丁基酸钠的应用.pdf

本发明提供了一种丁基酸钠在饲料防霉中的应用，用于防治黄曲霉、烟曲霉、枯青霉、岛青霉、串珠镰刀菌、禾谷镰刀菌或从霉变饲料中提取的混合霉菌，丁基酸钠对混合霉菌的最低抑菌浓度为62mg/kg，对黄曲霉、烟曲霉的最低抑菌浓度为62mg/kg，对枯青霉、岛青霉、串珠镰刀菌、禾谷镰刀菌的最低抑菌浓度为88mg/kg，经121℃高温处理30min后，丁基酸钠的最低抑菌浓度为62mg/kg，pH＝5.5、7.5时，丁基酸钠的最低抑菌浓度分别为88mg/kg、130mg/kg、140mg/kg，本发明提供了不

1.  一种丁基酸钠在饲料防霉中的应用，其特征在于，用于防治黄曲霉、烟曲霉、枯青霉、岛青霉、串珠镰刀菌、禾谷镰刀菌或从霉变饲料中提取的混合霉菌。

2.  根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述丁基酸钠对混合霉菌的最低抑菌浓度为62mg/kg。

3.  根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述丁基酸钠对黄曲霉、烟曲霉的最低抑菌浓度为62mg/kg。

4.  根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述丁基酸钠对枯青霉、岛青霉、串珠镰刀菌、禾谷镰刀菌的最低抑菌浓度为88mg/kg。

