具靶向性的嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法.pdf

本发明涉及一种医药技术领域的具靶向性的嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法。本发明利用羧基化的PEO-PPO-PEO嵌段共聚物为载体构建难溶性药物的胶束水溶液，以羧基活化剂活化PEO-PPO-PEO的羧基，制备连接有相关配体或抗体等靶向分子的PEO-PPO-PEO载药胶束体系，经过滤除菌、冷冻干燥后得到该靶向给药胶束体系的冻干制剂。本发明操作简单、条件温和、原料低廉、无需采用复合材料、可控性强，可在保持载药PEO-PPO-PEO胶束粒径小、无免疫原性等特点的前提下实现其主动靶向作用，减小治疗药物对周围正常组织细胞的损害，减小毒副作用及用药剂量，并适于大量制备和工业化生产。

1、  一种具靶向性的嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
第一步，将羧基化PEO-PPO-PEO嵌段共聚物、难溶性药物溶于有机溶剂，使羧基化PEO-PPO-PEO嵌段共聚物、难溶性药物充分溶解，制备以羧基化PEO-PPO-PEO为载体的难溶性药物胶束水溶液；
第二步，活化PEO-PPO-PEO嵌段共聚物的羧基，加入靶向分子，制备连有靶向分子的PEO-PPO-PEO载药胶束水溶液；
第三步，在连有靶向分子的PEO-PPO-PEO载药胶束水溶液中加入冻干保护剂，经过过滤除菌，冷冻干燥后得到该靶向载药胶束体系的冻干制剂。

2、  如权利要求1所述的具靶向性的嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法，其特征是，所述羧基化PEO-PPO-PEO嵌段共聚物的分子式为：
RO(C₂H₄O)_a(C₃H₆O)_b(C₂H₄O)_cMCOOH
结构式：

这里的R是-C₂H₄COOH、-H、-CH₃、-C₂H₅、-C₃H₇基团，M是-(CH₂)₂-、-(CH₂)₃-基团，其中a、c为2～200、b为15～100的整数。

3、  如权利要求1所述的具靶向性的嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法，其特征是，所述难溶性药物，是指在无任何助溶剂的情况下，1g药物需要30mL以上水才能完全溶解的药物。

4、  如权利要求1或3所述的具靶向性的嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法，其特征是，所述难溶性药物，是指抗肿瘤类难溶性药物，包括紫杉醇、多西紫杉醇、羟基喜树碱。

5、  如权利要求1所述的具靶向性的嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法，其特征是，所述有机溶剂，包括脂肪烃类及其衍生物、芳烃类及其衍生物、环烷烃类及其衍生物溶剂，单独或混合使用。

6、  如权利要求1所述的具靶向性的嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法，其特征是，所述使羧基化PEO-PPO-PEO嵌段共聚物、难溶性药物充分溶解，其方法包括使用加热、搅拌、或超声促进溶解。

7、  如权利要求1所述的具靶向性的嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法，其特征是，所述制备以羧基化PEO-PPO-PEO为载体的难溶性药物胶束水溶液，其方法包括使用透析法、薄膜水化法或溶剂挥发法。

8、  如权利要求1所述的具靶向性的嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法，其特征是，所述活化PEO-PPO-PEO嵌段共聚物的羧基，采用羧基活化剂进行，羧基活化剂包括N，N’-二环己基碳二亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、N，N’-二异丙基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺，单独或混合使用。

9、  如权利要求1所述的具靶向性的嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法，其特征是，所述靶向分子，是指能与人体内的特定正常或病变组织、器官、细胞或细胞内特定部位产生特异性结合、以氨基酸为基本单位的物质。

10、  如权利要求1所述的具靶向性的嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法，其特征是，所述冻干保护剂，包括：蔗糖、海藻糖、甘露醇、乳糖、葡萄糖、麦芽糖、葡聚糖、白蛋白，单独或混合使用。

