糖噁唑啉衍生物的制造方法.pdf

本发明提供由无保护糖简便地制造噁唑啉衍生物的方法以及使用其产物制造糖苷的方法。使用卤代甲脒鎓衍生物作为脱水缩合剂，在水溶液中以一阶段的步骤由具有游离的半缩醛羟基和酰氨基的糖合成其糖噁唑啉衍生物，进一步以该噁唑啉衍生物作为糖供体，使用糖水解酶制造糖苷。本方法可以适用于长的糖链，在生理活性寡糖、药物传输系统的载体、表面活性剂、糖链药物、糖肽、糖蛋白、糖链高分子等的制造中是有用的。

1.  一种噁唑啉衍生物的合成方法，所述噁唑啉衍生物以如下通式(3)表示：

通式(3)中，R¹为烷基，R²、R³和R⁴分别相同或不同，相互独立地为选自由氢原子、羟基、羟甲基、乙酰氨基、羧基、硫酸基、磷酸基或糖残基以及它们的修饰物残基组成的组中的基团，
所述合成方法的特征在于，用如下通式(2)的卤代甲脒鎓衍生物对如下通式(1)的具有半缩醛羟基和酰氨基的糖进行处理，

通式(1)中，R¹、R²、R³和R⁴的含义与上述相同，

通式(2)中，R⁵、R⁶、R⁷和R⁸分别相同或不同，相互独立地为选自由带取代或不带取代的烷基、带取代或不带取代的烯基和带取代或不带取代的芳基组成的组中的基团，R⁵与R⁷或R⁶与R⁸形成环或不形成环，或者R⁵与R⁶或R⁷与R⁸形成环或不形成环，X为卤原子，而且Y^-为阴离子。

2.  如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，Y为卤原子、OH、BF₄或PF₆，在含有水的溶剂中进行通式(1)的糖与通式(2)的卤代甲脒鎓衍生物的反应。

3.  如权利要求1或2所述的合成方法，其特征在于，
(1)通式(1)的糖为选自由N-乙酰基葡糖胺、N-乙酰基半乳糖胺和N-乙酰基甘露糖胺组成的组中的糖，
(2)通式(1)的糖为选自由N-乙酰基乳糖胺、N，N’-二乙酰基壳二糖、透明质酸二糖和糖胺聚糖二糖组成的组中的糖，或者，
(3)通式(1)的糖为选自由N键合型糖蛋白糖链、O键合型糖蛋白糖链和壳寡糖组成的组中的糖。

4.  一种糖苷的合成方法，其特征在于，用如下通式(2)的卤代甲脒鎓衍生物对如下通式(1)的具有半缩醛羟基和酰氨基的糖进行处理，合成出如下通式(3)所示的噁唑啉衍生物后，以所得到的通式(3)的噁唑啉衍生物作为糖供体，在糖受体的存在下与糖基转移酶或糖水解酶接触，得到糖链加成产物，

通式(1)中，R¹为烷基，R²、R³和R⁴分别相同或不同，相互独立地为选自由氢原子、羟基、羟甲基、乙酰氨基、羧基、硫酸基、磷酸基或糖残基以及它们的修饰物残基组成的组中的基团，

通式(2)中，R⁵、R⁶、R⁷和R⁸分别相同或不同，相互独立地为选自由带取代或不带取代的烷基、带取代或不带取代的烯基和带取代或不带取代的芳基组成的组中的基团，R⁵与R⁷或R⁶与R⁸形成环或不形成环，或者R⁵与R⁶或R⁷与R⁸形成环或不形成环，X为卤原子，而且Y^-为阴离子，

通式(3)中，R¹、R²、R³和R⁴的含义与上述相同。

5.  如权利要求4所述的合成方法，其特征在于，糖基转移酶或糖水解酶为选自由壳多糖酶、变异型壳多糖酶、内切β-N-乙酰基氨基葡糖苷酶M、内切β-N-乙酰基氨基葡糖苷酶A、透明质酸酶、软骨素酶组成的组中的酶。

6.  如权利要求4或5所述的合成方法，其特征在于，
(1)通式(1)的糖为选自由N-乙酰基葡糖胺、N-乙酰基半乳糖胺和N-乙酰基甘露糖胺组成的组中的糖，
(2)通式(1)的糖为选自由N-乙酰基乳糖胺、N，N’-二乙酰基壳二糖、透明质酸二糖和糖胺聚糖二糖组成的组中的糖，或者，
(3)通式(1)的糖为选自由N键合型糖蛋白糖链、O键合型糖蛋白糖链和壳寡糖组成的组中的糖。

7.  一种噁唑啉衍生物，其以如下通式(4)表示：

通式(4)中，R⁹为烷基，R¹⁰～R¹⁹分别相同或不同，相互独立地为选自由氢原子、羟基、乙酰氨基、羧基、硫酸基、磷酸基或糖残基以及它们的修饰物残基组成的组中的基团，其中，R¹⁰～R¹⁹中的至少一个为糖残基。

糖噁唑啉衍生物的制造方法
技术领域
本发明涉及以无保护糖链作为起始原料来合成噁唑啉衍生物的方法和由此得到的新型化合物、以及将该噁唑啉衍生物作为糖供体得到糖苷的合成方法。
背景技术
随着近年科学技术的进步，发现糖链担负各种生命现象，日益强烈地认识到糖链化合物的重要性。作为糖链化合物的合成方法之一，使用通过酶催化剂进行的糖苷化反应。通过酶催化剂进行的糖苷化反应中，由于通过加成反应进行糖苷化反应，进行反应时不伴随有酸或水等的离去，因此使用糖噁唑啉衍生物作为糖供体的糖苷化反应是非常有用的糖苷的合成方法。加成有糖链的化合物或寡糖链在例如生理活性寡糖、药物传输系统的载体、表面活性剂、糖链药物、糖肽、糖蛋白、糖链高分子等各种用途中是有用的。
活化异头碳的糖衍生物作为使用糖水解酶的糖基化反应的糖供体是已知的，其中，糖噁唑啉衍生物作为不具有离去基团的糖供体是有用的基质。但是，现有的糖噁唑啉衍生物的合成方法中，有机溶剂的使用是不可欠缺的，要经过包括存在于糖中的羟基的保护和去保护的多阶段步骤来合成[S.Shoda et al.Helv.Chim.Acta，85，3919(2002)(非专利文献1)]。特别是目前的现状是，寡糖的噁唑啉衍生物的合成困难[Bing Li et al.J.AM.CHEM.SOC.，127，9692(2005)(非专利文献2)]而几乎没有进行。另外，作为现有的糖噁唑啉衍生物的合成方法，已知有日本特开平9-3088号公报(专利文献1)、日本特开2003-12683号公报(专利文献2)等。这种现有的化学合成方法中，由于必需伴随有羟基的保护、去保护等多阶段的步骤，操作烦杂，难以适用于长的糖链，所以在糖链合成中，要求开发不使用保护、去保护等步骤就可以简便且温和地合成糖噁唑啉衍生物的技术。
从这种观点考虑，开发了使用水溶性碳二亚胺作为脱水缩合剂、以一个阶段由无保护的糖合成糖噁唑啉衍生物的方法[J.Kadokawa et al.，Heterocycles，63(7)，(2004)，pp.1531-1535(非专利文献3)和疟师英利等、第2回東北大学バイオサイエンスシンポジウム(第2届日本东北大学生物科学研讨会)要旨、“水溶性カルボジイミドを用いる糖オキサゾリン誘導体の一段階合成”、2005.5(非专利文献4)]。此外，还开发了使用三嗪衍生物作为脱水缩合剂、在水溶剂中由无保护的糖直接合成糖噁唑啉衍生物的方法[第55回高分子討論会，题目：“脱水縮合剤-酵素系による無保護糖のワンポツト重合反応”，作者：野口真人、三泽卓也、石原正规、小林厚志、正田晋一郎，杂志名：Polymer Preprints，Japan Vol.55，No.2(2006)pp4826(非专利文献5)；2006高分子学会東北支部研究発表会，题目：“酵素重合反応を利用する無保護糖から多糖のワンポツト合成”，作者：野口真人、三泽卓也、石原正规、小林厚志、正田晋一郎，杂志名：2006高分子学会東北支部研究発表会予稿集pp 21(非专利文献6)；疟师英利等、第3回東北大学バイオサイエンスシンポジウム要旨、“無保護糖のワンポツト配糖化反应”、2006.5(非专利文献7)]。
专利文献1：日本特开平9-3088号公报
专利文献2：日本特开2003-12683号公报
非专利文献1：S.Shoda et al.Helv.Chim.Acta，85，3919(2002)
非专利文献2：Bing Li et al.J.AM.CHEM.SOC.，127，9692(2005)
非专利文献3：J.Kadokawa，M.Mito，S.Takahashi，M.Noguchi，S.Shoda，“Direct Conversion of 2-Acetamido-2-Deoxysugars to 1，2-OxazolineDerivatives by Dehydrative Cyclization”，Heterocycles，63(7)，(2004)，pp.1531-1535
非专利文献4：疟师英利、高桥智史、白鸟正人、野口真人、小林厚志、正田晋一郎、第2回東北大学バイオサイエンスシンポジウム要旨、“水溶性カルボジイミドを用いる糖オキサゾリン誘導体の一段階合成”、2005.5
非专利文献5：第55回高分子討論会、题目：“脱水縮合剤-酵素系による無保護糖のワンポツト重合反応”，作者：野口真人、三泽卓也、石原正规、小林厚志、正田晋一郎，杂志名：Polymer Preprints，Japan Vol.55，No.2(2006)pp 4826
非专利文献6：2006高分子学会東北支部研究発表会、题目：“酵素重合反応を利用する無保護糖から多糖のワンポツト合成”、作者：野口真人、三泽卓也、石原正规、小林厚志、正田晋一郎，杂志名：2006高分子学会東北支部研究发表会予稿集pp 21
非专利文献7：疟师英利、三泽卓也、山本宪司、桑折道济、野口真人、小林厚志、正田晋一郎，第3回東北大学バイオサイエンスシンポジウム要旨、“無保護糖のワンポツト配糖化反応”、2006.5
发明内容
现有的合成方法中，为了合成酶合成糖苷时作为糖供体有用的噁唑啉衍生物，而必需伴随有羟基的保护、去保护等多阶段步骤，应用该合成方法时，存在操作烦杂、而且难以适用于长的糖链的问题。此外，虽然也有使用路易斯酸进行合成的方法，但是该方法中存在的问题是，存在于寡糖中的糖苷键发生断裂而导致收率降低等。出于这种理由，要求开发在糖链合成中不使用保护、去保护等步骤就可以简便且温和地合成糖噁唑啉衍生物的技术。
对糖噁唑啉衍生物的结构进行研究时发现，其是在糖的还原末端的1位的羟基与2位的脱氧部位的酰氨基之间的脱水缩合产物。即，如能够在分子内进行脱水缩合反应，则可以实现噁唑啉衍生物的一阶段的合成。脱水缩合剂被用作羧酸的羰基碳的活化剂，与此同样地将糖的还原末端的异头碳活化，使酰氨基的羰基氧对异头碳进行亲核攻击，则生成噁唑啉衍生物。
从该观点考虑，虽然如上所述本发明人的团队迄今为止提出了使用水溶性碳二亚胺或三嗪衍生物作为脱水缩合剂的方法，但是依然需要开发以更简单的操作且更高的收率合成目的噁唑啉衍生物的方法；以及可以在水性介质中更合适地进行反应、可以适用于更长的糖链的方法。
本发明人对作为糖供体有用的噁唑啉衍生物的合成方法进行了深入研究，结果发现，使用卤代甲脒鎓衍生物作为脱水缩合剂，以无保护糖链作为起始原料，可以直接合成噁唑啉衍生物，进而还成功地使用这种噁唑啉衍生物作为糖供体以简单的方法合成了糖苷，从而完成了本发明。
本发明中，提供以下方式。
[1]一种噁唑啉衍生物的合成方法，所述噁唑啉衍生物以如下通式(3)表示：

