一种治疗肾病的药物及其制备方法 【技术领域】
本发明涉及一种治疗肾病的药物及其制备方法， 属于中药领域。背景技术 肾炎是由多种原因引起的肾小球损害， 可引起肾小球毛细血管通透性的改变， 出 现不同程度的蛋白尿、 血尿、 白细胞尿和管型尿。中医认为这与风、 水湿、 热、 过劳有关。
肾炎清片作为医院制剂自 1979 年在北京军区北戴河疗养院使用并获得医院制剂 批件， 在医院使用期间积累了一定的临床数据。肾炎清片的处方及制备方法是 ： 黄芪 800g、 益母草 800g、 白茅根 400g、 萹蓄 400g、 瞿麦 400g、 小蓟 400g、 石韦 160g、 地榆炭 120g、 土大 黄 400g、 甘草 40g。取上述药材加水煎煮 3 次， 合并煎煮液过滤， 浓缩至清膏， 加适量淀粉制 粒， 70℃以下低温干燥， 加硬酯酸镁压片、 包糖衣， 即得。
肾炎清片方中益母草， 性苦、 辛而微寒， 具有利水消肿、 解毒活血之功， 为方中君 药。白茅根性甘、 寒， 既能凉血止血， 又能清热利尿、 导热下行， 适宜于膀胱湿热蕴结而致的 血尿。本方用其与益母草共为君药， 可使妄行之血归于脉中而降血尿。萹蓄与瞿麦二者合 用， 善于清下焦湿热而利水通淋 ； 小蓟善治下焦结热所致尿涩赤痛、 血淋尿血 ； 石韦能上清 肺热、 下走膀胱而利尿通淋 ； 地榆长于治疗下焦病证， 在本方中携诸药清热下焦火热之邪， 破解下焦淤血 ； 土大黄可治疗血热所致的咳血、 吐血、 尿血、 痔血、 崩漏， 以及外伤出血等证。 黄芪功于补气升阳、 益卫固表、 利水消肿、 托疮生肌。 肾炎清片对于降低急性肾小球肾炎、 慢 性肾小球肾炎、 隐匿性肾小球肾炎、 紫癜性肾炎等原因所致血尿有明显作用， 可减少和减轻 糖皮质激素治疗过程中的不良反应。
肾炎清片的传统工艺采用水提浓缩直接制剂的工艺， 基本沿用了传统中药汤剂的 工艺， 该工艺虽然可以一定程度上保留药效成分， 但其缺点也是显而易见的 ： ①采取传统汤 剂水提工艺， 后续不经任何的精制处理， 使得产品的出膏率很高 ( 干膏得率为 30％以上 )， 患者服用量大 ( 日服 24 片 )， 加上慢性肾炎需要长期用药， 给患者的服用带来极大的困难 ； ②采用糖衣片工艺， 不仅使片重大大增加， 而且不利于糖尿病患者服用， 尤其是近年来发病 率持续上升的糖尿病肾病患者不得不被限制使用 ； ③提取工艺未考虑处方中各药味的特 点， 使功效成分提取不完全， 如据文献报道， 处方中小蓟的主要功效成分为黄酮类化合物、 土大黄的主要功效成分为蒽醌、 萘醌及黄酮类化合物， 这几类化合物醇溶性较好， 理论上应 采用乙醇提取， 而该工艺采用水提取， 使功效成分转移率较低， 提取不完全。
本发明的目的在于根据处方中各药味的特点， 充分考虑用药人群的要求， 设计合 理的提取制剂工艺， 在去粗取精的同时， 达到保持甚至提高药效的目的， 从而更有利于处方 药效的发挥和患者的服用。
发明内容
本发明要解决的第一个技术问题是提供一种疗效显著的治疗肾病的药物。
本发明要解决的另一个技术问题是提供上述药物组合物的制备方法。为实现上述目的， 本发明采用以下技术方案 ：
一种治疗肾病的药物， 其特征在于 ： 其活性成分由下列重量份数的原料制成 ：
黄芪 30-50 份 益母草 30-50 份 白茅根 10-30 份 萹蓄 10-30 份 瞿麦 10-30 份
小蓟 10-30 份 石韦 5-15 份 地榆炭 5-15 份 土大黄 10-30 份 甘草 2-4 份
其制备方法如下 ：
(1) 黄芪加水提取， 水提液滤过浓缩， 加乙醇醇沉， 醇沉浓度为 60-90％， 静置， 过 滤得沉淀 ； 滤液回收乙醇后， 加适量水溶解， 溶液通过大孔树脂柱处理， 上样后先用水洗涤， 再用浓度为 30-95％的乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压回收乙醇， 浓缩液与上述沉淀混合浓 缩至稠膏 ( 或干燥 )， 得黄芪提取物 ；
(2) 益母草加水或醇 - 水溶剂提取， 提取液浓缩 ( 可加 50％ -95％乙醇醇沉， 滤过， 滤液浓缩 )， 加入适量水溶解， 用盐酸调 pH 值为 1.0-4.0， 滤过， 滤液通过离子交换树脂柱处 理， 水洗后， 用 1-3M 的 NaCl 溶液洗脱， 收集洗脱液， 浓缩干燥， 用体积百分比浓度为 80-95％ 的乙醇回流提取 1-3 次， 醇提液浓缩至稠膏 ( 或干燥 )， 得益母草提取物 ；
(3) 土大黄加水或醇 - 水溶剂提取， 提取液浓缩， 加入适量水溶解， 静置， 滤过， 滤液通过大孔吸附树脂或聚酰胺树脂柱处理， 上样后先用水洗涤， 再用体积百分比浓度为 30-95％的乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 浓缩至稠膏 ( 或干燥 ) 得土大黄提取物 ； (4) 小 蓟、 白 茅 根、 萹 蓄、 瞿 麦、 石 韦、 地 榆 炭、 甘 草 七 味 药 材 加 水 提 取 浓 缩， 50％ -80％乙醇醇沉， 上清液浓缩至稠膏 ( 或干燥 )， 得七味提取物 ；
(5) 以上步骤得到的四种提取物， 混匀， 即得药物活性物质， 以药物活性物质作为 药物有效成分， 用制剂学常规技术制备成制剂。
