包含抗菌药以及一种选自麝香草酚、 香芹酚的活性物质的 药物组合物 本申请是申请号为 200680016491.2， 申请日为 2006 年 5 月 15 日， 发明名称为 “包 含一种抗菌药以及一种选自香芹醇、 麝香草酚、 丁香酚、 冰片、 香芹酚的活性物质的药物组 合物” 的分案申请。
技术领域 本发明涉及一种药物组合物以及该组合物的应用， 该组合物包含两种治疗活性物 质， 其中一种对另一种施加协同增效作用。
背景技术 人们知道， 治疗药剂的效力取决于所用的剂量， 在部分耐药性的情况下这使得有 必要增加治疗药剂的剂量以便获得所期望的效力。 这种剂量增加导致有害副作用和急性或 慢性毒性的问题， 可以显著地使治疗患者的状况复杂化。
所述部分耐药性可以转变成完全耐药性。在这种情况下， 增加剂量不再具有任何 有益的治疗效应， 仅观察到毒性效应。在这样的情况下， 治疗包括改变治疗药剂。
这种事件链本身可以重复并导致最严重的情况 ： 对多种治疗药剂的完全耐药性 ( 多药耐药 )。
例如， 特别是， 免疫抑制患者变得越来越难以治疗并且他们的预期寿命会相应缩 短。此外， 他们的生活质量实质上受到给予高剂量治疗药剂的影响。
发明内容 本发明通过提出结合至少两种治疗活性物质来减轻这些问题， 其中一种治疗活性 物质增强另一种治疗活性物质的活性， 这不仅使得有可能降低每种治疗活性物质的剂量而 且使得有可能治疗被耐药性微生物感染的患者。
在这方面， 本发明提供了一种药物组合物， 其特征在于该药物组合物包含 ：
- 至少一种第一治疗活性物质， 该第一治疗活性物质选自由香芹醇、 麝香草酚、 丁 香酚、 冰片、 香芹酚、 α- 紫罗兰酮、 β- 紫罗兰酮、 以及它们的异构体、 衍生物和混合物组成 的组， 以及
- 至少一种第二治疗活性物质， 该第二治疗活性物质是一种抗生素。
可以通过化学合成或从植物来源获得第一治疗物质。
优选地， 在本发明的组合物中的抗生素选自由 β- 内酰胺、 头孢菌素、 磷霉素、 糖 肽类、 多粘菌素类、 短杆菌肽类、 短杆菌酪肽、 氨基糖苷类、 大环内酯类、 林可酰胺类、 协同菌 素类、 苯丙醇类、 四环素类、 梭链孢酸、 唑烷酮类、 利福霉素类、 喹诺酮类、 氟喹诺酮类、 硝化 产物、 磺酰胺、 甲氧苄啶、 以及它们的混合物组成的组。
更优选地， 抗菌药选自由青霉素、 苯唑西林、 氯唑西林、 氨苄西林、 阿莫西林、 巴氨 西林、 美坦西林、 匹氨西林、 阿洛西林、 美 洛西林、 哌拉西林、 替卡西林、 匹美西林、 青霉砜、
三唑巴坦、 亚胺培南、 头孢力新、 头孢羟氨苄、 头孢克洛、 头孢曲秦、 头孢噻吩、 头孢匹林、 头 孢唑林、 头孢西丁、 头孢孟多、 头孢替坦、 头孢呋辛、 头孢氨噻肟、 头孢磺啶、 头孢哌酮、 头孢 替安、 头孢他啶、 头孢曲松、 头孢克肟、 头孢泊肟、 头孢吡肟、 拉氧头孢、 氨曲南、 万古霉素、 万古霉素 (vancocin)、 替考拉宁、 多粘菌素 B、 多粘菌素 E、 杆菌肽、 短杆菌素、 链霉素、 卡那 霉素、 妥布霉素、 阿米卡星、 西索米星、 地贝卡星、 奈替米星、 大观霉素、 螺旋霉素、 红霉素、 交 沙霉素、 罗红霉素、 克拉霉素、 阿奇霉素、 林可霉素、 克林霉素、 维吉霉素、 普那霉素、 达福普 汀 - 喹奴普丁、 氯霉素、 甲砜霉素、 四环素、 多西环素、 二甲胺四环素、 梭链孢酸、 利奈唑胺、 利福霉素、 利福平、 萘啶酸、 奥索利酸、 吡哌酸、 氟甲喹、 培氟沙星、 诺氟沙星、 氧氟沙星、 环丙 沙星、 依诺沙星、 司帕沙星、 左氧氟沙星、 莫西沙星、 硝羟喹啉、 甲溴羟喹、 呋喃妥因、 硝呋齐 特、 甲硝唑、 奥硝唑、 磺胺嘧啶、 磺胺甲二唑、 甲氧苄啶、 异烟肼以及它们的衍生物和混合物 组成的组。所述抗生素， 更特别地是阿莫西林， 可以任选地和克拉维酸一起使用。
更特别优选的抗生素组合物是这样的组合物， 其中第一治疗活性物质是香芹醇或 香芹酚以及抗生素是阿莫西林或利福平。
另一种更特别优选的抗生素组合物是这样的抗生素组合物， 其中第一治疗活性物 质是香芹醇以及抗生素是氨苄西林、 氯霉素、 四环素、 链霉素、 红霉素或多粘菌素 B。