通式(3)中，R¹为烷基，R²、R³和R⁴分别相同或不同，相互独立地为选自由氢原子、羟基、羟甲基、乙酰氨基、羧基、硫酸基、磷酸基或糖残基以及它们的修饰物残基组成的组中的基团，
所述合成方法的特征在于，用如下通式(2)的卤代甲脒鎓衍生物对如下通式(1)的具有半缩醛羟基和酰氨基的糖进行处理，

通式(1)中，R¹、R²、R³和R⁴的含义与上述相同，

通式(2)中，R⁵、R⁶、R⁷和R⁸分别相同或不同，相互独立地为可以被取代的烷基、可以被取代的烯基和可以被取代的芳基组成的组中的基团，R⁵与R⁷或R⁶与R⁸可以形成环，或者R⁵与R⁶或R⁷与R⁸可以形成环，X为卤原子，而且Y^-为阴离子。
[2]上述[1]记载的合成方法，其特征在于，Y为卤原子、OH、BF₄或PF₆，在含有水的溶剂中进行通式(1)的糖与通式(2)的卤代甲脒鎓衍生物的反应。
[3]上述[1]或[2]记载的合成方法，其特征在于，
(1)通式(1)的糖为选自由N-乙酰基葡糖胺、N-乙酰基半乳糖胺和N-乙酰基甘露糖胺组成的组中的糖，
(2)通式(1)的糖为选自由N-乙酰基乳糖胺、N，N’-二乙酰基壳二糖、透明质酸二糖和糖胺聚糖二糖组成的组中的糖，或者，
(3)通式(1)的糖为选自由N键合型糖蛋白糖链、O键合型糖蛋白糖链和壳寡糖组成的组中的糖。
[4]一种糖苷的合成方法，其特征在于，用通式(2)的卤代甲脒鎓衍生物(式中，R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、X和Y^-的含义与上述相同)对通式(1)的具有半缩醛羟基和酰氨基的糖(式中，R¹、R²、R³和R⁴的含义与上述相同)进行处理，合成出通式(3)所示的噁唑啉衍生物(式中，R¹、R²、R³和R⁴的含义与上述相同)后，以所得到的通式(3)所示的噁唑啉衍生物作为糖供体，在糖受体的存在下与糖基转移酶或糖水解酶接触，得到糖链加成产物。
[5]上述[4]记载的合成方法，其特征在于，糖基转移酶或糖水解酶为选自由壳多糖酶、变异型壳多糖酶、内切β-N-乙酰基氨基葡糖苷酶M、内切β-N-乙酰基氨基葡糖苷酶A、透明质酸酶、软骨素酶中的酶。
[6]上述[4]或[5]记载的合成方法，其特征在于，
(1)通式(1)的糖为选自由N-乙酰基葡糖胺、N-乙酰基半乳糖胺和N-乙酰基甘露糖胺组成的组中的糖，
(2)通式(1)的糖为选自由N-乙酰基乳糖胺、N，N’-二乙酰基壳二糖、透明质酸二糖和糖胺聚糖二糖组成的组中的糖，或者，
(3)通式(1)的糖为选自由N键合型糖蛋白糖链、O键合型糖蛋白糖链和壳寡糖组成的组中的糖。
[7]一种噁唑啉衍生物，其以如下通式(4)表示：