本发明优选的处方和制法如下 ：
黄芪 40 份 益母草 40 份 白茅根 20 份 萹蓄 20 份 瞿麦 20 份
小蓟 20 份 石韦 8 份 地榆炭 6 份 土大黄 20 份 甘草 2 份
其制备方法如下 ：
(1) 黄芪加水提取， 水提液滤过浓缩， 加乙醇醇沉， 醇沉浓度为 60-90％， 静置， 过 滤得沉淀 ； 滤液回收乙醇后， 加适量水溶解， 溶液通过大孔树脂柱处理， 上样后先用水洗涤， 再用浓度为 30-95％的乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压回收乙醇， 浓缩液与上述沉淀混合浓 缩至稠膏 ( 或干燥 )， 得黄芪提取物 ；
(2) 益母草加水或醇 - 水溶剂提取， 提取液浓缩 ( 可加 50％ -95％乙醇醇沉， 滤过， 滤液浓缩 )， 加入适量水溶解， 用盐酸调 pH 值为 1.0-4.0， 滤过， 滤液通过离子交换树脂柱处 理， 水洗后， 用 1-3M 的 NaCl 溶液洗脱， 收集洗脱液， 浓缩干燥， 用体积百分比浓度为 80-95％ 的乙醇回流提取 1-3 次， 醇提液浓缩至稠膏 ( 或干燥 )， 得益母草提取物 ；
(3) 土大黄加水或醇 - 水溶剂提取， 提取液浓缩， 加入适量水溶解， 静置， 滤过， 滤液通过大孔吸附树脂或聚酰胺树脂柱处理， 上样后先用水洗涤， 再用体积百分比浓度为 30-95％的乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 浓缩至稠膏 ( 或干燥 ) 得土大黄提取物 ；
(4) 小 蓟、 白 茅 根、 萹 蓄、 瞿 麦、 石 韦、 地 榆 炭、 甘 草 七 味 药 材 加 水 提 取 浓 缩， 50％ -80％乙醇醇沉， 上清液浓缩至稠膏 ( 或干燥 )， 得七味提取物 ；
(5) 以上步骤得到的四种提取物， 混匀， 即得药物活性物质， 以药物活性物质作为 药物有效成分， 用制剂学常规技术制备成制剂。
或以重量单位克表示， 处方组成如下 ：
黄芪 800g 益母草 800g 白茅根 400g 萹蓄 400g 瞿麦 400g
小蓟 400g 石韦 160g 地榆炭 120g 土大黄 400g 甘草 40g。
以上组成中， 各味药的重量是以生药计算的， 所述份为重量份， 若每 1 重量份以克 为单位， 上述配方组成可制成药物制剂 200-20000 剂。所述剂指制成的成品药物制剂， 如胶 囊剂 200-20000 剂指胶囊制剂 200-20000 粒， 片剂 200-20000 剂指片剂 200-20000 片， 对于 颗粒剂是颗粒剂 200-20000 克， 口服液是口服液 200-20000ml 等。
以上组成是按重量作为配比的， 在生产时可按照相应比例增大或减少， 如大规模 生产可以以公斤为单位， 或以吨为单位， 小规模生产也可以以毫克为单位， 重量可以增大或 者减小， 但各组成之间的生药材重量配比的比例不变。
以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的， 对于特殊病人， 如重症或轻症， 肥胖 或瘦小的病人， 可以相应调整组成的量的配比， 增加或减少不超过 100％， 药效不变。
以上组成中的中药原料， 尤其是佐药和使药可以用适当的具有相同药性的中药替 换， 替换后的中药制剂其药物作用不变。
所述的药物还含有药学可接受的辅料。 所述药学可接受的辅料选自 ： 甘露醇、 山梨醇、 焦亚硫酸钠、 亚硫酸氢钠、 硫代硫酸 钠、 盐酸半胱氨酸、 巯基乙酸、 蛋氨酸、 维生素 C、 EDTA 二钠、 EDTA 钙钠， 一价碱金属的碳酸 盐、 醋酸盐、 磷酸盐或其水溶液、 盐酸、 醋酸、 硫酸、 磷酸、 氨基酸、 氯化钠、 氯化钾、 乳酸钠、 木 糖醇、 麦芽糖、 葡萄糖、 果糖、 右旋糖苷、 甘氨酸、 淀粉及其衍生物、 糊精、 蔗糖、 乳糖、 甘露糖 醇、 硅衍生物、 纤维素及其衍生物、 藻酸盐、 泊洛沙姆、 硬脂酸聚烃氧酯、 明胶、 硬脂酸、 单硬 脂酸甘油酯、 氢化植物油、 聚乙烯吡咯烷酮、 甘油、 土温 80、 琼脂、 碳酸钙、 碳酸氢钙、 表面活 性剂、 聚乙二醇、 环糊精、 β- 环糊精、 磷脂类材料、 高岭土、 滑石粉、 硬脂酸钙或硬脂酸镁中 的一种或几种。
本发明的治疗肾病的药物组合物， 优选的是单位剂量的药物制剂形式， 在制成药 物制剂时可以制成任何可药用的剂型。
所述制剂为口服或外用制剂， 所述制剂为片剂、 胶囊剂、 颗粒剂、 丸剂、 散剂、 滴丸 剂、 糖浆剂、 口服液、 栓剂或贴膏剂。
这些剂型选自 ： 片剂如 ： 普通片剂， 糖衣片剂、 薄膜衣片剂、 肠溶衣片剂 ； 胶囊剂 如： 硬胶囊剂、 软胶囊剂 ； 以及口服液、 糖浆剂、 口含剂、 颗粒剂、 丸剂、 散剂、 煎膏剂、 混悬 剂、 溶液剂、 注射剂、 栓剂、 软膏剂、 贴膏剂。
本发明药物在制备治疗慢性肾小球肾炎、 急性肾小球肾炎、 隐匿性肾炎、 紫癜性肾 炎、 肾病综合征、 糖尿病肾病、 狼疮性肾病、 肾功能衰竭、 IgA 肾病、 非 IgA 肾病等肾病类药物 中的应用。
本发明的治疗肾病的药物组合物， 优选的是口服制剂形式。
