选自取代的芳基中所描述那些，特别是选自羟基、低级烷氧基(最优选的)，优选甲氧基、卤素(优选氟或氯)和卤素-低级烷基(优选三氟甲基)。
R2优选为取代的芳基。
脂肪族基团优选具有最多12个碳原子，优选最多7个碳原子，最优选最多4个碳原子，并且是脂肪族烃基，也就是说是未取代的或取代的炔基、链烯基或优选的烷基，更优选为低级烷基，特别是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
烷基可以是支链的或直链的，优选具有最多12个碳原子，并且更优选为低级烷基。烷基R3优选为低级烷基，特别是异丁基。
前缀“低级”表示具有最多并且包括7个、优选最多并且包括4个碳原子的基团。
低级烷基优选是正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基或正庚基，优选异丁基、仲丁基、叔丁基、异丙基、乙基或甲基，最优选异丙基、乙基或甲基。
醚化的羟基是，例如烷氧基，特别是低级烷氧基，如乙氧基或甲氧基；芳基氧基，特别是苯基氧基；芳基-低级烷氧基，特别是苯基-低级烷氧基；杂环基氧基，特别是吡啶基氧基；或者杂环基-低级烷氧基，特别是吡啶基-低级烷氧基(芳基和杂环基优选具有上文所描述的含义)。
酯化的羟基优选为通过有机羧酸如链烷酸酯化的羟基，例如低级链烷酰氧基。
酯化的羧基为，例如烷氧基羰基，特别是低级烷氧基羰基，例如甲氧基羰基。
单-或二-取代的氨基优选为N-烷基氨基或N，N-二烷基氨基，特别是N-低级烷基氨基或N，N-二-低级烷基氨基，如N-甲基氨基或N，N-二甲基氨基。
卤素是氟、氯、溴或碘，优选氟、氯或溴。
未取代的或取代的环烷基优选具有最多12个，更优选3-8个环碳原子并且被一个或多个，特别是最多3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自取代的芳基中所述的那些取代基，或者优选为未取代的。优选的是环戊基、环己基或环庚基。
在被未取代的或取代的环烷基取代的烷基R3中，烷基优选如上文所述，更优选低级烷基，特别是异丙基，并且被上文定义的环烷基所取代(优选在末端)。
在被未取代的或取代的芳基取代的烷基R3中，烷基优选如上一段所定义，芳基如上所定义并且被一个或多个，特别是最多3个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自取代的芳基中所提到的那些取代基，或者芳基是未取代的；芳基尤其为被一个或多个，特别是最多3个取代基取代的苯基，所述取代基彼此独立地选自卤素，特别是氟、羟基或低级烷氧基，特别是甲氧基，或者芳基是未取代的苯基。
在被未取代的或取代的杂环基取代的烷基R3中，烷基优选如上文环烷基取代的烷基R3中所定义，杂环基如上所定义并且被一个或多个，特别是最多3个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自取代的杂环基所提到的那些取代基，或者杂环基是未取代的。
如果A1和A2均为取代的羟基，则取代的羟基优选为烷氧基，特别是低级烷氧基、芳基氧基，特别是含有上文所定义的未取代或取代的芳基的芳氧基、或含有上文所定义的未取代或取代的环烷基的环烷氧基。
如果A1和A2与所结合的硼原子和氧原子一起形成如上所示的式IA*的环，则W优选在两个不同的碳原子上携带两个与硼原子结合的氧原子，这两个碳原子在空间上是相邻或相近的，特别是彼此相对为邻位(“1 ，2-”，)的或“1，3”-位的。
亚烷基优选为通过刚刚描述的两个不同的、优选邻位或者“1，3”-位的碳原子结合的直链的C2-C12-、优选C2-C7亚烷基部分，例如1，2-亚乙基或者1，2-亚丙基，广义地说为亚丁基、亚戊基或亚己基。一个或多个，特别是一个不与结合有硼原子的氧原子相连的碳原子可以被选自O、S或优选N(分别携带有所需数目的H原子)的杂原子置换，例如1，5-(3-氮杂-亚戊基)。
取代的亚烷基优选为上文定义的直链的低级亚烷基部分，它是未取代的或者被一个或多个，特别是最多3个取代基所取代，所述取代基优选彼此独立地选自低级烷基如甲基或乙基(例如1-甲基亚乙基、1，2-二甲基亚乙基)、羟基(例如2-羟基-1，2-亚丙基)或者羟基-低级烷基如羟基甲基(例如1-羟基甲基-亚乙基)。
未取代的或取代的亚环烷基优选为通过W中所述的两个不同的、优选邻位或“1，3”-位的碳原子结合的C3-C12-、更优选C3-C8-亚环烷基，如亚环己基或亚环戊基，其中一个或多个，特别是一个不与结合有硼原子的氧原子相连的碳原子可以被选自O、S或N(分别携带所需数目的H原子)的杂原子置换，例如亚四氢呋喃基或亚四氢吡喃基，并且可以是未取代的或者被一个或多个，特别是最多3个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自低级烷基如甲基或乙基、羟基、羟基-低级烷基如甲氧基或者通过氧原子结合的单或低聚糖基(“低聚糖基”优选包含最多5个糖基部分)。
未取代的或取代的亚二环烷基优选为通过W中所述的两个不同的、优选邻位或“1，3”-位的碳原子结合的C5-C12-亚二环烷基，其中一个或多个，特别是一个不与结合有硼原子的氧原子相连的碳原子可以被选自O、S或N(分别携带有所需数目的H原子)的杂原子置换，并且可以是未取代的或者被一个或多个，特别是最多3个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自低级烷基如甲基或乙基、羟基和羟基-低级烷基如甲氧基。优选的是亚蒎烷基(2，3-(2，6，6-三甲基-二环[3.1.1]庚烷)。
未取代的或取代的亚三环烷基优选为通过W中所述的两个不同的、优选邻位或“1，3”-位的碳原子结合的C8-C12-亚三环烷基，其中一个或多个，特别是一个不与结合有硼原子的氧原子相连的碳原子可以被选自O、S或N(分别携带有所需数目的H原子)的杂原子置换，并且可以是未取代的或者被一个或多个，特别是最多3个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自低级烷基如甲基或乙基、羟基和羟基-低级烷基如甲氧基。
最优选地，R4是-B(OH)2或2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基，特别是(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基。
在未取代的或取代的烷基R5中，烷基可以是支链的或直链的，优选具有最多12个碳原子，并且更优选为低级烷基。烷基R5优选为低级烷基，特别是异丙基。可以存在一个或多个，特别是最多两个取代基，所述取代基彼此独立地选自未取代的或取代的芳基(特别是苯基或羟基苯基)、未取代的或取代的杂环基(特别是咪唑基或吲哚基)、未取代的或取代的环烷基，各基团的定义同上；羟基(优选的)、羧基(优选的)、氨基甲酰基、巯基、低级烷硫基，例如甲硫基、苯基、羟基苯基、吲哚基、咪唑基、氨基、三-低级烷基氨基，例如三甲基氨基、低级链烷酰基氨基，例如乙酰基氨基、胍基、N-低级烷基胍基，例如N-甲基胍基或者可以构成包含R5的氨基酸的任何其他取代基。优选地，R5可以是甲基、异丙基、异丁基、仲丁基、巯基甲基、2-甲硫基乙基、苯基甲基、羟基苯基甲基、吲哚-3-基甲基、羟基甲基、1-羟基乙基、2-羟基乙基、氨基甲酰基甲基、2-氨基甲酰基乙基、4-氨基丁基、3-胍基丙基、5-咪唑基甲基、羧基甲基或2-羧基乙基。
式I化合物中所含的不对称碳原子可以(R)、(S)或(R，S)构型存在，优选(R)或(S)构型，最优选下式I*所示的构型。双键或环上的取代基可以存在顺式-(＝Z-)或反式(＝E-)构型。因此，化合物可作为异构体的混合物存在或者优选地以纯异构体的形式存在。
式I化合物的成盐基团是具有碱性或酸性的基团。具有至少一个碱性基团例如氨基、不形成肽键的仲氨基或吡啶基的化合物可形成酸加成盐，例如与无机酸，如盐酸、硫酸或磷酸，或者与合适的有机羧酸或磺酸，例如脂族一元或二元羧酸，如三氟乙酸、乙酸、丙酸、羟基乙酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、羟基马来酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸或草酸，或者氨基酸如精氨酸或赖氨酸，芳族羧酸如苯甲酸、2-苯氧基-苯甲酸、2-乙酰氧基-苯甲酸、水杨酸、4-氨基水杨酸，芳族-脂族羧酸如苦杏仁酸或肉桂酸，杂芳族羧酸如烟酸或异烟酸，脂肪族磺酸如甲磺酸、乙磺酸或2-羟基乙磺酸，或者芳族磺酸，例如苯磺酸、对甲苯磺酸或萘-2-磺酸形成酸加成盐。存在多个碱性基团时，可形成单-或多-酸加成的盐。
具有酸性基团例如游离的硼酸基团(-B(OH)2，即式IA*中，A1和A2均为羟基)或羧基的式I化合物可形成金属或铵盐，如碱金属或碱土金属盐，例如钠、钾、镁或钙盐，或者与氨或合适的有机胺如叔单胺，例如三乙胺或三-(2-羟基乙基)-胺，或者杂环碱，例如N-乙基-哌啶或N，N′-二甲基哌嗪形成铵盐。也可以是盐的混合物。
同时具有酸性和碱性基团的式I化合物可以形成内盐。
为了分离或纯化的目的，以及在化合物进一步用作中间体的情况下，也可以使用不可药用的盐，例如苦味酸盐。但仅仅是可药用的、无毒的盐可用于治疗目的，并且因此那些盐是优选的。
由于新化合物的游离形式和其盐形式(包括例如可在新化合物的纯化或其鉴定中用作中间体的那些盐)之间的密切关系，只要是合适的和有用的，上文和下文中任何提及的游离化合物均应当理解为包括相应的盐。
提及化合物或盐的复数时，其意思也包括单数的形式(一种化合物或盐)。
式I化合物具有有价值药理特性并可用作例如治疗增殖性疾病的药物。
式I化合物可抑制蛋白酶体活性。已知由多催化蛋白酶体复合物催化降解的蛋白质在细胞周期控制(例如细胞周期蛋白，p21，p27)和细胞程序死亡(例如p53)中具有特别的功能(Rolfe，M.，Chiu，I.M.和Pagano，M.，治疗领域中遍在蛋白质介导的蛋白分解途径，J.Mol.Med.75，1997，5-17)。所以，蛋白酶体抑制剂适于治疗对抑制蛋白酶体活性有响应的增殖性疾病。增殖性疾病如牛皮癣和肿瘤，特别是实体瘤如结肠肿瘤、乳房肿瘤、肺肿瘤和前列腺肿瘤属于这里所述的疾病。其他可治疗的增殖性疾病是牛皮癣或再狭窄。广义来讲，本发明也可以治疗其他疾病，例如肌蛋白降解或其他与细胞内蛋白质降解或负氮平衡有关的疾病，例如患有如下疾病的患者：脓毒病、烧伤、外伤、癌症、慢性或系统性感染、皮质类固醇治疗期间的神经运动退化疾病，例如肌营养不良、酸中毒、脊髓或神经损伤等；与细胞上抗原呈递有关的疾病；与细胞粘附有关的疾病等等，特别是抑制蛋白酶体对其有效的疾病。
20S蛋白酶体的抑制
式I化合物可抑制20S蛋白酶体，特别是高度选择性地抑制糜蛋白酶-类的活性。
多催化蛋白酶体复合物负责大多数细胞蛋白质的ATP-依赖性蛋白水解作用。尽管20S蛋白酶体包含蛋白质水解的核心，但它并不能在体内降解蛋白质，除非它在其结构的末端与19S帽复合，19S帽本身包含多种ATP酶活性。该较大的结构被称作26S蛋白酶体并且可以快速降解那些添加了多个8.5kDa多肽遍在蛋白分子的蛋白质。如上所述，靶向于蛋白酶体降解的蛋白质在细胞周期中具有功能。因此，式I化合物特别适合于治疗对抑制20S蛋白酶体活性有响应的疾病，该疾病是上文所述的增殖性疾病(或更多的其他疾病)。
20S蛋白酶体的糜蛋白酶样活性的抑制作用可通过下列实验来证明。该实验基于荧光肽Suc-LLVY-AMC(琥珀酰-亮氨酸-亮氨酸-缬氨酸-酪氨酸-7-氨基-4-甲基-香豆素)的水解，它可被20S蛋白酶体在Y-AMC键合处特异性地裂解。该肽的水解伴随有荧光强度的增加(λex(激发波长)：355nm；λem(发射波长)：460nm)，这是由于内在猝灭的2-氨基苯甲酰荧光素的释放以及与水解产物Suc-LLVY的扩散分离。
将2μl 1mM试验化合物的DMSO(二甲基亚砜，孔中的最终浓度为20μM)溶液与1μl纯化的人胎盘20S蛋白酶体(Diabetes Forschungsinstitut，Diisseldorf，德国；约100ng蛋白酶体，取决于蛋白酶体制剂)和47μl缓冲剂-Ca(5mM CaCl2，20mM Tris/HCl(三-(羟基甲基)-氨基-甲烷盐酸盐)pH8.0)的混合物一起在室温下于黑色的96孔微滴定板中预培养60分钟。将3μl 2.67mM的Suc-LLVY-AMC(Bachem，瑞士)的DMSO(在孔中的最终浓度为80μM)溶液和47μl缓冲剂-Ca混合并加入。所得混合物在37℃下保温3-24小时。如果需要，可通过加入50μl终止溶液(100mM一氯乙酸，130mM NaOH，100mM乙酸，pH＝4.3)终止底物的蛋白水解。用FLUOROSKAN ASCENTTM微滴定板读数仪检测荧光。
对于每个测量系列，都进行两个对照实验：
1.)0％值：在上述测定中用2μl DMSO代替2μl浓度为1mM的试验化合物的DMSO溶液并用48μl缓冲剂-Ca代替47μl缓冲剂-Ca和1μl纯化蛋白酶体的混合物。
2.)100％值：在上述测定中，用2μl DMSO代替2μl浓度为1mM的试验化合物的DMSO溶液。
计算
剩余活性％＝[(含化合物时的值-0％值)/(100％值-0％值)]·100％
IC50值被定义为与0％的对照相比剩余活性为50％时的化合物浓度。式I化合物显示抑制20S蛋白酶体糜蛋白酶样活性的IC50值为0.3nM到1μM，特别是0.5nM到200nM。
另一方面，本发明化合物对糜蛋白酶-类活性具有高度的特异性。