通式(4)中，R⁹为烷基，R¹⁰～R¹⁹分别相同或不同，相互独立地为选自由氢原子、羟基、乙酰氨基、羧基、硫酸基、磷酸基或糖残基以及它们的修饰物残基组成的组中的基团，其中，R¹⁰～R¹⁹中的至少一个为糖残基。
[8]一种糖苷的合成方法，其特征在于，以通式(4)的噁唑啉衍生物(R⁹～R¹⁹的含义与上述相同)作为糖供体，在糖受体的存在下与糖基转移酶或糖水解酶接触，得到糖链加成产物。
本发明是可以通过简便且温和的方法以一阶段的步骤及良好的收率由无保护糖合成作为糖供体的噁唑啉衍生物的技术，该技术可以适用于长的糖链，可以针对各种化合物、糖，将各种各样的糖链(包括寡糖链和多糖链、以及分支糖链)糖苷化，因此，本发明在例如生理活性寡糖、药物传输系统的载体、表面活性剂、糖链药物、糖肽、糖蛋白、糖链高分子等各种用途的物质的制造中是有用的。
对于本领域技术人员来说，本发明的其他目的、特征、优异性及其具有的观点由以下的记载可知。但是，包括以下的记载和具体的实施例等记载的本说明书的记载表示的是本发明的优选方式，其应被理解为仅为了说明而进行的记载。对于本领域技术人员来说显而易见的是，通过以下的记载以及来源于本说明书的其他部分的知识，可以在本说明书公开的本发明的意图和范围内进行各种变化和/或改变(或修饰)。本说明书中引用的全部专利文献和参考文献是为了说明而引用的，应解释为它们作为本说明书的一部分、其内容包含在其中。
附图说明
图1表示实施例1中得到的含有目的物的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图2表示实施例1中得到的含有目的物的反应液的¹³C NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图3表示实施例2中得到的含有目的物的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图4表示实施例2中得到的含有目的物的反应液的¹³C NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图5表示实施例3中得到的含有目的物的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图6表示实施例3中得到的含有目的物的反应液的¹³C NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图7表示实施例4中得到的含有目的物的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图8表示实施例4中得到的含有目的物的反应液的¹³C NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图9表示实施例5中得到的含有目的物的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图10表示实施例6中得到的含有目的物的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图11表示实施例7中得到的含有目的物的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图12表示实施例9中得到的含有目的物的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺。
图13表示实施例10中得到的含有目的物的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺。
图14表示实施例11中得到的含有目的物的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图15表示实施例12中得到的含有目的物的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Me₃N表示三甲胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图16表示实施例13中得到的含有目的物的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、DMC表示2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物、Me₂EtN表示N，N-二甲基乙基胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图17表示实施例14中得到的含有目的物的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、DMC表示2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物、n-Bu(Me)₂N表示N-正丁基二甲基胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图18表示实施例15中得到的含有目的物的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、DMC表示2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物、(i-Pr)EtN表示N，N-二异丙基乙基胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图19表示实施例16中得到的含有目的物的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、DMC表示2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物、TMEDA表示N，N，N’，N’-四甲基乙二胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图20表示实施例20中得到的含有产物2-甲基(1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并(glucopyrano))[2，1-d]-2-噁唑啉-6-硫酸钠盐的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图21表示实施例21中得到的含有产物2-甲基(1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并)[2，1-d]-2-噁唑啉-6-磷酸二钠盐的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图22表示实施例22中得到的含有产物2-甲基(1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并)[2，1-d]-2-噁唑啉的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠。
图23表示实施例23中得到的含有产物2-甲基(1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并)[2，1-d]-2-噁唑啉的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMP表示1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)-嘧啶酮、Et₃N表示三乙胺、PhSO₃Na表示苯磺酸钠、GlcNAc表示原料的N-乙酰基葡糖胺。
图24表示实施例24中得到的含有产物2-甲基[3-O-[4-O-[3-O-(β-D-吡喃葡糖醛酸基)-2-乙酰氨-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基]-β-D-吡喃葡糖醛酸基]-1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并][2，1-d]-2-噁唑啉的反应液的¹H NMR光谱。图中的DMI表示1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、Et₃N表示三乙胺。
图25表示实施例25中得到的含有产物的反应液的¹H NMR光谱。
图26表示实施例26中得到的含有产物的反应液的¹H NMR光谱。
具体实施方式
根据本发明，提供以无保护糖链作为起始原料来合成噁唑啉衍生物的方法和由此得到的新型化合物、以及以该噁唑啉衍生物作为糖供体得到糖苷的合成方法。
对该噁唑啉衍生物没有特别限定，只要由糖衍生而来、具有起到糖供体的作用的活性即可，但是优选由无保护糖或作为无保护糖链等的具有半缩醛羟基和酰氨基的糖合成的噁唑啉衍生物，可以举出例如上述通式(3)所示的噁唑啉衍生物。
如下述反应式所示，通式(3)所示的噁唑啉衍生物可以通过用作为脱水缩合剂的通式(2)的卤代甲脒鎓衍生物对通式(1)的具有半缩醛羟基和酰氨基的糖进行处理来制造。