本发明的治疗肾病的药物组合物， 由上述配方的中药作为原料药经过加工制备成 药物活性物质， 以该药物活性物质作为药物有效成分， 用制剂学常规技术制备而成。
在制备成药物制剂时， 根据需要可以加入一些药物可接受的载体， 制备方法包括， 将药物活性物质与药物可接受的载体混合。
本发明的肾炎清制剂， 其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂， 诸如粘合剂、 填充
剂、 稀释剂、 压片剂、 润滑剂、 崩解剂、 着色剂、 调味剂和湿润剂， 必要时可对片剂进行包衣。
适用的填充剂包括纤维素、 甘露糖醇、 乳糖和其它类似的填充剂。 适宜的崩解剂包 括淀粉、 聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物， 例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括， 例如硬 脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。
可通过混合， 填充， 压片等常用的方法制备固体口服组合物。 进行反复混合可使活 性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。
对于滴丸剂， 所述药物载体包括水溶性基质和非水溶性基质。 例如聚乙二醇类、 泊 洛沙姆、 硬脂酸聚烃氧酯、 明胶、 硬脂酸、 单硬脂酸甘油酯、 氢化植物油等中的一种或几种， 必要时可对滴丸剂进行包衣。
口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、 溶液、 乳剂、 糖浆剂或酏剂， 或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含 有常规的添加剂， 诸如悬浮剂， 例如山梨醇、 糖浆、 甲基纤维素、 明胶、 羟乙基纤维素、 羧甲基 纤维素、 硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪， 乳化剂， 例如卵磷脂、 脱水山梨醇一油酸酯或阿拉 伯胶 ； 非水性载体 ( 它们可以包括食用油 )， 例如杏仁油、 分馏椰子油、 诸如甘油的酯的油性 酯、 丙二醇或乙醇 ； 防腐剂， 例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸， 并且如果需 要， 可含有常规的香味剂或着色剂。 对于注射剂， 制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体 和浓度， 可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载 体中， 在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒， 然后密封。辅料例如一种局部麻醉 剂、 防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。 为了提高其稳定性， 可在装入小瓶以后将这 种组合物冰冻， 并在真空下将水除去。
本发明的治疗肾病的药物组合物， 在制成药剂时， 单位剂量的药剂可含有本发明 的药物活性物质 0.1-1000mg， 其余为药学上可接受的载体。药学上可接受的载体以重量计 可以是制剂总重量的 0.1-99.9％。
本发明的肾炎清制剂在使用时根据病人的情况确定用法用量， 可每日服三次， 每 次 1-20 剂， 如： 1-20 袋或粒或片。
本发明的药物 ( 肾炎清制剂 )， 其药物活性物质是经过提取加工制得的， 优选的本 发明的方法如下 ：
1. 基本工艺
处方量各药材按下述步骤提取 ：
(1) 黄芪加 4-10 倍量的水提取 1-3 次， 每次 0.5-3 小时， 水提液滤过， 浓缩至相对 密度为 1.00-1.20， 加乙醇醇沉， 醇沉浓度为 60-90％， 静置， 过滤得沉淀 ； 滤液回收乙醇后， 加水至原生药量 0.5-5 倍量使溶解， 溶液通过大孔树脂柱处理， 上样后先用水洗涤， 再用 1-10 倍量树脂床体积的体积百分比浓度为 30-95％的乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压回收 乙醇， 浓缩液与上述沉淀混合浓缩至稠膏 ( 或干燥 )， 得黄芪提取物 ；
(2) 益母草加 4-10 倍量的水或醇 - 水溶剂提取 1-3 次， 每次 0.5-3 小时， 提取液浓 缩至相对密度为 1.00-1.20( 可加 50％ -95％乙醇醇沉， 滤过， 滤液浓缩 )， 加水至原生药量 的 0.5-5 倍使溶解， 用盐酸调 pH 值为 1.0-4.0， 滤过， 滤液通过离子交换树脂柱处理， 水洗 后， 用 1-3M 的 NaCl 溶液洗脱， 收集洗脱液， 浓缩干燥， 用体积百分比浓度为 80-95％的乙醇
回流提取 1-3 次， 醇提液浓缩至稠膏 ( 或干燥 )， 得益母草提取物 ；