具靶向性的嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法
技术领域
本发明涉及一种药物技术领域的制备方法，具体地说，涉及的是一种具靶向性的嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法，即具靶向性的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯(PEO-PPO-PEO)嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法。
背景技术
靶向给药系统(targeted drug delivery system，TDDS)，又称靶向制剂，是指将药物通过局部或全身血液循环而浓集定位于病变组织、器官、细胞或细胞内，以提高药物在作用部位的治疗浓度而降低毒副作用的一种新型给药系统。TDDS被认为是抗癌药的适宜剂型。TDDS要求药物作用于靶组织、靶器官、靶细胞，甚至细胞内的结构，并要求有一定浓度的药物停留相当长的一段时间以便发挥治疗作用，故理想的TDDS应具备3个要素：定位蓄积、控制释药、可生物降解。TDDS已在多种临床疾病的防治中显示出优势，如肝病、胃结肠疾病、皮肤、脑病及眼部疾病等。TDDS就其导向机理而论可分为被动靶向、主动靶向和物理靶向。其中被动靶向即自然靶向，一般的微粒给药系统都具有被动靶向给药的性能，被动靶向无主动结合靶部位细胞的作用，因此在发挥药效的同时，不可避免对正常组织造成损伤；物理靶向指通过磁场、电场、温度、超声波响应、红外线响应等因素把药物导向到靶部位，如磁球、热敏脂质体等，物理靶向在靶向精确性、保证靶部位药物浓度方面较有优势，是一个很有前途的方法；主动靶向指表面经修饰后的药物微粒躲避单核吞噬系统识别，利用抗原-抗体或配体-受体等分子亲和作用将药物定向分布在靶组织或靶细胞内。主动靶向依赖在纳米粒表面偶联特异性的靶向分子(特异性的配体、单克隆抗体等)，通过靶向分子与细胞表面特异性受体结合实现靶向治疗，因此具有高度特异性、靶向过程无需外部因素影响、抗干扰能力强等优点，是一种较有发展前景的靶向技术。
聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯(PEO-PPO-PEO)嵌段共聚物是用共价键将亲水的PEO链段和疏水的PPO链段链结在一起的高分子化合物，是一类非离子型的高分子表面活性剂，商品名Pluronic(BASF公司)或Poloxamer(ICI公司)，与低分子表面活性剂相比，PEO-PPO-PEO共聚物具有更加优越的性能，如极低的临界胶束浓度、多样化的分子化学组成结构以及由此导致的多样化两亲性质、极低的毒性、良好的生物相容性和蛋白抗性等，使它们在废水处理、介孔材料的制备、生物医用材料、动物细胞培养、生物大分子分离和药物载体研究等方面有广阔的应用前景，如PEO-PPO-PEO共聚物在水溶液中所形成的胶束疏水核心可以与难溶性药物结合，从而达到增加药物溶解性、代谢稳定性和体内循环时间的作用，PEO-PPO-PEO共聚物的胶束水溶液还具有独特的温度敏感胶束化和热可逆凝胶化特点，因此作为药物载体能改变细胞内的药物排出机制，抑制药物通过血脑屏障或小肠时的排出，提高对脑部给药和口服给药的生物利用度，增加多重耐药癌细胞对抗癌药物的敏感性等，这对提高药物特别是难溶性药物的临床适应性，方便药物制剂生产、运输、使用等具有重要价值。PEO-PPO-PEO共聚物无毒、无刺激、无免疫原性，胶束外壳的PEO嵌段能阻止血小板的聚集，胶束尺寸和病毒相仿，大小适合在体内传输，是一种难溶性药物的优良载体。
然而PEO-PPO-PEO共聚物胶束作为给药系统由于其粒径小、无免疫原性等自身特点虽具有一定的天然被动靶向作用，却无任何主动靶向性，因此在作用于靶细胞的同时不可避免地对周围正常细胞造成损害，形成严重的药物毒副作用。
经对现有技术的文献检索发现，Li-mei HAN等在《Acta PharmacologicaSinica》(中国药理学报)(2006年第27期第747页)上发表的“Pharmacokineticsand biodistribution of polymeric micelles of paclitaxel with PluronicP123”(紫杉醇Pluronic P123聚合物胶束药物动力学和组织分布学研究)，该文中提出以PEO-PPO-PEO共聚物P123胶束作为紫杉醇的给药载体，其不足在于：该给药系统无主动特异靶向性。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供了一种具靶向性的嵌段聚合物胶束给药系统的制备方法，该方法操作简单，条件温和，可以在保持载药PEO-PPO-PEO胶束粒径小、无免疫原性等原有自身特点的前提下实现其主动靶向作用，从而减小治疗药物对周围正常组织细胞的损害，减小毒副作用及用药剂量。
本发明是通过以下技术方案实现的，本发明利用羧基化的PEO-PPO-PEO嵌段共聚物为载体构建难溶性药物的胶束水溶液，以羧基活化剂活化PEO-PPO-PEO的羧基，制备连接有相关配体或抗体等靶向分子的PEO-PPO-PEO载药胶束体系，经过滤除菌、冷冻干燥后得到该靶向给药胶束体系的冻干制剂。
本发明包括如下步骤：
第一步，将羧基化PEO-PPO-PEO嵌段共聚物、难溶性药物溶于有机溶剂，使载体材料和药物充分溶解，制备以羧基化PEO-PPO-PEO为载体的难溶性药物胶束水溶液。
所述羧基化PEO-PPO-PEO嵌段共聚物的分子式为：
RO(C₂H₄O)_a(C₃H₆O)_b(C₂H₄O)_cMCOOH
结构式：