对20S蛋白酶体胰蛋白酶-类(TrpL)活性和肽谷氨酰-水解(PGPH)活性的抑制作用可通过检测针对TrpL活性的荧光肽Boc-LRR-AMC(Boc-亮氨酸-精氨酸-精氨酸-7-氨基-4-甲基-香豆素)的水解和针对PGPH活性的Z-LLE-AMC(Z-亮氨酸-亮氨酸-谷氨酸-7-氨基-4-甲基-香豆素)的水解来证明。这些肽可被20S蛋白酶体相应的蛋白水解活性在氨基酸-AMC键合处特异性地裂解。该肽的水解伴随有荧光强度的增加(λex＝355nm，λem＝460nm)，这是由于如上所述的内在猝灭的2-氨基苯甲酰荧光素的释放所引起的。
将2μl 1mM试验化合物的DMSO(二甲基亚砜，孔中的最终浓度为20μM)溶液与1μl人20S蛋白酶体(由人红细胞按照Dahlmann等人，Biochem.J.309，195-202(1995)和McGuire等人，Biochim.Biophys.Acta995(2)，181-186(1989)所述方法纯化的约100ng蛋白酶体)和47μl缓冲剂-Ca(5mM CaCl2，20mM Tris/HCl(三-(羟基甲基)-氨基-甲烷盐酸盐)pH 8.0)的混合物一起在室温下于黑色的96孔微滴定板中预培养60分钟。将3μl2.67mM的Suc-LLVY-AMC(Bachem，瑞士)的DMSO(在孔中的最终浓度为80μM)溶液和47μl缓冲剂-Ca混合并加入以测定ChyL活性。将3μl1.67mM的Boc-LRR-AMC(Affinity，Mamhead，UK)的DMSO(在孔中的最终浓度为50μM)溶液或3μl 3.67mM的Z-ILE-AMC(Calbiochem/JuroSupply AG，Lucerne，瑞士)的DMSO(在孔中的最终浓度为80μM)溶液和47μl缓冲剂-Ca混合并加入以便分别测定TryL或PGPH的活性。所得混合物在37℃下保温3-24小时。如果需要，可通过加入50μl终止溶液(100mM一氯乙酸，130mM NaOH，100mM乙酸，pH＝4.3)终止底物的蛋白水解。用FLUOROSKAN ASCENTTM微滴定板读数仪检测荧光。
对于每个测量系列，都进行两个对照实验：
1.)0％值：在上述测定中用2μl DMSO代替2μl浓度为1mM的试验化合物的DMSO溶液并用48μl缓冲剂-Ca代替47μl缓冲剂-Ca和1μl纯化蛋白酶体的混合物。
2.)100％值：在上述测定中，用2μl DMSO代替2μl浓度为1mM的试验化合物DMSO溶液。
计算
剩余活性％＝[(含化合物时的值-0％值)/(100％值-0％值)]·100％
IC50值被定义为剩余活性为50％时的化合物浓度。
在这些试验系统中，式I化合物对糜蛋白酶样活性的选择性比胰蛋白酶-类或肽谷氨酰-水解活性高20倍以上，优选50-3000倍，该选择性是式I化合物的又一个优点。
式I化合物的抗增殖活性可通过体外对抗例如人乳腺瘤细胞系MDA-MB435(HTB-129)(从美国典型培养物保藏中心(ATCC，Rockville，USA)获得)来证实。一般来说，按供应商推荐的方法使用′CellTiter96TM′增殖测定(Promega，Madison MI)。该测定在用于组织培养物的96孔板上进行。将细胞按每孔2.5×104的密度接种在50μl完全MEM[最低基本培养基](Gibco-LifeTechnologies)中，其中补充有10％胎牛血清、100U/mlPenStrep、1mM丙酮酸钠、4mM L-谷氨酰胺、20mM HEPES和非必需氨基酸。将细胞在37℃下在用5％CO2平衡的潮湿环境中培养24小时。将试验化合物以每孔50μl完全MEM的系列稀释液的形式加到细胞上清液中。将细胞在37℃下在用5％CO2平衡的潮湿环境中培养至少48小时。按每孔15μl的体积，将四氮唑染料MTT(3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四氮唑溴化物)加到细胞上清液中并将细胞培养物保温4小时。此后，通过每孔加入100μl终止溶液来使反应停止并将培养板再保温1小时。代谢活性细胞将四氮唑转化产生可溶解的甲(formazan)。蓝色细胞上清液的吸光度与活细胞的量成比例。在550和630nm波长处使用微滴定板读数仪(Dynatech MR5000)检测吸光度。
化合物的系列稀释液的制备如下：首先将10mM的化合物储备液(在DMSO中)在完全MEM中稀释成60μM的试验溶液，然后在完全MEM中进行九次连续的1∶3稀释。含有完全MEM的孔作为阴性对照，背景(0％)。含有细胞和MEM/0.6％DMSO的孔作为阳性对照(100％)。按上文关于抑制20S蛋白酶体糜蛋白酶样活性中描述的方法计算剩余活性％。IC50值定义为剩余活性为50％时的化合物浓度。
式I化合物显示抗增殖活性的IC50值为0.5nM到1μM，特别是1nM到200nM。
在体内也证明了式I化合物的抗肿瘤作用：
使用人肿瘤异种皮移植在裸鼠体内评价抗肿瘤作用
使用皮下移植人肿瘤的雌性或雄性BALB/c nu/nu(Novartis动物场，Sisseln，瑞士或Bomholtgaard，Copenhagen，丹麦)小鼠来评价式I化合物对来源于四种类型肿瘤细胞系的抗肿瘤作用：乳腺肿瘤：MCF-7；肺肿瘤：NCI H596：结肠肿瘤：HCT 116；和前列腺肿瘤：PC3。
材料：
人结肠癌HCT 116(ATCC CCL 247)、人鳞状细胞肺癌NCI H596(ATCC HTB 178)、雌激素依赖性乳腺癌MCF-7(ATCC HTB 22)和人前列腺癌PC 3细胞系来自美国典型培养物保藏中心(ATCC，Rockville，USA)。细胞在37℃下、在5％v/v CO2和80％相对湿度的气氛中用下列培养基进行培养：NCI H 596：RPMI 1640、20％v/v FBS(胎牛血清)、1％w/v谷氨酰胺；HCT-116：McCoy’s 5A、10％v/v FBS、1％w/v谷氨酰胺；PC 3：RPMI1640、20％v/v FBS、1％w/v谷氨酰胺；MCF-7，RPMI 1640、20％v/v FBS、1％w/v谷氨酰胺。所有这些细胞系都是贴壁的并且可以通过用Hank’s平衡盐冲洗并用0.25％w/v胰蛋白酶处理来释放。所有这些细胞都被制备成细胞原种(在补充有20％v/v FBS和7％v/v DMSO的培养基中)并在-125℃(液氮蒸气)下储存。工作细胞株由细胞原种通过融化并三次传代扩增细胞来制备，然后分装在小瓶中并冷冻。所有细胞系在冷冻前的存活率(使用0.5％w/v台酚蓝进行的台酚蓝排除试验)＞90％。
在裸鼠中建立实体瘤：
在自由接近无菌食物和水的控制条件下(最佳卫生条件[OHC])饲养小鼠。在载体小鼠(每种细胞系为4-8只小鼠)中皮下注射细胞(在100μl PBS(磷酸盐缓冲的盐水)或培养基中的至少2×106个细胞)后建立肿瘤。皮下注射在小鼠尾和头之间中部的左侧。在开始实验前，所得肿瘤连续传代移植至少三次。肿瘤达到800-1000mm3时进行移植。
在裸鼠中移植实体瘤：
麻醉(Forene，Abbott，瑞士)供体小鼠并通过断颈处死。消毒皮肤并切取肿瘤。用解剖刀去除肿瘤块的外缘并将所得肿瘤块切成约3-4mm厚的片。切出3-4mm2的切片并放置在无菌的0.9％w/v NaCl中。不使用坏死的肿瘤切片。
将肿瘤碎块皮下植入受体小鼠的左侧肋腹部。麻醉(Forene，Abbott，瑞士)受体小鼠并将小鼠整个背部和侧面的皮肤消毒。挑起尾部上方0.5-1cm处的皮肤并做出一个1-1.Scm的切口。将肿瘤切片推入13-号套针中。将套针推入皮肤开口中并在皮下推入尾和头之间的中点部位。通过推进套针沉积肿瘤碎块。用一个或两个金属夹缝合伤口。
在雌激素依赖性乳腺肿瘤的情况下，将雌激素小药丸(17β-雌二醇，5mg/丸，持续释放60天，来自Innovative Research of America，Sarasota，USA)皮下置于另一侧。
开始治疗前，允许肿瘤长到100-150mm3大小。然后，测量肿瘤并按肿瘤体积的平均大小和范围平衡分组(一般来说n＝6-8)。随机指定治疗组。试验化合物的制备和应用：
将40mg/ml化合物的储备液溶解在100％DMSO中并在室温下搅拌直到获得澄清的溶液。每次给药前，在储备液中加入10％Tween80(Fluka，Buchs，瑞士；聚氧乙烯基-脱水山梨醇-单硬脂酸酯；Tween是ICIAmericas Inc.的商标，USA)然后用无菌0.9％w/v NaCl或水按1∶20(v/v)稀释。每天使用前制备溶液和稀释液。每周使用7天(口服、腹膜内、皮下或静脉内)。使用体积是：口服，25mL/kg；腹膜内，25mL/kg；皮下，10mL/kg；静脉内，10mL/kg。
测量肿瘤体积：
通过测量垂直直径，每周一次、两次或三次(取决于肿瘤系生长的速度)以及最后一次处理后24小时检测肿瘤的生长。使用能够测定mm距离的测径器。按式L×D2×π/6(L：长度；D：直径)计算肿瘤体积。抗肿瘤活性用T/C％(被治疗动物肿瘤体积增加的平均值除以对照动物增加的平均值后乘以100)表示。肿瘤消退(％)表示与开始治疗时肿瘤平均体积相比的最小肿瘤平均体积。Δ肿瘤体积比较实验期间肿瘤体积的改变(治疗最后一天的体积减去治疗第一天的体积)。处死肿瘤大小超过约1500-2000mm3的所有动物。
另外的测量：
还收集了体重和存活数据。计算Δ体重作为对治疗的耐受性的指标(治疗最后一天的重量减去治疗第一天的重量)。有统计学意义的体重减轻或者死亡被认为是对治疗耐受性差的指示。另外，每天一次或两次检测小鼠的总体健康状况。
统计分析：
统计分析的基本方法是使用用于多重比较的检验来判断治疗组之间差异以及组内差异的统计学意义，以确定治疗是否诱导稳定的疾病或肿瘤的消退。由于皮下肿瘤体积不总是正态分布的，所以治疗组之间皮下肿瘤体积的差异使用非参数的Kruskal-Wallis单侧方差分析检验用分等级的数据来确定，并用Dunnett检验确定治疗组与对照组相比差异的统计学意义。所有组之间的成对比较使用Student-Newman-Keuls(SNK)方法来进行。如果仅仅比较两个组，使用秩和检验。动物体重成正态分布，并且通过成对t检验分析组中的体重变化，组间的差异通过单侧方差分析进行分析并且使用Tukey检验进行成对比较。对于所有检验，显著性水平设定为p＜0.05。
使用相同的方法，也可以使用从美国典型培养物保藏中心获得的非雌激素依赖性乳腺肿瘤细胞系MDA-MB435(HTB-129)代替所述的肿瘤细胞系。该细胞系在MEM，10％v/v FBS，1％w/v谷氨酰胺中培养，按上文关于其他细胞系所述的方法贴壁和释放。
测定式I化合物抗肿瘤作用的另一体内试验是下述空心纤维测定法：
空心纤维测定法：在裸鼠中评价抗肿瘤作用
在该测定中，将包囊在空心纤维中的四种不同的人肿瘤皮下和/或腹膜内植入裸鼠(无胸腺的雌性杂交繁殖的裸鼠(Ncr nu/nu))体内。然后，使用在合适的载体中配制的试验化合物处理动物，而对照动物单独用载体处理。在实验结束时，取回纤维并用代谢分析(MTT，3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四氮唑溴化物)测定存活细胞的数目。通过将实验动物细胞生长(T)与单独用载体处理的对照动物生长(C)进行比较测定试验化合物的活性，并表示为％T/C。
材料：
人结肠癌SW 620和LS 174T，和乳腺癌MDA-MB-435S从美国典型培养物保藏中心(ATCC，Rockville，USA)获得。表达高水平pgp-1的结肠癌MIP 101源自Dana Farber Cancer Institute，Boston，USA的一个病人。所有细胞系都按标准组织培养技术在含有下列添加剂的RPMI 1640中生长：5％FBS(胎牛血清)、5mg/ml胰岛素、5mg/ml运铁蛋白、5ng/ml亚硒酸、1nM β-雌二醇、1nM睾酮。
测定方法的设计：
将人实体瘤细胞系包囊在PVDF(聚偏二氟乙烯)空心纤维中，该空心纤维可渗透＜500,000道尔顿的分子并具有1mm的内径(Biopore，SpectrumMedical，CA，USA)。包囊后和植入动物体内前，通过在组织培养基中保温24小时使细胞粘附在纤维的内表面上。然后将四根空心纤维腹膜内或皮下植入一个动物体内。在实验计划中，每组使用4-6只动物并且实验由至少三个组组成：
1.“零时间”组
2.对照(空白)组
3.“治疗”(试验化合物)组。
植入纤维后24小时开始治疗。在第1、3和5天，每天对动物治疗一次。当治疗开始时，处死“零时间”组动物，取回纤维并测定实验开始时存活细胞的数目(T0)。在植入后第7天，处死所有动物，取回纤维并测定对照(Cv)和“治疗”(Tv)组存活细胞的数目。然后按下式计算％T/C：
％T/C＝(Tv-T0)/(Cv-T0)×100％
在空心纤维中包囊肿瘤细胞：
将纤维切成所需长度并在70％乙醇中浸泡至少72小时。此后，灭菌纤维和包囊用的仪器。将在组织培养基中生长的人实体瘤细胞系用胰蛋白酶消化，悬浮在少量组织培养液中并用注射器转移到纤维内。将纤维热密封并在含有5％CO2的气氛中于37℃下保温24小时。然后，将纤维植入裸鼠的皮下和/或腹膜内。
测定空心纤维中存活的细胞：
将1g MTT加到200ml PBS(磷酸盐缓冲的盐水)中，搅拌20分钟并过滤(0.22微米滤器)。将10ml该溶液与40ml含有添加剂的RPMI 1640混合，得到MTT工作溶液。将取回的纤维在5ml RPMI 1640中在5％CO2下于37℃保温30分钟使其稳定。在样品板的各孔中加入0.5ml MTT工作液。将该板在37℃下于5％CO2中保温4小时。从样品板的各孔中抽吸出MTT。将2ml浓度为2.5％的硫酸鱼精蛋白水溶液加到样品板的各孔中。将该板在4℃下保温24小时。吸出样品板各孔中的硫酸鱼精蛋白。在各孔中加入2ml硫酸鱼精蛋白并将该板在4℃下再保温2-4小时。将各纤维转移到24孔板的孔中。将纤维切短以便使它们能够位于孔的底部，然后干燥过夜。在各孔中加入250μl DMSO。将该板在轨道振荡仪上放置4小时，进行覆盖以使MTT避光。将150μl各样品转移到96孔板的合适孔中。在540nm处用DMSO作为空白孔来读板。
