一种治疗肿瘤的中药组合物及其制备方法.pdf

本发明公开了一种治疗肿瘤的中药组合物及其制备方法，该中药组合物含蟾毒配基提取物和药用载体，所述蟾毒配基提取物由蟾酥药材提取后以硅胶柱纯化后制得，总含量不低于92％，然后经溶解、过滤、灌封、灭菌制得中药组合物，可进一步被制成注射用溶液剂或冻干粉针剂。该中药组合物对肺癌、肝癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌等具有良好的抗癌作用，并能升高白细胞，副作用较少。

1、  一种中药组合物，其特征在于含有蟾毒配基提取物和溶解剂，所述蟾毒配基提取物由脂蟾毒配基、华蟾毒精和蟾毒灵三种活性成分组成，且所述蟾毒配基提取物中三种活性成分总含量不低于92％。

2、  根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述蟾毒配基提取物中三种活性成分总含量不低于95％。

3、  根据权利要求2所述的中药组合物，其特征在于所述蟾毒配基提取物中三种活性成分总含量不低于97％。

4、  根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于述蟾毒配基提取物中脂蟾毒配基、华蟾毒精和蟾毒灵的重量比为2∶1～1.5∶1～1.3。

5、  根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述溶解剂选自水、PEG400和其按任一比例的混合。

6、  根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于还含有冻干支架剂。

7、  根据权利要求6所述的中药组合物，其特征在于所述冻干支架剂为甘露醇，或乳糖，或海藻糖，或三者按任一比例的混合。

8、  根据权利要求5或6所述的中药组合物，其特征在于所述组合物可被制成注射用溶液剂或冻干粉针剂。

9、  根据权利要求1至7所述的中药组合物在制备治疗肿瘤药物中的用途，其特征在于所述肿瘤包括肺癌、肝癌、乳腺癌、胃癌或结肠癌。

10、  一种权利要求1至7所述的中药组合物的制备方法，其特征在于按以下步骤制备：
a、取蟾酥药材适量，加95％乙醇，加热回流提取，提取液趁热过滤，浓缩后制备成浓缩液；和
b、将上述浓缩液与适量硅胶搅拌，以石油醚∶乙酸乙酯(体积比4∶1)浸泡后湿法装柱，用石油醚∶乙酸乙酯(体积比4.5∶1)洗脱剂进行等速洗脱，收集洗脱液，蒸干，即得本发明的蟾毒配基提取物，所述提取物中三种组分的总含量不低于92％；和
c、取上述提取物适量，用适量溶解剂溶解，溶解后浓度为0.01～2g/L，超声15min，放置48h。在无菌条件下，用0.45μm或0.22μm的滤膜过滤，得透明澄清液体，将此液体灌封于安瓿中，灭菌，即得本发明的中药组合物；或
d、取上述提取物适量，用适量溶解剂溶解，溶解后浓度为0.01～2g/L，超声15min，放置48h。在无菌条件下，用0.45μm或0.22μm的滤膜过滤，得透明澄清液体，取澄明液体适量，加入适量冻干支架剂，灭菌，冻干，即得本发明的所述中药组合物，所述冻干支架剂为甘露醇，或乳糖，或海藻糖，或三者按任一比例的混合。