又一更特别优选的抗生素组合物是这样的抗生素组合物， 其中所述第一治疗活性 物质是 α- 紫罗兰酮或 β- 紫罗兰酮以及抗生素是头孢唑林。
另一更特别优选的抗生素组合物是这样的抗生素组合物， 其中所述第一治疗活性 物质是麝香草酚以及抗生素是异烟肼。
另外， 更特别优选的抗生素组合物是这样的组合物， 其中所述第一治疗活性物质 是香芹酚以及抗生素是和克拉维酸一起使用的阿莫西林。
本发明还提出了一种试剂盒， 其特征在于， 该试剂盒包括至少一个第一容器， 该容 器容纳有第一治疗活性物质， 其选自由香芹醇、 麝香草酚、 丁香酚、 冰片、 香芹酚、 α- 紫罗兰 酮、 β- 紫罗兰酮、 以及其异构体、 衍生物和混合物组成的组， 以及至少一个第二容器， 该容 器容纳有第二治疗活性物质， 该第二治疗活性物质是一种抗生素。
最后本发明提出了一种用于治疗细菌感染的方法， 其特征在于， 同时或顺序地给 予被细菌感染的患者至少一种第一治疗活性物质， 该第一治疗活性物质选自由香芹醇、 麝 香草酚、 丁香酚、 冰片、 香芹酚、 α- 紫罗兰酮、 β- 紫罗兰酮、 以及其异构体、 衍生物和混合 物组成的组， 以及至少一种第二治疗活性物质， 该第二治疗活性物质是一种抗生素。
优选地， 在所述方法中， 同时或顺序地给予患有细菌感染的患者 10 至 200mg/kg 体 重 / 天之间的所述第一治疗活性物质、 以及 1 和 100mg/kg 体重 / 天之间的第二治疗活性物 质， 该第二治疗活性物质是一种抗生素。
优选地， 在此方法中， 所述第一治疗活性物质选自由香芹酚、 香芹醇、 丁香酚、 α- 紫罗兰酮、 β- 紫罗兰酮以及麝香草酚组成的组， 而所述第二治疗活性物质选自由阿莫 西林、 氨苄西林、 链霉素、 红 霉素、 多粘菌素 B、 氯霉素、 四环素、 利福平、 异烟肼以及头孢唑 林组成的组。 附图说明
根据以下参照单个附图的说明性描述， 可以更好地理解本发明并且本发明的其它目的和优点将更为明了， 其中附图提供了实验性感染高耐药性肺炎克雷伯氏菌菌株的小鼠 的体内试验结果 ： 未治疗的， 或单独用阿莫西林治疗， 单独用香芹醇治疗， 或用根据本发明 的抗菌药物组合物 ( 包含阿莫西林和香芹醇 ) 治疗。 具体实施方式
根据本发明的药物组合物包含麝香草酚、 丁香酚、 香芹酚、 冰片、 香芹醇、 α- 紫罗 兰酮、 β- 紫罗兰酮、 其衍生物、 以及异构体及其混合物 ( 纯的形式 ) 作为第一治疗活性物 质。
所述化合物具有众所周知的抗生素性能。
麝香草酚、 丁香酚、 香芹酚、 冰片以及香芹醇、 α- 紫罗兰酮、 β- 紫罗兰酮以不同 的比例存在于不同的芳香植物提取物中， 即， 它们可以从这样的植物中纯化。然而， 通过化 学合成可以相当简单地获得它们。
事实上， 诸位发明人现已发现， 所述化合物对许多治疗活性物质 ( 包括已知的抗 生素， 其已在本领域用作特效药 ) 具有增强效应。
因而包含在本发明的药物组合物中的第二治疗活性物质是抗生素， 其本身已经是 熟知的并且已经用作此领域的特效药并且其活性被增强。 那些已经用作此领域特效药的、 可以用于本发明的药物组合物并且其效应将被纯 的第一治疗活性物质增强的已知抗生素的实例属于若干类 ： 由阿莫西林和氨苄西林代表的 β- 内酰胺类， 由头孢唑林代表的头孢菌素类， 由金霉素代表的四环素类， 由利福平代表的 利福霉素类， 由多链丝霉素代表的肽类， 由链霉素代表的氨基糖苷类， 由氯霉素代表的苯丙 醇类， 由红霉素代表的大环内酯类。
所述化合物可以单独使用或彼此联合使用。如果其衍生物具有抗生素活性， 也可 以使用其衍生物。
非常特别优选的是阿莫西林 ( 可任选地连同克拉维酸 )、 氨苄西林、 四环素、 红霉 素、 链霉素、 氯霉素、 利福平、 异烟肼、 头孢唑林以及多粘菌素 B 连同特别是香芹酚、 香芹醇、 麝香草酚、 α- 紫罗兰酮以及 β- 紫罗兰酮一起使用。
当然， 根据本发明的药物组合物并不限于仅使用上述提及的那些抗生素。 事实上， 考虑由本发明中所定义的第一治疗活性物质施加的增强效应， 也可以成功地使用其它已知 或未来的抗生素。