例如在下述试验中可显示式I化合物口服后的生物利用度：为了通过口服给药，制备在合适溶剂如Cremophor RH40/Maisine/丙二醇/乙醇(38/32/15/15)中的试验物质溶液(25mg/ml)。实验开始前，使雌性Balb/c小鼠禁食24小时，并在整个实验过程中允许随意进水。在给药后的不同时间，通过在麻醉下切开颈静脉然后脱颈处死动物来获得血样。样品收集在肝素化的试管中(通常为0.4-0.6ml)。为了进行样品分析，采用固相提取和HPLC。样品中的药物浓度通过标准品血样的峰面积比(抑制剂/内标)与浓度的最小二乘方线性回归分析来计算。由浓度-时间图，通过梯形规则计算“曲线下面积”(AUC)值。
本发明的优选实施方案：
在下列本发明优选的实施方案中，如果没有另外说明，一般性的定义或表述方式可以各自地、彼此独立地用几个或全部用以上给出的定义本发明更为优选的实施方案的更具体的定义来代替。
优选如下式I化合物或其盐，其中
R1为取代的芳基-低级烷基羰基或者未取代的或取代的芳基，
R2为取代的芳基或者未取代的或取代的杂环基，
R3为低级烷基、未取代的或取代的芳基或被未取代的或取代的芳基取代的低级烷基，
R4为上述式IA的部分，其中A1和A2为羟基、低级烷氧基、含有未取代的或取代的芳基的芳氧基或含有未取代的或取代的环烷基的环烷氧基，或者其中A1和A2与所结合的硼原子和两个所结合的氧原子一起形成上述式IA*的环，其中W为通过两个不同的、在空间上相邻或相近的，特别是邻位或彼此相对为“1，3”-位的碳原子连接的未取代的或取代的低级亚烷基，
并且
R5为低级烷基。
更优选如下式I化合物或其盐，其中
R1为苯氧基苯基-低级烷基羰基；苯基-低级烷氧基苯基-低级烷基羰基；吡啶氧基苯基-低级烷基羰基；被低级烷氧基，特别是甲氧基、卤素，特别是氟或氯，或者卤素-低级烷基，特别是三氟甲基取代的苯基-低级烷基羰基；或者优选是未取代的或取代的苯基或萘基，其中在两种情况下，如果存在取代基，则所述取代基彼此独立地为一个或多个，特别是1-3个取代基，它选自低级烷基、羟基、低级烷氧基、低级链烷酰氧基、羧基、低级烷氧基羰基、甲酰基、低级链烷酰基、氨基、N-低级烷基氨基、N，N-二-低级烷基氨基、巯基、磺基、低级烷硫基、氨基甲酰基、N-低级烷基-氨基甲酰基；N，N-二-低级烷基-氨基甲酰基、苯基、萘基、吡啶基、氰基和硝基，更优选低级烷氧基，特别是甲氧基或乙氧基；
R2为被一个或多个，特别是1-3个彼此独立地选自羟基、低级烷氧基，特别是甲氧基、卤素，特别是氟或氯和卤素-低级烷基，特别是三氟甲基的取代基取代的苯基；
R3为低级烷基，特别是异丁基；苯基或被一个或多个，特别是最多3个彼此独立地选自羟基、低级烷氧基，特别是甲氧基、卤素，特别是氟或氯和卤素-低级烷基，特别是三氟甲基的取代基取代的苯基；
R4为-B(OH)2(特别优选)或2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基，特别是(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基；并且
R5为低级烷基，特别是异丙基。
特别优选如下式I化合物或其盐，其中
R1为苯氧基苯乙酰基、苄氧基苯乙酰基、吡啶氧基苯乙酰基、联苯基、吡啶基苯基、低级烷基苯基或取代的苯基丙酰氧基，其中苯基的取代基为最多3个彼此独立地选自甲氧基、氟、氯和三氟甲基的取代基；
R2为被最多3个甲氧基取代基取代的苯基，特别是2，3，4-三甲氧基苯基或3，4，5-三甲氧基苯基；
R3为异丁基或未取代的或被最多3个彼此独立地选自羟基、氟和甲氧基的取代基取代的苯基；
R4为(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基或者特别是-B(OH)2；并且
R5为异丙基。
还特别优选如下式I化合物或其盐，其中
R1为联苯基、低级烷基-苯基、苯基-低级烷基-羰基、苯氧基-苯基-低级烷基-羰基、苯基-低级烷氧基-苯基-低级烷基-羰基或吡啶基-苯基；
R2为被1-3个低级烷氧基取代的苯基或为苯基-低级烷氧基-苯基；
R3为低级烷基或苯基-低级烷基；
R4为4，4，5，5-四甲基-[1，3，2 ]二氧杂硼杂环戊烷-2-基、(1 S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基或-B(OH)2；并且
R5为低级烷基。
尤其特别优选的是如下式I化合物或其盐，其中立体化学如式I*所述
其中所显示的构型表示绝对构型，并且其中R1、R2、R3、R4和R5具有关于式I化合物所定义的含义，特别是上文中描述为优选的那些含义。
也优选如下式I化合物或其盐，其中立体化学如式I**所示
其中所显示的构型表示绝对构型，并且其中R1、R2、R3、R4和R5具有关于式I化合物所定义的含义，特别是上文中描述为优选的那些含义。
还优选如下式I化合物或其盐，包括非对映体的混合物，其中立体化学如式I***所示
其中所显示的构型表示绝对构型，并且其中R1、R2、R3、R4和R5具有关于式I化合物所定义的含义，特别是上文中描述为优选的那些含义。
最优选实施例中所描述的式I化合物或其可药用盐。
尽管先前没有描述过式I化合物的生产，但可按照现有的已知方法制备式I化合物或其盐。所述方法优选地包括
a)将式II的二肽类似物
其中R3、R4和R5具有式I中给出的含义，与式III的氨基酸
或其反应性衍生物反应，其中R1和R2具有式I中给出的含义，除参与反应的基团外，需要时用易于除去的保护基保护式II和/或式III化合物中存在的功能基，然后除去所存在的任何保护基，或者
b)为了制备其中R1为芳基烷基羰基或杂环基烷基羰基并且其他部分R2-R5具有式I中给出的含义的式I化合物，将式IV的氨基化合物
其中R2、R3、R4和R5具有式I中给出的含义，与式V的碳酸
或其反应性衍生物反应，其中R1为芳基烷基羰基或者杂环基烷基羰基，除参与反应的基团外，需要时用易于除去的保护基保护式IV和/或式V化合物中存在的功能基，然后除去所存在的任何保护基，并且需要时，将通过方法a)或b)得到的式I化合物转化为另一种式I化合物，将所得到的游离的式I化合物转化为盐，将所得到的式I化合物的盐转化为不同的盐或其游离形式，和/或将式I的异构体化合物的混合物分离为单个的异构体。
可通过使用具有适宜构型的离析物制备式I化合物不同的、可能存在的立体异构体。例如，可通过下列方法制备式I*化合物或其盐
a)将式II*的二肽类似物
其中R3、R4和R5具有式I中给出的含义，与式III*的氨基酸
或其反应性衍生物反应，其中R1和R2具有式I中给出的含义，除参与反应的基团外，需要时用易于除去的保护基保护式II*和/或式III*化合物中存在的功能基，然后除去所存在的任何保护基，或者
b)为了制备其中R1为芳基烷基羰基或者杂环基烷基羰基并且其它部分R2-R5具有式I中给出的含义的式I*化合物，将式IV*的氨基化合物
其中R2、R3、R4和R5具有式I中给出的含义，与式V的碳酸
或其反应性衍生物反应，其中R1为芳基烷基羰基或者杂环基烷基羰基，除参与反应的基团外，需要时用易于除去的保护基保护式IV*和/或式V化合物中存在的功能基，然后除去所存在的任何保护基，并且需要时，将通过方法a)或b)得到的式I*化合物转化为另一种式I*化合物，将所得到的游离的式I*化合物转化为盐，或将所得到的式I*化合物的盐转化为不同的盐或其游离形式。
一般评论：
式I的终产物可包含也可在用于制备其他式I终产物的原料中用作保护基的取代基，例如在R4不是-B(OH)2的情况下。因此，在本文范围内，除非另有说明，只有易于除去的、不是特定的式I终产物的组成部分的基团被指定为“保护基”。
例如，用所述保护基保护功能基、保护基本身及其裂解反应描述于标准参考书中，例如J.F.W.McOmie，“有机化学中的保护基(ProtectiveGroups in Organic Chemistry)”，Plenum出版社，伦敦和纽约1973；T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“有机合成中的保护基(Protective Groups inOrganic Synthesis)”，第3版，Wiley，纽约1999；“肽(The Peptides)”，第3卷(编者：E.Gross和J.Meienhofer)，高等专科院校出版社，伦敦和纽约1981；“Methoden der organischen Chemie(有机化学的方法)”，Houben Weyl，第4版，第15/I卷，Georg Thieme Verlag，Stuttgart 1974；H.-D.Jakubke和H.Jescheit，“Aminosuren，Peptide，Proteine(氨基酸，肽，蛋白质)”，Verlag Chemie，Weinheim，Deerfield Beach和Basel 1982；和Jochen Lehmann，“Chemie der Kohlenhydrate：Monosaccharide undDerivate(糖类化学：单糖和衍生物)”，Georg Thieme Verlag，Stuttgart1974。
保护基的特点是它们可以通过例如溶剂分解、还原、光解作用或者在生理条件下(例如通过酶裂解)方便地除去(即不发生不需要的副反应)。
除去-B(OH)2-基的保护基(以便获得其中R4为-B(OH)2的式I化合物)优选在适宜的溶剂，例如低级烷醇如甲醇或低级烷烃如己烷或其混合物中，在0-50℃，例如在室温下，用酸，例如氯化氢进行。
方法a)：
通过将式II和式III化合物溶解在适宜的溶剂，例如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、二氯甲烷或两种或多种所述溶剂的混合物中，通过加入适宜的碱，例如三乙胺、二异丙基乙基胺(DIEA)或N-甲基吗啉和适宜的、可就地形成优选的式III碳酸的反应性衍生物的偶联剂，例如二环己基碳二亚胺/1-羟基苯并三唑(DCC/HOBT)；O-(1，2-二氢-2-氧代-1-吡啶基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TPTU)；O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)；或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)进行反应。关于其他可能的偶联剂的综述，例如，参见Klauser；Bodansky，Synthesis，1972，453-463。优选地，将反应混合物在大约-20至50℃，特别是0℃至室温的温度下搅拌得到式I化合物。优选在惰性气体，例如氮气或氩气中进行反应。
方法b)：
反应优选在方法a)描述的类似的条件下进行。
具有成盐基团的式I化合物的盐可通过现有的已知方式制备。因此式I化合物的酸加成盐可通过用酸或用适宜的阴离子交换剂处理得到。
通常，通过例如用适宜的碱性试剂，例如用碱金属碳酸盐、碳酸氢盐或者氢氧化物，典型地用碳酸钾或碳酸钠处理，将盐转化为游离化合物。
可按照现有的已知方式，通过适宜的分离方法将立体异构体混合物，例如非对映异构体的混合物分离成其相应的异构体。例如，可通过分级结晶、色谱法、溶剂分配和类似的方法将非对映异构体混合物分离成其单个的非对映异构体。该分离可在任一起始化合物阶段或在式I化合物本身上进行。可通过形成非对映异构体的盐，例如通过与对映体纯的手性酸成盐，或者通过色谱方法，例如通过HPLC，采用带有手性配体的色谱底物来分离对映体。
可按照标准方法，例如在酸、特别是氢卤酸的存在下，在水/甲醇/己烷混合物中，优选在0-50℃下、例如在室温下，用异丁基-硼酸(i-BuB(OH)2)将其中R4不是-B(OH)2的式I化合物转化为其中R4为-B(OH)2的式I化合物。
如下文所述，在方法a)和b)中，为了转化或合成中间体或原料，可供选择的适用于所述反应的溶剂包括水；酯，典型的为低级烷基-低级链烷酸酯，例如乙酸乙酯；醚，典型的为脂肪族醚，例如乙醚，或者环醚，例如四氢呋喃；液体芳族烃，典型的为苯或甲苯；醇，典型的为甲醇、乙醇或1-或2-丙醇；腈，典型的为乙腈；卤化烃，典型的为二氯甲烷；酰胺，典型的为二甲基甲酰胺；碱，典型的为含氮杂环碱，例如吡啶；羧酸，典型的为低级链烷烃羧酸，例如乙酸；酸酐，典型的为低级链烷烃酸酐，例如乙酸酐；环状、直链或支链的烃，典型的为环己烷、己烷或者异戊烷；或这些溶剂的混合物，例如水溶液，除非在方法的描述中另有说明。所述溶剂混合物也可用于例如色谱法或分配的操作中。
新的原料和/或中间体及其制备方法也是本发明的主题。在优选的实施方案中，使用可以生产出优选化合物的原料和反应条件。
式II-V的原料或其前体是已知的，可按照已知的方法制备，或者可通过商业渠道获得；具体地讲，它们可用与实施例中所描述的方法相同或类似的方法制备。
例如，可通过下列反应获得其中的取代基如上文式I中所定义的式II化合物：
首先，将式VI的氨基酸的硼酸类似物
它包含例如式VI*所示的构型
其中R3具有以上式I化合物中给出的含义并且R4具有以上式I化合物中给出的除-B(OH)2之外的含义，特别是(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基，或其酸加成盐，特别是其三氟乙酸盐，与式VII的氨基酸
它包含例如式VII*所示的构型
或其反应性衍生物，其中R5具有以上式I化合物中给出的含义并且Pr1为保护的氨基，优选为叔丁氧基羰基氨基，
在与上文反应a)中所描述的类似反应条件下(也是缩合反应，也优选就地形成活性的碳酸衍生物)缩合，由此得到N-保护形式的式II化合物，然后，利用例如上述标准教科书中所描述的条件，例如在叔丁氧基羰基氨基的情况下，在适宜的溶剂例如二噁烷和/或二氯甲烷中用盐酸进行N-脱保护，得到可直接在方法a)中使用的式II化合物。