(上式中，R¹为烷基，R²、R³和R⁴可以分别相同或不同，相互独立地为选自由氢原子、羟基、羟甲基、乙酰氨基、羧基、硫酸基、磷酸基或糖残基以及它们的修饰物残基组成的组中的基团，R⁵、R⁶、R⁷和R⁸可以分别相同或不同，相互独立地为选自由可以被取代的烷基、可以被取代的烯基和可以被取代的芳基组成的组中的基团，R⁵与R⁷或R⁶与R⁸可以形成环，或者R⁵与R⁶或R⁷与R⁸可以形成环，X为卤原子，而且Y^-为阴离子)
本说明书中，“烷基”可以为直链或支链中的任意一种，可以举出例如C_1-22烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、叔戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十六烷基、二十烷基等)等，优选C_1-6烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基等)，进一步优选C_1-4烷基(例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基等)。
本说明书中，糖残基可以指由糖衍生得到的残基。本说明书中，“糖”可以理解为包括糖类、糖质、复合糖质等的含义，“糖类”指的是单糖类、两种以上单糖类缩合而成的少糖类(包括二糖类、寡糖)、多糖类。糖类可以指具有与碳原子数大致相同的氧原子的多羟基醛、多羟基酮以及它们的衍生物(例如，具有氨基的氨基糖、醛基或伯羟基的部分变成羧基的羧酸、醛基或酮基变成羟基的多元醇等)、以及它们的缩聚物。“糖质”可以理解为指的是具有糖类作为主要成分的物质，认为仅含有糖的物质是单纯糖质、认为含有其他物质(包括蛋白质、脂质、合成高分子等)的物质是复合糖质。
本发明的糖不受该物质的起源、由来的特别限定，可以包括由天然得到的糖；在基因工程学中通过动物细胞、植物细胞、微生物等合成的糖；利用酶制造的糖；通过发酵制造的糖；或人工化学合成的糖等。糖可以包括单糖、二糖、寡糖、多糖，单糖可以举出葡萄糖、半乳糖、甘露糖、葡糖胺、N-乙酰基葡糖胺、半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、甘露糖胺、N-乙酰基甘露糖胺、果糖、葡糖醛酸、艾杜糖醛酸等，二糖可以举出麦芽糖、异麦芽糖、乳糖、乳糖胺、N-乙酰基乳糖胺、纤维二糖、蜜二糖、N，N’-二乙酰基壳二糖、透明质酸二糖、糖胺聚糖二糖等。寡糖包括由2个以上单糖构成的通常意义上的寡糖，作为寡糖可以举出通常由2～30个单糖构成的寡糖，代表性地为由2～20个单糖构成的寡糖，可以举出由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、葡糖胺、N-乙酰基葡糖胺、果糖等构成的同源寡聚体；或由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、葡糖胺、N-乙酰基葡糖胺、果糖、唾液酸等中的2个以上成分构成的异源寡聚体，可以举出例如麦芽寡糖、异麦芽寡糖、乳寡糖、乳糖胺寡糖、N-乙酰基乳糖胺寡糖、纤维寡糖、蜜二糖寡糖、N-乙酰基壳三糖、N-乙酰基壳四糖、N-乙酰基壳五糖等。此外，也可以举出糖胺聚糖寡糖，例如，透明质酸寡糖(例如上述的透明质酸二糖、透明质酸四糖等)、硫酸软骨素寡糖(例如硫酸软骨素A寡糖、硫酸软骨素C寡糖等)、硫酸角质素寡糖、肝素寡糖、硫酸乙酰肝素寡糖等。作为多糖，可以举出在动物、植物(包括海藻)、昆虫、微生物等范围广泛的生物中发现的糖，可以举出例如，唾液酸复合型糖链、N键合型糖链、O键合型糖链、糖胺聚糖、淀粉、直链淀粉、支链淀粉、纤维素、甲壳质、糖原、琼脂糖、海藻酸、透明质酸、菊粉、葡甘露聚糖等。
作为糖残基以及它们的修饰物残基，通常可以举出在单糖的1位或寡糖的还原末端的1位形成残基的残基。本发明中糖的修饰物可以为由天然存在的物质通过分离、纯化过程修饰得到的修饰物；利用酶修饰得到的修饰物；化学修饰得到的修饰物；通过包括微生物的生物学方法修饰得到的修饰物，修饰包括在糖科学领域中已知的修饰，例如包括通过水解、氧化还原、酯化、酰化、氨基化、醚化、硝基化、脱水反应、糖苷化等进行的修饰。
实施本发明时，作为用作起始物质的具有半缩醛羟基和酰氨基的糖，通常可以应用在还原末端的2位具有酰氨基的糖，但优选在还原末端的2位具有乙酰氨基的糖，例如单糖可以举出N-乙酰基葡糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、N-乙酰基甘露糖胺等，二糖、寡糖、多糖等中优选为还原末端为N-乙酰基葡糖胺、N-乙酰基半乳糖胺等的糖。作为起始物质的糖的优选例子，例如包括N-乙酰基葡糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、N-乙酰基甘露糖胺等；进而，包括N-乙酰基乳糖胺、N，N’-二乙酰壳二糖、透明质酸二糖、糖胺聚糖二糖等；另外，包括N键合型糖蛋白糖链、O键合型糖蛋白糖链、壳寡糖等。
本说明书中，作为“可以被取代的烷基/带取代或不带取代的烷基”中的“烷基”，可以举出与上述相同的基团。作为“可以被取代的烯基/带取代或不带取代的烯基”中的“烯基”，可以为直链或支链中的任意一种，可以举出例如C_2-24烯基(例如，乙烯基、烯丙基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-甲基-2-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基等)。作为“可以被取代的芳基/带取代或不带取代的芳基”中的“芳基”，可以举出例如C_6-14芳基(例如，苯基、1-萘基、2-萘基、2-联苯基、3-联苯基、4-联苯基、2-蒽基、3-茚基、5-芴基等)等，优选为苯基。
此外，“可以被取代的烷基/带取代或不带取代的烷基”、“可以被取代的烯基/带取代或不带取代的烯基”和“可以被取代的芳基/带取代或不带取代的芳基”中的“烷基”、“烯基”和“芳基”可以任意被1个或更多的取代基取代，作为被取代时的“取代基”，可以为本领域已知的取代基，可以举出例如氧代基、硫代基、可以具有取代基的亚氨基、卤原子(例如氟、氯、溴、碘等)、C_1-3亚烷基二氧基(例如，亚甲基二氧基、亚乙基二氧基等)、硝基、氰基、C_1-6烷基、C_2-6烯基、羧基C_2-6烯基(例如，2-羧基乙烯基、2-羧基-2-甲基乙烯基等)、C_2-6炔基、C_3-6环烷基、C_6-14芳基(例如，苯基、1-萘基、4-联苯基、2-蒽基等)、C_1-8烷氧基、C_1-6烷氧基-羰基-C_1-6烷氧基(例如乙氧基羰基甲氧基等)、羟基、C_6-14芳氧基(例如苯氧基等)、C_7-16芳烷氧基(例如苄氧基等)、巯基、C_1-6烷硫基、C_6-14芳硫基(例如苯硫基等)、C_7-16芳烷硫基(例如苄硫基等)、氨基、单C_1-6烷基氨基(例如甲基氨基、乙基氨基等)、单C_6-14芳基氨基(例如苯基氨基等)、二C_1-6烷基氨基(例如二甲基氨基、二乙基氨基等)、二C_6-14芳基氨基(例如二苯基氨基等)、甲酰基、羧基、C_1-6烷基-羰基(例如乙酰基、丙酰基等)、C_3-6环烷基-羰基(例如环丙基羰基等)、C_1-6烷氧基-羰基(例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、叔丁氧基羰基等)、C_6-14芳基-羰基(例如苯甲酰基等)、C_7-16芳烷基-羰基(例如苯基乙酰基等)、C_6-14芳氧基-羰基(例如苯氧基羰基等)、C_7-16芳烷氧基-羰基(例如苄氧基羰基等)、5元或6元杂环羰基(例如烟酰基、噻吩甲酰基、糠酰基、吗啉代羰基、硫代吗啉代羰基、哌嗪-1-基羰基、吡咯烷-1-基羰基等)、氨基甲酰基、硫代氨基甲酰基、单C_1-6烷基-氨基甲酰基(例如甲基氨基甲酰基等)、二C_1-6烷基-氨基甲酰基(例如二甲基氨基甲酰基等)、C_6-14芳基-氨基甲酰基(例如苯基氨基甲酰基等)、5元或6元杂环氨基甲酰基(例如3-吡啶基氨基甲酰基、2-噻吩基氨基甲酰基等)、C_1-6烷基磺酰基(例如甲基磺酰基等)、C_6-14芳基磺酰基(例如苯磺酰基等)、C_1-6烷基亚磺酰基(例如甲基亚磺酰基等)、C_6-14芳基亚磺酰基(例如苯基亚磺酰基等)、甲酰基氨基、C_1-6烷基-羰基氨基(例如乙酰基氨基等)、C_6-14芳基-羰基氨基(例如苯甲酰基氨基等)、C_1-6烷氧基-羰基氨基(例如甲氧基羰基氨基等)、C_1-6烷基磺酰基氨基(例如甲基磺酰基氨基等)、C_6-14芳基磺酰基氨基(例如苯磺酰基氨基等)、C_1-6烷基-羰基氧基(例如乙酰氧基等)、C_6-14芳基-羰基氧基(例如苯甲酰氧基等)、C_1-6烷氧基-羰基氧基(例如甲氧基羰基氧基等)、单C_1-6烷基-氨基甲酰氧基(例如甲基氨基甲酰氧基等)、二C_1-6烷基-氨基甲酰氧基(例如二甲基氨基甲酰氧基等)、C_6-14芳基-氨基甲酰氧基(例如苯基氨基甲酰氧基等)、烟酰氧基、可以具有取代基的5～7元饱和环状氨基、5～10元芳族杂环基(例如2-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-喹啉基、4-喹啉基、8-喹啉基、4-异喹啉基、1-吲哚基、3-吲哚基、2-苯并噻唑基、2-苯并[b]噻吩基、2-苯并[b]呋喃基、3-苯并[b]呋喃基等)、磺基、胺磺酰基、胺亚磺酰基(スルフイナモイル)、胺硫基(スルフエナモイル)等。在此举出的取代基中，“烷基部”(包括烷氧基中的烷基部)、“亚烷基部”、“烯基部”、“炔基部”、“芳基部”和“杂环部”可以任意被1个或更多的取代基取代，此时的取代基可以为上述说明的基团。上述“取代基”的说明中“可以具有取代基”时的取代基同样地为上述说明的基团。
作为“R⁵与R⁷或R⁶与R⁸形成环”时的“环”，可以为如下形成的5～7元环，R⁵、R⁷与所键合的氮原子(或R⁶、R⁸与所键合的氮原子)一起，进一步通过可以任意含有1个或更多的氧原子、氮原子和/或硫原子的碳链形成5～7元环，例如可以为咪唑啉环、苯并咪唑啉环、氢化嘧啶环等。作为“R⁵与R⁶或R⁷与R⁸形成环”时的“环”，可以为如下形成的5～7元环，R⁵、R⁶与所键合的氮原子(或R⁷、R⁸与所键合的氮原子)一起，进一步通过可以任意含有1个或更多的氧原子、氮原子和/或硫原子的碳链形成5～7元环，例如可以为吡咯烷环、哌啶环、哌嗪环、吗啉环、硫代吗啉环等。X为卤原子，例如为氯原子、溴原子、碘原子等。
Y^-若为阴离子则不特别限定，作为适当的Y，可以举出例如氯原子、溴原子、碘原子等卤原子；OH；BF₄；PF₆等。
该卤代甲脒鎓衍生物(2)通过用适当的卤化剂(例如氯化剂等)对相对应的脲衍生物进行处理来得到。作为该卤化剂，可以举出例如光气、草酰氯、五氯化磷、三氯化磷、氧氯化磷、这些化合物的相应的溴化物等。作为化合物(2)的具体例子，可以举出下式所示的2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物(2-chloro-1，3-dimethylimidazolinium chloride；DMC)、2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓六氟磷酸盐、N，N，N’，N’-四甲基氯甲脒(N，N，N’，N’-tetramethylchloroformamidinium chloride)、氯-N，N，N’，N’-二(四亚甲基)甲脒鎓六氟磷酸盐(chloro-N，N，N’，N’-bis(tetramethylene)formamidiniumhexafluorophosphate)、2-氯-1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)-嘧啶氯化物等。