这里的R是-C₂H₄COOH、-H、-CH₃、-C₂H₅、-C₃H₇等基团，M是-(CH₂)₂-、-(CH₂)₃-等基团，其中a、c为2～200、b为15～100的整数。
所述难溶性药物，是指在无任何助溶剂的情况下，1g需要30mL以上水才能完全溶解的药物，特别是指抗肿瘤类难溶性药物，如紫杉醇、多西紫杉醇、羟基喜树碱等。
所述有机溶剂，包括但不限于脂肪烃类及其衍生物、芳烃类及其衍生物、环烷烃类及其衍生物等溶剂，单独或混合使用。
所述使载体材料和药物充分溶解，其方法包括但不限于使用加热、搅拌、超声等促进溶解的方法。
所述制备以羧基化PEO-PPO-PEO为载体的难溶性药物胶束水溶液，其方法包括但不限于使用透析法、薄膜水化法或溶剂挥发法等方法。
第二步，活化PEO-PPO-PEO嵌段共聚物的羧基，加入靶向分子(配体或抗体)，制备连有靶向分子的PEO-PPO-PEO载药胶束水溶液。
所述靶向分子，是指可与人体内的特定正常或病变组织、器官、细胞或细胞内特定部位产生特异性结合、以氨基酸为基本单位的物质，特别是指多肽类、蛋白类及抗体蛋白类物质。
所述活化PEO-PPO-PEO嵌段共聚物的羧基，采用羧基活化剂进行，羧基活化剂包括但不限于使用N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)、N，N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)等，单独或混合使用。
第三步，在连有靶向分子的PEO-PPO-PEO载药胶束水溶液中加入冻干保护剂，经过滤除菌，冷冻干燥后得到该靶向载药胶束体系的冻干制剂。
所述冻干保护剂，包括但不限于使用：蔗糖、海藻糖、甘露醇、乳糖、葡萄糖、麦芽糖、葡聚糖、白蛋白等，单独或混合使用，每100毫升冻干溶液所需冻干保护剂的重量可在1％～50％，常用量为2％～20％。
所述经过过滤除菌，是指经过0.22μm微孔滤膜过滤除菌。
本发明所述的水溶液就是指水。
本发明利用可生物降解并具有良好生物相容性的两亲性PEO-PPO-PEO嵌段共聚物构建水溶性胶束，包载难溶性药物于PPO分子链形成的胶束疏水内核，并直接链接靶向配体或抗体分子于PEO链，实现难溶性药物与靶向分子的有机结合，制备包载难溶性治疗药物的纳米靶向两亲性嵌段共聚物胶束给药系统。
本发明具有以下优点：
1、操作简单、价格低廉、制备过程不需要复杂的仪器设备，适于大量制备和工业化生产；
2、条件温和、稳定，借助单一的无毒、无免疫原性PEO-PPO-PEO嵌段共聚物载体材料，利用其可在水溶液中自组装形成胶束的特点，无需借助第二载体或构建复合载体，即实现靶向分子与药物的有机结合，从而增加了实现药物靶向传递的可控性及可行性。
具体实施方式
下面实施例对本发明作详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述实施例。
实施例1
称取40mg羧基化的P123型PEO-PPO-PEO嵌段共聚物、1mg紫杉醇，加入2mL乙腈，200rpm搅拌2h使载体材料和药物充分溶解，溶液经40℃水浴旋转蒸发挥尽乙腈，25℃真空干燥过夜后得到无色透明药膜，以1mL纯水为水化介质，将药膜于25℃旋转水化1h，得无色透明紫杉醇PEO-PPO-PEO胶束溶液；
加入0.3mL0.25M浓度1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)及0.3mL0.25M浓度N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，200rpm旋转搅拌15min以活化羧基，加入400μg抗c-erbB-2单克隆抗体，200rpm旋转搅拌2h，以氢氧化钠调整pH值至7，得抗c-erbB-2紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束；
加入0.3g蔗糖作为冻干保护剂，补足溶液总体积至2mL，过0.22μm微孔滤膜除菌，将溶液分装于无菌青霉素小瓶中，每支1mL，冷冻干燥，得白色疏松状抗c-erbB-2紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束冻干制剂，每支含紫杉醇0.5mg，抗c-erbB-2单克隆抗体200μg，该冻干制剂加入1mL葡萄糖注射液或氯化钠注射液经振摇可于1min内完全复溶，所得胶束溶液澄清透明，状态可保持3d以上，疏水性药物紫杉醇位于胶束中，稳定性良好。
实施例2
称取80mg羧基化的F127型PEO-PPO-PEO嵌段共聚物、1mg多西紫杉醇，加入1mL二甲基甲酰胺(DMF)，水浴超声10min使载体材料和药物充分溶解，溶液装入MWCO2000透析袋中，用1.5L去离子水透析24h，透析后溶液经1000rpm离心10min，上清液过0.45μm微孔滤膜，滤液补足体积至1mL，得无色透明多西紫杉醇PEO-PPO-PEO胶束溶液；
加入0.3mL0.2M浓度N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)及0.3mL0.2M浓度N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，200rpm旋转搅拌15min以活化羧基，加入800μg抗BRCAA1单克隆抗体，200rpm旋转搅拌2h，以碳酸氢钠调整pH值至pH＝7，得抗BRCAA1多西紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束；