(3) 土大黄加 4-10 倍量的水或醇 - 水溶剂提取 1-3 次， 每次 0.5-3 小时， 提取液浓 缩， 加水至原生药量的 1-5 倍使溶解， 静置， 过滤， 滤液通过大孔吸附树脂或聚酰胺树脂柱 处理， 上样后先用水洗涤， 再用 1-10 倍量体积百分比浓度为 30-95％的乙醇洗脱， 收集醇洗 脱液， 浓缩至稠膏 ( 或干燥 ) 得土大黄提取物 ；
(4) 小蓟、 白茅根、 萹蓄、 瞿麦、 石韦、 地榆炭、 甘草七味药材加 4-12 倍量水提取 1-3 次， 每次 0.5-3 小时， 浓缩至相对密度为 1.00-1.20， 50％ -80％乙醇醇沉， 上清液浓缩至稠 膏 ( 或干燥 )， 得七味提取物 ；
(5) 以上步骤得到的四种提取物， 混匀， 即得药物活性物质， 以药物活性物质作为 药物有效成分， 用制剂学常规技术制备成制剂。
2. 最佳工艺 ( 动物实验用药的制备工艺， 在下述工艺参数范围内制备的药物具有 相同的疗效 )
(1) 黄芪加 6-10 倍量的水提取 2-3 次， 每次 1-3 小时， 水提液滤过， 浓缩至相对密 度为 1.00-1.10， 加乙醇醇沉， 醇沉浓度为 70-85％， 静置， 过滤得沉淀 ； 滤液回收乙醇后， 加 水至原生药量 0.5-2 倍量使溶解， 溶液通过大孔吸附树脂柱处理， 上样后先用水洗涤， 再用 2-8 倍量树脂床体积的体积百分比浓度为 60-80％的乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压回收乙 醇， 浓缩液与上述沉淀混合浓缩至稠膏 ( 或干燥 )， 得黄芪提取物 ；
(2) 益母草加 6-10 倍量的水提取 2-3 次， 每次 1-3 小时， 提取液浓缩至相对密度为 1.00-1.10， 60％ -80％乙醇醇沉， 滤过， 滤液浓缩， 加水至原生药量 0.5-2 倍量使溶解， 用盐 酸调 pH 值为 1.5-3.0， 滤过， 滤液通过阳离子交换树脂柱处理， 水洗后， 用 1-3M 的 NaCl 溶液 洗脱， 收集洗脱液， 浓缩干燥， 用体积百分比浓度为 85-95％的乙醇回流提取 2-3 次， 醇提液 浓缩至稠膏 ( 或干燥 )， 得益母草提取物 ；
(3) 土大黄加 6-10 倍量的 60-85％乙醇提取 2-3 次， 每次 1-3 小时， 提取液浓缩， 加 水至原生药量的 3-5 倍使溶解， 静置， 过滤， 滤液通过大孔吸附树脂或聚酰胺树脂柱处理， 上样后先用水洗涤， 再用体积百分比浓度为 60-90％的乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 浓缩至稠 膏 ( 或干燥 ) 得土大黄提取物 ；
(4) 小蓟、 白茅根、 萹蓄、 瞿麦、 石韦、 地榆炭、 甘草七味药材加 6-10 倍量水提取 2-3 次， 每次 1-3 小时， 浓缩至相对密度为 1.00-1.10， 60％ -80％乙醇醇沉， 上清液浓缩至稠膏 ( 或干燥 )， 得七味提取物 ；
(5) 以上步骤得到的四种提取物， 混匀， 即得药物活性物质， 以药物活性物质作为 药物有效成分， 用制剂学常规技术制备成制剂。
本发明工艺得到的提取物 ( 药物活性物质 ) 与原工艺得到的提取物相比， 具有以 下优势
本发明其他优选的制备方法在实施例中。
通过以下实验进一步说明本发明的药物制剂的治疗效果。
实验一肾炎清不同工艺对甘油所致急性肾衰竭大鼠尿量的影响
【实验材料】
1. 实验动物 ： SPF 级 SD 大鼠， 雄性， 体重 180 ～ 220g。购于北京维通利华公司。饲 养条件 ： 在有空调的动物室饲养， 温度为 20℃～ 25℃， 相对湿度 60％， 每笼 5 只， 照明时间 12 小时， 定时定量添加饲料， 食用鼠专用饲料 ( 北京科澳协饲料有限公司生产 )， 自由饮水， 每日更换垫料
2. 主要试剂和药品 ：
2.1 试剂 ：
1. 甘油 ： 天津化学试剂有限公司 ； 分析纯 ； 批号 ： 20070312
2. 生理盐水 ： 天津津蓝药业有限公司， 批号 ： 09110904
2.2 药品 ：
1. 受试药物 ： 肾炎清 A( 批号 081101A ； 现有技术方法制备， 水煎 3 次浓缩 )、 肾炎 清 B( 批号 ： 081201B ； 按本发明实施例 1 工艺制备 ) 天士力集团现代中药研究所提供
2. 阳性药 ： 氢氯噻嗪 ； 天津力生制药股份有限公司 ； 批号 ： 0711018
3. 实验仪器 ：
代谢笼 ： 苏州市冯氏实验动物设备有限公司
【实验方法】
1. 预选 ： 取 180g-200g SD 健康雄性大鼠， 适应饲养 1 天， 实验前禁食不禁水 24 小 时， 灌胃给予 25ml/kg 生理盐水后， 收集 2 小时尿量， 以排尿量达到灌胃量的 40％以上者选 入实验。
2. 分组 ：
取预选合格的大鼠按体重随机分组， 分别为空白对照组， 肾炎清 A 高、 低剂量组， 肾炎清 B 高、 低剂量组及氢氯噻嗪组 ( 阳性对照组 )， 每组 10 只。给药剂量按照肾炎清片及 氢氯噻嗪片的临床给药剂量换算得来， 分别为肾炎清 A 高剂量组 1000mg 生药 /kg， 肾炎清 A 低剂量组 500mg 生药 /kg， 肾炎清 B 高剂量组 1000mg 生药 /kg， 肾炎清 B 低剂量组 500mg 生 药 /kg 氢氯噻嗪组 16mg/kg， 空白组灌胃生理盐水。