式VI的硼酸是已知的，可通过商业渠道获得和/或可按照已知的方法合成。例如，可通过下述方法制备其中R3为低级烷基，特别是异丁基并且R4如式VI合物所述，优选为(1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基的式VI化合物：
将式VIII化合物
其中R4具有刚刚描述的含义，在适宜的溶剂例如二氯甲烷中与正-低级烷基锂，特别是正-丁基锂反应，随后与氯化锌反应，得到式IX化合物，
其中R4具有式VI中给出的含义。然后将该化合物与LiN(SiCH3)2反应，所得到的化合物在三氟乙酸存在下反应得到式X的盐，
其中R4具有式VI中给出的含义，该化合物便是式VI化合物并且可直接用于如上所述的与式VII化合物的反应中。
式III化合物是已知的，可通过商业渠道获得和/或按照标准方法获得。
例如，可通过下述方法制备其中R1为芳基，特别是联苯基的式III化合物：
将已知的、可通过商业渠道获得的或者可按照标准方法获得的式XI化合物
它包含例如式XI*所示的构型
其中R2具有以上式I化合物中给出的含义，与式XII化合物
R1-X (XII)
其中R1为芳基并且X为卤素，特别是溴，在适宜的溶剂例如二甲基甲酰胺中，在碱、特别是碱金属碳酸盐例如碳酸钾的存在下，在50-100℃，例如在90℃的温度下，优选在惰性气体例如在氮气或氩气下反应。由此直接得到相应的式III化合物。
式VII的氨基酸衍生物是已知的，可通过商业渠道获得或者按照标准方法获得。它们优选以氨基保护的形式使用，例如用叔丁氧基羰基氨基代替游离氨基。
例如，可通过下述方法获得式IV化合物：
将包含例如式II*所示构型的式II化合物(如方法a)所定义)与N-保护的式XIII的氨基酸
它包含例如式XIII*所示的构型
或其反应性衍生物，其中R2如式I中所定义并且Pr2为保护的氨基，特别是叔丁氧基羰基氨基，在如上文方法a)中所描述的优选的缩合反应条件下反应。得到其中N-末端氨基以保护的形式存在的式IV化合物，然后，例如在叔丁氧基羰基氨基的情况下，用氯化氢/二噁烷除去N-末端保护基。
药物制剂和应用：
本发明尤其涉及对患有上述疾病，特别是增殖性疾病，尤其肿瘤疾病和对抑制多催化蛋白酶体复合物有响应的疾病的温血动物，特别是人进行治疗的方法，该方法包括给予需要所述治疗的温血动物抑制肿瘤有效量的式I化合物，本发明还涉及式I化合物在所述治疗中的应用或者涉及式I化合物在制备用于所述治疗的药物组合物中的应用。本发明也涉及式I化合物在抑制温血动物，特别是人多催化蛋白酶体复合物中的应用。
根据物种、年龄、个体情况、给药方式和个体综合征，给予大约70kg体重的温血动物的有效剂量、例如每日剂量大约为0.05g至约10g，优选大约0.1g至约5g，例如大约0.15g至约1.5g式I化合物。
本发明还涉及药物组合物，该药物组合物包含式I化合物或其可药用盐(活性组分)、特别是有效量、尤其是预防或治疗任一上述疾病有效量的活性组分和适于局部、肠内，例如口服或直肠，或者肠胃外给药并且可以是无机或有机的、固体或液体的或其任何组合的可药用载体。对于口服给药，尤其可以使用片剂或明胶胶囊，它们包含活性组分和稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素和/或甘油；和/或润滑剂，例如硅酸、滑石粉、硬脂酸或其盐，如硬脂酸镁或硬脂酸钙；和/或聚乙二醇。片剂也可以包含粘合剂，例如硅酸镁铝；淀粉，如玉米淀粉、小麦淀粉或米淀粉；明胶；甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮，需要时，还可包含崩解剂，例如淀粉、琼脂、藻酸或其盐，如藻酸钠，和/或泡腾混合物，或者吸附剂、染料、矫味剂和甜味剂。本发明的药理活性化合物也可以以肠胃外给药组合物的形式或以输液形式使用。优选地，所述溶液是等渗水溶液或悬浮液，例如，在单独包含活性组分或同时还包含载体，例如甘露糖醇的冷冻干燥组合物情况下，它们可在使用前制备。药物组合物可以进行灭菌和/或可以包含赋形剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂和/或乳化剂、加溶剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。需要时，本发明的药物组合物还可以包含其他药理学活性物质如抗生素，该药物组合物可按照现有的已知方式，例如通过常规的混和、制粒、成型、溶解或冷冻干燥方法制备。当然，活性组分的浓度将随着例如所使用的式I化合物、所需要的治疗和剂型的性质而改变。本发明的药物组合物包含大约1％-100％，特别是大约1％至约20％的活性组分。
例如，口服给药的组合物可通过将式I化合物与包含亲水相、亲脂相和表面活性剂的载体介质一起配制获得。优选地，组合物是“微乳预浓缩物”或“乳剂预浓缩物”的形式，特别是可提供o/w(水包油)微乳或乳剂的形式。然而，组合物可以是另外包含水相、优选水的微乳或乳剂形式。“微乳预浓缩物”是可以在含水介质例如水中，或者在口服给药后在胃液中自发形成微乳的一种制剂。微乳是当其组分彼此接触时自发地或基本上自发地形成的一种非-不透明或基本上非-不透明的胶体分散体。微乳是热力学稳定的。“乳剂预浓缩物”是可以在含水介质例如水中，或者在口服给药后在胃液中自发形成乳剂的一种制剂。所形成的乳剂是不透明的和热力学稳定的。亲脂相可占载体介质重量的大约10-85％；表面活性剂可占载体介质重量的大约5-80％；并且亲水相可占载体介质重量的大约10-50％。
亲水相可选自，例如Transcutol(C2H5-[O-(CH2)2]2-OH)、Glycofurol(也称为四氢呋喃甲醇聚乙二醇醚)和1，2-丙二醇，或其混合物，并且优选1，2-丙二醇。它可进一步包括亲水性辅助组分，例如C1-C5链烷醇。
优选的亲脂相组分是中链脂肪酸甘油三酯，混和的一-、二-、三酸甘油酯和酯基转移的乙氧基化植物油。
适宜的表面活性剂的实施例为：
i)天然或氢化蓖麻油和环氧乙烷的反应产物。商品名为Cremophor(BASF AG，德国)的油是特别适宜的。尤其适宜的是Cremophor RH 40(由1∶40-1∶45比例的氢化蓖麻油/环氧乙烷合成得到)和Cremophor RH 60(由1∶60比例的氢化蓖麻油/环氧乙烷合成得到)。同样适宜的是聚乙二醇蓖麻油如商品名为Cremophor EL(由1∶35-1∶40比例的蓖麻油/环氧乙烷合成得到)的蓖麻油。也可以使用的类似的或相同的产品是商品名为Nikkol、Mapeg、Incrocas(Croda Inc.，USA)和Tagat(Th.Goldschmidt，德国)的产品；
ii)聚氧乙烯-脱水山梨糖醇-脂肪酸酯，例如已知的和可通过商业渠道获得的商品名为Tween(ICI Americas，Inc.，USA)的酯；
iii)聚氧乙烯脂肪酸酯，例如已知的和可通过商业渠道获得的商品名为Myrj(ICI Americas，Inc.，USA)的聚氧乙烯硬脂酸酯。
iv)聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物和嵌段共聚物，例如已知的和可通过商业渠道获得的商品名为Pluronic(BASF AG，德国)、Emkalyx和Poloxamer的共聚物，特别优选Pluronic F68和Poloxamer 188；
v)磺基琥珀酸二辛酯或二-[2-乙基己基]-琥珀酸酯。
vi)磷脂，特别是卵磷脂。
vii)丙二醇一-和二-脂肪酸酯。
优选地，所选择的表面活性剂具有至少为10的HLB(亲水/亲脂平衡常数)。本文以商品名形式提到的产物的全部物理特性可来自，例如H.P.Fiedler，＂Lexikon der Hilfsstoffe für Pharmazie，Kosmetik und An-grenzende Gebiete＂，Editio Cantor，D-7960 Aulendorf，德国，第3次修订和扩版(1989)。
例如，适宜的药物制剂可由Cremophor/乙醇2∶1混合物配制，在静脉内注射应用中，将其用5％葡萄糖水溶液稀释1∶4(v/v)。
药物组合物也可以包含其他添加剂或组分，例如抗氧化剂。当口服给药时，它们表现出特别有利的特性，例如一致性和从标准生物利用度试验中获得的高水平的生物利用度。药代动力学参数，例如吸收和血液浓度也意外地变得更可预测并且可消除或减少给药时吸收不稳定的问题。另外，含有表面活性剂材料，例如胃肠道中存在的胆汁盐的药物组合物是有效的。
口服给药的药物组合物优选以单位剂量形式混和，例如将它们填充到可口服给药的胶囊壳中。胶囊壳可以是软或硬明胶胶囊壳。然而，需要时，药物组合物可以是口服溶液剂形式并且可以包含水或其他任何含水系统以便提供适于口服的乳剂或微乳。
本发明尤其涉及式I化合物在生产用于治疗增殖性疾病，例如实体瘤的药物组合物中的应用及其治疗所述增殖性疾病的应用。
实施例：
下列实施例举例说明本发明但不以任何方式限制本发明的范围。
缩写：
abs. 绝对的
i-BuB(OH)2 异丁基-硼酸
DIEA N-乙基二异丙基胺
DMF N，N-二甲基甲酰胺
equiv 当量
ES-MS 电雾化质谱
EtOAc 乙酸乙酯
h 小时
HPLC 高效液相色谱
MeOH 甲醇
min 分钟
m.p. 熔点
MPLC 中压液相色谱
Rf 通过在硅胶60 F254(Merck，Darmstadt)上进行TLC得到
的前沿值之比
rt 室温
TBTU O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐
TFA 三氟乙酸
TLC 薄层色谱
tR 保留时间
如果不另外说明，洗脱剂和其他溶剂混合物的比率以体积/体积(v/v)表示。
TLC的显色：
通过UV-照射不能检测到的最终化合物或中间体的TLC点利用高锰酸钾染色溶液显色，然后加热该层析板。
高锰酸钾染色溶液的组成：
2.5g KMnO4(高锰酸钾)(Fluka，Buchs，瑞典)
在800ml H2O和200ml 1N H2SO4中
分析HPLC条件：
系统1
线性梯度为2-100％CH3CN(0.1％TFA)和H2O(0.1％TFA)10分钟+2分钟100％CH3CN(0.1％TFA)；在215nm检测，流速为0.7mL/分钟，温度为25℃。柱子：Nucleosil 120-3 C18(125×3.0mm)。
系统2
线性梯度为20-100％CH3CN(0.1％TFA)和H2O(0.1％TFA)7分钟+2分钟100％CH3CN(0.1％TFA)；在215nm检测，流速为1mL/分钟，温度为30℃。柱子：Nucleosil 100-3 C18HD(125×4mm)。
系统3
线性梯度为20-100％CH3CN(0.1％TFA)和H2O(0.1％TFA)7分钟+2分钟100％CH3CN(0.1％TFA)；在215nm检测，流速为1mL/分钟，温度为30℃。柱子：Nucleosil 100-3 C8 HD(125×4mm)。
合成方案1(实施例1和2)：
实施例1：(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基[-3-甲基-N-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-丁酰胺
步骤A：在氩气环境下，将4N HCl的二噁烷溶液(5.7mL，22.77mMol，30当量)加到冷的(0℃){(S)-2-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(合成方案1中的(A))(0.352g，0.759mMol)的无水CH2Cl2(5.5mL)溶液中。将所得到的混合物温热至室温并搅拌10分钟。补加4N HCl(1.9mL，7.59mMol，10当量)。将反应混合物搅拌10分钟并浓缩得到黄色泡沫状粗品盐酸盐。
步骤B：在氩气环境下，将无水DIEA(0.72mL，4.14mMol，5当量)滴加(1.9mL/分钟)到冷的(0℃)粗品盐酸盐(0.331g，0.828mMol)、(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸(合成方案1中的(B))(0.518g，0.994mMol，1.2当量)和TBTU(0.292g，0.910mMol，1.1当量)的无水DMF(3.0mL)溶液中。将反应混合物温热至室温，搅拌40分钟并倾泻到0℃的H2O(45mL)上。通过真空过滤收集所形成的沉淀，溶解在EtOAc中并用H2O洗涤。将有机相干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物通过硅胶(25g)柱色谱(CH2Cl2/MeOH，90/10)纯化，得到黄色泡沫状标题化合物。
标题化合物：ES-MS：754.2[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.85分钟(系统1)；Rf＝0.72(CH2Cl2/MeOH，90/10)。
按如下描述制备原料：
(a)(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸(步骤B)
通过在氩气环境下，将3-溴-联苯(1.47mL，8.54mMol，Aldrich25，538-6)、(S)-2-氨基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸(3，4，5-OCH3-phe-OH)(3.27g，12.81mMol)、K2CO3(1.18g，8.54mMol)和CuI(163mg，0.854mMol)的无水DMF(10.6mL)悬浮液在90℃下加热24小时制备标题化合物。将所得到的混合物冷却至室温，然后真空浓缩并通过MPLC(CH3CN/H2O/TFA)纯化得到标题化合物。
