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本发明属于药物制剂技术领域，具体是提供了一种白细胞介素-2脂质体及其制备方法。现有技术表明白细胞介素-2(IL-2)脂质体剂型存在使用辅料多，工艺复杂等问题。本发明技术方案为IL-2及其制剂辅料按重量百分比计为：白细胞介素-20.005-0.2％、磷脂类载体15-40％、胆固醇类载体2-10％、冻干保护剂25-80％、抗氧剂0.5-2％。其制备方法，其特征是取IL-2溶于适量磷酸盐缓冲液中，加入胆固醇、磷脂、抗氧剂、混匀；加入海藻糖、磷酸缓冲液、搅拌混合均匀；转移至高压均质机储料罐，启动均质机，控制压力，冷冻干燥即可。本发明所得IL-2脂质体具有包封率、回收率高，粒径小，稳定性好的优点。

1、  一种白细胞介素-2脂质体，其特征是白细胞介素-2及其制剂辅料按重量百分比计为：
白细胞介素-2          0.005—0.2％
磷脂类载体            15—40％
胆固醇类载体          2—10％
冻干保护剂            25—80％
抗氧剂                0.5—2％
其中，磷脂类载体是大豆卵磷脂、神经鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰甘油磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酸、磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种或两种以上；冻干保护剂是海藻糖；抗氧剂是维生素E、硫脲、硫代甘油中的一种或两种以上。

2、  如权利要求1所述的一种白细胞介素-2脂质体，其特征是白细胞介素-2及其制剂辅料按重量百分比计为：
白细胞介素-2          0.05％
大豆卵磷脂            26.00％
胆固醇                6.00％
海藻糖                66.65％
维生素E               1.35％。

3、  如权利要求1或2所述一种白细胞介素-2脂质体的制备方法，其特征是取IL-2溶于适量磷酸盐缓冲液中，加入胆固醇、磷脂、抗氧剂，混匀；加入海藻糖、磷酸缓冲液，搅拌混合均匀；转移至高压均质机储料罐，启动均质机，控制压力，冷冻干燥即可。

4、  如权利要求3所述方法，其特征是磷酸盐缓冲液的PH为6.5-7.0，用量为IL-2和其他制剂辅料的10-30倍；均质机控制压力在5000-15000psi，循环2次；冷冻干燥条件为-20℃预冻，-52℃冷冻干燥20h。