3. 利尿实验 ： 各组大鼠分别肌注 50％甘油生理盐水溶液 10ml/kg 造模， 造模后禁 食 ( 不禁水 )， 24 小时后灌胃给予 50ml/kg 包含受试药物的生理盐水负荷， 用手压迫大鼠下 腹部使其排尽余尿， 模型组给予相应的生理盐水， 放入代谢笼中， 每笼一只， 每小时收集尿 液一次， 连续 5 小时， 记录每小时尿量及总尿量。 4. 统计方法 ：
在原始数据整理时， 以 95％置信区间定义异常数据， 即将数值超过 范围外 的数据予以剔除。
采用 SPSS11.5 软件进行统计分析。计量资料以 表示各药物组与模型组相比 较， 采用单因素方差分析， 以评价药物的作用。P ＜ 0.05 为差异有显著性意义。
【实验结果】
与模型组比较， 各个组尿量均有所增加， 且差异有显著性意义， 提示药物对病理状 态下大鼠有一定的利尿作用， 但各给药组间的差异并没有统计学意义， 即肾炎清 A、 B 组效 果相当。具体数据详见表 1
表 1 肾炎清 A、 B 工艺对甘油所致急性肾功能衰竭大鼠排尿量的影响
* ** 与模型组比较 ： ： P ＜ 0.05 ； ： P ＜ 0.01
实验二肾炎清不同工艺对急性肾小球肾炎大鼠尿蛋白及血尿的影响
【实验材料】
1. 实验动物 ： SPF 级 SD 大鼠， 雌雄各半， 体重 180 ～ 220g。购于北京维通利华公 司。饲养条件 ： 在有空调的动物室饲养， 温度为 20℃～ 25℃， 相对湿度 60％， 每笼 5 只， 照 明时间 12 小时， 定时定量添加饲料， 食用鼠专用饲料 ( 北京科澳协饲料有限公司生产 )， 自 由饮水， 每日更换垫料
2. 主要试剂和药品 ：
2.1 试剂 ：
1. 生理盐水 ： 天津津蓝药业有限公司， 批号 ： 09110904
2. 弗氏完全佐剂 ： sigma 公司， CAS ： 9007-81-2
3. 尿蛋白测定试剂盒 ： 南京建成生物工程研究所， 批号 ： 20090424
2.2 药品 ：
1. 受试药物 ： 肾炎清 A( 批号 081101A 现有技术方法制备， 水煎 3 次浓缩 )、 肾炎清 B( 批号 ： 081201B 按本发明实施例 1 工艺制备 ) 天士力集团现代中药研究所提供
2. 阳性药 ： 地塞米松 ； 天津力生制药股份有限公司 ； 批号 ： 0812026
3. 实验仪器 ：
1. 代谢笼 ： 苏州市冯氏实验动物设备有限公司 2. 尿分析仪 ： 罗氏公司 Miditron Junior Ⅱ
3. 紫外分光光度计 ： 北京瑞利分析仪器公司， UV-1800
【实验方法】
1. 肾皮质匀浆的制备 ：
使用 10％水合氯醛 (0.35ml/100g) 腹腔注射麻醉动物 ； 将麻醉好的大鼠用剪刀剪 断两侧后肢股动脉和前肢动脉， 充分放血， 以方便后续操作。在无菌条件下开腹， 结扎肾动 脉， 自结扎处向肾脏插管， 剪断肾静脉， 经插管用预冷的生理盐水反复冲洗肾脏呈白色， 取 下肾脏， 取皮质用电动高速匀浆机在冰浴中研磨成匀浆， 分装后密封于 -70℃冰箱中冷冻待 用。
2. 急性肾小球肾炎模型的建立 ：
取 25 克皮质匀浆， 加弗氏完全佐剂至 50ml， 置于乳钵中研匀， 缓缓加入生理盐水 100ml， 边加边研磨， 使乳化完全即可。 取乳化剂， 选用与取肾大鼠同品系的大鼠进行腹腔注 射， 剂量为每次 2ml/ 只， 每两周注射 1 次， 共注射 7 次， 即可制得大鼠肾炎模型。
3. 分组及给药 ：
于末次注射后分别测量各只大鼠的尿蛋白含量， 筛选尿蛋白含量符合标准的大鼠 入组。合格大鼠共分为 4 组， 分别为模型组、 肾炎清 A 组 (1000mg 生药 /kg)、 肾炎清 B 组 (1000mg 生药 /kg) 及地塞米松 ( 阳性药， 2mg/kg) 组， 每天灌胃一次， 连续给药 14 天。
4. 取材 ：
于末次给药后置于代谢笼中， 收集 24 小时尿量， 按照试剂盒说明书及仪器使用说 明， 分别测定大鼠尿蛋白含量及各组出现血尿的频率。并于取样后处死动物， 称取肾脏、 胸 腺、 脾脏及肝脏， 计算脏器系数
5. 统计方法 ：
在原始数据整理时， 以 95％置信区间定义异常数据， 即将数值超过 范围外的 数据予以剔除。
采用 SPSS11.5 软件进行统计分析。计量资料以 表示各药物组与模型组相比 较， 采用单因素方差分析， 以评价药物的作用。P ＜ 0.05 为差异有显著性意义。
【实验结果】
1. 对尿蛋白及血尿的影响 ： 与模型组比较， 阳性药地塞米松以及肾炎清两组工艺 均能降低大鼠 24h 尿蛋白的含量， 且差异有统计学意义 (P ＜ 0.01) ； 两种工艺组间比较显 示， 虽然两组工艺对尿蛋白的改善差异没有统计学意义， 但从数据来看， 肾炎清 B 组较 A 组 降低效果明显。 与模型组比较， 肾炎清两组工艺均能降低血尿的出现率， 两种工艺组间比较 显示， 肾炎清 B 组较 A 组降低效果明显。具体数据详见表 2
表 2 肾炎清不同工艺对急性肾小球肾炎大鼠尿蛋白及血尿的影响
** 与模型组比较 ： ： P ＜ 0.01
2. 对脏器系数的影响 ： 与模型组比较， 在肾脏、 脾脏、 胸腺及肝脏方面， 仅阳性对 照组显示出明显的差异， 但是在大鼠体重方面， 阳性对照组的大鼠体重明显降低， 且差异有 统计学意义 (P ＜ 0.01)， 结果见表 3