标题化合物：ES-MS：408.2[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝8.86分钟(系统1)。
(b)(S)-2-氨基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸(L-3，4，5-三甲氧基-苯基-丙氨酸)
按照文献方法(E.M.Oltz，R.C.Bruening，M.J.Smith，K.Kustin和K.Nakanishi，J.Am.Chem.1998，110(18)，6162-6172)，由通过商业渠道获得的3，4，5-三甲氧基苯甲醛和N-乙酰基甘氨酸制备标题化合物。如文献(J.J.Nestor，Jr.，T.L.Ho，R.A.Simpson，B.L.Horner，G.H.Jones，G.I.McRae和B.H.Vickery，J.Med.Chem.1982，25(7)，795-801；或O.D.Tyagi & P.M.Boll，Indian J.Chem.1992，pp.851-854)所述，通过用Alcalase(Novo Nordisk)酶催化水解L-酯拆分外消旋的N-乙酰基-3，4，5-三甲氧基-苯基丙氨酸甲酯。
标题化合物：[α]D20＝-18.9°(c＝1.025，H2O)；ES-MS：256.1[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝2.08分钟(系统2)。
(c){(S)-2-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯
如实施例1步骤B所述制备标题化合物，但使用(S)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基三氟乙酸铵(合成方案1中的(C))(制备参见Kettner，C.A.和Shenvi，A.B.J.Biol.Chem.1984，259，p.15106-151 14和Matteson，D.S.和Sadhu，K.M.J.Am.Chem.Soc.1981，103，p.5241-5242)(2.395g，6.32mMol)、Boc-L-缬氨酸(1.373g，6.32mMol)、TBTU(2.23g，6.95mMol，1.1当量)、DIEA(3.3mL，18.95mMol，3.0当量)和DMF(24mL)。
标题化合物：ES-MS：465.1[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝9.95分钟(系统1)。
实施例2：(R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-丁酰氨基}-3-甲基-丁基硼酸
将i-BuB(OH)2加到(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-N-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-丁酰胺、甲醇(4.3mL)、己烷(4.3mL)和1N HCl(1.45mL)的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后用甲醇(8mL)和己烷(8mL)稀释。分离两层。甲醇层用己烷洗涤两次，用CH2Cl2稀释，用H2O洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将残余物溶解在CH2Cl2中并通过硅胶(20g)柱色谱(CH2Cl2/MeOH，80/20)纯化，得到淡黄色泡沫状标题化合物。
标题化合物：ES-MS：618.2 [M-H]-；Rf＝0.03(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
合成方案2(实施例3和4)：
实施例3：(S)-3-甲基-N-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-2-[(S)-2-[2-(3-苯氧基-苯基)-乙酰基氨基]-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-丁酰胺
通过重复实施例1所描述的两步(脱保护/偶联)过程，由{(S)-2-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(合成方案2中的(A))制备标题化合物，但分别使用(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酸(合成方案2中的(D))和(3-苯氧基-苯基)-乙酸(合成方案2中的(F))(Trans World Chemicals，Inc.；Rockville，MD，USA)作为各偶联反应(步骤B，实施例1)的反应物。得到白色固体状标题化合物。
标题化合物：ES-MS：812.1[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.13分钟(系统1)；Rf＝0.41(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
步骤3.1：(S)-2-氨基-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酸(L-2，3，4-三甲氧基-苯基-丙氨酸)
按照关于(S)-2-氨基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸(实施例1)的描述制备标题化合物。
标题化合物：ES-MS：256.1[M+H]+；HPLC：tR＝2.54分钟(系统2)；[α]D20＝-18.5°(c＝0.99，H2O)。
步骤3.2：(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酸
按照本领域已知的方法(M.Bodanszky，Principles of Peptide Synthesis，Akad.-Verlag，1984)，由(S)-2-氨基-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酸开始制备标题化合物。
标题化合物：ES-MS：356.1 [M+H]+；HPLC：tR＝5.35分钟(系统1)；[α]D20＝-2.5°(c＝0.985，MeOH)。
实施例4：(R)-3-甲其-1-{(S)-3-甲基-2-[(S)-2-[2-(3-苯氧基-苯基)-乙酰基氨基]-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-丁酰氨基}-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：676.0[M-H]-；Rf＝0.025(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例5：(S)-3-甲基-N-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-2-[(S)-2-(3-苯基-丙酰基-氨基)-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-丁酰胺
通过重复实施例1所描述的两步(脱保护/偶联)过程，由{(S)-2-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物，但分别使用(S)-2-(叔丁氧基羰基-氨基)-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酸和3-苯基-丙酸(Fluka，Buchs，瑞士)作为各偶联反应(步骤B，实施例1)的反应物。
标题化合物：ES-MS：734.1[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.25分钟(系统1)；Rf＝0.41(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例6：(R)-3-甲基-1-{(S)-3-甲基-2-[(S)-2-(3-苯基-丙酰基氨基)-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-丁酰氨基}-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：598.2 [M-H]-；Rf＝0.025(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例7：(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(4-甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-N-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-丁酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(4-甲氧基-苯基)-丙酸。
标题化合物：ES-MS：694.4[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝12.01分钟(系统
1)；Rf＝0.56(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
步骤7.1：(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(4-甲氧基-苯基)-丙酸
按照关于(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸(实施例1)的描述制备标题化合物，但使用O-甲基-L-酪氨酸(Bachem)。通过MPLC纯化(CH3CN/H2O/TFA)得到标题化合物；ES-MS：348.3[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝9.52分钟(系统1)。
实施例8：(R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(4-甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-丁酰氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：558.0[M-H]-；HPLC：tR＝6.47分钟(系统3)；Rf＝0.086(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例9：(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-N-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-丁酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-丙酸。
标题化合物：ES-MS：724.4[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.75分钟(系统1)；Rf＝0.41(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
步骤9.1：(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-丙酸
按照关于(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸(实施例1)的描述制备标题化合物，但使用3-(3，4-二甲氧基苯基)-L-丙氨酸(Aldrich)。通过MPLC纯化(CH3CN/H2O/TFA)得到标题化合物；ES-MS：378.2[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝9.10分钟(系统1)。
实施例10：(R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-丁酰氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：588.2[M-H]-；Rf＝0.090(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例11：(S)-2-[(S)-2-(3-异丙基-苯基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-N-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-丁酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用(S)-2-(3-异丙基-苯基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸。
标题化合物：ES-MS：720.4[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.85分钟(系统1)；Rf＝0.43(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