可以对根据本发明的药物组合物进行配制， 以便适用于同时或顺序地给予所述至 少第一和第二治疗活性物质。
本发明的药物组合物的药剂剂型应适合于它的应用。例如， 它可以以溶液、 混悬 剂、 片剂的形式或其它形式加以使用。用于肠胃外给予的组合物通常是药用无菌溶液或悬 浮液， 其可以任选地在使用前即时制备。
为了制备无水溶液或悬浮液， 可以使用天然植物油如橄榄油、 麻油或石蜡油， 或可 注射有机酯如油酸乙酯。无菌水溶液可以由治疗活性物质在水中的溶液组成。在适当调节 pH 并且它们被制成等 渗的情况下该水溶液适用于静脉给予， 例如通过加入足够量的氯化 钠或葡萄糖。
事实上， 考虑到抗生素的化学结构， 并且其次考虑到香芹醇、 香芹酚、 麝香草酚、 丁
香酚、 α- 紫罗兰酮、 β- 紫罗兰酮、 以及冰片的化学结构， 我们认为 ( 但不受此理论限制 ) 香芹醇、 香芹酚、 麝香草酚、 丁香酚、 冰片、 α- 紫罗兰酮和 β- 紫罗兰酮以及它们的异构体、 衍生物和混合物与抗生素相互作用， 以形成具有一定结构的复合物， 这种结构更容易扩散 进入生理体液并且这种结构更容易扩散进入靶感染细胞的细胞质。
然而， 研究表明， 当在有去污剂如吐温或 Triton 或溶剂如乙醇或 DMSO( 二甲基亚 砜 ) 存在的情况下混合本发明的药物组合物的不同成分时， 第一和第二治疗活性物质的活 性分子会和去污剂和溶剂的分子结合并且不会形成协同增效的复合物。
现已发现， 当使用一种含水琼脂悬浮液 ( 作为通过粘度进行扩散的方式 ) 时， 则形 成协同增效的复合物。
因此， 优选在没有去污剂和没有溶剂的情况下制备本发明的药物组合物。 例如， 它 将被制备成含水悬浮液， 并通过加入非凝固浓度的琼脂 ( 例如每升悬浮液 1 至 5 克琼脂 ) 使其变成粘性的。
本发明的药物组合物使得可以利用每一种所述第一和第二治疗活性物质的更小 剂量来治疗局部或全身由耐药性微生物引起的感染， 其中上述剂量小于单独用所述第一和 第二治疗活性物质的一种或另一种来治疗起因于敏感 ( 即非耐药 ) 微生物的相同感染所需 要的剂量。 事实上， 本发明的组合物可以做到 ： 当和所述第二治疗活性物质联用时所述第一 治疗活性物质的剂量比单独使用所述第一治疗活性物质时所需要的剂量大约低 3 至 10 倍， 以及当和所述 第一治疗活性物质联用时所述第二治疗活性物质的剂量比单独使用所述第 二治疗活性物质时所需要的剂量大约低 2 至 10 倍。 该结果提供了具有下述优点的治疗 ：
- 相对于敏感微生物， 非常低的剂量是有效的，
- 相对于耐治疗药剂的微生物是有效的，
- 相对于耐若干种治疗药剂的微生物是有效的，
- 控制复发现象，
- 控制耐药性微生物选择的现象。
在所有这些情况下， 显著地降低了本领域技术人员熟知的毒性和 / 或有害作用的 可能性， 这是由于所述增强作用而使之可以给予非常低的剂量。
此外， 由于使用少量的活性物质， 所以治疗成本降低。
根据本发明的药物组合物可以具有脂质体的形式或与载体如环糊精或聚乙二醇 结合的形式。
本发明的药物组合物表现出简单和有效的方式来解决与一般的微生物制剂有关 的问题， 问题主要包括对治疗药剂的耐药性以及由于使用高剂量的治疗药剂所引起的后者 的毒性。
事实上， 香芹醇、 麝香草酚、 丁香酚、 冰片、 香芹酚、 α- 紫罗兰酮和 β- 紫罗兰酮以 及其衍生物、 混合物和异构体是简单分子， 其从未被描述为具有任何毒性并且它们的加入 对第二治疗活性物质 具有协同增效作用使得可以使用低得多的所述第二治疗活性物质的 剂量。
于是， 在第一变通例中， 用于治疗患有细菌感染的患者的方法包括给予所述患者 由医师所确定的剂量的本发明的药物组合物， 其包含适宜剂量的至少一种所述第一治疗活
性物质， 连同适宜剂量的至少一种所述第二治疗物质， 即， 适宜的抗生素。
在第二变通例中， 用于治疗患有细菌感染的患者的方法包括顺序地给予所述患者 由医师所确定的剂量的至少一种所述第一治疗活性物质， 接着给予适宜剂量的至少一种所 述第二治疗活性物质， 即， 适宜的抗生素， 或反过来也是一样。
在这方面， 本发明提出了一种试剂盒， 该试剂盒包括至少一个第一容器， 该容器容 纳有所述第一治疗活性物质之一， 以及至少一个第二容器， 该容器容纳有所述第二治疗活 性物质之一。