一种治疗肿瘤的中药组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法，主要涉及一种用于治疗肿瘤的含有蟾毒配基提取物的组合物及其制备方法。
背景技术
药用蟾蜍为两栖纲蟾蜍科动物中华大蟾蜍(Bufo bufogargarizans Cantor)或黑眶蟾蜍(Bufo melanostictus Schneider)，蟾酥为中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的耳后腺及皮肤腺分泌的白色浆液，经加工干燥制成。古今验方广泛应用蟾蜍、蟾酥拔毒消肿、定痛杀虫、强心利尿。现代研究表明，蟾酥中的脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵三种脂溶性成分的混合物不但具有明显的抗肿瘤作用，而且还能将肿瘤细胞转化为正常细胞(诱导肿瘤细胞分化)、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞新生血管形成、降低肿瘤转移等作用。
中药注射剂是一种新型的给药系统，能使中药的有效成分能很好的地发挥其治疗作用。目前已有的文献所报道三种脂溶性成分的总含量低于80％，不符合现行中药注射剂的新药申报要求。
发明内容
本发明要解决的技术问题是如何获得符合现行中药注射剂技术要求的中药组合物。
为此，本发明的目的之一是提供了一种符合中药注射技术要求的中药组合物。具体的技术方案是提供了一种中药组合物，该组合物含有脂蟾毒配基、华蟾毒精和蟾毒灵的蟾毒配基提取物和溶解剂，所述蟾毒配基提取物中三种成分的总含量不低于92％。所述组合物可进一步被制成注射用的溶液剂或冻干粉针剂，或额外加入冻干支架剂，进一步被制成注射用粉针剂。
所述中药组合物中的溶解剂可以是医用的含水溶媒，或医药的含PEG的溶媒，或含水和PEG按任一比例的混合的医用溶媒，优选水或PEG400或其按任一比例的混合，特别优选水或PEG400。
上述中药组合物除蟾毒配基提取物和溶解剂外，还可以附加其他的治疗肿瘤的活性药物，也可以含其他的辅助药物如葡萄糖等。
所述提取物是采用以下方式获得的。以醇类溶剂为提取溶剂，以硅胶柱为分离柱，采用一定比例的石油醚和乙酸乙酯等度洗脱，不仅提取效率高，简化了操作步骤，还进一步提高了上述三种蟾毒配基提取物的含量，含量不低于92％，优选不低于95％，特别优选不低于97％。上述提取溶剂优选无水乙醇或95％乙醇；上述蟾毒配基提取物中脂蟾毒配基、华蟾毒精和蟾毒灵三者的重量比为重量比为2～3∶1～2∶1～2，优选重量比为2∶1～1.5∶1～1.3。
本发明另一目的是提供一种所述中药组合物的制备方法。这种方法包括以下步骤：
a、取蟾酥药材适量，加醇类溶剂，加热回流提取，提取液趁热过滤，浓缩后制备成浓缩液，上述醇类溶剂优选无水乙醇或95％乙醇；和
b、将上述浓缩液与适量硅胶搅拌，以石油醚∶乙酸乙酯(体积比4∶1)浸泡后湿法装柱，用石油醚∶乙酸乙酯(体积比2～7∶1)洗脱剂进行等速洗脱，收集洗脱液，蒸干，即得本发明的蟾毒配基提取物，所述提取物中三种组分的总含量不低于92％，上述洗脱剂石油醚∶乙酸乙酯的体积比优选4.5∶1；和
c、取上述提取物适量，用溶解剂将其溶解，溶解后浓度为0.01～2g/L，超声15min，放置48h。在无菌条件下，用0.45μm或0.22μm的滤膜过滤，得透明澄清液体，将此液体灌封于安瓿中，灭菌，即得本发明的中药组合物，所述浓度优选0.05～1g/L，特别优选0.1～0.5g/L，溶解剂可以是医用的含水溶媒，或医药的含PEG的溶媒，或含水和PEG按任一比例的混合的医用溶媒，优选水或PEG400或其按任一比例的混合，特别优选水或PEG400，该中药组合物可被制成注射用溶液剂或粉针剂；或
d、取上述提取物适量，用溶解剂溶解，溶解后浓度为0.01～2g/L，超声15min，放置48h。在无菌条件下，用0.45μm或0.22μm的滤膜过滤，得透明澄清液体，取澄明液体适量，加入适量冻干支架剂，灭菌，混和后冻干，即得本发明的中药组合物，所述浓度优选0.05～1g/L，特别优选0.1～0.5g/L，所述溶解剂可以是医用的含水溶媒，或医药的含PEG的溶媒，或含水和PEG按任一比例的混合的医用溶媒，优选水或PEG400或其按任一比例的混合，特别优选水或PEG400，所述冻干支架剂为甘露醇，或乳糖，或海藻糖，或三者按任一比例的混合，该组合物可被制成注射用冻干粉针剂。
本发明的中药组合是以蟾酥为原料药材，主要成分为脂蟾毒配基、华蟾毒精和蟾毒灵的蟾毒配基提取物，是一种对肿瘤有疗效的中药组合物。经动物试验表明，对肺癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、胃癌等疾病具有良好的治疗作用，对肺癌、肝癌的疗效优于蟾酥注射液，与剂量相同的环磷酰胺相当。小鼠的毒理学试验表明，该注射剂毒性低于蟾酥注射液，并具有升高白细胞作用。
附图说明
图1为脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵三种蟾毒配基提取物的HPLC分析图
具体实施方式
下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受此限制。
实施例1
取蟾酥药材1克，加95％乙醇10mL，加热回流40min，上述条件下提取2次。将提取液趁热过滤，旋蒸浓缩后加入1克硅胶拌样，得拌样硅胶。取20克硅胶以石油醚∶乙酸乙酯(体积比4.5∶1)浸泡后湿法装柱，加入拌样硅胶，用石油醚∶乙酸乙酯(体积比4.5∶1)洗脱剂进行等度洗脱。通过普通条件下的HPLC分析，如图1所示，保留时间为7.184min的为蟾毒灵，8.886min的为华蟾毒精，9.549min的为脂蟾毒配基，收集含有这三种脂溶性成分的洗脱液，蒸干，即得本发明蟾毒配基提取物，其中三种活性的蟾毒配基占总提取物的重量百分比为97.88％。
实施例2
称取30mg三种蟾毒配基提取物，用蒸馏水将其溶解在250mL棕色容量瓶中，超声15min，放置48h，用0.45μm的滤膜过滤，得透明澄清药液，药液灌封于2mL安瓿中，流通蒸汽灭菌，即得装量为2mL的注射用溶液剂。
实施例3
称取30mg三种蟾毒配基提取物，用蒸馏水将其溶解在250mL棕色容量瓶中，超声15min，放置48h，用0.22μm的滤膜过滤，得透明澄清药液，加入适量冻干支架剂，灭菌，无菌条件下灌装于10mL的西林瓶中，冻干，即得供注射用冻干粉针剂，冻干支架剂为甘露醇，或乳糖，或海藻糖，或三者按任一比例混和。
实施例4
取生长良好的小鼠肝癌H22腹水，用生理盐水稀释成1-2×10⁷个/mL浓度的细胞悬液，每只小鼠右腋皮下接种0.2mL，随机分组，设：1)空白对照组(NS)；2)环磷酰胺(CTX，5mg/kg，ip×7)；3)蟾酥注射液(5mg/kg，iv×7)；4)脂蟾毒配基组合物注射液(1mg/kg，iv×7)；5)脂蟾毒配基组合物注射液(5mg/kg，iv×7)。
接种后次日起按以上方案给药，给药体积为0.5mL/20g体重。接种后10日脱颈处死动物，解剖取瘤块，称瘤重，结果判定根据以下公式：

结果：脂蟾毒配基组合物注射液连续尾静脉注射7天，1mg/kg和5mg/kg剂量组对小鼠肝癌H22的抑瘤率分别为57.36％和65.97％；阳性药物CTX组腹腔注射7天，抑瘤率为69.57％；蟾酥注射液腹腔注射7天，抑瘤率为39.65％。结果见表1。
表1.蟾素对小鼠肝癌H22的抑瘤作用

与空白对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01。