加入0.25g甘露醇作为冻干保护剂，补足溶液总体积至2mL，过0.22μm微孔滤膜除菌，将溶液分装于无菌青霉素小瓶中，每支1mL，冷冻干燥，得抗BRCAA1多西紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束冻干制剂，该冻干制剂加入1mL葡萄糖注射液或氯化钠注射液经振摇可于1min内完全复溶，所得胶束溶液澄清透明，状态可保持3d以上，疏水性药物多西紫杉醇位于胶束中，稳定性良好。
实施例3
称取100mg羧基化的F68型PEO-PPO-PEO嵌段共聚物、0.5mg羟基喜树碱，加入1mL二氯甲烷与三氯甲烷的混合液(1:1)，水浴超声10min使载体材料和药物充分溶解，加入1mL纯水，细胞破碎仪超声处理至形成均匀白色乳液，60℃水浴旋转蒸发挥尽有机溶剂至形成无色透明水溶液，补足溶液体积至1mL，得无色透明羟基喜树碱PEO-PPO-PEO胶束溶液；
加入0.3mL0.15M浓度N，N-二异丙基碳二亚胺(DIC)及0.3mL0.15M浓度N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，200rpm旋转搅拌15min以活化羧基，加入300μg表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体，200rpm旋转搅拌2h，以碳酸氢钠调整pH值至pH＝7，得抗EGFR羟基喜树碱PEO-PPO-PEO免疫胶束；
加入0.05g蔗糖和0.05g海藻糖作为冻干保护剂，补足溶液总体积至2mL，混匀，过0.22μm微孔滤膜除菌，将溶液分装于无菌青霉素小瓶中，每支1mL，冷冻干燥，得抗EGFR羟基喜树碱PEO-PPO-PEO免疫胶束冻干制剂，每支含羟基喜树碱0.25mg，抗EGFR单克隆抗体150μg，该冻干制剂加入1mL葡萄糖注射液或氯化钠注射液经振摇可于1min内完全复溶，所得胶束溶液澄清透明，状态可保持2d以上，疏水性药物羟基喜树碱位于胶束中，稳定性良好。
实施例4
称取40mg羧基化的P123型PEO-PPO-PEO嵌段共聚物、1mg紫杉醇，加入2mL乙腈，水浴超声20min使载体材料和药物充分溶解，溶液经40℃水浴旋转蒸发挥尽乙腈，25℃真空干燥过夜后得无色透明药膜，以1mL纯水为水化介质，将药膜于25℃旋转水化2h，得无色透明紫杉醇PEO-PPO-PEO胶束溶液；
加入0.3mL0.25M浓度1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)及0.3mL0.25M浓度N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，200rpm旋转搅拌15min以活化羧基，加入400μg抗缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)单克隆抗体，200rpm旋转搅拌2h，以氢氧化钠调整pH值至7，得抗HIF-1α紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束；
加入0.1g海藻糖作为冻干保护剂，补足溶液总体积至2mL，过0.22μm微孔滤膜除菌，将溶液分装于无菌青霉素小瓶中，每支1mL，冷冻干燥，得白色疏松状抗HIF-1α紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束冻干制剂，每支含紫杉醇0.5mg，抗HIF-1α单克隆抗体200μg，该冻干制剂加入1mL葡萄糖注射液或氯化钠注射液经振摇可于1min内完全复溶，所得胶束溶液澄清透明，状态可保持3d以上，疏水性药物紫杉醇位于胶束中，稳定性良好。
采用ELISA双抗夹心法检测抗HIF-1α紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束的主动靶向性：以每孔100μl200μg/mL羊抗鼠IgG包被96孔ELISA板，洗涤后每孔以200μl1％BSA封闭，洗涤，分别加入100μl抗HIF-1α紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束复溶液、阳性对照100μl浓度为200μg/mL的抗HIF-1α、阴性对照PBS(pH＝7.4)各五孔，充分反应后洗涤，各孔均加入HRP标记羊抗鼠IgG做二抗，免疫反应后充分洗涤，各孔加入等量0.5mg/mL四甲基联苯胺(TMB)溶液(pH＝5)显色15min，再加入50μl2M硫酸中止显色反应，450nm处酶标仪测吸光度OD值，结果见表1，免疫胶束组的OD平均值比阳性对照增加近一倍，说明抗HIF-1α紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束具有显著的免疫寻靶活性。
表1 ELISA双抗夹心法检测抗HIF-1α紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束主动靶向性