5.  根据权利要求1所述的应用，其特征在于，经121℃高温处理30min后，所述丁基酸钠的最低抑菌浓度为62mg/kg。

6.  根据权利要求1所述的应用，其特征在于，pH＝5.5时所述丁基酸钠的最低抑菌浓度为88mg/kg。

7.  根据权利要求1所述的应用，其特征在于，pH＝7.5时所述丁基酸钠的最低抑菌浓度为140mg/kg。

丁基酸钠的应用
技术领域
本发明涉及防霉剂技术领域，更具体地，涉及饲料防霉剂技术领域，特别是指丁基酸钠在饲料防霉中的应用。
背景技术
饲料在储存、运输、销售和使用过程中，由于饲料中水分的变化和环境的影响，极易发生霉变，大量生长和繁殖的霉菌污染饲料，饲料发霉和霉菌毒素中毒症是世界范围内畜禽生产中普遍存在的严重问题，控制饲料霉变是饲料生产中不可忽视的环节。
目前常用的防霉剂品种有丙酸和丙酸盐、山梨酸及其钾盐、苯甲酸及其钠盐和双乙酸钠等。这些防霉剂对保护饲料品质、促进畜牧业健康发展有着十分重要的作用，其经济和社会效益得到了人们的充分肯定。但也存在一定的问题，如丙酸有刺激性气味以及很强的腐蚀性，受热损失大，挥发快，使用不太方便；山梨酸及其钾盐防霉效果受pH值的影响，pH值大于7.5时，几乎无抑菌作用，对乳酸菌几乎无效，在水中易氧化，在塑料容器中其活性会降低，在空气中不稳定，能被氧化着色，有吸湿性；苯甲酸及其钠盐对pH值要求很窄，只能在酸性条件下发挥作用，pH值大于4时防霉作用开始下降，有苦涩等不良味道；当饲料霉变严重时或双乙酸钠量达不到完全抑菌时，双乙酸钠它本身可作为微生物的营养源反而促进了霉菌的生长，相应增加双乙酸钠的量可完全抑菌，但又增加了防霉成本。
丁基酸钠的最大特点是抗菌范围广，它通过渗透进入微生物的细胞壁，干扰细胞内各种酶体系而产生作用，主要抵抗常易使饲料、食品、饮料中繁殖而引起的腐败变质的细菌、酵母菌、霉菌等微生物，特别是假单孢子菌、葡萄球菌和大肠杆菌。耐光耐热性好，受酸碱度影响较小，有效使用浓度较低，且水溶液稳定，不会在加工过程中受热分解，或随水蒸气挥发，但是不清楚不同条件下丁基酸钠对几种霉菌的抑制浓度，妨碍了丁基酸钠在饲料生产中作为防霉剂的应用。
发明内容
本发明的主要目的就是针对以上存在的问题与不足，提供一种丁基酸钠在饲料防霉中的应用，该应用提供了不同条件下丁基酸钠对几种霉菌的抑制浓度，为丁基酸钠在饲料生产中用作防霉剂奠定了基础。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种丁基酸钠在饲料防霉中的应用，其特点是，用于防治黄曲霉、烟曲霉、枯青霉、岛青霉、串珠镰刀菌、禾谷镰刀菌或从霉变饲料中提取的混合霉菌。
较佳地，所述丁基酸钠对混合霉菌的最低抑菌浓度为62mg/kg。
较佳地，所述丁基酸钠对黄曲霉、烟曲霉的最低抑菌浓度为62mg/kg。
较佳地，所述丁基酸钠对枯青霉、岛青霉、串珠镰刀菌、禾谷镰刀菌的最低抑菌浓度为88mg/kg。
较佳地，经121℃高温处理30min后，所述丁基酸钠的最低抑菌浓度为62mg/kg。
较佳地，pH＝5.5时所述丁基酸钠的最低抑菌浓度为88mg/kg。
较佳地，pH＝7.5时所述丁基酸钠的最低抑菌浓度为140mg/kg。
本发明主要以防治黄曲霉、烟曲霉、枯青霉、岛青霉、串珠镰刀菌或禾谷镰刀菌或从霉变饲料中提取的混合霉菌为对象，提供了丁基酸钠对几种不同霉菌的最低抑菌浓度，以及不同pH条件下的最低抑菌浓度，为丁基酸钠在饲料生产中用作防霉剂奠定了基础。
具体实施方式
为更好的理解本发明的内容，下面结合具体实施例作进一步说明。
测定最低抑制溶度采用最低抑菌浓度(MIC)法，该方法根据防霉剂能够抑制霉菌生长的最低抑菌浓度来判断防霉剂抑菌效果，抑菌浓度愈低，防霉效果愈佳。
实施例中所用到的稀释液：0.85％生理盐水，称取分析NaCl8.5g，定容1000ml，121℃高温高压灭菌30min。
实施例中还具体用到了下列三种培养基：
①高盐察氏培养基：硝酸钠2g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.5g、氯化钾0.5g、硫酸亚铁0.01g、氯化钠60g、蔗糖30g、琼脂20g、蒸馏水1000ml；稀释液：0.85％生理盐水。
②查氏培养基：蒸馏水1000ml、硝酸钠3g、磷酸氢二钾1g、硫酸镁0.5g、氯化钾0.5g、硫酸亚铁0.01g、蔗糖30g、琼脂15g。
③马铃薯琼脂培养基：马铃薯去皮切成薄片，每200g马铃薯加自来水1000ml，置电炉上80℃温浸1h，用纱布过滤，稀释到1000ml，15磅30min灭菌即为20％的马铃薯浸汁。每100ml马铃薯浸汁加葡萄糖2g，加琼脂1.5-2g，15磅30min灭菌即得固态马铃薯琼脂培养基。
这三种培养基的pH值调成4.5。
实施例1丁基酸钠对饲料中霉菌最低抑制溶度(MIC)测定
1.1制备霉菌孢子悬液
称取有霉菌的鸡饲料25g，该饲料购自南京农业大学动物科技学院饲料加工实验室，放入含有灭菌的生理盐水250ml的三角瓶中，置振荡器上振荡30min，用10ml移液管吸取10ml的上述带霉菌的生理盐水1∶10稀释于25ml试管中，用洗耳球及1ml移液管反复吹吸50次，使霉菌孢子分散开。取1ml此带霉菌的稀释液加入9ml生理盐水，充分混合得1∶100带霉菌的稀释液。取1∶100带霉菌的稀释液1ml，加到100ml灭菌生理盐水中，充分混合得1∶10000带有霉菌的稀释液(此稀释液每毫升含有霉菌菌落数大致100个)。
1.2制备含不同丁基酸钠溶度的平板
分别取防霉剂丁基酸钠0.1g、0.125g、0.15g、0.175g、0.2g置于250ml灭菌的三角瓶中，加灭菌后的生理盐水100ml，放置振荡器30min取下，置电炉上加温至50℃左右3min～5min，使防霉剂的有效成分充分溶解，分别加入无菌培养皿各1ml，倒入约45℃灭菌的培养基①19ml，充分混匀待其凝固后，最终溶度为：40mg/Kg、50mg/Kg、60mg/Kg、62mg/kg、88mg/kg。同时设对照组，每组做两个平板作重复。
1.3接种：用移液枪加入步骤1.1制备的1ml 1∶10000带霉菌的稀释液于平板中，涂布均匀后，将平板倒置于28℃的培养箱中培养72小时后观察，培养观察一周。无微生物生长的最低浓度为其最低防霉浓度。
1.4结果
表1：丁基酸钠最低抑菌浓度