化合物(3)的合成反应使用化合物(2)，只要不对该反应带来不良影响，则该合成反应可以在本领域已知的溶剂等介质中进行。该反应在无溶剂(可以包括反应原料兼具溶剂功能的情况)条件下或在对反应为惰性的溶剂的存在下进行是有利的。只要反应能够进行，则对该溶剂不特别限定，可以适宜地使用水性溶剂，可以举出例如水、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、环己醇、糠醇、乙二醇、苯甲醇等醇类；例如四氢呋喃(THF)、二噁烷、四氢糠醇、二乙二醇、环己基甲醚、甲基溶纤剂、溶纤剂、丁基溶纤剂、甲基叔丁醇等醚类；例如甲基乙基酮、糠醛、甲基异丁基酮、异丙叉丙酮、二丙酮醇、环己酮等酮类；例如乙腈、苯甲腈等腈类；例如二甲亚砜(DMSO)、环丁砜等亚砜类；例如甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N-二甲基乙酰胺等酰胺类；例如甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸甲氧基丁酯、乙酸溶纤剂、碳酸二乙酯、碳酸乙二醇酯等酯类；例如甲酸、乙酸、丙酸、乙酸酐等有机酸类；六甲基磷酰三胺、吡啶、喹啉等杂环化合物；苯胺、N-甲基苯胺等芳胺类；硝基化合物等。这些溶剂可以单独使用，或根据需要以适当的比率(例如1∶1～1∶1000的比率)将两种或更多种溶剂混合来使用。
该反应的反应介质可以利用水以及通常使用的有机溶剂，优选水或含有水的有机溶剂，更优选具有胺的盐溶液。此外，还可以使用具有缓冲能力的盐水溶液。作为缓冲剂，只要不对本反应带来不良影响，则可以从本领域已知的缓冲剂中选择。
典型的情况下，该胺溶液表现出来的氢离子浓度pH为1.0～13，更优选为7.5～11。此外，反应温度优选为-80℃～80℃，更优选为0℃～40℃。对反应时间不特别限定，只要得到所需的产物，则可以为适当的时间，可以举出例如1分钟～24小时、通常为15分钟～5小时、代表性的情况下为15分钟～2小时。对脱水缩合剂的量不特别限定，相对于使用的糖，优选为1当量～5当量。对于胺的浓度，相对于使用的脱水缩合剂优选为0.1当量～100当量，更优选为1～4当量。添加的糖的浓度优选为0.1mM～5M，更优选为10mM～1M。
作为该胺，可以为伯胺、仲胺、叔胺、季胺中的任意一种，可以举出例如具有脂肪烃残基、芳烃残基、杂环残基等的胺，作为该脂肪烃残基，其可以为直链或支链，也可以为饱和或不饱和的脂肪烃残基，可以举出例如烷基、烯基、环烷基、芳烷基、环烷基烷基等，作为芳烃残基，可以为单环式芳烃残基、二环或更多环稠合而成的芳烃残基，可以举出例如苯基、萘基等，作为杂环残基，可以为具有1个以上选自由硫原子、氧原子、氮原子组成的组中的杂原子的杂环残基，可以包含吡啶基、咪唑基、噻唑基、喹啉基等，作为该胺，可以包含哌啶、吗啉、硫代吗啉、哌嗪、吡咯烷等。作为该胺的代表性例子，可以举出例如三甲胺、三乙胺、二乙基甲胺、二甲基乙胺、正丁基二甲胺、二异丙基乙胺、四甲基乙二胺等具有脂肪烃残基的叔胺类或二胺类。
产物可以直接以反应液的形式用于以下的反应中，或以粗制物的形式用于以下的反应中，也可以根据常规方法从反应混合物中分离，通过浓缩、减压浓缩、蒸馏、分馏、溶剂提取、液性转换、转溶、色谱法(例如高效液相色谱法(HPLC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法等)、结晶、重结晶等进行分离纯化。
本发明得到的噁唑啉衍生物(3)中，通式(4)所示的噁唑啉衍生物(式中，R⁹为烷基，R¹⁰～R¹⁹可以分别相同或不同，相互独立地为选自由氢原子、羟基、乙酰氨基、羧基、硫酸基、磷酸基或糖残基以及它们的修饰物残基组成的组中的基团，其中，R¹⁰～R¹⁹中的至少一个为糖残基)为新型噁唑啉衍生物，其作为糖供体是有用的。其中，取代基R⁹～R¹⁹与R¹～R⁴相关，为与上述说明相同的基团。该噁唑啉衍生物(4)作为合成加成有糖链的化合物或寡糖链时的糖供体是有用的，例如在生理活性寡糖、药物传输系统的载体、表面活性剂、糖链药物、糖肽、糖蛋白、糖链高分子等的合成等各种用途中是有用的。作为代表性的通式(4)的噁唑啉衍生物，可以举出如下的化合物，其在式中，R⁹为烷基，R¹⁰～R¹⁹可以分别相同或不同，相互独立地为选自由羟基、乙酰氨基或糖残基以及它们的修饰物残基组成的组中的基团，其中，R¹⁰～R¹⁹中的至少一个为糖残基。
本发明中得到的噁唑啉衍生物(3)可以用作糖供体(donor)，在糖受体(acceptor)存在下进行糖基转移反应，合成导入有糖链的有机化合物、即糖苷。该糖基转移反应可以适宜地使用利用酶的方法。对该酶不特别限定，只要可以进行所需的反应即可，例如，可以从作为糖基转移反应催化剂酶已知的酶中选择使用。该酶可以单独使用，也可以根据需要以适当的比率将两种或更多种酶混合来使用。对糖基转移反应中使用的糖基转移反应催化剂酶不特别限定，作为代表性的糖基转移反应催化剂酶，可以使用糖基转移酶、糖水解酶(或糖水解酶)。该噁唑啉衍生物(3)使用糖水解酶来适宜地提供糖苷。
糖水解酶包括：由包括人的动物、植物、微生物得到的酶；用基因工程学的方法产生的重组酶；变异型酶；固定化酶等。作为代表性的糖水解酶，可以举出壳多糖酶、变异型壳多糖酶、内切β-N-乙酰基氨基葡糖苷酶等内切糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶等。作为壳多糖酶和变异型壳多糖酶，其包括来源于芽孢杆菌(Bacillus)属的壳多糖酶(chitinases)，可以举出S.Shoda et al.，Helvetica Chemic Acta，Vol.85，pp.3919-3936(2002)中公开的酶，例如可以是来源于环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)WL-12的壳多糖酶A1及其变异型壳多糖酶，即E204Q、D202N、D200N、Y279F、D280N、W433F等。作为内切糖苷酶(endoglycosidases)，代表性地可以举出内切β-N-乙酰基氨基葡糖苷酶(endo-β-N-acetylglucosaminidases)，例如包含来源于冻土毛霉(Mucor hiemalis)的内切β-N-乙酰基氨基葡糖苷酶M(endo-β-N-acetylglucosaminidase M；EndoM)(Yamamoto，K.et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.，203，pp.244-252(1994))、来源于原玻璃蝇节杆菌(Arthrobacter protophormiae)的内切β-N-乙酰基氨基葡糖苷酶A(endo-β-N-acetylglucosaminidase A；Endo A)(Takegawa，K.et al.，Biochem.Int.，24，pp.849-855(1991))等。作为透明质酸酶，可以为来源于哺乳动物的酶，例如由高等动物的睾丸、精液、皮肤、脾脏得到的酶；由水蛭、蜂毒液、蛇毒得到的酶；由肺炎球菌、链球菌、葡萄球菌、气性坏疽菌等微生物得到的酶，代表性地可以举出牛睾丸透明质酸酶、羊睾丸透明质酸酶等。作为软骨素酶，可以举出例如，来源于肝素黄杆菌(Flavobacterium heparinum)的软骨素酶、来源于普通变形杆菌(Proteus vulgaris)的软骨素酶、来源于金黄节杆菌(Arthrobacter aurescens)的软骨素酶等，软骨素酶ABC(Proteus vulgaris)、软骨素酶AC II Arthro(Arthrobacter aurescens)、软骨素酶B(Flavobacterium heparinum)(生化学工业)等可以从市场上得到。
该酶可以直接或以固定化的形式使用。固定化可以通过本领域技术人员公知的方法(例如，交联法、物理性吸附法、包埋法等)进行。作为固定化载体，只要是通常使用的载体则可以是任意载体，可以举出例如纤维素、琼脂糖、右旋糖苷、κ-角叉菜胶、藻酸、明胶、乙酸纤维素等多糖类；例如谷蛋白等天然高分子；例如活性炭、玻璃、白土、高岭土、氧化铝、硅胶、膨润土、羟基磷灰石、磷酸钙等无机物；例如聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、聚丙二醇、氨基甲酸酯等合成高分子等。该载体可以包含交叉键合型载体；键合有二乙基氨基乙基、羧甲基等离子交换型的基团的载体；通过BrCN处理、环氧化、N-羟基琥珀酰亚胺化等方法预先活化的载体等，进一步地，为了酶的固定化以及配体的固定化，可以从市售载体中选择来使用。此外，还可以使用产生酶的微生物，此时菌体可以以封入微囊的形式使用，也可以使用固定化菌体，可以从本领域已知的方法适当选择来使用。
对本发明涉及的糖苷化反应的方法没有特别限定，只要是使上述糖供体的噁唑啉衍生物(3)在糖受体存在下与糖水解酶等催化糖基转移反应的酶发生作用，产生糖苷的方法即可，通过向原料化合物的水溶液中混合含有酶的缓冲液或水溶液来引发反应。反应通常可以在水中或水与水混合性的有机溶剂的混合体系、以及在水中实质上不溶或难溶的有机溶剂与水的液体二相体系中进行，通常优选在水性体系中进行。此外，还可以根据需要将起始原料溶解在适当的有机溶剂(例如乙醇、甲醇、二噁烷、二甲亚砜等)中后，将该溶解液用作水性溶液。此外，反应条件可以在不阻碍糖苷化产物的生成的范围内进行选择。作为基质的糖供体以及糖受体的浓度优选为0.001～20％，更优选为0.01～10％。进一步地，反应液的pH优选为5～13、更优选为6～10，反应温度优选为10～50℃、更优选为20～40℃。为了稳定pH，还可以使用缓冲液(例如磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、Tris缓冲液等)。进一步地，为了调节pH，还可以使用酸、碱来进行调节。此外，反应时间为1分钟～200小时、优选为20分钟～150小时，但是应根据各自的酶浓度或所使用的糖供体以及糖受体来适当决定。
使用酶产生生物(例如转化体等)时，为了更有效地进行反应，可以添加葡萄糖等糖类；乙酸等有机酸；乙醇、甘油等能量物质。它们可以分别单独使用或以它们的混合物的方式使用。添加量相对于基质优选为100份的1～10倍量。进一步地，可以分别组合葡萄糖等糖类、乙酸等有机酸、甘油等能量物质、辅酶、辅酶再生酶和辅酶再生酶的基质来使用。它们原本蓄积在菌体中，通过根据需要添加这些物质，有可能会提高反应速度、收率等，可以适当进行选择。根据需要可以向反应体系内依次添加或连续添加选自由基质、该酶、产生酶的微生物的菌体、其培养物、它们的处理物以及提取物组成的组中的物质、以及其他的物质。通过在连续地取出产物的同时进行反应，可以提高反应速度。
反应可以以间歇式或连续方式进行，也可以使用膜反应器。通过反应产生的糖苷可以通过惯用的分离纯化方法进行分离纯化。例如，可以由反应液直接(或在使用菌体的情况下在分离菌体后)用于膜分离、基于有机溶剂(例如甲苯、氯仿等)的提取、浓缩、减压浓缩、蒸馏、分馏、析晶、重结晶、高效液相色谱法(HPLC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法等通常的纯化方法中。例如，反应结束后，用乙酸丁酯、乙酸乙酯、甲苯、氯仿等有机溶剂从反应液中提取产物，蒸馏除去溶剂，由此可以得到粗产物。该粗产物可以直接使用，也可以根据需要通过硅胶柱色谱等方法纯化后，进一步通过使用纤维素衍生物等载体(包括光学活性载体)的高效液相色谱法等方法纯化。通过使酶与反应溶液接触，可以进行目的的酶反应，酶与反应溶液的接触方式不受这些具体例的限定。反应溶液是将基质或酶反应所必需的物质溶解在提供酶活性的表达所需的环境的适当的溶剂中而成的。
本糖苷化反应中，酶与含有糖供体和糖受体的基质溶液可以以间歇法或连续法接触，从而进行该糖苷化反应，可以适当选择适于工业实施的方法来进行。该糖受体与该糖供体的合计基质浓度约为1～50w/v％是适当的。更优选的方式中，噁唑啉衍生物(3)的浓度约为5～20w/v％，而且糖受体的浓度约为0.001～0.4mol/L。可以预先向基质溶液中添加有利于稳定酶的金属盐等。
作为上述糖苷化反应条件，在酶稳定且可以充分地发挥作用的条件(例如pH约3～10、更优选pH约5～10，温度约20～80℃、更优选约30～70℃的范围)下选择。对于壳多糖酶A1及其变异型壳多糖酶、Endo A、Endo M等，可以采用该酶稳定的pH，例如pH约为4～7、优选pH约为5.5～6，可以在温度为例如50℃以下的温度、优选37℃左右进行糖苷化。
根据本发明的优选实施方式，生物反应器具有可以使负载有酶的载体与待反应的流体接触的装置。优选该装置为选自搅拌型反应器、篮式生物反应器、流化床式反应器、支撑床式反应器、过滤器式反应器等的装置。作为非常一般的固定化酶的使用形式，可以为利用填充柱的连续式或固定化酶的回收较为容易的间歇式。生物反应器同样地可以由具有1根色谱柱或优选具有多根色谱柱的装置构成。待处理的基质优选沿着重力作用方向在色谱柱中流通。作为生物反应器的其他优选的实施方式，在该装置的基础上，还含有添加有待处理的基质的槽、用于对来自生物反应器的流出物进行后处理的后处理槽、以及产物的贮藏用槽。
本发明的实施方式中，可以构建具有如下特征的方法：通过液相色谱法将得到的糖苷化的糖苷产物分离和/或纯化为所需的含葡糖苷的糖苷。此外，液相色谱中，使用ODS反相柱，可以有效且在工业上有利地得到所需制品。
作为糖受体，可以使用本领域中已知的糖受体，可以适当选择适宜的糖受体来使用。该糖受体不受该物质的起源、由来的特别限定，可以包括由天然得到的糖受体；在基因工程学中通过动物细胞、植物细胞、微生物等合成的糖受体、利用酶制造的糖受体；通过发酵制造的糖受体或人工化学合成的糖受体等。可以举出包括蛋白质、肽、脂质、糖或糖质、有机化合物、天然或合成高分子化合物等、以及糖蛋白、糖肽、糖脂质等的糖受体。糖受体可以为单独的物质或混合物。
对于得到的糖苷即加成有糖链的化合物、寡糖，其在例如生理活性寡糖、药物传输系统的载体、表面活性剂、糖链药物、糖肽、糖蛋白、糖链高分子等各种用途中是有用的。产物糖苷在细胞识别、免疫、细胞分化、细胞移动、受精、成熟、组织形态形成、炎症、创伤治愈、癌转移、肿瘤化等的研究中是有用的。
可以使用本发明的技术，高度地进行区域选择和/或立体选择糖苷化，此外，由于可以适用于长的糖链，可以提高糖苷化的种类，可以将新的寡糖链和/或多糖链(oligosaccharides and/or polysaccharides)导入到肽、蛋白质、脂质、糖质等中。本发明技术中，由于可以使用结构明确的寡糖链等来合成作为糖供体的糖噁唑啉衍生物和糖苷，在药物、农药、化妆品等各种领域的应用上具有优点。利用本发明可以提供糖链微阵列(糖链芯片)的制造技术。
以下举出实施例对本发明进行具体的说明，但这些实施例仅是为了本发明的说明、作为本发明的具体方式的参考而提供的。这些例子用于说明本发明的特定具体方式，但这并不代表规定或限定了本申请公开的发明范围。本发明中，应理解为基于本说明书的思想可以存在各种实施方式。
对于所有的实施例，除了另外具体记载的之外，为使用标准的技术实施或可以实施的实施例，其对于本领域技术人员来说为公知的惯用技术。
实施例1
在83.9mg(0.496mmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入27.7mg(0.125mmol)N-乙酰基葡糖胺、208μl(1.5mmol)三乙胺和500μl重水，室温下搅拌1小时。对该反应液用NMR进行分析后可知，得到了下式所示的N-乙酰基葡糖胺的噁唑啉衍生物，其收率为83％。