所述试剂盒使健康护理人员一经要求即可以制备适宜剂量的所希望的第一治疗 物质和适宜剂量的所希望的抗生素的混合物， 用于同时给予， 或顺序地并分开地给予适宜 剂量的至少一种所述第一治疗活性物质， 接着给予适宜剂量的至少一种所述第二治疗活性 物质， 即， 适宜的抗生素， 或反过来也是一样。然而， 用于同时使用的混合物是优选的， 以便 在给予患者以后立即使协同增效复合物可以形成并起作用。
根据以下描述不同实施方案的各个实例本发明将变得更清楚， 给出实施例是用来 说明本发明目的而不是限制本发明。
实例 1 ： 用香芹醇协同增效的阿莫西林 (Amox-P) 处理不同的菌株 体外试验 ： 确定对不同菌株的最低杀菌浓度 (MBC)
用若干革兰氏阴性和革兰氏阳性菌株进行实验， 其中菌株是在医院环境中分离并 具有不同的敏感性。使用的抗生素是阿莫西林， 其是最有效和最广泛使用的抗生素之一。
根据本发明的抗菌药物组合物是通过混合不同浓度的阿莫西林和 0.3 克 / 升溶液 或赋形剂 ( 相当于 0.3mg/ml) 的亚抑制浓度的香芹醇而制得。确定了和 0.3mg/ml 香芹醇 联用时阿莫西林产生杀菌效应的最低浓度。 在每一种情况下， 单独用阿莫西林、 或单独用香 芹醇、 或用本发明的组合物， 确定了抗生素活性。
表 1 给出用来确定最低杀菌浓度 (MBC) 的静态试验的结果。
表1
表 1 清楚地表明， 和单独的阿莫西林或单独的香芹醇相比， 本发明的组合物对这 些具有不同敏感性的菌株具有显著的杀菌活性。
事实上， 可以看到， 通过使用浓度为 0.3mg/ml 的香芹醇 ( 其比单独香芹醇的 MBC 低 6 倍 )， 产生杀菌活性的阿莫西林浓度至少比能够呈现杀菌效应的单独阿莫西林的浓度 低 10 倍。
实例 2
体内试验
通过腹膜内注射耐阿莫西林的肺炎克雷白杆菌的 1,000,000 个细胞 ( 菌落形成单 位 ) 实验上感染 10 只小鼠的多个组。
第一组由对照小鼠组成， 其被感染并且未治疗。
第二组由感染小鼠组成， 在其感染后 24 小时， 借助于强饲法并单独用剂量为 10mg/kg 体重 / 天的阿莫西林对感染小鼠进行治疗。
第三组由感染小鼠组成， 在其感染后 24 小时， 借助于强饲法并单独用剂量为 120mg/kg 体重 / 天的香芹醇对感染小鼠进行治疗。
第四组由感染小鼠组成， 在其感染后 24 小时， 借助于强饲法并用剂量为 2mg/kg 体 重 / 天的阿莫西林和 120mg/kg 体重 / 天的香芹醇的本发明的药物组合物 (AMOX-P) 对感染 小鼠进行治疗。
测量随时间的存活率。结果在图 1 中给出， 其表明， 在感染 10 天以后只有用药物 组合物治疗的小鼠仍然活着。所有其它小鼠在感染后的第二天和第三天之间死去。
对在实验期间死去的小鼠 ( 未治疗小鼠以及单独用阿莫西林治疗的那些小鼠 ) 器 官的检查表明， 在肾、 肺以及骨髓中存在高荷载的肺炎克雷白杆菌。相反， 没有任何用本发 明的药物组合物进行治疗并在停止治疗后 7 天处死的小鼠在肺或骨髓中出现任何细菌。
在肾中， 10 只动物中仅 3 只动物仍然有非常低的肺炎克雷白杆菌荷载， 其相当于 在未治疗的感染对照中看到的 10％。
因此， 可以清楚地看到， 通过联合香芹醇， 阿莫西林的增强作用 ( 如在本实施例 中 ) 给出有关体外最低杀菌浓度降低的出乎意料 的结果并且在全身感染模型中这种增强 作用 ( 或称 “协同增效作用” ) 存在于体内。
因为全身感染可以是威胁生命的并且是最难治疗的感染形式， 尤其是因为它们可 以由于日益耐药性微生物的选择而复发， 所以本发明的药物组合物具有鲜明的优点。
用于治疗细菌感染的方法包括同时或顺序地给予患有细菌感染的患者由医师所 确定的剂量的至少一种第一纯的治疗活性物质， 其选自由香芹醇、 麝香草酚、 丁香酚、 冰片、 香芹酚、 α- 紫罗兰酮、 β- 紫罗兰酮以及其异构体、 衍生物和混合物组成的组， 以及确定剂 量的至少一种第二治疗物质， 其是众所周知的已经用于临床作为本领域特效药的抗生素。