由表1可见，随着丁基酸钠浓度的提高，霉菌数目逐渐减少；在丁基酸钠溶度达到62mg/kg时霉菌就不能生长，所以得出当培养剂的pH值在4.5时，丁基酸钠对饲料中霉菌最小抑制溶度为62mg/kg。
实施例2丁基酸钠对六种不同霉菌的抑制效果
六种标准实验菌：黄曲霉、烟曲霉、枯青霉、岛青霉、串珠镰刀菌、禾谷镰刀菌购于中国普通微生物保藏中心。
1.1菌株恢复培养
用无菌吸管，吸取0.3-0.4ml适宜的液体培养基葡萄糖蛋白胨汤，滴入买来的具有相应菌株的安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状；取约0.2ml菌体悬浮液，移植于指定的琼脂斜面/平板培养基上，培养5d。
1.2平板制备
分别取丁基酸钠0.1g、0.125g、0.15g、0.175g、0.2g置于250毫升灭菌的三角瓶中，加灭菌后的生理盐水100毫升，放置振荡器30min取下，置电炉上加温至50℃左右3min～5min，使丁基酸钠充分溶解分别加入无菌培养皿各1ml，倒入约45℃灭菌的培养基19ml，充分混匀待其凝固后，最终浓度为：40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、62mg/kg、88mg/kg。其中，黄曲霉、烟曲霉、枯青霉、岛青霉使用②培养基，串珠镰刀菌、禾谷镰刀菌使用③培养基。
1.3接种
将已活化的菌种分别接入无菌生理盐水，制成含菌量(孢子量)为100cfu/ml的菌悬液，用移液枪加入1ml菌悬液涂布均匀后，霉菌于28℃培养72h，细菌于37℃培养24h，酵母于37℃培养72h后，丁基酸钠对黄曲霉、烟曲霉的最低抑菌浓度为62mg/kg，对枯青霉、岛青霉、串珠镰刀菌、禾谷镰刀菌的最低抑菌浓度为88mg/kg，丁基酸钠对这六种特定霉菌具有很好的抑制作用。
实施例3pH值对丁基酸钠抑制效果的影响
1.1不同pH值的培养基配制
用0.1mol/L氢氧化钠把培养基(种类)的pH分别调成5.5、7.5。
1.2制备平板：分别取丁基酸钠(江苏天成生化制品有限公司，批号：20071011，规格：25kg/袋)0.1g、0.125g、0.15g、0.175g、0.2g、0.225g、0.25g、0.275g、0.3g、0.325g、0.35g置于250毫升灭菌的三角瓶中，加灭菌后的生理盐水100毫升，放置振荡器30min取下，置电炉上加温至50℃左右3～5min，使丁基酸钠充分溶解，分别加入无菌培养皿各1ml，倒入约45℃灭菌的各pH培养基19ml，充分混匀待其凝固后，最终浓度为：40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、62mg/kg、88mg/kg、90mg/kg、100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg。分别设各pH值的对照组，每组做两个平板作重复。
1.3接种
用移液枪加入实施例1制备的1ml 1∶10000带霉菌的稀释液于平板中，涂布均匀后，将平板倒置于28℃的培养箱中培养72小时后观察，培养观察一周。
当培养基pH＝5.5时，丁基酸钠的最低抑菌浓度为88mg/kg；当培养基pH＝7.5时，丁基酸钠的最低抑菌浓度为140mg/kg。当培养基呈弱酸性时，丁基酸钠的防霉效果最佳；当培养基呈中性或弱碱性时，丁基酸钠的防霉效果减弱，随着培养基pH值增大，丁基酸钠的防霉浓度逐渐升高；pH大于7.5时仍有一定的防霉作用，与常用的化学防霉剂的有效pH值(苯甲酸钠pH≤4，山梨酸钾pH≤7)相比丁基酸钠的防霉效果更具有实用性。
综上所述，本发明提供了不同条件下丁基酸钠对几种霉菌的抑制浓度，为丁基酸钠在饲料生产中用作防霉剂奠定了基础。