步骤11.1：(S)-2-(3-异丙基-苯基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸
按照关于(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸(实施例1)的描述制备标题化合物，但使用1-溴-3-异丙基苯(Lancaster)。通过MPLC纯化(CH3CN/H2O/TFA)得到标题化合物；ES-MS：374.1[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝8.95分钟(系统1)。
实施例12：(R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(3-异丙基-苯基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-丁酰氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：584.3[M-H]-；Rf＝0.13(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例13：(S)-3-甲基-N-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-2-[(S)-2-(3-吡啶-2-基-苯基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-丁酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用(S)-2-(3-吡啶-2-基-苯基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸。
标题化合物：ES-MS：755.3[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝9.97分钟(系统1)；Rf＝0.23(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
步骤13.1：2-(3-溴-苯基)-吡啶
按照文献方法制备标题化合物：Zhang，Biliang，Breslow，Ronald，“由带有金属联吡啶连接基的环糊精二聚体酶模拟物催化的酯水解”，J.Am.Chem.Soc.(1997)，119(7)，1676-1681；M.Van der Sluis，V.Beverwijk，A.Termaten，F.Bickelhaupt，H.Kooijman，A.L.Spek，“新的基于磷杂烷烃的二齿配位体Mes*P：CH(3-R-Ar)(R＝吡啶基、甲醛亚氨基)的合成以及通过P：C双键的碳钯化形成三元的钯杂环Mes*(Me)P-CH(3-R-Ar)-PdCl”，Organometallics(1999)，18(8)，1402-1407。
标题化合物：ES-MS：235.0[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝6.64分钟(系统1)；Rf＝0.17(己烷/Et2O，80/20)。
步骤13.2：(S)-2-(3-吡啶-2-基-苯基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸
按照关于(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸(实施例1)的描述制备标题化合物，但使用2-(3-溴-苯基)-吡啶。通过MPLC纯化(CH3CN/H2O/TFA)得到标题化合物；ES-MS：409.2[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝6.64分钟(系统1)。
实施例14：(R)-3-甲基-1-{(S)-3-甲基-2-[(S)-2-(3-吡啶-2-基-苯基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-丁酰氨基}-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：619.2[M-H]-；Rf＝0.044(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例15：(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-N-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-丁酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酸。
标题化合物：ES-MS：754.4[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝12.08分钟(系统1)；Rf＝0.66(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
步骤15.1：(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酸
按照关于(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸(实施例1)的描述制备标题化合物，但使用(S)-2-氨基-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酸。通过MPLC纯化(CH3CN/H2O/TFA)得到标题化合物；ES-MS：408.2[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝9.42分钟(系统1)。
实施例16：(R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-丁酰氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：618.3[M-H]-；Rf＝0.23(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例17：(S)-2-[(S)-3-(4-苄氧基-苯基)-2-(联苯-3-基氨基)-丙酰基氨基]-3-甲基-N-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-丁酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用(S)-3-(4-苄氧基-苯基)-2-(联苯-3-基氨基)-丙酸。
标题化合物：ES-MS：770.3[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝12.45分钟(系统1)；Rf＝0.74(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
步骤17.1：(S)-3-(4-苄氧基-苯基)-2-(联苯-3-基氨基)-丙酸
按照关于(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸(实施例1)的描述制备标题化合物，但使用(S)-2-氨基-3-(4-苄氧基-苯基)-丙酸(O-苄基-L-酪氨酸)。通过MPLC纯化(CH3CN/H2O/TFA)得到标题化合物；ES-MS：424.3[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝10.40分钟(系统1)。
实施例18：(R)-1-{(S)-2-[(S)-3-(4-苄氧基-苯基)-2-(联苯-3-基氨基)-丙酰基氨基]-3-甲基-丁酰氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：633.9[M-H]-；Rf＝0.65(CH2Cl2/MeOH，90/10)。
实施例19：(R)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-N-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-丁酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用{(R)-2-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯。
标题化合物：ES-MS：754.1[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.73分钟(系统1)；Rf＝0.52(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
步骤19.1：{(R)-2-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯
按照关于{(S)-2-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(实施例1(c))的描述制备标题化合物，但使用Boc-D-缬氨酸(Fluka)。标题化合物：ES-MS：465.4[M+H]+。
实施例20：(R)-1-{(R)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-丁酰氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：618.2[M-H]-；Rf＝0.088(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例21：(S)-2-[(R)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-N-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-丁酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用(R)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸。
标题化合物：ES-MS：754.3[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.71分钟(系统1)；Rf＝0.67(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
步骤21.1：(R)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸
标题化合物按照关于(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸(实施例1)的描述制备，但使用(R)-2-氨基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸(3，4，5-OCH3-phe-OH)。
标题化合物：ES-MS：408.2[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝9.10分钟(系统1)。
关于(R)-2-氨基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸的合成参见实施例1。酶催化拆分后，利用本领域已知的方法将剩余的D-氨基酸-甲酯水解和去乙酰化；[α]D20＝+19.7°(c＝1.04，H2O)；ES-MS：256.2[M+H]+；单峰在tR＝2.11分钟(系统2)。
实施例22：(R)-1-{(S)-2-[(R)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基[-3-甲基-丁酰氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：618.2[M-H]-；Rf＝0.20(CH2Cl2/MeOH，90/10)。
实施例23：(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-N-[3-甲基-1-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-丁基]-丁酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用{(S)-2-甲基-1-[3-甲基-1-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯。
得到标题化合物的粗品；ES-MS：702.3[M+H]+；HPLC：tR＝10.31分钟(系统1)。
步骤23.1：{(S)-2-甲基-1-[3-甲基-1-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯
类似于{(S)-2-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(实施例1(c))的合成制备标题化合物。
标题化合物：ES-MS：413.3[M+H]+。