一般地， 同时或顺序地给予患有细菌感染的患者 10 和 200mg/kg 体重 / 天之间的 所述第一治疗活性物质、 以及 1 和 100mg/kg 体重 / 天之间的所述第二治疗活性物质， 其是 已知的已经用作本领域特效药的抗生素。
实例 3 ： 用香芹醇增强的阿莫西林 (Ampi-P) 处理不同的菌株
用若干种在医院环境中分离的耐药性菌株进行实验。使用的抗生素是来自 β- 内 酰胺类的氨苄西林， 其是最广泛使用的抗生素之一。根据本发明的抗生素药物组合物是通 过将不同浓度的氨苄西林和 0.3 克 / 升溶液或赋形剂的亚抑制浓度的香芹醇混合而制得。 本发明的这种药物组合物称作 Ampi-P， 表示增强的氨苄西林。 在每一种情况下， 单独用氨苄 西林、 或单独用香芹醇、 或用本发明的组合物， 确定抗生素活性。
表 2 给出用来确定最低抑菌浓度 (MIC) 和最低杀菌浓度 (MBC)( 单位为 μg/ml) 的静态试验的结果。表2单独的氨苄西林 MIC(μg/ml) ＞ 50 ＞ 50 ＞ 50 ＞ 50 Ampi-P MBC(μg/ml) 5 1 10 5 单独的香芹醇 MBC(μg/ml) 2000 2000 2000 2000表 2 表明， 和单独的氨苄西林或单独的香芹醇相比， 本发明的组合物对所试验的 菌株具有显著的杀菌活性。
事实上， 在表 2 中可以看到， 通过使用浓度为 0.3mg/ml 的香芹醇 ( 其比单独香芹 醇的 MBC 低 6.6 倍 )， 产生杀菌活性的氨苄西林浓度比能够呈现抑菌效应的单独氨苄西林的 浓度低 5 至 50 倍。
因此， 香芹醇对氨苄西林的增强作用不仅大大降低氨苄西林剂量而且在低剂量提 供杀菌作用。
实例 4 ： 用 α- 紫罗兰酮和 β- 紫罗兰酮增强的头孢菌素 (Cepha-P) 处理不同的 菌株
用若干种在医院环境中分离的耐药性菌株进行实验。 使用的抗生素是来自头孢菌 素类 ( 另一类 β- 内酰胺， 属于最广泛使用的抗生素 ) 的头孢唑林。 根据本发明的抗生素药 物组合物是通过将不同浓度的头孢唑林与 0.3 克 / 升溶液或赋形剂的亚抑制浓度的 α- 紫 罗兰酮和 β- 紫罗兰酮混合而制得。 本发明的这种药物组合物称作 Cepha-P， 表示增强的头 孢唑林。在每一种情况下， 单独用头孢唑林、 或单独用 α- 紫罗兰酮或 β- 紫罗兰酮、 或用 本发明的组合物， 确定了抗生素活性。
表 3 给出用来确定最低抑菌浓度 (MIC) 和最低杀菌浓度 (MBC)( 单位为 μg/ml) 的静态试验的结果。
表3
表 3 表明， 和单独的头孢唑林或单独的 α- 紫罗兰酮或 β- 紫罗兰酮相比， 本发明 的组合物对所试验的菌株具有显著的杀菌活性。
事实上， 在表 3 中可以看到， 通过使用浓度为 0.3mg/ml 的 α- 紫罗兰酮或 β- 紫 罗兰酮 ( 其比单独 α- 紫罗兰酮或 β- 紫罗兰酮的 MBC 低 6.6 倍 )， 产生杀菌活性的头孢唑 林浓度比能够呈现抑菌效应的单独头孢唑林的浓度至少低 10 倍。
因此， α- 紫罗兰酮或 β- 紫罗兰酮对头孢唑林的增强作用不仅大大降低头孢唑 林剂量而且在低剂量提供杀菌作用。
实例 5 ： 用香芹醇增强的多粘菌素 B(Polymix-P) 处理不同的菌株
用若干种在医院环境中分离的耐药性菌株进行实验。 使用的抗生素是来自肽类的 多粘菌素 B， 其是最老的抗生素之一。根据本发 明的抗生素药物组合物是通过混合不同浓 度的多粘菌素 B 和 0.3 克 / 升溶液或赋形剂的亚抑制浓度的香芹醇而制得。本发明的这种 药物组合物称作 Polymix-P， 表示增强的多粘菌素 B。在每一种情况下， 单独用多粘菌素 B、 或单独用香芹醇、 或用本发明的组合物， 确定了抗生素活性。
表 4 给出用来确定最低抑菌浓度 (MIC) 和最低杀菌浓度 (MBC)( 单位为 μg/ml) 的静态试验的结果。
表4
表 4 表明， 和单独的多粘菌素 B 或单独的香芹醇相比， 本发明的组合物对所试验的 菌株具有显著的杀菌活性。
事实上， 在表 4 中可以看到， 通过使用浓度为 0.3mg/ml 的香芹醇 ( 其比单独香芹 醇的 MBC 低 6.6 倍 )， 产生杀菌活性的多粘菌素 B 浓度比能够呈现杀菌效应的单独多粘菌素 B 的浓度低 2.5 至 10 倍。