具体实施方式通过下面具体实施例仅仅是解释本发明的内容， 并不是对本发明保护范围的进一步限定。 实施例 1
一 . 处方 ：
黄芪 800g 益母草 800g 白茅根 400g 扁蓄 400g 瞿麦 400g
小蓟 400g 石韦 160g 地榆炭 120g 土大黄 400g 甘草 40g
二 . 制备方法
(1) 黄芪加 8、 6、 6 倍量水提取 3 次， 每次 1 小时， 水提液滤过， 浓缩至相对密度为 1.05(60℃ )， 加乙醇使醇浓度为 80％， 静置 12 小时以上， 过滤得沉淀 ； 滤液回收乙醇至稠 膏， 加水至生药量的 1 倍使溶解， 用 D101 大孔树脂处理， 上样后先用水洗涤， 弃去水洗液， 再 用 3 倍树脂床体积的 70％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压回收乙醇， 浓缩液与上述沉淀真空 干燥， 得黄芪提取物 ；
(2) 益母草加 10 倍量水回流提取 2 次， 每次 2 小时， 提取液浓缩至相对密度为 1.08(65℃ )， 加乙醇使醇浓度为 70％， 静置 12 小时以上， 滤过， 滤液浓缩至无醇， 加水至生 药量的 1 倍使溶解， 用盐酸调 pH 值为 2， 上 732 型阳离子交换树脂， 水洗后， 用 2M 的 NaCl 洗 脱， 收集洗脱液， 浓缩干燥， 用 95％乙醇回流提取 2 次， 醇提液减压浓缩干燥， 得益母草提取 物；
(3) 土大黄加 8 倍量 70％乙醇提取 3 次， 每次 1 小时， 提取液浓缩至无醇， 加水至 原生药量的 4 倍使溶解， 滤过， 用聚酰胺树脂处理， 上样后先用水洗涤， 弃去水洗液， 再用 4 倍量 70％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩干燥得土大黄提取物 ；
(4) 小蓟、 白茅根、 萹蓄、 瞿麦、 石韦、 地榆炭、 甘草七味药材加 10 倍量水煎煮 2 次， 每次 2 小时， 2 次煎液浓缩至相对密度为 1.06(65℃ )， 加乙醇使醇浓度为 70％， 静置 12 小 时以上， 滤过， 滤液回收乙醇至稠膏， 真空干燥， 得七味提取物。
(5) 以上步骤得到的四种提取物， 混匀， 即得药物活性物质。
以药物活性物质作为药物有效成分， 该有效成分与药物可接受的载体混合， 按照 制剂学常规技术制成药物制剂。
实施例 2
一 . 处方 ：
黄芪 800g 益母草 800g 白茅根 400g 扁蓄 400g 瞿麦 400g
小蓟 400g 石韦 160g 地榆炭 120g 土大黄 400g 甘草 40g
二 . 制备方法 ：
(1) 黄芪加分别加 10 倍量水提取 2 次， 每次 2 小时， 水提液滤过， 浓缩至相对密度 为 1.09(60℃ )， 加乙醇使醇浓度为 85％， 静置 12 小时以上， 过滤得沉淀 ； 滤液回收乙醇至 稠膏， 加水至生药量的 2 倍使溶解， 用 AB-8 型大孔树脂处理， 上样后先用水洗涤， 弃去水洗 液， 再用 3 倍树脂床体积的 80％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压回收乙醇， 浓缩液与上述沉 淀真空干燥， 得黄芪提取物 ；
(2) 益母草分别加 8 倍量水提取 3 次， 每次 1 小时， 提取液浓缩至相对密度为 1.02(65℃ )， 加乙醇使醇浓度为 60％， 静置 12 小时以上， 滤过， 滤液浓缩至无醇， 加水至生 药量的 2 倍使溶解， 用盐酸调 pH 值为 3， 上 717 型阳离子交换树脂， 水洗后， 用 3M 的 NaCl 洗
脱， 收集洗脱液， 浓缩干燥， 用 95％乙醇回流提取 2 次， 醇提液减压浓缩干燥， 得益母草提取 物；
(3) 土大黄分别加 6 倍量 80％乙醇提取 3 次， 每次 2 小时， 提取液浓缩至无醇， 加 水至生药量的 3 倍使溶解， 滤过， 通过 AB-8 型大孔吸附树脂柱， 上样后先用水洗涤， 弃去水 洗液， 再用 5 倍量 70％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩干燥得土大黄提取物 ；
(4) 小蓟、 白茅根、 萹蓄、 瞿麦、 石韦、 地榆炭、 甘草七味药材加 8 倍量水煎煮 3 次， 每 次 1 小时， 3 次煎液浓缩至相对密度为 1.09(65℃ )， 加乙醇使醇浓度为 60％， 静置 12 小时 以上， 滤过， 滤液回收乙醇至稠膏， 真空干燥， 得七味提取物。
(5) 以上步骤得到的四种提取物， 混匀， 即得药物活性物质。
以药物活性物质作为药物有效成分， 该有效成分与药物可接受的载体混合， 按照 制剂学常规技术制成药物制剂。
实施例 3
一 . 处方 ：
黄芪 800g 益母草 800g 白茅根 400g 萹蓄 400g 瞿麦 400g
小蓟 400g 石韦 160g 地榆炭 120g 土大黄 400g 甘草 40g 二 . 制备方法