实施例24：1-{(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-丁酰氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：618.2[M-H]-；Rf＝0.076(CH2Cl2/MeOH，95/5)；HPLC：两个峰分别在tR＝6.23分钟和6.36分钟(比率为1∶1)(系统3)。
实施例25：(S)-2-{(S)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-2-[2-(3-苯氧基-苯基)-乙酰基氨基]-丙酰基氨基}-3-甲基-N-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-丁酰胺
通过重复实施例1所描述的两步(脱保护/偶联)过程，由{(S)-2-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物，但分别使用Boc-L-3，4-二甲氧基苯基丙氨酸(Synthetech)和(3-苯氧基-苯基)-乙酸(Trans World Chemicals，Inc.；Rockville，MD，USA)作为各偶联反应(步骤B，实施例1)的反应物。得到泡沫状标题化合物；ES-MS：782.3[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.76分钟(系统1)；Rf＝0.61(CH2Cl2/MeOH，90/10)。
实施例26：(R)-1-((S)-2-{(S)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-2-[2-(3-苯氧基-苯基)-乙酰基氨基]-丙酰基氨基}-3-甲基-丁酰氨基)-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：646.2[M-H]-；HPLC：单峰在tR＝5.90分钟(系统3)；Rf＝0.12(CH2Cl2/MeOH，90/10)。
实施例27：(S)-3-甲基-N-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-2-[(S)-2-[2-(3-苯氧基-苯基)-乙酰基氨基]-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-丁酰胺
通过重复实施例1所描述的两步(脱保护/偶联)过程，由{(S)-2-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物，但分别使用(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸和(3-苯氧基-苯基)-乙酸(Trans World Chemicals，Inc.；Rockville，MD，USA)作为偶联反应(步骤B，实施例1)的反应物。得到黄色泡沫状标题化合物；ES-MS：812.4[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.36分钟(系统1)；Rf＝0.53(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
步骤27.1：(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸
按照关于(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酸(实施例3)的描述制备标题化合物，但由(S)-2-氨基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸开始。
标题化合物：ES-MS：356[M+H]+；HPLC：tR＝4.83分钟(系统2)；m.p.＝76-80℃；[α]D20＝+13.4°(c＝1.01，甲醇)。
实施例28：(R)-3-甲基-1-{(S)-3-甲基-2-[(S)-2-[2-(3-苯氧基-苯基)-乙酰基氨基]-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-丁酰氨基}-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：676.2[M-H]-；Rf＝0.14(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例29：(S)-2-{(S)-3-(4-苄氧基-苯基)-2-[2-(3-苄氧基-苯基)-乙酰基氨基]-丙酰基氨基}-3-甲基-N-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-丁酰胺
通过重复实施例1所描述的两步(脱保护/偶联)过程，由{(S)-2-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物，但分别使用(S)-3-(4-苄氧基-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸和(3-苯氧基-苯基)-乙酸(Trans World Chemicals，Inc.；Rockville，MD，USA)作为各偶联反应(步骤B，实施例1)的反应物。得到米色泡沫状标题化合物；ES-MS：842.0[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝12.19分钟(系统1)；Rf＝0.37(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
步骤29.1：(S)-3-(4-苄氧基-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸
按照关于(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酸(实施例3)的描述制备标题化合物，但由O-苄基-L-酪氨酸(Fluka)开始。
标题化合物：ES-MS：370.1[M-H]-；HPLC：tR＝9.23分钟(系统1)。
实施例30：(R)-1-((S)-2-{(S)-3-(4-苄氧基-苯基)-2-[2-(3-苄氧基-苯基)-乙酰基氨基]-丙酰基氨基}-3-甲基-丁酰氨基)-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：705.8[M-H]-；Rf＝0.12(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例31：(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-4-甲基-戊酸[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用{(S)-3-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丁基}-氨基甲酸叔丁酯。
标题化合物：ES-MS：768.2[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.79分钟(系统1)；Rf＝0.72(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
步骤31.1：{(S)-3-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丁基}-氨基甲酸叔丁酯
标题化合物按照关于{(S)-2-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(实施例1(c))的描述制备，但使用Boc-L-亮氨酸。
标题化合物：ES-MS：479.2[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝10.05分钟(系统1)。
实施例32.(R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-4-甲基-戊酰基氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：632.2[M-H]-；Rf＝0.15(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例33：(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-4-甲基-戊酸[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用{(S)-3-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丁基}-氨基甲酸叔丁酯和(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-丙酸。
标题化合物：ES-MS：738.3 [M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.76分钟(系统1)；Rf＝0.59(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例34：(R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-4-甲基-戊酰基氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：602.2[M-H]-；Rf＝0.14(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例35：(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(4-甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-4-甲基-戊酸[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基]-酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用{(S)-3-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丁基}-氨基甲酸叔丁酯和(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(4-甲氧基-苯基)-丙酸。
标题化合物：ES-MS：708.3[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝12.03分钟(系统1)；Rf＝0.70(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例36：(R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(4-甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-4-甲基-戊酰基氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：572.1[M-H]-；Rf＝0.25(CH2Cl2/MeOH，90/10)。
实施例37：(S)-2-(联苯-3-基氨基)-n-{(S)-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-乙基}-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用{(S)-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
标题化合物：ES-MS：726.3[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.24分钟(系统1)；Rf＝0.41(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
步骤37.1：{(S)-1-[((R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-乙基}-氧基甲酸叔丁酯
按照关于{(S)-2-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(步骤1.1，实施例1)的描述制备标题化合物，但使用Boc-L-丙氨酸(Fluka)。
标题化合物：ES-MS：437.4[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝10.91分钟(系统1)。
实施例38：(R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-丙酰基氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：590.0 M-H]-；Rf＝0.12(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例39：(S)-2-(联苯-3-基氨基)-N-{(S)-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-乙基}-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用{(S)-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯和(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酸。