因此， 香芹醇对多粘菌素 B 的增强作用不仅大大降低多粘菌素 B 有效抵抗耐药性 革兰氏阴性菌 ( 大肠杆菌和鼠伤寒沙门菌 ) 的剂量而且扩大了它对革兰氏阳性菌 ( 表皮葡 萄球菌、 枯草杆菌 )( 通常对多粘菌素 B 不敏感 ) 的活性范围。
实例 6 ： 用香芹醇增强的氯霉素 (Chloram-P) 处理不同的菌株
用若干种在医院环境中分离的耐药性菌株进行实验。 使用的抗生素是来自苯丙醇 类的氯霉素， 其是最老的抗生素之一。根据本发明的抗生素药物组合物是通过混合不同浓 度的氯霉素和 0.3 克 / 升溶液或赋形剂的亚抑制浓度的香芹醇而制得。本发明的这种药物 组合物称作 Chloram-P， 表示增强的氯霉素。 在每一种情况下， 单独用氯霉素、 或单独用香芹 醇、 或用本发明的组合物， 确定了抗生素活性。
表 5 给出用来确定最低抑菌浓度 (MIC) 和最低杀菌浓度 (MBC)( 单位为 μg/ml) 的静态试验的结果。
表5
表 5 表明， 和单独的氯霉素或单独的香芹醇相比， 本发明的组合物对所试验的菌 株具有显著的杀菌活性。
事实上， 在表 5 中可以看到， 通过使用浓度为 0.3mg/ml 的香芹醇 ( 其比单独香芹 醇的 MBC 低 6.6 倍 )， 产生杀菌活性的氯霉素浓度比能够呈现杀菌效应的单独氯霉素的浓度 低 10 至 50 倍。
因此， 香芹醇对氯霉素的增强作用不仅大大降低氯霉素有效抵抗耐药性革兰氏阴 性菌 ( 大肠杆菌和鼠伤寒沙门菌 ) 的剂量而且扩 大了它对革兰氏阳性菌 ( 表皮葡萄球菌、 枯草杆菌 )( 对于上述细菌来说， 它的作用通常仅是抑菌的 ) 的活性范围。
实例 7 ： 用香芹醇增强的金霉素 (Tetra-P) 处理不同的菌株
用若干种在医院环境中分离的耐药性菌株进行实验。使用的抗生素是金霉素， 其 是最老的抗生素之一。根据本发明的抗生素药物组合物是通过混合不同浓度的金霉素和 0.3 克 / 升溶液或赋形剂的亚抑制浓度的香芹醇而制得。本发明的这种药物组合物称作 Tetra-P， 表示增强的金霉素。在每一种情况下， 单独用金霉素、 或单独用香芹醇、 或用本发 明的组合物， 确定了抗生素活性。
表 6 给出用来确定最低抑菌浓度 (MIC) 和最低杀菌浓度 (MBC)( 单位为 μg/ml) 的静态试验的结果。
表6
表 6 表明， 和单独的金霉素或单独的香芹醇相比， 本发明的组合物对所试验的菌 株具有显著的杀菌活性。
事实上， 在表 6 中可以看到， 通过使用浓度为 0.3mg/ml 的香芹醇 ( 其比单独香芹 醇的 MBC 低 6.6 倍 )， 产生杀菌活性的金霉素浓度比能够呈现杀菌效应的单独金霉素的浓度 低 25 至 50 倍。
因此， 香芹醇对四环素的增强作用不仅大大降低金霉素剂量而且在非常低的剂量 提供杀菌作用。
实例 8 ： 用香芹醇增强的链霉素 (Strepto-P) 处理不同的菌株
用若干种在医院环境中分离的耐药性菌株进行实验。使用的抗生素是链霉素， 氨 基糖苷类的一个重要成员， 其属于最重要的抗生素。根据本发明的抗生素药物组合物是通 过混合不同浓度的链霉素和 0.3 克 / 升溶液或赋形剂的亚抑制浓度的香芹醇而制得。本发 明的这种药物组合物称作 Strepto-P， 表示增强的链霉素。 在每一种情况下， 单独用链霉素、 或单独用香芹醇、 或用本发明的组合物， 确定了抗生素活性。
表 7 给出用来确定最低抑菌浓度 (MIC) 和最低杀菌浓度 (MBC)( 单位为 μg/ml) 的静态试验的结果。
表7
表 7 表明， 和单独的链霉素或单独的香芹醇相比， 本发明的组合物对所试验的菌 株具有显著的杀菌活性。
事实上， 在表 7 中可以看到， 通过使用浓度为 0.3mg/ml 的香芹醇 ( 其比单独香芹 醇的 MBC 低 6.6 倍 )， 产生杀菌活性的链霉素浓度比能够呈现杀菌效应的单独链霉素的浓度 低至少 10 倍。
因此， 香芹醇对链霉素的增强作用不仅大大降低链霉素剂量而且在非常低的剂量 提供杀菌作用。
实例 9 ： 用香芹醇增强的红霉素 (Erythro-P) 处理不同的菌株