(1) 黄芪加分别加 6 倍量水提取 3 次， 每次 1 小时， 水提液滤过， 浓缩至相对密度 为 1.10(60℃ )， 加乙醇使醇浓度为 75％， 静置 12 小时以上， 过滤得沉淀 ； 滤液回收乙醇至 稠膏， 加水至生药量的 3 倍使溶解， 用 ADS-8 型大孔树脂处理， 上样后先用水洗涤， 弃去水洗 液， 再用 5 倍树脂床体积的 65％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压回收乙醇， 浓缩液与上述沉 淀微波干燥， 得黄芪提取物 ；
(2) 益母草分别加 12 倍量提取 2 次， 每次 1.5 小时， 提取液浓缩至相对密度为 1.18(65℃ )， 加乙醇使醇浓度为 80％， 静置 12 小时以上， 滤过， 滤液浓缩至无醇， 加水至生 药量的 0.5 倍使溶解， 用盐酸调 pH 值为 1.5， 上 D201 型阳离子交换树脂， 水洗后， 用 2.5M 的 NaCl 洗脱， 收集洗脱液， 浓缩干燥， 用 90％乙醇回流提取 2 次， 醇提液减压浓缩至稠膏， 微波 干燥， 得益母草提取物 ；
(3) 土大黄分别加 8 倍量 60％乙醇提取 3 次， 每次 1.5 小时， 提取液浓缩至无醇， 加水至生药量的 5 倍使溶解， 滤过， 通过 D101 型大孔吸附树脂柱， 上样后先用水洗涤， 弃去 水洗液， 再用 5 倍量 60％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩至稠膏， 微波干燥得土大黄提 取物 ；
(4) 小蓟、 白茅根、 萹蓄、 瞿麦、 石韦、 地榆炭、 甘草七味药材加 12 倍量水煎煮 2 次， 每次 1.5 小时， 2 次煎液浓缩至相对密度为 1.02(65℃ )， 加乙醇使醇浓度为 80％， 静置 12 小时以上， 滤过， 滤液回收乙醇至稠膏， 微波干燥， 得七味提取物。
(5) 以上步骤得到的四种提取物， 混匀， 即得药物活性物质。
以药物活性物质作为药物有效成分， 该有效成分与药物可接受的载体混合， 按照 制剂学常规技术制成药物制剂。
实施例 4
一 . 处方 ：
黄芪 800g 益母草 800g 白茅根 400g 萹蓄 400g 瞿麦 400g
小蓟 400g 石韦 160g 地榆炭 120g 土大黄 400g 甘草 40g
二 . 制备方法 ：
(1) 黄芪加分别加 12 倍量水提取 2 次， 每次 2 小时， 水提液滤过， 浓缩至相对密度 为 1.03(60℃ )， 加乙醇使醇浓度为 90％， 静置 12 小时以上， 过滤得沉淀 ； 滤液回收乙醇至 稠膏， 加水至生药量的 4 倍使溶解， 用 HP-20 型大孔树脂处理， 上样后先用水洗涤， 弃去水洗 液， 再用 3 倍树脂床体积的 75％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压回收乙醇， 浓缩液与上述沉 淀真空干燥， 得黄芪提取物 ；
(2) 益母草分别加 8 倍量 70％乙醇提取 3 次， 每次 1 小时， 提取液浓缩至无醇， 加 水至生药量的 3 倍使溶解， 滤过， 用盐酸调 pH 值为 2， 上 732 型阳离子交换树脂， 水洗后， 用 3M 的 NaCl 洗脱， 收集洗脱液， 浓缩干燥， 用 95％乙醇回流提取 3 次， 醇提液减压浓缩干燥， 得益母草提取物 ；
(3) 土大黄分别加 8 倍量水提取 3 次， 每次 2 小时， 提取液浓缩至生药量的 2 倍左 右， 滤过， 通过 ADS-8 型大孔吸附树脂柱， 上样后先用水洗涤， 弃去水洗液， 再用 5 倍量 75％ 乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩干燥得土大黄提取物 ；
(4) 小蓟、 白茅根、 萹蓄、 瞿麦、 石韦、 地榆炭、 甘草七味药材分别加 6 倍量水煎煮 3 次， 每次 3 小时， 3 次煎液浓缩至相对密度为 1.07(65℃ )， 加乙醇使醇浓度为 75％， 静置 12 小时以上， 滤过， 滤液回收乙醇至稠膏， 真空干燥， 得七味提取物。
(5) 以上步骤得到的四种提取物， 混匀， 即得药物活性物质。
以药物活性物质作为药物有效成分， 该有效成分与药物可接受的载体混合， 按照 制剂学常规技术制成药物制剂。
实施例 5
一 . 处方 ：
黄芪 600g 益母草 600g 白茅根 200g 萹蓄 200g 瞿麦 200g
小蓟 200g 石韦 100g 地榆炭 100g 土大黄 300g 甘草 40g
二 . 制备方法 ：
(1) 黄芪加分别加 12 倍量水提取 2 次， 每次 2 小时， 水提液滤过， 浓缩至相对密度 为 1.10(60℃ )， 加乙醇使醇浓度为 80％， 静置 12 小时以上， 过滤得沉淀 ； 滤液回收乙醇至 稠膏， 加水至生药量的 1.5 倍使溶解， 用 D101 型大孔树脂处理， 上样后先用水洗涤， 弃去水 洗液， 再用 3 倍树脂床体积的 70％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压回收乙醇， 浓缩液与上述 沉淀微波干燥， 得黄芪提取物 ；