目的物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹HNMR光谱的积分比算出。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图1所示，¹³C NMR光谱如图2所示。
实施例2
在41.6mg(0.246mmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入5.5mg(24.9μmol)N-乙酰基甘露糖胺、104μl(0.750mmol)三乙胺和500μl重水，室温下搅拌1小时。对该反应液用NMR进行分析后可知，得到了下式所示的N-乙酰基甘露糖胺的噁唑啉衍生物，其收率为76％。

目的物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹HNMR光谱的积分比算出。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图3所示，¹³C NMR光谱如图4所示。
实施例3
在42.2mg(0.250mmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入10.4mg(24.5μmol)N，N’-二乙酰基壳二糖、104μl(0.750mmol)三乙胺和500μl重水，室温下搅拌1小时。对该反应液用NMR进行分析后可知，得到了下式所示的N，N’-二乙酰基壳二糖的噁唑啉衍生物，其收率为77％。

目的物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹HNMR光谱的积分比算出。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图5所示，¹³C NMR光谱如图6所示。
实施例4
在42.5mg(0.251mmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入9.8mg(25.6μmol)N-乙酰基乳糖胺、104μl(0.750mmol)三乙胺和500μl重水，室温下搅拌1小时。对该反应液用NMR进行分析后可知，得到了下式所示的N-乙酰基乳糖胺的噁唑啉衍生物，其收率为90％。