用若干种在医院环境中分离的耐药性菌株进行实验。使用的抗生素是红霉素， 大 环内酯类的一个重要成员， 其属于最重要的抗生素。根据本发明的抗生素药物组合物是通 过混合不同浓度的红霉素和 0.3 克 / 升溶液或赋形剂的亚抑制浓度的香芹醇而制得。本发 明的这种药物组合物称作 Erythro-P， 表示增强的红霉素。 在每一种情况下， 单独用红霉素、 或单独用香芹醇、 或用本发明的组合物， 确定了抗生素活性。
表 8 给出用来确定最低抑菌浓度 (MIC) 和最低杀菌浓度 (MBC)( 单位为 μg/ml) 的静态试验的结果。
表8
表 8 表明， 和单独的红霉素或单独的香芹醇相比， 本发明的组合物对所试验的菌 株具有显著的杀菌活性。
事实上， 在表 8 中可以看到， 通过使用浓度为 0.3mg/ml 的香芹醇 ( 其比单独香芹 醇的 MBC 低 6.6 倍 )， 产生杀菌活性的红霉素浓度比能够呈现杀菌效应的单独红霉素的浓度 至少低 2 至 5 倍。
因此， 香芹醇对红霉素的增强作用可以大大降低能够呈现杀菌效应的红霉素剂 量。
实例 10 ： 用香芹酚增强的利福平 (Rifam-P) 处理不同的分支杆菌菌株
用两种在兽医环境中分离的耐药性分支杆菌菌株进行实验。 使用的抗生素是利福 平， 抗结核类的一个重要成员。根据本发明的抗生素药物组合物是通过混合不同浓度的利 福平和 0.3 克 / 升溶液或赋形剂的亚抑制浓度的香芹酚而制得。本发明的这种药物组合物 称作 Rifam-P， 表示增强的利福平。在每一种情况下， 单独用利福平、 或单独用香芹酚、 或用 本发明的组合物， 确定了抗生素活性。
表 9 给出用来确定最低抑菌浓度 (MIC) 和最低杀菌浓度 (MBC)( 单位为 μg/ml) 的静态试验的结果。
表9
表 9 表明， 与单独的利福平或单独的香芹酚相比， 本发明的组合物对所试验的分 支杆菌菌株具有显著的杀菌活性。
事实上， 在表 9 中可以看到， 通过使用浓度为 0.3mg/ml 的香芹酚 ( 其比单独香芹 酚的 MBC 低 3.3 倍 )， 产生杀菌活性的利福平浓度比能够呈现杀菌效应的单独利福平的浓度 至少低 25 倍。
因此， 香芹酚对利福平的增强作用可以大大降低相对于快速生长的分支杆菌 ( 通 常对利福平不敏感 ) 呈现杀菌活性的利福平剂量。
实例 11 ： 用麝香草酚增强的异烟肼 (Izon-P) 处理不同的分支杆菌菌株
用两种在兽医环境中分离的耐药性分支杆菌菌株进行实验。 使用的抗生素是异烟 肼， 抗结核类的一个重要成员。根据本发明的抗生素药物组合物是通过混合不同浓度的异 烟肼和 0.3 克 / 升溶液或赋形剂的亚抑制浓度的麝香草酚而制得。本发明的这种药物组合 物称作 Izon-P， 表示增强的异烟肼。 在每一种情况下， 单独用异烟肼、 或单独用麝香草酚、 或 用本发明的组合物， 确定了抗生素活性。
表 10 给出用来确定最低抑菌浓度 (MIC) 和最低杀菌浓度 (MBC)( 单位为 μg/ml) 的静态试验的结果。
表 10
表 10 表明， 与单独的异烟肼或单独的麝香草酚相比， 本发明的组合物对所试验的 分支杆菌菌株具有显著的杀菌活性。
事实上， 在表 10 中可以看到， 通过使用浓度为 0.3mg/ml 的麝香草酚 ( 其比单独麝
香草酚的 MBC 低 3.3 倍 )， 产生杀菌活性的异烟肼浓度比能够呈现杀菌效应的单独异烟肼的 浓度至少低 25 倍。
因此， 麝香草酚对异烟肼的增强作用可以大大降低相对于快速生长的分支杆菌 ( 通常对异烟肼不敏感 ) 呈现杀菌活性的异烟肼剂量。
实例 12 ： 在有香芹酚增强的阿莫西林存在的情况下选择耐药性突变株
进行了以下实验以便证实本发明披露的增强作用可以防止耐药性突变株的选择。
在有 3μg/ml 的亚抑制浓度存在的情况下， 培养对 5μg/ml 阿莫西林敏感的大 肠杆菌菌株， 然后接种到包含提高的阿莫西林浓度 (4μg/ml， 然后 5μg/ml， 然后 6μg/ ml...) 的营养培养基 (Muller Hinton) 中。用香芹酚 ( 其浓度比单独香芹酚的 MIC 低两 倍， 即 500μg/ml) 增强的阿莫西林进行相同的步骤。该实验是基于这样的原理， 即， 在每次 亚克隆化， 对新的阿莫西林浓度耐受的突变株将增加， 从而产生比从其产生亚克隆化的菌 株更耐药的菌株。