5、  如权利要求4所述方法，其特征是磷酸盐缓冲液的用量为IL-2和其他制剂辅料的20倍；均质机控制压力在7000-10000psi。

一种白细胞介素-2脂质体及其制备方法
技术领域
木发明属于药物制剂技术领域，具体是白细胞介素-2脂质体及其制备方法。
背景技术
白细胞介素-2(IL-2)是一种强效免疫刺激剂，具有广谱免疫增强作用，在临床上应用广泛，用于肾癌、黑色素癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、恶性淋巴瘤以及病毒感染、免疫缺陷病及自身免疫病的治疗，具有确切良好的疗效。但普通IL-2注射剂副作用较大，可引起发热、呕吐等一般症状，还可导致水盐代谢紊乱和肾、肝、心、肺等功能异常；最常见、最严重的是毛细血管渗漏综合征，使患者不得肝、心、肺等功能异常；最常见、最严重的是毛细血管渗漏综合征，使患者不得不中止治疗。同时，IL-2在体内半衰期短、不稳定也限制了其临床应用。
脂质体具有类细胞结构，由磷脂胆固醇等为膜材包合而成，是适合于生物体内降解、对人体无毒、无免疫原性的靶向药物载体。脂质体具有靶向性、低毒、高效的特点，脂质体包裹药物为物理过程，不改变药物结构，包裹药物后，可以对被包裹药物形成有效的保护，提高生物利用度，由于脂质体能够有效地将生物活性分子引进各种细胞以调节其生物合成、代谢，已成为当今生物医学工程领域内的高新技术之一，广泛应用于基因重组技术、药物运载系统、药剂改革及靶向性药物等方面的研究。
研究证明，IL-2脂质体能够显著延长IL-2半衰期，具有比游离IL-2更优越的抗肿瘤和免疫调节效能，并显著降低IL-2的毒性反应，更有效地活化巨噬细胞等免疫活性细胞，释放趋化因子，促进激活的T细胞朝肿瘤部位迁移。脂质体技术能显著降低IL-2毒性，增强其疗效。IL-2脂质体使用剂量小，治疗指数高，突破了传统IL-2制剂在临床使用的瓶颈，为临床的安全、合理用药提供了良好的空间，具备极大的市场潜力，必将产生良好的经济和社会效益，
经检索，现有技术中，有关于制备IL-2前体脂质体的专利，专利号为200410067266.4，但是该专利技术存在一些缺陷，如使用的辅料较多，导致工艺复杂化，而且其工艺中存在加热熔融过程，易引起磷脂氧化，产生甘油磷酸复合物及脂肪酸等对人体有毒物质；同时，该专利方法获得的白细胞介素-2脂质体粒径仅在900nm，体内循环时间相对较短。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提高IL-2的活性回收率和包封率，减小IL-2脂质体的粒径，提高IL-2脂质体的稳定性。
本发明的目的是提供一种IL-2脂质体。本发明采取的技术方案是，IL-2及其制剂辅料按重量百分比计为：
白细胞介素-2             0.005—0.2％
磷脂类载体               15—40％
胆固醇类载体             2—10％
冻干保护剂               25—80％
抗氧剂                   0.5—2％
其中，磷脂类载体是大豆卵磷脂、神经鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰甘油磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酸、磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种或两种以上；胆固醇类载体可以是胆固醇、麦角甾醇的一种或一种以上；冻干保护剂是海藻糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖的一种或两种以上；抗氧剂是维生素E、硫脲、硫代甘油中的一种或两种以上。
优选地，本发明采取的技术方案是，IL-2及其制剂辅料按重量百分比计为：白细胞介素-2                  0.05％
大豆卵磷脂               26.00％
胆固醇                   6.00％
海藻糖                   66.60％
维生素E                  1.35％
本发明的另一个目的是提供IL-2脂质体的制备方法，该方法为：
取IL-2溶于适量磷酸盐缓冲液中，加入胆固醇、磷脂、抗氧剂，混匀；加入海藻糖、磷酸缓冲液，搅拌混合均匀；转移至高压均质机储料罐，启动均质机，控制压力，冷冻干燥即可。
上述方法中，磷酸盐缓冲液的PH为6.5-7.0，用量为处方量的10-30倍；均质机控制压力在5000-15000psi，循环1—2次；冷冻干燥条件为-20℃预冻，-52℃冷冻干燥。
上述方法中，磷酸盐缓冲液的用量为处方量的20倍；均质机控制压力在7000-10000psi。
分析检测方法：
活性检测方法：CTLL-2细胞/MTT比色法(《中国药典》三版附录XD)
粒径检测：配制浓度约3mg/ml，马尔文HPPS5001测试
脂质体分离方法：选用葡聚糖凝胶G50装柱(1.5×40cm)分离。
包封率(％)＝包封药物的活性/总的药物活性×100％
活性回收率(％)＝制剂实测活性/制剂理论活性×100％
本发明的优点：
提高了IL-2的活性回收率和包封率。制剂活性回收率达到95.2—100.5％，包封率达到93.5—97.2％；
本发明处方、工艺简单易行，没有加热环节，最大程度降低磷脂氧化，所制备的前体脂质体吸湿性小，有利于IL-2的稳定性。
控制IL-2脂质体平均粒径在303—365nm，延长体内循环时间。本发明使用高压均质法获取粒径较小、分布范围较窄的IL-2脂质体，其有利于在人体内延长循环时间。