目的物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹HNMR光谱的积分比算出。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图7所示，¹³C NMR光谱如图8所示。¹³C NMR光谱中可以确认到源自原料N-乙酰基乳糖胺所含有的乙醇的峰，但其完全没有参与反应。
实施例5
在12.2mg(72.2μmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入3.1mg(4.9μmol)N，N’，N”-三乙酰基壳三糖、31.0μl(0.224mmol)三乙胺和500μl重水，室温下搅拌1小时。对该反应液用NMR进行分析后可知，得到了下式所示的N，N’，N”-三乙酰基壳三糖的噁唑啉衍生物，其收率为75％。

目的物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹HNMR光谱的积分比算出。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图9所示。
实施例6
在13.8mg(81.6μmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入4.2mg(5.06μmol)N，N’，N”，N”’-四乙酰基壳四糖、31.0μl(0.224mmol)三乙胺和500μl重水，室温下搅拌1小时。对该反应液用NMR进行分析后可知，得到了下式所示的N，N’，N”，N”’-四乙酰基壳四糖的噁唑啉衍生物，其收率为83％。

目的物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹HNMR光谱的积分比算出。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图10所示。
实施例7
在13.7mg(81.0μmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入5.2mg(4.93μmol)N，N’，N”，N”’，N””-五乙酰基壳五糖、31.0μl(0.224mmol)三乙胺和500μl重水，室温下搅拌1小时。对该反应液用NMR进行分析后可知，得到了下式所示的N，N’，N”，N”’，N””-五乙酰基壳五糖的噁唑啉衍生物，其收率为69％。

目的物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹HNMR光谱的积分比算出。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图11所示。
实施例8
在45.2mg(0.267mmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入26.4mg(62.2μmol)N，N’-二乙酰基壳二糖、104μl(0.750mmol)三乙胺和250μl重水，0℃搅拌1小时。接着，使用得到的反应液，在以下的条件下进行高效液相色谱，回收目的物的级分。
色谱柱：“Inertsil ODS-3(10.0×250mm)”(商品名、GL Sciences公司制)
溶剂：水100％
温度：30℃
流速：4.8ml/min
检测器：UV(214nm)
然后，对得到的级分进行冷冻干燥，得到下式所示的N，N’-二乙酰基壳二糖的噁唑啉衍生物23.3mg。收率为92％。

另外，上述N，N’-二乙酰基壳二糖的噁唑啉衍生物通过¹H NMR确认了结构。
实施例9
在16.6mg(98.2μmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入10.2mg高甘露糖型糖链、40.4μl(0.291mmol)三乙胺和194μl重水，0℃搅拌1小时。对该反应液用NMR进行分析后可知，得到了高甘露糖型糖链的噁唑啉衍生物，其收率为64％。目的物的代表性结构如下式所示。

目的物的收率由¹H NMR光谱的积分比算出。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图12所示。使用如下的高甘露糖型糖链：以蛋清白蛋白作为原料，通过来源于原玻璃蝇节杆菌(Arthrobacter protophormiae)的内切β-N-乙酰基氨基葡糖苷酶进行处理，对得到的糖链用凝胶过滤柱色谱进行纯化，得到高甘露糖型糖链。
实施例10
在17.6mg(0.104mmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入20.0mg(9.9μmol)唾液酸复合型糖链、42.0μl(0.303mmol)三乙胺和200μl重水，0℃搅拌1小时。对该反应液用NMR进行分析后可知，得到了下式所示的唾液酸复合型糖链的噁唑啉衍生物，其收率为92％。

目的物的收率由¹H NMR光谱的积分比算出。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图13所示。使用如下的唾液酸复合型糖链：以与Fmoc-天冬酰胺键合的糖链作为原料，通过来源于冻土毛霉(Mucor hiemalis)的内切β-N-乙酰基氨基葡糖苷酶进行处理，对得到的糖链使用高效液相色谱进行纯化，得到唾液酸复合型糖链。
同样地，可以合成其他的唾液酸复合型糖的噁唑啉衍生物。唾液酸复合型糖链为在非还原末端具有两个唾液酸的寡糖，可以用于糖链芯片的制造等各种目的。根据本发明的方法，即使为存在于唾液酸部分的羧酸，不对其进行保护也可以大致定量地进行噁唑啉化。
实施例11
在63.4mg(0.375mmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入27.7mg(0.125mmol)N-乙酰基葡糖胺、156μl(1.13mmol)三乙胺和500μl重水，0℃搅拌15分钟。对该反应液用NMR进行分析后可知，得到了下式所示的N-乙酰基葡糖胺的噁唑啉衍生物，其收率为90％。

目的物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹HNMR光谱的积分比算出。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图14所示。
实施例12
在63.4mg(0.375mmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入27.7mg(0.125mmol)N-乙酰基葡糖胺、262μl(1.13mmol)4.3M三甲基胺水溶液和238μl重水，0℃搅拌15分钟。对该反应液用NMR进行分析后可知，得到了下式所示的N-乙酰基葡糖胺的噁唑啉衍生物，其收率为74％。

目的物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹HNMR光谱的积分比算出。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图15所示。
实施例13
在63.4mg(0.375mmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入27.7mg(0.125mmol)N-乙酰基葡糖胺、121μl(1.13mmol)N，N-二甲基乙基胺和500μl重水，0℃搅拌15分钟。对该反应液用NMR进行分析后可知，得到了下式所示的N-乙酰基葡糖胺的噁唑啉衍生物，其收率为72％。

目的物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹HNMR光谱的积分比算出。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图16所示。
实施例14
在63.4mg(0.375mmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入27.7mg(0.125mmol)N-乙酰基葡糖胺、158μl(1.13mmol)N-正丁基二甲基胺和500μl重水，0℃搅拌15分钟。对该反应液用NMR进行分析后可知，得到了下式所示的N-乙酰基葡糖胺的噁唑啉衍生物，其收率为78％。

目的物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹HNMR光谱的积分比算出。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图17所示。
实施例15
在63.4mg(0.375mmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入27.7mg(0.125mmol)N-乙酰基葡糖胺、192μl(1.13mmol)N，N-二异丙基乙基胺和500μl重水，0℃搅拌15分钟。对该反应液用NMR进行分析后可知，得到了下式所示的N-乙酰基葡糖胺的噁唑啉衍生物，其收率为61％。

目的物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹HNMR光谱的积分比算出。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图18所示。
实施例16
在63.4mg(0.375mmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入27.7mg(0.125mmol)N-乙酰基葡糖胺、173μl(1.13mmol)N，N，N’，N’-四甲基乙二胺和500μl重水，0℃搅拌15分钟。对该反应液用NMR进行分析后可知，得到了下式所示的N-乙酰基葡糖胺的噁唑啉衍生物，其收率为45％。

目的物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹HNMR光谱的积分比算出。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图19所示。
[比较例1]
在335mg(1.75mmol)1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐中加入55mg(0.25mmol)N-乙酰基葡糖胺、35μl(0.25mmol)三乙胺和500μl重水，4℃搅拌4天。对该反应液用NMR进行分析后可知，目的物的2-甲基(1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并)[2，1-d]-2-噁唑啉的收率为37％。目的物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹H NMR光谱的积分比算出。1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐具有下述化学结构式。

[比较例2]
在37.0mg(0.134mmol)4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物水合物中加入5.6mg(25.3μmmol)N-乙酰基葡糖胺、21.8μl(0.125mmol)N，N-二异丙基乙基胺和500μl重水，室温下搅拌6小时。对该反应液用NMR进行分析后可知，目的物的2-甲基(1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并)[2，1-d]-2-噁唑啉的收率为33％。目的物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹H NMR光谱的积分比算出。4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物具有下述化学结构式。