(2) 益母草分别加 12、 10 倍量水提取 2 次， 每次 2 小时， 提取液浓缩至相对密度 为 1.03(65℃ )， 加乙醇使醇浓度为 70％， 静置 12 小时以上， 滤过， 滤液浓缩至无醇， 加水至 生药量的 1.5 倍使溶解， 用盐酸调 pH 值为 2， 上 732 型阳离子交换树脂， 水洗后， 用 1.5M 的 NaCl 洗脱， 收集洗脱液， 浓缩干燥， 用 95％乙醇回流提取 3 次， 醇提液减压浓缩至稠膏， 微波 干燥， 得益母草提取物 ；
(3) 土大黄分别加 8、 6、 6 倍量 70％乙醇提取 3 次， 每次 1 小时， 提取液浓缩至无醇， 加水至生药量的 5 倍使溶解， 滤过， 通过聚酰胺树脂柱， 上样后先用水洗涤， 弃去水洗液， 再 用 4 倍量 75％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩至稠膏， 微波干燥得土大黄提取物 ；
(4) 小蓟、 白茅根、 萹蓄、 瞿麦、 石韦、 地榆炭、 甘草七味药材加 8、 6、 6 倍量水煎煮 3次， 每次 1.5 小时， 3 次煎液浓缩至相对密度为 1.04(65℃ )， 加乙醇使醇浓度为 70％， 静置 12 小时以上， 滤过， 滤液回收乙醇至稠膏， 微波干燥， 得七味提取物。
(5) 以上步骤得到的四种提取物， 混匀， 即得药物活性物质。
以药物活性物质作为药物有效成分， 该有效成分与药物可接受的载体混合， 按照 制剂学常规技术制成药物制剂。
实施例 6
一 . 处方 ：
黄芪 1000g 益母草 800g 白茅根 600g 萹蓄 600g 瞿麦 600g
小蓟 600g 石韦 300g 地榆炭 300g 土大黄 800g 甘草 80g
二 . 制备方法 ：
(1) 黄芪加分别加 12 倍量水提取 2 次， 每次 2 小时， 水提液滤过， 浓缩至相对密度 为 1.03(60℃ )， 加乙醇使醇浓度为 80％， 静置 12 小时以上， 过滤得沉淀 ； 滤液回收乙醇至 稠膏， 加水至生药量的 0.5 倍使溶解， 用 D101 型大孔树脂处理， 上样后先用水洗涤， 弃去水 洗液， 再用 3 倍树脂床体积的 80％乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压回收乙醇， 浓缩液与上述 沉淀真空干燥， 得黄芪提取物 ；
(2) 益母草分别加 8、 6、 6 倍量 70％乙醇提取 3 次， 每次 1.5 小时， 提取液浓缩至无 醇， 加水至生药量的 1 倍使溶解， 滤过， 用盐酸调 pH 值为 2， 上 717 型阳离子交换树脂， 水洗 后， 用 2M 的 NaCl 洗脱， 收集洗脱液， 浓缩干燥， 用 95％乙醇回流提取 3 次， 醇提液减压浓缩 干燥， 得益母草提取物 ；
(3) 土大黄分别加 12、 10 倍量水提取 2 次， 每次 2 小时， 加水至生药量的 2.5 倍使 溶解， 滤过， 通过 AB-8 型大孔吸附树脂柱， 上样后先用水洗涤， 弃去水洗液， 再用 4 倍量 85％ 乙醇洗脱， 收集醇洗脱液， 减压浓缩干燥得土大黄提取物 ；
(4) 小蓟、 白茅根、 萹蓄、 瞿麦、 石韦、 地榆炭、 甘草七味药材分别加 12、 10 倍量水煎 煮 2 次， 每次 2 小时， 2 次煎液浓缩至相对密度为 1.16(65℃ )， 加乙醇使醇浓度为 65％， 静 置 12 小时以上， 滤过， 滤液回收乙醇至稠膏， 真空干燥， 得七味提取物。
(5) 以上步骤得到的四种提取物， 混匀， 即得药物活性物质。
以药物活性物质作为药物有效成分， 该有效成分与药物可接受的载体混合， 按照 制剂学常规技术制成药物制剂。
实施例 7、 颗粒剂
取实施例 1-6 任意一个药物活性物质 100g， 加入 0.6 倍量的糊精， 0.5 ％蔗糖， 1.5 ％微晶纤维素， 用适量乙醇溶解制成软材， 制粒， 60 ℃鼓风干燥， 制粒， 整粒， 即得颗粒 剂。
实施例 8、 滴丸
取实施例 1-6 任意一个药物活性物质 100g( 必要时加入适量水 )， 加入 400g 的聚 乙二醇， 混合均匀， 熔融， 上滴丸机， 制成滴丸剂。
实施例 9、 片剂
取实施例 1-6 任意一个药物活性物质 100g， 加入 5％交联聚维酮， 0.1％的硬脂酸 镁， 40％的微晶纤维素， 制粒， 整粒， 压制成片， 包薄膜衣， 即得。
实施例 10、 栓剂取实施例 1-6 任意一项药物活性物质 100g， 加入适量水、 1 ％吐温 -80、 2 ～ 3％ 氮酮后与熔融的混合辅料 [ 聚乙二醇 4000 ∶聚乙二醇 6000 ∶硬脂酸烃氧 (40) 酯＝ 3.5 ∶ 3.5 ∶ 3] 混匀， 浇模， 制成栓剂， 即得。
实施例 11、 胶囊剂
取实施例 1-6 任意一项药物活性物质 100g， 加入等量淀粉， 0.1％的硬脂酸镁， 适 量甜味剂， 制粒， 装入胶囊， 即得胶囊剂。
实施例 12、 浓缩丸
取实施例 1-6 任意一项药物活性物质 100g， 与微晶纤维素 50g、 PEG6000 8g， 混匀， 加适量水炼药、 制丸， 包薄膜衣即得。
实施例 13、 口服液
取实施例 1-6 任意一项药物活性物质 2g， 与糖浆 4g、 溶于 100ml 的纯净水中， 均 质， 过滤， 经过高温瞬时灭菌 (135℃， 4s)。无菌灌装、 分装。制得口服液。19