实施例5
称取80mg羧基化的F127型PEO-PPO-PEO嵌段共聚物、1mg多西紫杉醇，加入1mL二甲基甲酰胺(DMF)，水浴超声10min使载体材料和药物充分溶解，溶液装入MWCO2000透析袋中，用1.5L去离子水透析24h，透析后溶液经1000rpm离心10min，上清液过0.45μm微孔滤膜，滤液补足体积至1mL，得无色透明多西紫杉醇PEO-PPO-PEO胶束溶液；
加入0.3mL0.2M浓度N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)及0.3mL0.2M浓度N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，200rpm旋转搅拌15min以活化羧基，加入800μg抗血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体，200rpm旋转搅拌2h，以碳酸氢钠调整pH值至pH＝7，得抗VEGF多西紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束；
加入0.2g葡萄糖作为冻干保护剂，补足溶液总体积至2mL，过0.22μm微孔滤膜除菌，将溶液分装于无菌青霉素小瓶中，每支1mL，冷冻干燥，得抗VEGF多西紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束冻干制剂，该冻干制剂加入1mL葡萄糖注射液或氯化钠注射液经振摇可于1min内完全复溶，所得胶束溶液澄清透明，状态可保持3d以上，疏水性药物多西紫杉醇位于胶束中，稳定性良好。
采用细胞ELISA法检测抗VEGF多西紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束的主动靶向性：以在96孔板上以每孔5万个细胞的密度接种MGC-803胃癌细胞，待细胞贴壁后吸去培养基，每孔加40μl细胞维持液，再分别加入10μl抗VEGF多西紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束复溶液、阳性对照10μl浓度为400μg/mL的抗VEGF单克隆抗体、阴性对照PBS(pH＝7.4)各五孔，37℃孵育1h，以PBS(pH＝7.4)洗涤细胞，每孔以200μl1％BSA封闭2h，洗涤，各孔均加入1:4000稀释的HRP标记羊抗鼠IgG第二抗体，37℃孵育1h，充分洗涤，各孔加入等量0.5mg/mL四甲基联苯胺(TMB)溶液(pH＝5)显色15min，再加入50μl2M硫酸中止显色反应，450nm处酶标仪测吸光度OD值，结果见表2，免疫胶束组的OD平均值比阳性对照增加近一倍，说明抗VEGF多西紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束具有显著的寻靶活性。
表2 细胞ELISA法检测抗VEGF多西紫杉醇PEO-PPO-PEO免疫胶束主动靶向性