实施例17
将4，5-二氢-2-甲基{1，2-二脱氧-4-O-(β-D-吡喃半乳糖基)-α-D-吡喃葡糖基}[2，1-d]-2-噁唑(48mg、0.13mmol)和甲基(N-乙酰基-β-葡糖酰胺)(GlcNAcβ-OMe；92mg、0.39mmol)溶解在150μl的0.05M柠檬酸盐缓冲液(pH9.0)中，向得到的混合物中加入溶解在80μl的0.01M柠檬酸盐缓冲液(pH9.0)中的壳多糖酶(芽孢杆菌(Bacillus sp.)、相对于糖供体噁唑啉衍生物为10wt％)，将混合物在34℃搅拌0.5小时。向得到的混合物中加入THF，使酶失活，蒸馏除去溶剂，将残留物溶解于水中后，用HPLC分离，得到Gal(β1-4)GlcNAc(β1-4)GlcNAcβ-OMe。
实施例18
将4，5-二氢-2-甲基{1，2-二脱氧-4-O-(β-D-吡喃半乳糖基)-α-D-吡喃葡糖基}[2，1-d]-2-噁唑(73mg、0.2mmol)加入到微管中，向其中添加GlcNAcβ-SCH₂CH₂CONHCH₂NHCOCH＝CH₂(26mg、66.7mmol)和壳多糖酶(芽孢杆菌、7.3mg、292mU)的2.0mL的0.05M Tris缓冲液(pH9.0)溶液，将得到的混合物在40℃进行培养处理。向得到的混合物中加入过量的THF后，将混合物在90℃加热20分钟，使酶失活，蒸馏除去溶剂，将残留物溶解于水中后，用制备HPLC(Inertsil-ODS、H₂O/MeOH、3.0ml/min)进行纯化处理，得到Gal(β1-4)GlcNAc(β1-4)GlcNAcβ-SCH₂CH₂CONHCH₂NHCOCH＝CH₂(35mg、69％)。
实施例19
将4，5-二氢-2-甲基{1，2-二脱氧-4-O-(β-D-吡喃半乳糖基)-α-D-吡喃葡糖基}[2，1-d]-2-噁唑(18mg、48μmol)加入到微管中，向其中添加GlcNAc(β1-4)GlcNAcβ-SCH₂CH₂CONHCH₂NHCOCH＝CH₂(19mg、32μmol)和壳多糖酶(芽孢杆菌、70.4mU)的2.0mL的0.05M碳酸盐缓冲液(pH10.4)溶液，将得到的混合物在40℃培养处理2小时。将得到的混合物在90℃加热20分钟使酶失活，蒸馏除去溶剂，将残留物溶解于水中后，用制备HPLC(Inertsil-ODS、H₂O/MeOH＝900∶7、5.0ml/min)进行纯化处理，得到Gal(β1-4)GlcNAc(β1-4)GlcNAc(β1-4)GlcNAcβ-SCH₂CH₂CONHCH₂NHCOCH＝CH₂(17mg、54％)。
与上述大致同样地进行操作，使用变异型壳多糖酶、内切β-N-乙酰基氨基葡糖苷酶M、内切β-N-乙酰基氨基葡糖苷酶A，就可以由糖噁唑啉衍生物合成对应的糖苷。
实施例20
在3.2mg(18.75μmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入2.0mg(6.25μmol)N-乙酰基葡糖胺-6-硫酸钠盐、7.8μl(56.25μmol)三乙胺和50μl重水，0℃搅拌15分钟。向该反应液加入400μl重水，用NMR进行分析后可知，产物2-甲基(1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并)[2，1-d]-2-噁唑啉-6-硫酸钠盐的收率为84％。产物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹H NMR光谱的积分比算出。得到的含有产物2-甲基(1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并)[2，1-d]-2-噁唑啉-6-硫酸钠盐的反应液的¹HNMR光谱如图20所示。
实施例21
在3.2mg(18.75μmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入2.2mg(6.25μmol)N-乙酰基葡糖胺-6-磷酸二钠盐、7.8μl(56.25μmol)三乙胺和50μl重水，0℃搅拌15分钟。向该反应液加入400μl重水，用NMR进行分析后可知，产物2-甲基(1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并)[2，1-d]-2-噁唑啉-6-磷酸二钠盐的收率为79％。产物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹H NMR光谱的积分比算出。得到的含有产物2-甲基(1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并)[2，1-d]-2-噁唑啉-6-磷酸二钠盐的反应液的¹H NMR光谱如图21所示。
实施例22
在104.5mg(0.375mmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑鎓六氟磷酸盐中加入27.7mg(0.125mmol)N-乙酰基葡糖胺、156μl(1.125mmol)三乙胺和500μl重水，室温下搅拌15分钟。对该反应液用NMR进行分析后可知，产物2-甲基(1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并)[2，1-d]-2-噁唑啉的收率为82％。产物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹H NMR光谱的积分比算出。得到的含有产物2-甲基(1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并)[2，1-d]-2-噁唑啉的反应液的¹H NMR光谱如图22所示。
实施例23
在68.7mg(0.375mmol)2-氯-1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)-嘧啶鎓氯化物中加入27.7mg(0.125mmol)N-乙酰基葡糖胺、156μl(1.125mmol)三乙胺和500μl重水，0℃搅拌3小时。对该反应液用NMR进行分析后可知，产物2-甲基(1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并)[2，1-d]-2-噁唑啉的收率为65％。产物的收率通过向反应液中添加苯磺酸钠作为标准物质，由¹HNMR光谱的积分比算出。得到的含有产物2-甲基(1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并)[2，1-d]-2-噁唑啉的反应液的¹H NMR光谱如图23所示。
实施例24
在5.3mg(31.25μmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入4.9mg(6.25μmol)透明质酸四糖、13.9μl(93.75μmol)三乙胺和50μl重水，0℃搅拌30分钟。向该反应液中加入400μl重水，用NMR进行分析后可知，产物2-甲基[3-O-[4-O-[3-O-(β-D-吡喃葡糖醛酸基)-2-乙酰氨-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基]-β-D-吡喃葡糖醛酸基]-1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并][2，1-d]-2-噁唑啉的收率为定量(quant.)。由于通过反应液的NMR分析，不能观测到原料透明质酸四糖的异头质子的峰，产物的收率为定量(quant.)。得到的含有产物2-甲基[3-O-[4-O-[3-O-(β-D-吡喃葡糖醛酸基)-2-乙酰氨-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基]-β-D-吡喃葡糖醛酸基]-1，2-二脱氧-α-D-吡喃葡萄糖并][2，1-d]-2-噁唑啉的反应液的¹H NMR光谱如图24所示。
实施例25
在85.8mg(0.508mmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入99.3mg下式(5)所示的寡糖、0.21ml(1.50mmol)三乙胺和1.0ml重水，于22℃放置30分钟。对该反应液用NMR进行分析后可知，与实施例24同样地由NMR经验法则确认到定量地得到了下式(6)所示的噁唑啉衍生物。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图25所示。

实施例26
在84.9mg(0.502mmol)2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物中加入95.9mg下式(7)所示的寡糖、0.21ml(1.50mmol)三乙胺和1.0ml重水，于22℃放置30分钟。对该反应液用NMR进行分析后可知，与实施例24同样地由NMR经验法则确认到定量地得到了下式(8)所示的噁唑啉衍生物。含有目的物的反应液的¹H NMR光谱如图26所示。

实施例27
将实施例25的式(6)所示的噁唑啉衍生物(20mg)溶解在400μl的0.05M磷酸钠缓冲液(pH7.3)中，向得到的混合物中加入透明质酸酶(来源于牛睾丸、700U)，将混合物在30℃放置1小时、2小时、4小时、6小时或72小时。将得到的混合物煮沸，使酶失活，用水稀释后，用HPLC分离。结果确认到式(6)所示的噁唑啉衍生物随时间的经过而聚合伸长。
实施例28
将实施例26的式(8)所示的噁唑啉衍生物(20mg)溶解在400μl的0.05M磷酸钠缓冲液(pH7.3)中，向得到的混合物中加入透明质酸酶(来源于牛睾丸、700U)，将混合物在30℃放置1小时、2小时、4小时、6小时或72小时。将得到的混合物煮沸，使酶失活，用水稀释后，用HPLC分离。结果确认到式(8)所示的噁唑啉衍生物随时间的经过而聚合伸长。
工业实用性
本发明中，提供由无保护糖简便地制造噁唑啉衍生物的方法以及使用该产物制造糖苷的方法。本发明中，使用甲脒衍生物作为脱水缩合剂，在水溶液中以一阶段的步骤合成具有游离的半缩醛羟基和酰氨基的糖的噁唑啉衍生物，而且使用糖水解酶，以该噁唑啉衍生物作为糖供体来制造糖苷。得到的糖苷、即加成有糖链的化合物或寡糖在例如生理活性寡糖、药物传输系统的载体、表面活性剂、糖链药物、糖肽、糖蛋白、糖链高分子等各种用途中是有用的，此外，产物糖苷在细胞识别、免疫、细胞分化、细胞移动、受精、成熟、组织形态形成、炎症、创伤治愈、癌转移、肿瘤化等的研究中是有用的。
显而易见的是，本发明除了上述的说明和实施例中特别记载的内容之外也是可以实施的。可以根据上述本发明的启示对本发明进行很多改变和变形，因此这些改变和变形也在本案的权利要求书的范围内。