标题化合物：ES-MS：726.3[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.71分钟(系统1)；Rf＝0.45(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例40：(R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-丙酰基氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：590.0[M-H]-；Rf＝0.033(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例41：(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(4-甲氧基-苯基)-N-{(S)-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-乙基}-丙酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用{(S)-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯和(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(4-甲氧基-苯基)-丙酸。
标题化合物：ES-MS：666.3[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.63分钟(系统1)；Rf＝0.46(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例42：(R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(4-甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-丙酰基氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：530.3 [M-H]-；Rf＝0.051(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例43：(S)-2-(联基-3-基氨基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-N-{(S)-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-乙基}-丙酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用{(S)-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯和(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-丙酸。
标题化合物：ES-MS：696.3[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.39分钟(系统1)；Rf＝0.53(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例44：(R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-丙酰基氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：560.2[M-H]-；Rf＝0.023(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例45：(S)-2-(3-异丙基-苯基氨基)-N-{(S)-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-乙基}-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用{(S)-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯和(S)-2-(3-异丙基-苯基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酸。
标题化合物：ES-MS：692.3[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.49分钟(系统1)；Rf＝0.24(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例46：(R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(3-异丙基-苯基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-丙酰基氨基}-3-甲基-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：560.2[M-H]-；Rf＝0.22(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例47：(S)-N-{(S)-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-乙基}-2-(3-苯基-丙酰基氨基)-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酰胺
通过重复实施例1所描述的两步(脱保护/偶联)过程，由{(S)-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物，但分别使用(S)-2-氨基-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酸和3-苯基-丙酸(Fluka)作为偶联反应(步骤B，实施例1)的反应物。
标题化合物：ES-MS：706.3[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝10.81分钟(系统1)；Rf＝0.32(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例48：(R)-3-甲基-1-{(S)-2-[(S)-2-(3-苯基-丙酰基氨基)-3-(2，3，4-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-丙酰基氨基}-丁基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：570.3[M-H]-；Rf＝0.22(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例49：(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-N-[(R)-2-苯基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5--二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-乙基]-丁酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用{(S)-2-甲基-1-[(R)-2-苯基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-乙基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯。
标题化合物：ES-MS：788.0[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.66分钟(系统1)；Rf＝0.79(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
步骤49.1：{(S)-2-甲基-1-[(R)-2-苯基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-乙基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯
类似于{(S)-2-甲基-1-[(R)-3-甲基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-丁基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(实施例1(c))的合成制备标题化合物。
标题化合物：ES-MS：499.1[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝10.78分钟(系统1)。
实施例50：(R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-丁酰氨基}-2-苯基-乙基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：652.2[M-H]-；Rf＝0.22(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例51：(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(4-甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-N-[(R)-2-苯基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-乙基]-丁酰胺
如实施例1所述制备标题化合物，但使用{(S)-2-甲基-1-[(R)-2-苯基-1-((1S，2S，6R，8S)-2，9，9-三甲基-3，5-二氧杂-4-硼杂-三环[6.1.1.02，6]癸-4-基)-乙基氨基甲酰基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯和(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(4-甲氧基-苯基)-丙酸。
标题化合物：ES-MS：727.9[M+H]+；HPLC：单峰在tR＝11.87分钟(系统1)；Rf＝0.73(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例52：(R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(联苯-3-基氨基)-3-(4-甲氧基-苯基)-丙酰基氨基]-3-甲基-丁酰氨基}-2-苯基-乙基硼酸
如实施例2所述制备标题化合物；ES-MS：591.8[M-H]-；Rf＝0.13(CH2Cl2/MeOH，95/5)。
实施例53：抑制20S蛋白酶体的糜蛋白酶样活性
按照上文描述的试验测得的式I化合物的IC50值的实例如下(表1)。
表1 实施例IC50[μM](1或2次 实验的结果) 实施例IC50[μM](1或2次实 验的结果) 1 0.0046/0.0024 28 0.0008 2 0.0028/0.0021 29 0.004 3 0.0017/0.0014 30 0.0059 4 0.0019/0.0015 31 0.0022 5 0.0013/0.0006 32 0.0037 6 0.0018/0.0019 33 0.0026 7 0.0029/0.0032 34 0.0013 8 0.0028/0.0045 35 0.0023 9 0.0017/0.0022 36 0.0023 10 0.0029/0.004 37 0.0013 11 0.0039 38 0.0017 12 0.0038 39 0.0019 13 0.0013 40 0.0022 14 0.0017 41 0.0012 15 0.0071 42 0.0019 16 0.0059 43 0.0018 17 0.0093 44 0.001 18 0.0015 45 0.0013 21 0.0015 46 0.0019 22 0.0017 47 0.0008 23 0.0021 48 0.0007 24 0.0021 50 0.0023 25 0.0008 51 0.0043 26 0.001 52 0.005 27 0.0003
实施例54：口服应用的组合物
可如下制备20.0g用于口服给药的实施例1-6中提供的任一标题化合物的溶液(％是指组分重量/溶液总重量)：
Cremophor RH 40 9.6g(48％)，
玉米油的一-二-三酸甘油酯 5.8g(29％)，
丙二醇 3.8g(19％)，
式I化合物 0.8g(4％)。
该溶液在使用前制备。