实施例6
称取100mg羧基化的F68型PEO-PPO-PEO嵌段共聚物、0.5mg羟基喜树碱，加入1mL二氯甲烷与三氯甲烷的混合液(1:1)，水浴超声10min使载体材料和药物充分溶解，加入1mL纯水，细胞破碎仪超声处理至形成均匀白色乳液，60℃水浴旋转蒸发挥尽有机溶剂至形成无色透明水溶液，补足溶液体积至1mL，得无色透明羟基喜树碱PEO-PPO-PEO胶束溶液；
加入0.3mL0.15M浓度N，N-二异丙基碳二亚胺(DIC)及0.3mL 0.15M浓度N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，200rpm旋转搅拌15min以活化羧基，加入300μg抗黏着斑激酶(FAK)单克隆抗体，200rpm旋转搅拌2h，以碳酸氢钠调整pH值至pH＝7，得抗FAK羟基喜树碱PEO-PPO-PEO免疫胶束；
加入0.08g葡萄糖和0.08g海藻糖作为冻干保护剂，补足溶液总体积至2mL，混匀，过0.22μm微孔滤膜除菌，将溶液分装于无菌青霉素小瓶中，每支1mL，冷冻干燥，得抗FAK羟基喜树碱PEO-PPO-PEO免疫胶束冻干制剂，每支含羟基喜树碱0.25mg，抗FAK单克隆抗体150μg，该冻干制剂加入1mL葡萄糖注射液或氯化钠注射液经振摇可于1min内完全复溶，所得胶束溶液澄清透明，状态可保持2d以上，疏水性药物羟基喜树碱位于胶束中，稳定性良好。
采用间接免疫荧光法检测抗FAK羟基喜树碱PEO-PPO-PEO免疫胶束的靶向性：以每孔5千个细胞的密度接种MGC-803胃癌细胞，待细胞贴壁后吸去培养基，每孔加40μl细胞维持液，再分别加入10μl抗FAK羟基喜树碱PEO-PPO-PEO免疫胶束复溶液、10μl不含抗FAK的羟基喜树碱PEO-PPO-PEO胶束复溶液为阴性对照，37℃孵育1h，以PBS(pH＝7.4)洗涤，各孔均加入1:5稀释的FITC标记羊抗鼠IgG第二抗体，37℃孵育1h，充分洗涤，荧光显微镜下观察，与抗FAK羟基喜树碱PEO-PPO-PEO免疫胶束反应的细胞组在荧光显微镜下可观察到细胞膜有一圈绿色荧光，而阴性对照组均无荧光，证明FAK羟基喜树碱PEO-PPO-PEO免疫胶束有与靶细胞结合的活性。
从以上实施例可以看出，本发明操作简单、条件温和、原料低廉、使用载体材料单一、可控性强，并且可以在保持载药PEO-PPO-PEO胶束粒径小、无免疫原性等原有自身特点的前提下实现其主动靶向作用，从而减小治疗药物对周围正常组织细胞的损害，减小毒副作用及用药剂量，并适于大量制备和工业化生产。