具体实施方式
实施例1
IL-2                 0.11％      (1.0×108IU)
大豆卵磷脂           31.21％     (2.500g)
胆固醇               4.68％      (0.375g)
海藻糖               62.43％     (5.000g)
维生素E              1.56％      (0.125g)
制备工艺：取1.0×108IU IL-2溶于50ml(PH为7.0)的磷酸盐缓冲液中，按上述量加入胆固醇、磷脂、维生素E，混匀；加入海藻糖、100ml磷酸缓冲液，搅拌混合均匀；转移至高压均质机储料罐，启动均质机，控制压力在5000-7000psi，循环2次，-20℃预冻，-52℃冷冻干燥即可。
检测结果：活性回收率95.2％，包封率93.5％，平均粒径330.3nm
实施例2
IL-2                  0.05％      (5.6×107IU)
大豆卵磷脂            26.00％     (2.600g)
胆固醇         6.00％      (0.600g)
海藻糖         66.60％     (6.660g)
维生素E        1.35％      (0.135g)
制备工艺：取5.6×107IU IL-2溶于60ml(PH为7.0)的磷酸盐缓冲液中，按上述量加入胆固醇、磷脂、维生素E，混匀；加入海藻糖、140ml磷酸缓冲液，搅拌混合均匀；转移至高压均质机储料罐，启动均质机，控制压力在7000-10000psi，-20℃预冻，-52℃冷冻干燥即可。
检测结果：活性回收率100.5％，包封率97.2％，平均粒径303.7nm
实施例3
白细胞介素-2          0.005％      (1.68×106IU)
二硬脂酰磷脂酰胆碱    40.0％       (1.20g)
麦角甾醇              2.0％        (0.06g)
蔗糖                  57.495％     (1.725g)
硫代甘油              0.5％        (0.015g)
制备工艺：取1.68×106IU IL-2溶于20ml(PH为6.8)的磷酸盐缓冲液中，按上述量加入胆固醇、大豆卵磷脂、硫代甘油，混匀；加入海藻糖、60ml磷酸缓冲液，搅拌混合均匀；转移至高压均质机储料罐，启动均质机，控制压力在10000-15000psi，-20℃预冻，-52℃冷冻干燥即可。
检测结果：活性回收率95.5％，包封率94.5％，平均粒径310.3nm
实施例4
白细胞介素-2          0.2％       (1.78×108IU)
二棕榈酰磷脂酰胆碱    30.0％      (2.400g)
胆固醇                5.0％       (0.400g)
麦芽糖                63.8％      (5.104g)
硫脲                  1.0％       (0.080g)
制备工艺：取1.78×108IU IL-2溶于40ml(PH为6.5)的磷酸盐缓冲液中，按上述量加入胆固醇、大豆卵磷脂、硫脲，混匀；加入麦芽糖、160ml磷酸缓冲液，搅拌混合均匀；转移至高压均质机储料罐，启动均质机，控制压力在9000-11000psi，-20℃预冻，-52℃冷冻干燥即可。
检测结果：活性回收率96.3％，包封率96.1％，平均粒径320.7nm
实施例5
白细胞介素-2          0.10％     (1.12×108IU)
二棕榈酰磷脂酰胆碱    8.0％      (0.80g)
大豆卵磷脂            20.0％     (2.00g)
胆固醇                6.0％      (0.60g)
海藻糖                63.9％     (6.39g)
维生素E2.0％(0.20g0
制备工艺：取1.12×108IU IU IL-2溶于40ml(PH为7.0)的磷酸盐缓冲液中，按上述量加入胆固醇、大豆卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、维生素E，混匀；加入海藻、160ml磷酸缓冲液，搅拌混合均匀；转移至高压均质机储料罐，启动均质机，控制压力在7000-10000psi，-20℃预冻，-52℃冷冻干燥即可。
检测结果：活性回收率98.2％，包封率94.7％，平均粒径310.8nm
实施例6
白细胞介素-2          0.05％     (5.6×107IU)
大豆卵磷脂            26.00％    (2.600g)
胆固醇                6.00％     (0.600g)
乳糖                  40.0％     (4.000g)
海藻糖                26.60％    (2.660g)
维生素E               1.35％     (0.135g)
制备工艺：取5.6×107IU IL-2溶于50ml(PH为7.0)的磷酸盐缓冲液中，按上述量加入胆固醇、大豆卵磷脂、维生素E，混匀；加入海藻、乳糖、250ml磷酸缓冲液，搅拌混合均匀；转移至高压均质机储料罐，启动均质机，控制压力在5000-7000psi，循环2次，-20℃预冻，-52℃冷冻干燥即可。
检测结果：活性回收率98.2％，包封率95.1％，平均粒径343.1nm稳定性考察结果
贮存条件：6±2℃