实验结果记录在表 11 中， 其示出具有增加的耐药性的突变株的选择以及为获得 它们所需要的亚克隆化次数。
表 11
表 11 表明， 借助于本发明的组合物， 需要 14 次连续的亚克隆化以选择耐浓度为 17μg/ml( 从 3μg/ml 开始 ) 的 Amox-P 的突变株， 而借助于单独的阿莫西林， 仅用四次亚 克隆化就获得耐 17μg/ml 的突变株。在 9 次亚克隆化以后获得具有更高耐药性 ( 高达 50μg/ml 的单独的阿莫西林 ) 的突变株， 而在使用 Amox-P 的情况下， 没有选择出耐浓度大 于 17μg/ml 的突变株。
事实上， 这些数据表明， 一方面， 与单独阿莫西林相比 ( 分别为 14 次亚克隆化与 4 次亚克隆化 )， 通过使用浓度为 0.5mg/ml 的 香芹酚 ( 其比单独香芹酚的 MIC 低两倍 )， 用 本发明的组合物更难选择出耐药性突变株。此外， 耐单独阿莫西林的突变株的选择可以更 容易地继续至高达 50μg/ml( 实验中的最高浓度 )， 而在有本发明的组合物存在的情况下， 耐药性在 17μg/ml 达到平稳状态。
因此， 可以看到， 香芹酚对阿莫西林的增强作用显著地降低了选择耐药性突变株 的可能性。
实例 13 ： 在有香芹酚增强的阿莫西林 + 克拉维酸存在的情况下选择耐药性突变株
上述结合是以 1 克阿莫西林 ： 0.125 克克拉维酸的比例加以制备。
进行了以下实验以便证实本发明披露的增强作用可以防止耐药性突变株的选择。
在有 3μg/ml 的亚抑制浓度存在的情况下， 培养对阿莫西林 / 克拉维酸结合 ( 阿 莫西林的浓度为 5μg/ml) 敏感的大肠杆菌菌株， 然后接种到包含增加浓度的阿莫西林 / 克 拉维酸结合 (4μg/ml， 然后 5μg/ml， 然后 6μg/ml...) 的营养培养基 (Muller Hinton) 中。 用比单独香芹酚的 MIC 低两倍的浓度 ( 即 500μg/ml) 的香芹酚增强的阿莫西林 / 克拉维
酸进行相同的步骤。该实验是基于这样的原理， 即， 在每次亚克隆化， 对新的阿莫西林 / 克 拉维酸浓度耐受的突变株将增加， 从而产生比从其产生亚克隆化的菌株更耐药的菌株。
实验结果记录在表 12 中， 其示出具有增加的耐药性的突变株的选择以及为获得 它们所需要的亚克隆化次数。
表 12
表 12 表明， 借助于本发明的组合物， 需要 17 次连续的亚克隆化以选择耐浓度为 20μg/ml( 从 3μg/ml 开始 ) 的突变株， 而借助于单独的阿莫西林 / 克拉维酸， 仅用 8 次亚 克隆化就获得耐 20μg/ml 的突变株。在 13 次亚克隆化以后获得具有更高耐药性 ( 高达 50μg/ml 的单独的阿莫西林 / 克拉维酸 ) 的突变株， 而在使用本发明的组合物的情况下， 没 有选择出耐浓度大于 20μg/ml 的突变株。
事实上， 这些数据表明， 一方面， 与单独阿莫西林 / 克拉维酸相比 ( 分别为 17 次亚 克隆化与 8 次亚克隆化 )， 通过使用浓度为 0.5mg/ml 的香芹酚 ( 其比单独香芹酚的 MIC 低 两倍 )， 用本发明的组合物更难选择出耐药性突变株。此外， 耐单独阿莫西林 / 克拉维酸的 突变株的选择可以更容易地继续至高达 50μg/ml( 实验中的最高浓度 )， 而在有本发明的 组合物存在的情况下， 耐药性在 20μg/ml 达到平稳状态。
因此， 可以看到， 香芹酚对阿莫西林 / 克拉维酸的增强作用显著地降低了选择耐 药性突变株的可能性。
从所有上述实例可以明显看到， 所述第一治疗活性物质对抗生素的增强作用使之 有可能降低为对抗耐药性细菌所需要的剂量， 扩大抗生素的活性范围， 将抑菌作用转化成 杀菌作用以及使耐药性突变株更难形成。
当然， 本发明决不限于本文所描述和说明的实施方式， 这些实施方式只是通过举 例方式给出。
相反， 在不偏离本发明的精神的情况下， 本发明包括本文所描述方法的所有技术 等效替换以及其组合。